中藥化學(xué)苷類(lèi)-2

1、第5節(jié) 苷的提取、分離及檢識(shí)l苷的提?。很盏奶崛。?溶劑法溶劑法l苷的分離：苷的分離： 大孔樹(shù)脂法大孔樹(shù)脂法 色譜法色譜法l苷的檢識(shí)：苷的檢識(shí)： 化學(xué)檢識(shí)化學(xué)檢識(shí) 色譜檢識(shí)色譜檢識(shí) 1.苷的提取v溶劑法：溶劑法：用極性由小到大的溶劑依次提取。常用溶劑有用極性由小到大的溶劑依次提取。常用溶劑有沸水沸水、甲、甲( (乙乙) )醇醇、正丁醇正丁醇、乙酸乙酯等。、乙酸乙酯等。！注意：注意：苷的水解（酸、酶、堿的影響）。苷的水解（酸、酶、堿的影響）。 原生苷的提取原生苷的提取：破壞或抑制酶的活性。：破壞或抑制酶的活性。 藥材迅速干燥藥材迅速干燥 拌料無(wú)機(jī)鹽如碳酸鈣拌料無(wú)機(jī)鹽如碳酸鈣 用沸水、高濃度醇提取

2、用沸水、高濃度醇提取 次生苷或苷元的提取次生苷或苷元的提取：利用酶活性。：利用酶活性。 發(fā)酵后或水解后，用親脂性有機(jī)溶劑提取發(fā)酵后或水解后，用親脂性有機(jī)溶劑提取。EtOH 提取中藥EtOH 提取物減壓回收 EtOH濃縮物石油醚提取石油醚部分 （油脂）殘留物Et2O或CHCl3提取EtOAc提取殘留物n-BuOH提取 EtOAc提取液（含單糖甙或含糖較少的甙） n-BuOH提取液（含糖較多的甙）殘留物Et2O或CHCl3提取物 （甙元）2.苷的分離純化v溶劑處理法溶劑處理法：利用溶解度差異分離。提取液濃縮后，用：利用溶解度差異分離。提取液濃縮后，用合適的溶劑處理，根據(jù)苷類(lèi)與雜質(zhì)的溶解度不同分離。

3、合適的溶劑處理，根據(jù)苷類(lèi)與雜質(zhì)的溶解度不同分離。如乙醚、丙酮沉淀皂苷等。如乙醚、丙酮沉淀皂苷等。v鉛鹽沉淀法鉛鹽沉淀法：利用醋酸鉛在水或稀醇中能沉淀某類(lèi)成分：利用醋酸鉛在水或稀醇中能沉淀某類(lèi)成分的性質(zhì)，進(jìn)行除雜或提純。中性醋酸鉛能沉淀具鄰二酚的性質(zhì)，進(jìn)行除雜或提純。中性醋酸鉛能沉淀具鄰二酚OHOH、-COOH-COOH的酸性苷；堿式醋酸鉛能沉淀酚性成分。的酸性苷；堿式醋酸鉛能沉淀酚性成分。v色譜法色譜法：利用混合物中各組分與固定相和流動(dòng)相的相互利用混合物中各組分與固定相和流動(dòng)相的相互之間的作用不同，使各組分以不同程度分布在固定相和之間的作用不同，使各組分以不同程度分布在固定相和流動(dòng)相中，當(dāng)流動(dòng)

4、相流過(guò)固定相時(shí)，各組分以不同的速流動(dòng)相中，當(dāng)流動(dòng)相流過(guò)固定相時(shí)，各組分以不同的速度移動(dòng)，達(dá)到分離。分離效果好，是一種實(shí)驗(yàn)室常規(guī)分度移動(dòng)，達(dá)到分離。分離效果好，是一種實(shí)驗(yàn)室常規(guī)分離方法。離方法。l 按流動(dòng)相分：液相色譜按流動(dòng)相分：液相色譜（liquid chromatography） 氣相色譜氣相色譜（gas chromatography）l 按操作方式分：薄層色譜按操作方式分：薄層色譜 紙色譜紙色譜 柱色譜柱色譜l 按分離機(jī)理分：吸附色譜按分離機(jī)理分：吸附色譜 分配色譜分配色譜 離子交換色譜離子交換色譜 l 按極性分：正相色譜按極性分：正相色譜 反相色譜反相色譜色譜法（Chromatograp

5、hy）分類(lèi)：2.苷的分離純化 大孔樹(shù)脂吸附色譜大孔樹(shù)脂吸附色譜 原理原理：大孔樹(shù)脂是一類(lèi)具有多孔結(jié)構(gòu)、不溶于水的固體高分：大孔樹(shù)脂是一類(lèi)具有多孔結(jié)構(gòu)、不溶于水的固體高分子物質(zhì)，可以通過(guò)物理吸附（范德華力）從水溶液中有選擇子物質(zhì)，可以通過(guò)物理吸附（范德華力）從水溶液中有選擇的吸附成分，達(dá)到分離目的。的吸附成分，達(dá)到分離目的。 特點(diǎn)特點(diǎn)：選擇性、機(jī)械強(qiáng)度高、再生處理方便、吸附速度快等。：選擇性、機(jī)械強(qiáng)度高、再生處理方便、吸附速度快等。應(yīng)用廣泛，如苷與糖類(lèi)的分離等。應(yīng)用廣泛，如苷與糖類(lèi)的分離等。 分類(lèi)分類(lèi)：非極性、中極性、極性和強(qiáng)極性四類(lèi)。選擇的樹(shù)脂極非極性、中極性、極性和強(qiáng)極性四類(lèi)。選擇的樹(shù)脂極性

6、與被分離物質(zhì)極性既不能相似（吸附過(guò)強(qiáng)），也不能差太性與被分離物質(zhì)極性既不能相似（吸附過(guò)強(qiáng)），也不能差太大（無(wú)法分離）。常用的有大（無(wú)法分離）。常用的有DA-101DA-101、DA-201DA-201、AB-8AB-8型等。型等。 操作操作：樣品用水溶解，上樣后依次用水、含水醇、濃醇洗樣品用水溶解，上樣后依次用水、含水醇、濃醇洗脫。收集洗脫液，回收溶劑，濃縮干燥，即得。脫。收集洗脫液，回收溶劑，濃縮干燥，即得。 聚酰胺色譜聚酰胺色譜 凝膠色譜凝膠色譜苷的分離（有效部位）：2.苷的分離純化 硅膠、氧化鋁吸附色譜：適用于極性低的苷類(lèi)或苷元的分離。利用被分離組分與吸附劑之間的相互作用（可逆的范德華力

7、）差異進(jìn)行分離。在洗脫過(guò)程中，柱內(nèi)不斷地發(fā)生解吸、吸附，再解吸、再吸附的過(guò)程。即被吸附的物質(zhì)被溶劑解吸而隨溶劑向下移動(dòng)，又遇到新的吸附劑顆粒被再吸附，后面流下的溶劑又再解吸而使其下移動(dòng)。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間以后，該物質(zhì)會(huì)向下移動(dòng)一定距離。此距離的長(zhǎng)短與吸附劑對(duì)該物質(zhì)的吸附力以及溶劑對(duì)該物質(zhì)的解吸(溶解)能力有關(guān)。不同的物質(zhì)由于吸附力和解吸力不同 ，移動(dòng)速度也不同。吸附力弱而解吸力強(qiáng)的物質(zhì)，移動(dòng)速度就較快。 分配色譜：以硅膠、纖維素等為支持劑，水飽和的溶劑為流動(dòng)相進(jìn)行分離，適用于極性較大的苷類(lèi)成分。常用反相色譜，即以鍵合硅膠為固定相，含水的溶劑系統(tǒng)為流動(dòng)相分離。苷的純化（有效成分）：3.苷的檢識(shí)v化學(xué)檢

8、識(shí) Molish反應(yīng)（反應(yīng)（-萘酚濃硫酸）：糖、苷（）紫色環(huán)。萘酚濃硫酸）：糖、苷（）紫色環(huán)。 糖被氧化成糠醛，糖醛與酚胺縮合生成有色化合物。糖被氧化成糠醛，糖醛與酚胺縮合生成有色化合物。 Fehling或Tollen反應(yīng)：還原糖（）。 苷、非還原糖(-)。比較水解前后結(jié)果，判斷是糖還是苷。 RCHO+2Ag(NH3)2+OHRCOONH4+2Ag+3NH3+H2O RCHO+2Cu(OH)2+NaOHRCOONa+Cu2O+3H2O第6節(jié) 苷的結(jié)構(gòu)研究l純度鑒定l分子式的測(cè)定l苷的水解l苷元的結(jié)構(gòu)鑒定l糖的結(jié)構(gòu)鑒定糖的結(jié)構(gòu)鑒定v糖的種類(lèi)v糖的數(shù)目v糖鏈的結(jié)構(gòu) 位置：苷元-糖、糖-糖 順序：糖

9、-糖 構(gòu)型：苷鍵1.糖的種類(lèi)的確定 色譜法測(cè)定水解液中的單糖，與對(duì)照品比較。 PC：最常用。 TLC：點(diǎn)樣量較少5g?？捎脽o(wú)機(jī)鹽（強(qiáng)堿弱酸）的水溶液制板，增加樣品承載量，改善分離效果。如0.3mol/L Na2HPO4、0.03mol/L H3BO3等。 HPLC：直接進(jìn)樣，但靈敏度不及GC。 GC：靈敏度高，但需水解、制備衍生物。 NMR法直接測(cè)定苷，與標(biāo)準(zhǔn)品的糖數(shù)據(jù)比較。1HNMR、13CNMR 二維NMR常見(jiàn)單糖紙色譜hRfBAWBAW：正丁醇醋酸水（：正丁醇醋酸水（4:1:5, 4:1:5, 上層）上層）BEWBEW：正丁醇乙醇水（：正丁醇乙醇水（4:1:24:1:2）BBPWBBPW

10、：正丁醇苯吡啶水（：正丁醇苯吡啶水（5:1:3:35:1:3:3）PhOHPhOH：水飽和苯酚：水飽和苯酚 2.糖的數(shù)目的確定 MS法 測(cè)定苷和苷元分子量，根據(jù)差值或碎片質(zhì)荷比差值計(jì)算。 色譜法測(cè)定水解液中的單糖 TLC-Scan、HPLC-定量，以單糖對(duì)照品為標(biāo)準(zhǔn)。 NMR法1HNMR：根據(jù)糖端基質(zhì)子信號(hào)數(shù)目確定；或全乙?；⑷谆瘮?shù)目推測(cè)。13CNMR：根據(jù)糖端基碳信號(hào)數(shù)目（90-112ppm）確定；或苷和苷元碳信號(hào)差值推斷。 二維NMR 3.糖的連接位置苷元與糖13CNMR 苷化位移（苷化位移（glycosylation shift, GS）：）：苷元與糖結(jié)合成苷苷元與糖結(jié)合成苷后，苷

11、元的成苷碳原子（后，苷元的成苷碳原子（-C）與相鄰的碳原子（）與相鄰的碳原子（-C）信信號(hào)會(huì)發(fā)生位移，其他碳信號(hào)不變；糖端基碳原子與游離單號(hào)會(huì)發(fā)生位移，其他碳信號(hào)不變；糖端基碳原子與游離單糖信號(hào)相比也發(fā)生了位移。糖信號(hào)相比也發(fā)生了位移。 苷元：醇苷，苷元：醇苷，-C 低場(chǎng)位移低場(chǎng)位移 4-10ppm -C 高場(chǎng)位移高場(chǎng)位移 1-4.6ppm 酚苷，酚苷，-C 高場(chǎng)位移高場(chǎng)位移 -C 低場(chǎng)位移低場(chǎng)位移 糖：端基糖：端基C低場(chǎng)位移低場(chǎng)位移 4-7ppm 相鄰相鄰C高場(chǎng)位移高場(chǎng)位移 1-4ppm 二維二維NMR OCHOHOOHOHOHMeOH62.571.377.475.997.477.5OCHO

12、HOOHOMeOH62.471.277.374.6104.677.413CNMR 法：法：苷的碳譜數(shù)據(jù)與單糖的碳譜數(shù)據(jù)比較，苷的碳譜數(shù)據(jù)與單糖的碳譜數(shù)據(jù)比較，根據(jù)苷化位移規(guī)律可確定單糖的連接位置。若內(nèi)側(cè)根據(jù)苷化位移規(guī)律可確定單糖的連接位置。若內(nèi)側(cè)糖的某碳原子向低場(chǎng)移動(dòng)（糖的某碳原子向低場(chǎng)移動(dòng)（4-7ppm），），而相鄰兩個(gè)而相鄰兩個(gè)碳原子又略向高場(chǎng)移動(dòng)（碳原子又略向高場(chǎng)移動(dòng)（1-4ppm），），確定內(nèi)側(cè)糖的確定內(nèi)側(cè)糖的碳原子是連接糖的位置。碳原子是連接糖的位置。OCHOHOOHOHOH62.571.377.475.997.477.5OCHOHOOHOMeOH62.471.277.374.610

13、4.677.44.糖的連接位置糖與糖6.苷鍵構(gòu)型的確定酶水解法 麥芽糖酶水解 -苷鍵 苦杏仁苷酶水解 -苷鍵NMR1HNMR：糖成苷后，端基質(zhì)子常位于較低場(chǎng)。H-2為a鍵的糖，如葡萄糖，形成-苷或-苷時(shí)，偶合常數(shù)J不同，由此可判斷苷鍵構(gòu)型。H-2為e鍵的糖，如鼠李糖，形成不同構(gòu)型苷的J值相近，無(wú)法判斷。OHHe-OOROHHOHHOHOROHHHOHOHOR-OHeOHHOHHOHHOHHOROHC 3H aC 2123aeJaa = 6-9H zC 3H aC 2123aJae = 2-3.5H z-D -葡 萄 糖 -D -葡 萄 糖a21OHHCH3OHHOHOHHORH21OHHCH3

14、OHHOHOHHHOR-L-鼠李糖苷鼠李糖苷 J12 = Jae = 2-3 Hz-L-鼠李糖苷鼠李糖苷 J12 = Jae = 2-3 Hz13CNMR：糖成苷后端基碳原子向低場(chǎng)位移，而其他碳變化不大。 2D-NMR（NOE） -D-葡萄糖苷，H1H2 -D-葡萄糖苷，H1H3、H1H5復(fù)習(xí)思考題：1.名詞解釋名詞解釋苷苷 原生苷原生苷 次生苷次生苷 乙酰解反應(yīng)乙酰解反應(yīng) 酶解反應(yīng)酶解反應(yīng) Smith降解降解 Molish反應(yīng)反應(yīng) 與與構(gòu)型構(gòu)型 全甲基化甲醇解全甲基化甲醇解 苷化位移苷化位移 端基碳端基碳 氧苷氧苷 2.比較以下各化合物水解難易，并說(shuō)明理由。比較以下各化合物水解難易，并說(shuō)明理由。ABDCN