第二章生物安全防護(hù)

1、1姚振江姚振江流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)系流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)系廣東藥學(xué)院廣東藥學(xué)院2以前的實(shí)驗(yàn)室.現(xiàn)在的實(shí)驗(yàn)室對(duì)個(gè)人防護(hù)有了新的要求.3生物安全概要生物安全概要簡(jiǎn)介實(shí)驗(yàn)室內(nèi)感染生物危害分類感染/生物危害控制溢出響應(yīng)生物醫(yī)學(xué)廢棄物處理總結(jié)4什么是生物安全什么是生物安全? ?從業(yè)人員處理生物危害材料時(shí)的措施，以避免感染自己、他人或環(huán)境達(dá)到此目的主要通過(guò)：工程學(xué)控制行政管理控制操作與規(guī)程個(gè)體防護(hù)設(shè)備5什么是生物危害什么是生物危害?例如：病毒、細(xì)菌、真菌和寄生蟲(chóng)以及他們的毒素血液和體液, 還有人和動(dòng)物的組織 變異的細(xì)胞系和一些特定類型的核酸 是由生物或者此種生物產(chǎn)生的物質(zhì)引起的對(duì)人、是由生物或者此種生物產(chǎn)生的

2、物質(zhì)引起的對(duì)人、動(dòng)物或環(huán)境具有潛在威脅動(dòng)物或環(huán)境具有潛在威脅6為什么我們關(guān)注生物危害物質(zhì)？為什么我們關(guān)注生物危害物質(zhì)？可能獲得實(shí)驗(yàn)室感染可能獲得實(shí)驗(yàn)室感染 (LAI)環(huán)境污染環(huán)境污染造成研究的污染造成研究的污染公眾知曉公眾知曉7實(shí)驗(yàn)室感染實(shí)驗(yàn)室感染傳播途徑傳播途徑易感宿主易感宿主感染源感染源經(jīng)皮接種吸入氣溶膠粘膜接觸食入培養(yǎng)物和儲(chǔ)存物研究的動(dòng)物標(biāo)本免疫系統(tǒng)免疫狀況年齡8只有只有20% 可查到原因可查到原因80% 是由人為的錯(cuò)誤造成的20% 是由于設(shè)備故障造成的排在前排在前4位的導(dǎo)致感染的事故位的導(dǎo)致感染的事故溢出或?yàn)R出注射器及針尖銳的物體，碎玻璃動(dòng)物或體外寄生蟲(chóng)的抓傷或咬傷實(shí)驗(yàn)室感染實(shí)驗(yàn)室感染

3、9實(shí)驗(yàn)室感染實(shí)驗(yàn)室感染誰(shuí)什么哪里何時(shí)如何研究者SARS臺(tái)灣2003年12月微生物學(xué)家西尼羅病毒美國(guó)2002年8月劃傷實(shí)驗(yàn)室工作人員流腦美國(guó)2000年氣溶膠?實(shí)驗(yàn)室工作人員牛痘病毒歐洲2002年接觸1019791999年間實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染（年間實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染（LAI）的統(tǒng)計(jì)）的統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)室感染實(shí)驗(yàn)室感染11暴露的風(fēng)險(xiǎn)暴露的風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)的病原體體液的類型暴露的途徑暴露的持續(xù)時(shí)間暴露過(guò)程中的血液量此次暴露病毒的濃度個(gè)人保護(hù)設(shè)備使用12如果發(fā)生了暴露或可能發(fā)生了暴露如果發(fā)生了暴露或可能發(fā)生了暴露開(kāi)始急救通知你的管理者或指定的人向醫(yī)院的急診部門或大學(xué)的衛(wèi)生服務(wù)部門報(bào)告向職業(yè)衛(wèi)生、傷殘和死亡辦公室報(bào)告（電話或網(wǎng)絡(luò)

4、）13全面預(yù)防全面預(yù)防預(yù)防血傳病原體傳播的最簡(jiǎn)單的行之有效的方法預(yù)防血傳病原體傳播的最簡(jiǎn)單的行之有效的方法 包括包括:教育教育洗手洗手穿防護(hù)設(shè)備穿防護(hù)設(shè)備使用安全的工作規(guī)程使用安全的工作規(guī)程如果不能保證樣品的非感染性，按照感染性樣品處理如果不能保證樣品的非感染性，按照感染性樣品處理If samples cannot be guaranteed non-infective treat as infectious!14生物危害的分類生物危害的分類常見(jiàn)病原體非傳統(tǒng)的病原體重組 DNA組織培養(yǎng)動(dòng)物工作解剖的標(biāo)本15BSL 4BSL 3BSL 2BSL 1_水平按箭頭方向由低到高水平按箭頭方向由低到高

5、微生物對(duì)人、動(dòng)物、植物和微生物對(duì)人、動(dòng)物、植物和/或環(huán)境的危險(xiǎn)性或環(huán)境的危險(xiǎn)性程序和設(shè)備需求程序和設(shè)備需求 圍堵策略水平需求圍堵策略水平需求 對(duì)人員、環(huán)境和社區(qū)的保護(hù)程度對(duì)人員、環(huán)境和社區(qū)的保護(hù)程度生物危害的等級(jí)生物危害的等級(jí)16危險(xiǎn)危險(xiǎn)分組分組個(gè)體危險(xiǎn)個(gè)體危險(xiǎn)公眾危險(xiǎn)公眾危險(xiǎn)遏制遏制例子例子1LowLowLevel 1大腸桿菌 細(xì)桿菌2ModerateLimitedLevel 2 大腸桿菌 0157:H7, 鏈球菌、沙門氏菌、腺病毒、肝炎病毒A、B、C，流感，麻疹。3HighLowLevel 3 炭疽桿菌，結(jié)核分支桿菌，漢坦病毒，HIV，黃熱病度4HighHighLevel 4 拉沙病毒,

6、埃博拉病毒,馬爾堡病毒Unlikely to cause disease in healthy workers or animalsRarely cause serious human or animal diseaseMay cause serious diseaseLikely to cause very serious disease常見(jiàn)病原體的等級(jí)常見(jiàn)病原體的等級(jí)17不常見(jiàn)的病原體不常見(jiàn)的病原體p傳播性的海綿體腦病阮病毒疾?。恢滤佬陨窠?jīng)變傳播性的海綿體腦病阮病毒疾?。恢滤佬陨窠?jīng)變性情況性情況庫(kù)賈氏病庫(kù)賈氏病, , 新型克雅氏病新型克雅氏病, , 瘋牛病瘋牛病, ,綿羊瘙癢綿羊瘙癢病，慢

7、性消耗性疾病。病，慢性消耗性疾病。p對(duì)通常的滅活病毒的破壞方法產(chǎn)生抗性對(duì)通常的滅活病毒的破壞方法產(chǎn)生抗性p與危害處理辦公室接觸以評(píng)估其需求（防護(hù)、程與危害處理辦公室接觸以評(píng)估其需求（防護(hù)、程序、廢棄物的處理）序、廢棄物的處理）18重組重組DNA危險(xiǎn)級(jí)別依賴于DNA的來(lái)源、載體及宿主 生物安全委員會(huì)將幫助研究者作出這方面的判斷遺傳工程 = 在體外將遺傳物質(zhì)從一個(gè)細(xì)胞參入到另一個(gè)細(xì)胞19組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)一般可能含有致病微生物的潛在風(fēng)險(xiǎn)一般可能含有致病微生物的潛在風(fēng)險(xiǎn)Level 2人和靈長(zhǎng)類的含有支原體的細(xì)胞系當(dāng)使用新的細(xì)胞系時(shí)要進(jìn)行詳細(xì)的評(píng)估其他Level 120動(dòng)物工作動(dòng)物工作動(dòng)物可儲(chǔ)存感染性的

8、微生物（自然的或引進(jìn)的）等級(jí)基于所從事工作的類型對(duì)所有從事動(dòng)物工作的人員都需要進(jìn)行專門的動(dòng)物照料培訓(xùn)所有的工作包括動(dòng)物的使用必須得到動(dòng)物委員會(huì)的許可21解剖的標(biāo)本解剖的標(biāo)本所有的 標(biāo)本都應(yīng)考慮其可能存在的感染性微生物考慮標(biāo)本的類型尤為重要血液, 器官, 組織脊髓, 腦組織來(lái)自于感染的病人一般而言，生物2級(jí)僅僅依據(jù)于其工作的特性22感染感染/ /生物危害控制生物危害控制工程控制工程控制管理控制管理控制實(shí)踐與操作實(shí)踐與操作個(gè)人防護(hù)設(shè)備個(gè)人防護(hù)設(shè)備23工程控制工程控制在技術(shù)層面上, 通過(guò)改變危害的來(lái)源以減少 或根除危害的暴露防護(hù):一道 vs二道 防護(hù)水平24第一道防護(hù)（一級(jí)屏障）第一道防護(hù)（一級(jí)屏障

9、）確保工作人員和直接環(huán)境免受感染性微生物的暴露保護(hù)性的外殼 封閉感染性的微生物或動(dòng)物培養(yǎng)皿, 玻璃罐, 瓶塞等生物安全柜，手套箱和動(dòng)物籠等裝備 控制的效果取決于防護(hù)的完整性控制的效果取決于防護(hù)的完整性25第二道防護(hù)（二級(jí)屏障）第二道防護(hù)（二級(jí)屏障）保護(hù)實(shí)驗(yàn)室外的環(huán)境免遭暴露包括實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)和規(guī)章制度26生物安全防護(hù)水平生物安全防護(hù)水平防護(hù)水平與危險(xiǎn)水平相似生物安全委員會(huì)將對(duì)研究提案進(jìn)行評(píng)估以確保防護(hù)水平恰當(dāng)。一級(jí) 二級(jí) 三級(jí) 四級(jí)27一級(jí)水平一級(jí)水平 最基本的實(shí)驗(yàn)室不需要特別的設(shè)計(jì)特性不需要生物安全柜可在開(kāi)放的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上進(jìn)行工作28二級(jí)水平二級(jí)水平 具有生物危害2級(jí)的臨床、診斷、研究和教學(xué)部門如果

10、具有氣溶膠或?yàn)R出的潛在風(fēng)險(xiǎn)，需要一級(jí)或二級(jí)生物安全柜必須制定處理溢出的應(yīng)急方案使用權(quán)應(yīng)加以控制29專門的設(shè)計(jì)和建造一級(jí)屏障保護(hù)個(gè)體二級(jí)屏障保護(hù)環(huán)境所有工作人員必須進(jìn)行專門的培訓(xùn)：病原微生物的使用，個(gè)人防護(hù)設(shè)備，設(shè)備、廢棄物處理，還有實(shí)踐與操作三級(jí)水平三級(jí)水平 型型(全密封型全密封型)30四級(jí)水平四級(jí)水平在一個(gè)國(guó)家一般只有一個(gè)設(shè)計(jì)規(guī)范異常的嚴(yán)格，工作人員完全與感染性材料隔離313233生物安全柜生物安全柜對(duì)生物病原物理防護(hù)的有效方法，尤其當(dāng)產(chǎn)生氣溶膠時(shí)。高效分子空氣過(guò)濾器能以99.97%的效率去除顆粒（最小 0.3微米）有三個(gè)主要級(jí)別的安全柜（ I, II, III ） 能提供不同水平的保護(hù)。3

11、4在生物安全柜內(nèi)安全操作在生物安全柜內(nèi)安全操作使用前使用前:確保生物安全柜經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)關(guān)閉紫外燈，打開(kāi)熒光燈用適宜的消毒劑消毒工作臺(tái)面將最基本的條目放入安全柜在工作之前，讓排風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn) 5-10 分鐘35使用中使用中:確保材料和器材放置在接近安全柜內(nèi)的后部，尤其是產(chǎn)生氣溶膠的設(shè)備，不要阻擋通風(fēng)口。使用技術(shù)減少飛濺和氣溶膠的產(chǎn)生?？偟墓ぷ髁鞒虘?yīng)該是從清潔區(qū)域到污染區(qū)域。減少運(yùn)動(dòng)以免阻礙氣流在生物安全柜內(nèi)打開(kāi)火焰存在著爭(zhēng)議。在生物安全柜內(nèi)安全操作在生物安全柜內(nèi)安全操作36使用后使用后:保持排風(fēng)機(jī)工作至少5分鐘以清潔安全柜移走和消毒用過(guò)的器材和材料消毒安全柜臺(tái)面關(guān)閉排風(fēng)機(jī)和熒光燈，打開(kāi)紫外燈。在生物安全柜

12、內(nèi)安全操作在生物安全柜內(nèi)安全操作37保養(yǎng)保養(yǎng):2次/天 -擦拭工作臺(tái)面1次/周 擦拭紫外燈1次/月 擦拭所有的垂直面1次/年 紫外燈強(qiáng)度驗(yàn)證 - 用甲醛氣體去除沾染 (ORM)- 認(rèn)證 (ORM)在生物安全柜內(nèi)安全操作在生物安全柜內(nèi)安全操作38行政管理控制行政管理控制危險(xiǎn)評(píng)估醫(yī)學(xué)監(jiān)測(cè)培訓(xùn)/教育資源檢查符號(hào) & 標(biāo)志根據(jù)程序、信息和方法將暴露危險(xiǎn)降至最低39風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估確定防護(hù)的種類,方法和所需的安全設(shè)備使用者的職責(zé), 能從ORM得到的幫助考慮的方面有:實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),方法,個(gè)人的經(jīng)驗(yàn)和知識(shí)情況等http:/www.hc-sc.gc.ca/pphb-dgspsp/ols-bsl/lbg-l

13、dmbl/pdf/lbg-3e-draft.pdf *行政管理控制行政管理控制40醫(yī)學(xué)監(jiān)測(cè)醫(yī)學(xué)監(jiān)測(cè) 用醫(yī)學(xué)方法監(jiān)測(cè)環(huán)境污染對(duì)人類健康的影響，觀察人群健康水平和人體對(duì)環(huán)境污染的生物學(xué)效應(yīng)。培訓(xùn)培訓(xùn) & & 教育教育實(shí)驗(yàn)室專門的政策和規(guī)程生物安全培訓(xùn)行政管理控制行政管理控制41檢查檢查日常的自查生物安全檢查清單此外, 檢查實(shí)驗(yàn)室以確保其按照規(guī)程或 指導(dǎo)方針工作并提供反饋意見(jiàn)行政管理控制行政管理控制42標(biāo)記標(biāo)記 & & 標(biāo)簽標(biāo)簽生物危害標(biāo)記必須粘貼在使用生物危害材料的實(shí)驗(yàn)室的門上生物危害標(biāo)簽應(yīng)貼在使用生物病原的容器、設(shè)備和儲(chǔ)存裝置上行政管理控制行政管理控制43實(shí)踐和規(guī)

14、程實(shí)踐和規(guī)程總的安全指導(dǎo)方針好的微生物學(xué)實(shí)踐洗手專門的規(guī)程離心機(jī)注射器、針頭和其他的尖銳物移液管混勻器、研磨器、超聲破碎儀、冷凍真空干燥器接種環(huán)冷凍切片機(jī)44一般實(shí)驗(yàn)室安全指導(dǎo)方針一般實(shí)驗(yàn)室安全指導(dǎo)方針基本的常識(shí),你必須了解你所面對(duì)的實(shí)驗(yàn)室的危險(xiǎn)，并且經(jīng)過(guò)正確的培訓(xùn)以便處理這些危險(xiǎn)。最基本的是知道所有的實(shí)驗(yàn)危險(xiǎn)舉出5個(gè)例子?b i o s a f et y使用移液管和移液器使用接種環(huán)分離血清打開(kāi)安瓶使用離心機(jī)45良好的微生物實(shí)踐良好的微生物實(shí)踐 (GMP) (GMP)基本的使用標(biāo)準(zhǔn)適用于所有的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)工作目的預(yù)防實(shí)驗(yàn)室人員和環(huán)境被污染預(yù)防實(shí)驗(yàn)或樣本被污染無(wú)菌操作、減少氣溶膠產(chǎn)生、控制污染、

15、個(gè)人防護(hù)、應(yīng)急反應(yīng)。46洗手洗手預(yù)防感染的單純有效的方法之一如果經(jīng)常正確的執(zhí)行如果經(jīng)常正確的執(zhí)行何時(shí)洗手？開(kāi)始任何操作之前離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室之前當(dāng)手有明顯的污物時(shí)在安全柜內(nèi)完成任何實(shí)驗(yàn)之前和之后每次脫掉手套時(shí)在觸及臉和嘴之前下班時(shí)Level 1 lab - a non antiseptic soap can be usedLevel 2 lab - requires antiseptic hand washing solutions47安全使用離心機(jī)安全使用離心機(jī)使用前裂紋？ 過(guò)滿？ 平衡？蓋子或塞子安置正確？轉(zhuǎn)速能達(dá)到？使用可封閉的轉(zhuǎn)子 使用后離心完全停止？溢出或滲漏？使氣溶膠沉降（30分鐘）or

16、在生物安全柜內(nèi)打開(kāi)48注射劑及針注射劑及針盡可能避免使用在生物安全柜內(nèi)完成感染性材料的操作使用注射器時(shí)小心抽吸保護(hù)從塞子退出的針不要弄彎、切斷或翻新針處理所有使用過(guò)的針和注射器，將其放入黃色的尖銳物體盛放器內(nèi)49移液管移液管禁用嘴吸移液管所有的生物危害材料的移液管都應(yīng)在生物安全柜內(nèi)使用。不要使液體溢出，使用移液管裝置。避免飛濺，沿管壁將液體慢慢注入試管或瓶?jī)?nèi)不要用抽-吸混勻溶液?？稍俣仁褂玫囊埔汗軕?yīng)水平放置在已消毒的淺盤(pán)上50混勻器、研磨器、超聲破碎器和冷凍干燥器混勻器、研磨器、超聲破碎器和冷凍干燥器盡可能地在BSC內(nèi)操作，再打開(kāi)前靜置5分鐘以使氣溶膠沉降。安全地混勻 不要用玻璃混勻罐 使用后

17、立即清除污染冷凍真空干燥器 使用玻璃制造的真空部件時(shí)，確保使用前無(wú)損壞。 使用后所有的表面都要消毒 盡可能使用真空蒸發(fā)套51接種環(huán)接種環(huán)在開(kāi)放的火焰上滅菌可能產(chǎn)生含有活微生物的氣溶膠柄越短，越能減少震動(dòng)一次性的塑料接種環(huán)是較好的替代52冷凍干燥器冷凍干燥器在準(zhǔn)備冰凍切片時(shí)戴手套，當(dāng)使用冷凍干燥器時(shí)戴厚手套。經(jīng)常性的去污 (70%乙醇o(jì)r 專門的消毒劑)防備和上鎖!53個(gè)體防護(hù)設(shè)備個(gè)體防護(hù)設(shè)備個(gè)體防護(hù)設(shè)備是非常重要的防護(hù)屏障，也是最后一道防護(hù)線監(jiān)督者和使用者的職責(zé)就是確保使用個(gè)體防護(hù)設(shè)備監(jiān)督者和使用者的職責(zé)就是確保使用個(gè)體防護(hù)設(shè)備護(hù)目鏡手套實(shí)驗(yàn)室外衣 鞋 54個(gè)體防護(hù)設(shè)備個(gè)體防護(hù)設(shè)備考慮的標(biāo)準(zhǔn)阻

18、斷暴露的途徑提供保護(hù)的級(jí)別容易使用只有當(dāng)正確的選擇、適合、小心使用和個(gè)體培訓(xùn)才能產(chǎn)生效果確保離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前脫下個(gè)體防護(hù)設(shè)備55個(gè)體防護(hù)設(shè)備個(gè)體防護(hù)設(shè)備鞋襪鞋襪應(yīng)該穿包裹腳趾的鞋，在一些較高級(jí)防護(hù)的實(shí)驗(yàn)室和動(dòng)物設(shè)施部門穿靴子。實(shí)驗(yàn)室外衣實(shí)驗(yàn)室外衣長(zhǎng)袖達(dá)膝的外衣有彈性的袖口后背系帶的長(zhǎng)大衣定期清洗56個(gè)體防護(hù)設(shè)備個(gè)體防護(hù)設(shè)備手套手套對(duì)于從事生物病原的人使用乳膠、腈、乙烯樹(shù)脂材料的手套測(cè)驗(yàn)的手套不應(yīng)再用，實(shí)用的手套能消毒再用，如果它們沒(méi)有變形的征兆?？紤]彈性和手掌的長(zhǎng)度雙層手套危險(xiǎn)處理辦公室對(duì)那些具有過(guò)敏的人提供幫助，找到替換材質(zhì)的手套。 在公共場(chǎng)所不要帶實(shí)驗(yàn)手套57個(gè)體防護(hù)設(shè)備個(gè)體防護(hù)設(shè)備眼和臉?lè)雷o(hù)眼和臉?lè)雷o(hù)護(hù)目鏡、安全眼鏡可以保護(hù)眼睛面罩可以保護(hù)面部皮膚呼吸罩呼吸罩58溢出溢出溢出反應(yīng)不同主要基于： 溢出的是什么？ 溢出多少？ 在哪里溢出的? 對(duì)環(huán)境潛在的風(fēng)險(xiǎn)是什么？ 溢出物應(yīng)該被立即清理（除非產(chǎn)生了氣溶膠），確保正確的去除污染方法確保恰當(dāng)?shù)氖褂脗€(gè)體防護(hù)設(shè)備，清除設(shè)備容易使用59溢出溢出 一般清理一般清理用吸收性物質(zhì)蓋住溢出區(qū)域用恰當(dāng)?shù)南緞?0%漂白劑）浸泡溢