家兔急性腎功能不全及其腎功能評價(jià)指標(biāo)檢測

1、家兔急性腎功能不全及其腎功能評價(jià)指標(biāo)檢測姓名 溫正煌 學(xué)號1專業(yè) 臨床醫(yī)學(xué) 班級 本部4班實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.用氯化汞中毒方法復(fù)制家兔急性腎功能不全模型。2.觀察急性腎功能不全時(shí)腎功能評價(jià)指標(biāo)變化，從而探討致病因素及急性腎功能不全的可能發(fā)病機(jī)制。實(shí)驗(yàn)材料和方法實(shí)驗(yàn)儀器：分光光度計(jì)，離心機(jī)，恒溫水浴鍋，哺乳動(dòng)物手術(shù)器械，注射器，試管架，試管， 試管夾，微量移液器，量筒實(shí)驗(yàn)藥品和試劑：20%氨基甲酰乙酯，0.6%酚紅溶液，20%葡萄糖溶液，10%NaOH，12.5%NaOH 溶液，50%乙酸溶液，1%氯化汞，堿性你苦味酸，生理鹽水，肌酐標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液，蒸餾水實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 家兔實(shí)驗(yàn)步驟1.1急性腎功能不全模型復(fù)制

2、：于實(shí)驗(yàn)前24h，取兩只家兔，稱重，一只作為實(shí)驗(yàn)兔，按 0.81.0ml/kg體重劑量皮下或肌肉注射10g/L氯化汞造成急性腎功能不全備用，另一只皮下注射或肌肉注射等量的生理鹽水作為對照兔。1.2麻醉固定：用200g/L氨基甲酸乙酯按5ml/kg體重劑量注射耳緣靜脈，緩慢注射。待兔 麻醉后將其仰臥，先后固定四肢及兔頭。1.3心臟采血：剪去家兔胸前區(qū)部位的毛，在第34肋間靠近胸骨處，用左手食指摸到心跳最明顯處，右手持注射器垂直刺入心臟，當(dāng)針穿刺心臟時(shí)，血液由于心臟搏動(dòng)的力量自動(dòng)進(jìn)入注射器，取血3ml，推入干燥試管，靜置。1.4 膀胱插管術(shù)：從恥骨聯(lián)合向上沿中線作約34厘米的切口，沿腹白線打開腹腔

3、，將膀胱輕拉至腹壁外，先辨認(rèn)清膀胱和輸尿管的解剖部位，先用注射器取尿液2ml于試管中，然后在輸尿管下方穿線結(jié)扎尿道，再用止血鉗提起膀胱前壁（靠近頂端部分），選擇血管較少處，切一縱行小口，插入插管后結(jié)扎，將膀胱插管平放于恥骨處，引流管自然下垂，管口低于膀胱水平，排空膀胱，術(shù)畢，用溫?zé)嵘睇}水紗布覆蓋腹部切口。然后準(zhǔn)備小燒杯，收集尿液。1.5酚紅排泄試驗(yàn)：按1ml/kg耳緣靜脈注射0.6%酚紅溶液,開始計(jì)時(shí)，再按30ml/kg耳緣靜脈緩慢注射20%葡萄糖溶液。從注射酚紅溶液起收集15分鐘（對照組），30分鐘（模型組）尿液。1.6生化檢測1.6.1測酚紅排泄率 a.收集注射酚紅后的全部尿液移入500

4、ml量筒內(nèi)，加入10%NaOH10ml，使之顯色，再加入自來水至500ml搖勻。b.從量筒中吸出尿液置于試管中，與標(biāo)準(zhǔn)管比色管進(jìn)行比較，即為15min、30min酚紅排泄率。1.6.2測血肌酐將靜置后心臟采血的血用離心機(jī)2000r/min離心5分鐘，小心吸取血清置于另一干燥試管中，測血肌酐用。取硬質(zhì)試管3支編號，分別為空白管、標(biāo)準(zhǔn)管及測定管。按表1加樣，混勻，37水浴30min，用分光光度計(jì)以波長510nm，空白調(diào)零，讀OD值。然后各管液體倒回試管，加50%乙酸溶液兩滴，靜置6min后，再測OD值。按公式Cr（mg%）=（OD測-OD測）/（OD標(biāo)-OD標(biāo)）0.01/0.2100（正常值=0.

5、70.8mg%）表1 血清肌酐測定單位/ml空白管標(biāo)準(zhǔn)管測定管肌酐標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液/（0.05mg/ml)0.2血清0.2蒸餾水0.2堿性苦味酸2.02.02.01.6.3測尿肌酐 a.按表2中步驟操作 b.混勻，放10min后加蒸餾水6.0ml，搖勻，用分光光度計(jì)以波長530nm，空白調(diào)零，讀 取OD值，按公式計(jì)算尿肌酐值Crp(mg%)=OD測/OD標(biāo)0.05mg100ml/0.1ml表2 尿肌酐測定單位/ml空白管標(biāo)準(zhǔn)管測定管尿液（原尿或1:50稀釋）0.1尿肌酐標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液0.1蒸餾水0.1堿性苦味酸2.02.02.012.5%NaOH溶液0.50.50.51.6.4內(nèi)生肌酐清除率 內(nèi)生肌酐清

6、除率=尿中肌酐含量/血中肌酐含量尿量（ml/min)1.7腎形態(tài)學(xué)觀察：于耳緣靜脈注射10ml空氣處死家兔，解剖取出腎臟，沉重，計(jì)算腎臟與 體重之比（即腎系數(shù)），并觀察腎外形、質(zhì)地，包膜，最大徑縱向剖開腎臟，觀察腎切面包膜、腎實(shí)質(zhì)色澤、皮髓質(zhì)結(jié)構(gòu)改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：家兔的血肌酐、尿肌酐數(shù)據(jù)表管號對照組模型組血肌酐尿肌酐血肌酐尿肌酐加乙酸前加乙酸后加乙酸前加乙酸后標(biāo)準(zhǔn)管0.4230.0520.4610.0510.0160.181測定管0.0560.0490.1570.1500.0400.086對照組和模型組家兔各項(xiàng)生化指標(biāo)血清肌酐Crp（mg%）尿肌酐Cru（mg%）尿肌酐/血肌酐酚紅排泄率（%）腎

7、比重（g/kg)內(nèi)生肌酐清除率對照組9.47.850.83458.790.0835模型組15.74.30.2757.330.0054不同濃度標(biāo)準(zhǔn)比色液分光光度值排泄率（%）5101520253035404550OD值0.010.0340.0650.1130.1340.1640.1780.2720.2840.312 結(jié)果說明：與正常組的家兔對比，急性腎功能不全的家兔血清肌酐升高，尿肌酐明顯降 低，每分鐘的尿量減少，內(nèi)生肌酐清除率明顯下降，酚紅排泄率下降，腎系數(shù)降低（由于實(shí)驗(yàn)中結(jié)扎尿道時(shí)不慎將輸尿管結(jié)扎，造成尿路梗阻，腎臟積水，以致對照組腎系數(shù)大于模型組）。正常腎臟顏色為紅褐色，切面色澤鮮艷，皮髓

8、質(zhì)分界清晰。模型組的家兔腎臟重量增加，腎臟顏色蒼白，表面腫脹，切面為蒼白色，皮髓質(zhì)分界不清，偶有淤血。實(shí)驗(yàn)討論：1. 氯化汞是一類具有較強(qiáng)毒性的重金屬鹽，溶于水，其中的汞離子可使含巰基的酶喪失活性，失去功能；還能與酶中的氨基、二巰基、羧基、羥基以及細(xì)胞內(nèi)的磷?；Y(jié)合，引起相應(yīng)的損害。家兔皮下或肌肉注射1%氯化汞，可引起以腎小管壞死為主的急性腎功能不全。急性腎功能不全臨床分為少尿型和非少尿型兩種，前者多見。少尿型一般表現(xiàn)少尿甚至無尿、等滲尿。血漿肌酐進(jìn)行性升高，肌酐從尿中排出障礙，尿肌酐/血肌酐40有明顯區(qū)別.2. 氯化汞引起家兔急性腎功能不全的機(jī)制：（1） 管內(nèi)的NaCl增加，刺激致密斑使腎素

9、分泌增加，腎素-血管緊張素系統(tǒng)激活，血管緊張素增加，從而使入球小動(dòng)脈收縮，腎小球毛細(xì)血管血壓下降，腎小球有效濾過壓下降，腎小球?yàn)V過率下降，導(dǎo)致少尿。（2） 腎小管阻塞：當(dāng)HgCl2引起急性腎小管上皮細(xì)胞壞死時(shí)，管型、細(xì)胞碎片或細(xì)胞腫脹等阻塞腎小管，直接引起少尿；另一方面，近端腎小管阻塞，腎小囊內(nèi)壓升高，有效濾過壓下降，腎小球?yàn)V過率降低，尿量減少。 （3） 原尿回漏和腎間質(zhì)水腫：腎小管上皮細(xì)胞受損，基膜斷裂，原尿到達(dá)腎小管時(shí)便回漏到腎間質(zhì)，而后進(jìn)入腎血管，直接使尿量減少。腎間質(zhì)水腫和間質(zhì)壓增高，一方面使有效濾過壓下降，導(dǎo)致腎小球?yàn)V過率降低，尿量減少；另一方面，壓迫腎血管，妨礙尿液流入腎小管，壓迫

10、腎周圍毛細(xì)血管，導(dǎo)致腎缺血，進(jìn)一步引起少尿。3.急性腎功能衰竭時(shí)的功能代謝變化：（本實(shí)驗(yàn)中毒家兔處于少尿期）（1）尿變化：少尿或無尿；低比重尿；尿鈉高；血尿、蛋白尿、管型尿。（2）水中毒：ARF時(shí)，因少尿、分解代謝所致內(nèi)生水增多、攝入水過多等原因，導(dǎo)致體內(nèi)水潴留、稀釋性低鈉血癥和細(xì)胞水腫。嚴(yán)重時(shí)可出現(xiàn)心功能不全、肺水腫和腦水腫。（3）高鉀血癥：尿量減少使鉀隨尿排出減少；組織損傷和分解代謝增強(qiáng)，使鉀大量釋放到細(xì)胞外液；酸中毒時(shí)，細(xì)胞內(nèi)鉀離子外溢；低鈉血癥，使遠(yuǎn)端小管的鉀鈉交換減少。（4）代謝性酸中毒：GFR降低，使酸性代謝產(chǎn)物在體內(nèi)蓄積；腎小管分泌H+和NH3能力降低，使NaHCO3重吸收減少；

11、分解代謝增強(qiáng)，固定酸產(chǎn)生增多。（5）氮質(zhì)血癥：血中尿素、肌酐、尿酸等非蛋白氮含量顯著增高，稱氮質(zhì)血癥，其發(fā)生主要是由于腎臟排泄功能障礙和體內(nèi)蛋白質(zhì)分解增加所致，少尿期，氮質(zhì)血癥進(jìn)行性加重，嚴(yán)重時(shí)可出現(xiàn)尿毒癥。4. 內(nèi)生肌酐清除率（80120ml/min）測定的臨床意義： 肌酐是肌酸代謝的最終產(chǎn)物，體內(nèi)的肌酸大部分與磷酸結(jié)合生成磷酸肌酸，磷酸肌酸與能量代謝有關(guān)。在體外肌酐與肌酸可以互變，在酸性溶液中，肌酸及易脫水而變成肌酐，在堿性溶液中，肌酐則可變回肌酸。但是，在體內(nèi)肌酸脫水生成肌酐是一種不可逆反應(yīng)。（1）判斷腎小球損害的敏感指標(biāo)：多數(shù)急性腎小球腎炎內(nèi)生肌酐清除率低到正常值的80%以下，但血清尿

12、素氮、肌酐測定仍在正常范圍，故是較早的反映腎小球?yàn)V過功能的敏感指標(biāo)。（2）初步估價(jià)腎臟的損害程度：輕度損害Ccr在7051ml/min；中度損害在5030ml/min；小于30ml/min為重度損害；慢性腎功能衰竭病人若清除率在2011ml/min為早期腎功能衰竭；106ml/min為晚期腎功能衰竭；小于5ml/min為終末期腎功能衰竭。（3）指導(dǎo)治療：內(nèi)生肌酐清除率為3040ml/min，應(yīng)限制蛋白質(zhì)攝入；小于30ml/min噻嗪類利尿劑治療常無效；小于10ml/min應(yīng)結(jié)合臨床進(jìn)行透析治療，對袢利尿劑（如速尿、利尿酸鈉）的反應(yīng)也已極差。（4）慢性腎炎臨床分型的參考：如慢性腎炎普通型Ccr常

13、降低，腎病型Ccr常偏高。5.尿肌酐/血肌酐比值：功能性腎衰40，器質(zhì)性腎衰20。功能性腎衰（也叫腎前性腎衰）由腎的灌流不足引起，使腎血流量和腎小球?yàn)V過率下降，但內(nèi)生肌酐在體內(nèi)積聚不多；器質(zhì)性腎衰由腎小球?yàn)V過率下降、腎小管壞死引起，內(nèi)生肌酐不能從尿中排出，從而使血肌酐濃度急劇升高。6.氯化汞中毒導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞損傷，尿量減少，酚紅排泄率降低。酚紅排泄率是反映腎血流量與腎小管排泌功能的指標(biāo)。注射大量的葡萄糖溶液是為了造成滲透性利尿，利于排除酚紅。酚紅是一種對人體無害的紅色染料，經(jīng)靜脈注射后，大部分與血漿蛋白結(jié)合，除20%為肝臟清除，經(jīng)膽道排出外，其余則由腎臟排出。在腎臟的排泌過程中，94%由近

14、曲小管上皮細(xì)胞主動(dòng)排泌，小部分不與白蛋白結(jié)合者可從腎小球?yàn)V過，尿中排出4%左右，2%通膽汁到大腸由糞便排出，因?yàn)榉蛹t大部分通過近曲小管分泌、排出，所以其尿中排出量，可作為判斷近曲小管排泌功能的指標(biāo)。氯化汞中毒導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞損傷，尿量減少，酚紅排泄率降低。7.腎形態(tài)觀察：（1）正常家兔：表面光滑，皮質(zhì)紅褐色，髓質(zhì)淡紅色，皮髓質(zhì)紋理清楚。（2）中毒家兔：重量增加，體積增大，包膜緊張，皮質(zhì)腫脹蒼白，紋理不清，髓質(zhì)充血。實(shí)驗(yàn)結(jié)論： 氯化汞中毒導(dǎo)致的急性腎功能不全時(shí)，家兔尿肌酐/血肌酐1，酚紅排泄率降低；腎臟的主要病理改變?yōu)槟I臟腫大、顏色蒼白、重量增加；切面皮質(zhì)蒼白、髓質(zhì)呈暗紅色。參考文獻(xiàn)：1.陸源