雞新城疫的診斷

1、技能訓(xùn)練8 雞新城疫的診斷 掌握雞新城疫的臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室診斷的方法實(shí)訓(xùn)目標(biāo)疑似雞新城疫病死雞、剪刀、鑷子、病理剖檢記錄表、工作服、膠靴、圍裙、橡膠手套和來蘇兒等。911日齡SPF雞胚、恒溫箱、照蛋器、蛋盤、接種箱、注射器（15ml）、針頭、中號(hào)鑷子、剪刀、眼科剪刀和鑷子、毛細(xì)吸管、橡皮乳頭、滅菌平皿、試管、吸管（0.5ml、1ml、5ml）、酒精燈、試管架、膠布、蠟、錐子、煮沸消毒器、消毒劑（3%碘酊棉、75%酒精棉、5%石炭酸）、離心機(jī)、離心管、生理鹽水、96孔V型微量血凝集反應(yīng)板、微量吸液器、混合振蕩器；1%雞紅細(xì)胞懸液、雞新城疫弱毒疫苗、雞新城疫標(biāo)準(zhǔn)陽性血清等。 儀器材料方法步驟（一）

2、ND的臨床診斷（二）ND的實(shí)驗(yàn)室診斷（一）ND的臨床診斷 1按家禽尸體剖檢程序，首先檢查雞的體表組織，然后檢查皮下組織，最后打開體腔，暴露整個(gè)胸腔和腹腔器官，檢查內(nèi)部組織器官。雞新城疫主要檢查消化道病變。2將剖檢所見填寫于病理剖檢記錄表內(nèi)。3根據(jù)剖檢記錄，歸納分析進(jìn)行初步診斷。 （二）ND的實(shí)驗(yàn)室診斷 1病毒的分離培養(yǎng) 2病毒的鑒定 1病毒的分離培養(yǎng)（1）病料采集與處理分離病毒的材料應(yīng)來自早期病例病雞撲殺后應(yīng)用無菌操作采取脾、腦、肺、肝、腎等器官組織混合將病料制成1 51 10的乳劑，每毫升加入青霉素10000單位、鏈霉素10mg，以抑制可能污染的細(xì)菌置冰箱中作用24h，然后離心沉淀，取其上清

3、液作為接種材料。在這同時(shí)，應(yīng)對(duì)接種材料作無菌檢查如有細(xì)菌生長，應(yīng)將原始材料再作除菌處理，也可改用細(xì)菌濾器過濾除菌。 （2）雞胚接種 用911日齡的SPF雞胚（如果沒有SPF雞胚，也可用非免疫雞胚），將上述處理過的材料，取0.10.2ml接種于尿囊腔內(nèi)。接種后以熔化的石蠟將卵殼上的接種孔封閉，繼續(xù)置溫箱內(nèi)。每日上下午各照蛋一次，連續(xù)觀察5d，接種24h內(nèi)死亡的雞胚，廢棄不用，于24h后死亡的雞胚，立即取出置4冰箱冷4h以上（氣室向上）。然后用無菌操作吸取尿囊液，并做無菌檢查，尿囊液渾濁應(yīng)廢棄。留下無菌的尿囊液置低溫冰箱保存，供作進(jìn)一步鑒定。在這同時(shí)可將雞胚傾入一平皿內(nèi)，仔細(xì)觀察病變。由新城疫病毒

4、致死的雞胚，胚體全身充血，在胚頭、胸、背、翅和趾部有小出血點(diǎn)，尤其以翅，趾部明顯，這在診斷上有參考價(jià)值。 2病毒的鑒定（1）微量血凝試驗(yàn)（HA）（2）微量血凝抑制試驗(yàn)（HI）（1）微量血凝試驗(yàn)（HA） 一方面判斷分離病毒是否具有血凝性，另一方面確定HI試驗(yàn)中所用抗原的HA滴度。用微量移液器向反應(yīng)板每個(gè)孔分別加生理鹽水50l，共加12孔。換一吸頭吸取50l待檢病毒液，加于第1孔的生理鹽水中，并用移液器擠壓35次使病毒混和均勻，然后取50l移入第二孔，混勻后取50l移入第3孔，依次倍比稀釋到第11孔，第11孔中液體混勻后從中吸出50l棄去。第12孔不加病毒抗原，作對(duì)照。換一吸頭吸取1紅細(xì)胞懸液依次

5、加入112個(gè)孔中，每孔加50l。加樣完畢，將反應(yīng)板置于微型振蕩器上振蕩1min。并放室溫（1820）下作用3040min，或置37恒溫培養(yǎng)箱中作用1530min取出，觀察并判定結(jié)果。結(jié)果判定及記錄“”表示紅細(xì)胞完全凝集。紅細(xì)胞凝集后完全沉于反應(yīng)孔底層，呈顆粒狀，邊緣不整或鋸齒狀，而上層液體中無懸浮的紅細(xì)胞?！啊北硎炯t細(xì)胞未凝集。反應(yīng)孔底部的紅細(xì)胞沒有凝集成一層，而是全部沉淀成小圓點(diǎn)，位于小孔最底端，邊緣水平?！啊北硎静糠帜?。紅細(xì)胞下沉情況介于“”與“”之間。新城疫病毒液能凝集雞的紅細(xì)胞，但隨著病毒液被稀釋，其凝集紅細(xì)胞的作用逐漸變?nèi)?。稀釋到一定倍?shù)時(shí)，就不能使紅細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凝集，從而出現(xiàn)可

6、疑或陰性結(jié)果。血凝試驗(yàn)（HA） 孔號(hào)試劑1239101112生理鹽水50505050505050病毒液5050505050501%的紅細(xì)胞50505050505050振蕩1min，置于室溫3040min，或置37溫箱1530 min 結(jié)果觀察（血凝價(jià)） 凝 不凝不凝 不滑 滑滑棄HA視頻用上述分離病毒制備4單位病毒，再用標(biāo)準(zhǔn)的陽性血清進(jìn)行HI試驗(yàn)。用微量移液器向112號(hào)孔中分別加入50l生理鹽水。 換一吸頭取標(biāo)準(zhǔn)陽性血清50l 置于第孔中，擠壓35次混勻，吸出50l放入第二孔中，然后依次倍比稀釋至第10孔，并將第10 孔的液體混勻后取50l棄去。第11孔為病毒對(duì)照，第12孔為鹽水對(duì)照。用微量移

7、液器吸取稀釋好的4個(gè)血凝單位的病毒抗原，向111孔中分別加50l。然后，振蕩1min，將反應(yīng)板置室溫下作用20min， 或在37恒溫培養(yǎng)箱中作用510min。取出血凝板，用微量移液器向每一孔中各加入1紅細(xì)胞懸液50l，再將反應(yīng)板置于微型振蕩器上振蕩1530s，混和均勻。將反應(yīng)板置37 溫箱中作用1530min 后取出，觀察并記錄結(jié)果。（2）微量血凝抑制試驗(yàn)（HI）結(jié)果判斷和記錄“”表示紅細(xì)胞凝集抑制。高濃度的新城疫抗體能抑制新城疫病毒對(duì)雞紅細(xì)胞的凝集作用，使反應(yīng)孔中的紅細(xì)胞呈圓點(diǎn)狀沉淀于反應(yīng)孔底端中央，而不出現(xiàn)血凝現(xiàn)象?！啊北硎炯t細(xì)胞完全凝集。隨著血清被稀釋，它對(duì)病毒血凝作用的抑制減弱，反應(yīng)孔中的病毒逐漸表現(xiàn)出血凝作用，而最終使紅細(xì)胞完全凝集，沉于反應(yīng)孔底層，邊緣不整或呈鋸齒狀?！啊北硎静煌耆种啤＜t細(xì)胞下沉情況介于“”與“”之間。如果待檢抗體被標(biāo)準(zhǔn)陽性血清所中和，則確診為NDV。血凝抑制試驗(yàn)（HI） 孔號(hào)試劑1239101112生理鹽水50505050505050待檢血清50505050504單位病毒505050505050振蕩1min，置于室溫20min，或置37溫箱中