抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑注冊技術(shù)審查指導原則2020版

1、附件 5抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑注冊技術(shù)審查指導原則本指導原則旨在指導注冊申請人對抗甲狀腺過氧化物 酶抗體測定試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術(shù) 審評部門審評注冊申報資料提供參考。本指導原則是對抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑的 一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否 適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學依據(jù)，并依 據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。本指導原則是供申請人和審查人員使用的指導文件，不 涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能 夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細的 研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前

2、提下使用本指 導原則。本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下 制定的，隨著法規(guī)、標準體系的不斷完善和科學技術(shù)的不斷 發(fā)展，本指導原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。一、適用范圍從方法學考慮，在本文中抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定 試劑盒是指采用化學發(fā)光免疫分析技術(shù)，利用全自動、半自 動化學發(fā)光免疫分析儀，對人血清或血漿等樣本中抗甲狀腺 過氧化物酶抗體的含量進行體外定量分析的試劑?；瘜W發(fā)光 免疫分析法主要有直接化學發(fā)光、電化學發(fā)光、酶促間接化 學發(fā)光等。根據(jù)體外診斷試劑注冊管理辦法（國家食品藥品監(jiān) 督管理總局令第 5 號）和食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外 診斷試劑分類子目錄的通知 （食藥監(jiān)械管 2

3、013242 號）， 抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑盒的管理類別為二類，分 類代碼為 6840。本指導原則適用于進行首次注冊申報和相關(guān) 許可事項變更的產(chǎn)品。本指導原則不適用于：（一）單獨申請注冊的抗甲狀腺過氧化物酶抗體校準品 和質(zhì)控品。（二）化學發(fā)光免疫分析法原理之外的其他抗甲狀腺過 氧化物酶抗體測定試劑盒。二、注冊申報資料要求（一）綜述資料甲狀腺過氧化物酶（thyroid peroxidase , TPO）,是催化 甲狀腺激素的重要酶，由甲狀腺濾泡細胞合成。其主要成分 是由 933 個氨基酸殘基組成的分子量 103kD 的 10%糖化的 血色素樣蛋白質(zhì)，表達在細胞表面，在濾泡腔面的微絨毛處

4、分布最為豐富。 該酶可與甲狀腺球蛋白 （ Thyroglobulin ， Tg） 協(xié)同作用將 L- 酪氨酸碘化， 并將一碘酪氨酸和二碘酪氨酸聯(lián) 結(jié)成為甲狀腺激素 T4、T3和訂3。TPO也是自身免疫性甲狀 腺疾病一種重要的自身抗原，可以刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗 TPO 抗體（ Antibodies to thyroid peroxidase ， Anti-TPO ）。 Anti- TPO 作為自身免疫性甲狀腺疾病一種主要的自身抗體，可通過激活補體、 抗體依賴細胞介導的細胞毒作用和致敏的T 殺 傷細胞直接殺傷等作用機制，引起甲狀腺濾胞損傷，間接的 抑制甲狀腺素的合成，導致甲狀腺功能減退。檢測該類抗

5、體 的主要適用癥為自身免疫性甲狀腺疾?。òㄍ谎坌约谞钕?腫和橋本甲狀腺炎等）。Anti-TPO 抗體主要以 IgG 類為主，該抗體主要見于自身 免疫性甲狀腺病，如橋本甲狀腺炎（陽性率 85%100% ）、 Graves 病（陽性率 65%）、原發(fā)性黏液性水腫患者；也見于 其他器官特異性自身免疫病， 如 1 型糖尿?。栃月?14%）、 Addison 病（陽性率 31%）、惡性貧血（陽性率 55% ）及產(chǎn) 后甲狀腺炎（陽性率 15%）等。目前認為， Anti-TPO 抗體為 人類自身免疫性甲狀腺炎較理想的標志抗體，陽性結(jié)果可用 于自身免疫性甲狀腺疾病的輔助診斷。綜述資料應(yīng)主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途

6、、產(chǎn)品描述、有關(guān)生 物安全性方面的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及同類產(chǎn)品在 國內(nèi)外上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部 分應(yīng)著重從方法學、臨床應(yīng)用情況、申報注冊產(chǎn)品與目前市 場上已獲批準的同類產(chǎn)品之間的異同方面進行介紹。應(yīng)符合 體外診斷試劑注冊管理辦法（國家食品藥品監(jiān)督管理總 局令第 5 號）和關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求 和批準證明文件格式的公告（國家食品藥品監(jiān)督管理總局 公告 2014 年第 44 號）的相關(guān)要求。（二）主要原材料研究資料（如需提供）1. 所用抗原 /抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細試 驗資料。 如抗原 /抗體為申請人自制， 則應(yīng)詳述抗原 /抗體的名 稱

7、及生物學來源， 申請人對該抗原 /抗體技術(shù)指標的要求 （如 外觀、純度、蛋白濃度、效價等），且其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定， 并對其工藝有相關(guān)的驗證。 同時確定該抗原 /抗體作為 主要原材料的依據(jù)和質(zhì)量標準；如為申請人外購，則應(yīng)詳述 其名稱及生物學來源，外購方名稱，提交外購方出具的抗原 /抗體性能指標及檢驗證書，詳述申請人對該抗原/ 抗體技術(shù)指標的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。2. 質(zhì)控品（如有） 的原料選擇、 制備、定值過程及試驗資 料。3. 申請人應(yīng)根據(jù) GB/T 21415 2008/ISO 17511：2003體 外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準品和控制物質(zhì)賦 值的計量學

8、溯源性提供所用校準品的來源、賦值過程和相 應(yīng)指標、以及不確定度等內(nèi)容。明確校準品的質(zhì)量標準并提 供校準品的溯源性文件，校準品應(yīng)溯源至現(xiàn)行的國家標準品 或國際標準品。（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料 （如需提供） 生產(chǎn)工藝主要包括：各組分制備工藝的研究，包括試劑 的配方及工藝關(guān)鍵參數(shù)的確定依據(jù)等。反應(yīng)體系主要包括： 反應(yīng)條件、樣本用量、試劑用量等確定的依據(jù)。1. 主要生產(chǎn)工藝介紹，可以流程圖方式表示，并簡要說 明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。2. 產(chǎn)品反應(yīng)原理介紹。3. 抗原 /抗體包被工藝研究：申請人應(yīng)考慮如包被緩沖液 及添加量、濃度、時間、溫度等指標對產(chǎn)品性能的影響，通 過試驗確定上述指標的

9、最佳組合。4. 體系反應(yīng)條件確定：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)模式、反應(yīng)時 間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試 驗確定上述條件的最佳組合。5. 體系中樣本及試劑的加樣方式及添加量確定：申請人 應(yīng)考慮樣本加樣方式、加樣量以及試劑添加順序、添加量對 產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，通過實驗確定最佳的樣本及試劑的添 加方式和添加量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進行 處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對可用于樣本稀釋的 基質(zhì)或處理方法進行研究，通過試驗確定樣本稀釋基質(zhì)或處 理方法。確定反應(yīng)所需其他試劑用量（校準品、標記物、底 物等）的研究資料。（四）分析性能評估資料企業(yè)應(yīng)提交產(chǎn)品研制階段的所有性能驗證的

10、研究資料， 包括具體研究方法、質(zhì)控標準、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細 資料。建議選擇不少于 3 批產(chǎn)品對以下分析性能進行研究， 包括檢出限、線性、準確度、重復(fù)性、批間差、特異性等指 標。對于適用多個機型的產(chǎn)品，應(yīng)提供產(chǎn)品說明書【適用儀 器】項中所列的所有型號儀器的性能評估資料。如產(chǎn)品涉及 不同包裝規(guī)格，則需要提供每個包裝規(guī)格在不同型號儀器上 的評估資料；如不同包裝規(guī)格之間不存在性能上的差異，需 要提交包裝規(guī)格間不存在性能差異的說明。1.準確度按以下優(yōu)先順序選擇準確度性能評估方法，其結(jié)果應(yīng)滿 足相關(guān)國際 /國家及行業(yè)標準的要求：1.1 相對偏差根據(jù)企業(yè)提供的試劑盒線性區(qū)間，將有證參考物質(zhì)或其 他公認

11、的參考物質(zhì)，或由參考方法定值的人源性樣品（可適 當添加被測物，以獲得高濃度的樣品）作為樣本，合理設(shè)置23個濃度，將其作為樣本按照待測試劑盒說明書的步驟進 行檢測，每個樣品重復(fù)測定 3次，測試結(jié)果記為（Xi），按 式（1）分別計算相對偏差（Bi ）。如果3次結(jié)果都符合要求， 即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不合格，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照公式（1）計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合要求。Bi 二（Xi - T）/T X 100%z、（1）式中：Bi相對偏差；Xi 測量濃度；T 標定濃度。注：優(yōu)先考慮使用國家標準品或國際標準品、參考品

12、。1.2比對試驗參考體外診斷試劑分析性能評估相關(guān)技術(shù)審查指導原 則的要求完成準確度（方法學比對）評估。取不少于40個合理分布在線性區(qū)間內(nèi)不同濃度的人血 清或/和血漿樣本，待測 Anti-TPO試劑與生產(chǎn)企業(yè)選定的比 對系統(tǒng)進行比對試驗。每份樣本按待測試劑及選定比對系統(tǒng) 的要求分別進行檢測，每份樣本各測定1遍，用線性回歸方法對兩組結(jié)果進行線性擬合，得到線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)（r）和斜率，計算各個樣本的待測試劑測定值與比對系統(tǒng)測 定值的絕對偏差或相對偏差。1.3回收實驗參考體外診斷試劑分析性能評估相關(guān)技術(shù)審查指導原則要求完成準確度（回收實驗）評估方法：選擇接近參考區(qū)間的常規(guī)檢測樣本，分為體積相 同

13、的34份，在其中23份樣本中加入不同濃度相同體積 的待測物標準液制備待回收分析樣本，加入體積小于原體積 的10%，制成2 3個不同濃度的待回收分析樣本，計算加 入的待測物的濃度。在另一份樣本中加入同樣體積的無待測 物的溶劑，制成基礎(chǔ)樣本。用待評價系統(tǒng)對待回收分析樣本 和基礎(chǔ)樣本進行測定，通常對樣本進行3次重復(fù)測定，計算均值，取其均值進行下述計算，求得回收率。數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報告：用公式（2）計算回收率：式中：R回收率；V 加入待測物標準液的體積；Vo 基礎(chǔ)樣本的體積C基礎(chǔ)樣本加入待測標準物質(zhì)后的檢測濃度;Co基礎(chǔ)樣本的檢測濃度；Cs待測物標準液的濃度。2檢出限（LOD）申請人應(yīng)評估空白限（LOB

14、 ）和檢出限（LOD ）。 空白限的建立可使用檢測零濃度校準品或樣本稀釋液 的方法進行。例如重復(fù)測定20次，根據(jù)測量結(jié)果的平均值（M ）和標準差（SD），計算M+2SD及其對應(yīng)的濃度值， 結(jié)果應(yīng)符合企業(yè)規(guī)定要求。檢出限的確立可采用系列稀釋參考品的方法進行。建議使用國際參考品 /國家參考品進行梯度稀釋并進行至少60 次檢測， 95%以上的檢測結(jié)果高于空白限作為檢出限。最低檢 出限應(yīng)不高于 12IU/ml 。另外，應(yīng)使用最低檢出限或接近最 低檢出限水平的樣本進行檢出限的驗證，結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品技 術(shù)要求性能指標的要求。3. 線性 建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實 際檢測的樣本相似，理想的

15、樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定 上限的人血清 /血漿，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影 響。建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預(yù)期測定范 圍內(nèi)選擇 711 個濃度水平。例如，將預(yù)期測定范圍加寬至 130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平， 然后依據(jù)實驗結(jié)果 逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，確定線性范圍。驗證線性范圍時， 可以采用高濃度樣本稀釋的方法驗證線 性，將接近線性區(qū)間上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少 5 種濃度，其中低值濃度的樣本須接近線性區(qū)間的下限。按 試劑說明書操作， 對每一濃度的樣本均重復(fù)檢測不少于2 次，計算其平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進行 直線擬合，計算線

16、性相關(guān)系數(shù)r,應(yīng)不低于0.9900,線性區(qū)間 應(yīng)不窄于 12 ， 400IU/mL 。4. 重復(fù)性 重復(fù)性的評估應(yīng)包括至少兩個濃度水平的樣本進行，兩 個濃度都應(yīng)在試劑的測量范圍內(nèi)，且有一定的臨床意義，通 常選用該檢測指標的正常參考值附近樣本和病理高值樣本， 建議采用濃度為 （ 30 ±6）IU/mL 和（200 ±40）IU/mL 的樣本。分別用不同濃度的樣本各重復(fù)檢測 10 次，計算 10 次測 量結(jié)果的平均值（M ）和標準差（SD），根據(jù)公式（3）得出 變異系數(shù)（ CV ）。CV= SD/M X 100% （3）5. 批間差 用3個批號的試劑盒分別檢測濃不同濃度（建議與

17、重復(fù)性樣本濃度的選擇一致） 的樣本， 各重復(fù) 10次，計算每個濃 度樣本30次測量結(jié)果的平均值 （M ）和標準差（SD）,根據(jù) 公式（ 3）得出變異系數(shù)（ CV） ，應(yīng)不大于 15%。6. 特異性推薦參考 CLSI 的 EP7-A2 臨床生化干擾實驗批準指 南或 WS/T416-2013 干擾實驗指南進行特異性評估。6.1 交叉反應(yīng)：易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他抗體等的驗證情 況，應(yīng)至少驗證與抗甲狀腺球蛋白抗體的交叉反應(yīng)情況。6.2 干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響， 如血紅蛋白、高脂、黃疸、類風濕因子、抗核抗體、嗜異性 抗體、總蛋白以及說明書中聲稱其他的干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果 的影響。干擾物

18、濃度的分布應(yīng)覆蓋人體樣本生理及病理狀態(tài) 下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度。建議將研究結(jié)果在說明書中進行說 明。如無法獲得含有高濃度干擾物質(zhì)的樣本，可采用純品物 質(zhì)分別添加到健康人樣本、參考區(qū)間附近樣本、中濃度值樣 本中的方式進行驗證。方法為對模擬添加樣本分別進行驗 證，樣本量選擇應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計學意義，說明樣本的制備 方法及干擾試驗的評價標準，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃 度，被測物濃度至少應(yīng)包括其醫(yī)學決定水平的濃度。7. 鉤狀（ HOOK ）效應(yīng)（如適用）說明不會產(chǎn)生 HOOK 效應(yīng)的濃度上限或相關(guān)研究， 如需 稀釋，應(yīng)注明對稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。每個 濃度重復(fù) 3 份，對鉤狀效應(yīng)進行合理的驗

19、證。建議在產(chǎn)品說 明書上明示對鉤狀效應(yīng)的研究結(jié)果。過度稀釋可能影響樣本基質(zhì)，研究過程應(yīng)注意基質(zhì)效應(yīng) 影響，必要時應(yīng)提供基質(zhì)效應(yīng)研究有關(guān)的資料。8. 校準品及質(zhì)控品（如適用）參照 GB/T 21415 2008體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中 量的測量校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學溯源性的要求， 提供企業(yè)（工作）校準品及試劑盒配套校準品定值及不確定 度計算相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍確定的相關(guān) 資料。 Anti-TPO 已有國家標準品和國際標準品， 試劑盒配套 校準品和質(zhì)控品，應(yīng)參照 GB/T 21415 2008 的要求溯源至 國家（國際）標準品。如校準品或質(zhì)控品的基體不同于臨床 常用樣本類型

20、，還應(yīng)提交校準物質(zhì)互換性的相關(guān)研究資料。9. 樣本類型的研究（如適用） 如果試劑盒適用樣本類型包括血漿樣本，應(yīng)采用各種適 用抗凝劑抗凝的血漿樣本分別與血清樣本進行對比實驗研 究，樣本量的選擇應(yīng)符合統(tǒng)計學意義。方法為對比線性范圍 內(nèi)的同一病人的血清和血漿樣本，樣本濃度應(yīng)均勻分布且包 含醫(yī)學決定水平以及低值濃度，以驗證申報試劑盒對于血清 和血漿樣本檢測結(jié)果的一致性。如同一病人的不同抗凝劑抗 凝的高值血漿樣本難以獲得，可采用高值血清樣本分別添加 到健康人的血清和不同抗凝劑抗凝的血漿樣本中進行驗證。性能指標的評價方法并無統(tǒng)一的標準可依，可根據(jù)不同 的試劑特征進行，前提是必須保證研究的科學合理性。具體

21、研究方法建議參考相關(guān)國內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估 的文件進行。（五）參考區(qū)間確定資料 參考區(qū)間確定所采用的樣本來源、確定方法及詳細的試 驗資料。樣本來源覆蓋年齡、性別等因素，盡可能考慮樣本 來源的多樣性、代表性。應(yīng)明確參考人群的篩選標準，研究 各組（如性別、年齡等）例數(shù)不應(yīng)低于 120 例。建議參考 CLSI C28-A3c 或 WS/T 402-2012 臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間 的制定進行相應(yīng)研究。參考值研究結(jié)果應(yīng)在說明書【參考區(qū)間】項中進行相應(yīng) 說明。（六）穩(wěn)定性研究資料 穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑盒的穩(wěn) 定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。試劑盒穩(wěn)定性主要包括實時 穩(wěn)定性（

22、有效期）、運輸穩(wěn)定性、開瓶（在機）穩(wěn)定性、復(fù) 溶穩(wěn)定性（干粉或凍干粉）及熱穩(wěn)定性等研究，申請人可根 據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。對于實時穩(wěn)定性研 究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效 期后的研究資料。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依 據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論，應(yīng)涵蓋產(chǎn) 品中受穩(wěn)定性影響的性能指標（如準確度、線性、重復(fù)性、 檢出限等）。樣本穩(wěn)定性研究主要包括樣本在室溫、冷藏或冷凍保存 條件下抗甲狀腺過氧化物酶抗體含量的穩(wěn)定性驗證，可以在 合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的 時間段即對儲存樣本進行穩(wěn)定性驗證，從而確定不同類型樣 本的保

23、存條件及使用期限。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融 次數(shù)進行研究。試劑盒穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在 說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中分別進行 詳細說明。（七）臨床評價資料 根據(jù)關(guān)于公布新修訂免于進行臨床試驗醫(yī)療器械目錄 的通告（國家藥品監(jiān)督管理局通告 2018 年第 94號），抗 甲狀腺過氧化物酶（TPO）抗體檢測試劑可免于進行臨床試 驗，申請人可依照免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床 評價資料基本要求（試行）開展評價。申請人如無法或不 適于按照上述要求對產(chǎn)品進行臨床評價，則應(yīng)按照體外診 斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則的要求開展臨床試驗。下面僅對臨床試驗中的基本問題進行闡

24、述。1. 臨床試驗研究方法 選擇境內(nèi)已批準上市、臨床普遍認為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試 劑）與之進行比較研究試驗，證明本產(chǎn)品與已上市產(chǎn)品等效 或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。對比試劑盡量選擇方法學相同、線性范 圍、參考區(qū)間及精密度等性能接近的同類產(chǎn)品。2. 臨床試驗機構(gòu)的選擇2.1 應(yīng)在至少兩家經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局備案的 臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗。2.2 臨床試驗機構(gòu)應(yīng)有能力提供臨床試驗所需的各類樣 本，實驗操作人員有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀 器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實 驗中，考核試劑和對比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，定

25、期對儀器進行校準，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重 復(fù)性。3. 臨床試驗方案 臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學、 統(tǒng)計學等多方面考慮，設(shè)計科學合理的臨床研究方案。各臨 床試驗機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗 過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程 應(yīng)在臨床試驗機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操 作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導外，不 得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。試驗方案中應(yīng)確定嚴格的樣本納入 /排除標準， 任何已經(jīng) 入選的樣本再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明 原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法及樣

26、本隨機分配以保證試驗結(jié)果的客觀性。待評價試劑的樣本類 型應(yīng)不超過參比試劑的樣本類型，且每種樣本類型例數(shù)的選 擇應(yīng)符合基本的統(tǒng)計學要求。4. 研究對象選擇4.1 臨床試驗樣本量的確定：在符合指導原則有關(guān)最低 樣本要求的前提下，還應(yīng)符合統(tǒng)計學要求。4.1.1 對于同源的不同樣本類型， 其中一種樣本類型臨床 試驗的樣本數(shù)至少為 200 例，其他樣本類型在至少 2 家（含 2 家）臨床試驗機構(gòu)共驗證不少于 100 例受試者的自身血清、 血漿樣本測試結(jié)果間的一致性 （采用考核試劑評價） ，其中不 同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應(yīng)一致。4.1.2 應(yīng)考慮樣本量的分布， 各臨床試驗機構(gòu)樣本量和樣本分布

27、應(yīng)相對均衡。4.2 按說明書的樣本要求，明確試驗用樣本的存貯條件、 可否凍融等要求及避免使用的樣本，血漿樣本應(yīng)明確抗凝劑 的要求。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法 避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時 應(yīng)考慮其影響。4.3 各種類型的樣本濃度應(yīng)覆蓋考核試劑線性范圍，盡 可能均勻分布。盡可能使不少于 30%樣本的測定值處于參考 區(qū)間以外，但在線性范圍內(nèi)。4.4 變更事項相關(guān)的臨床試驗 :涉及產(chǎn)品檢測條件優(yōu)化、 增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項， 產(chǎn)品臨床試驗總樣本數(shù)至少為 100 例，并在至少 2 家（含 2 家）臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗；變更抗原、

28、抗體等主要原 材料的供應(yīng)商、陽性判斷值或參考區(qū)間的變化及增加臨床適 應(yīng)癥等變更事項，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床 試驗總樣本數(shù)。4.5 應(yīng)考慮在臨床試驗中選擇部分含干擾物質(zhì)的標本進 行對比研究，包括高脂、溶血、黃疸的樣本、類風濕因子等 陽性樣本，易共存的其他自身免疫抗體同時升高的患者標 本，以從臨床角度驗證試劑的特異性。5. 統(tǒng)計分析 對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)結(jié)合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況選擇合適的統(tǒng)計方法，如離群值判斷、相關(guān)分析、 線性回歸、 Bland-Alraman 分析（如絕對偏倚 /偏差及相對偏 倚/偏差分析）等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對 考核試劑和對比試劑兩組

29、檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析， 以 y=a+bx 和 R2 的形式給出回歸分析的擬合方程，其中： y 是考核試劑結(jié)果， x 是對比試劑結(jié)果， b 是方程斜率， a 是 y 軸截距，R2是判定系數(shù)，r是相關(guān)系數(shù)，同時應(yīng)給出b的95% （或 99%）置信區(qū)間。結(jié)合臨床試驗數(shù)據(jù)的對比情況，統(tǒng)計 學負責人進行統(tǒng)計分析，應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果具 有較好的相關(guān)性。分別計算醫(yī)學決定水平處或參考區(qū)間臨界值相對偏倚 / 偏差及 95%置信區(qū)間。 醫(yī)學決定水平處相對偏倚應(yīng)不大于允 許誤差（建議參照 1/2CLIA '、818/2 室間質(zhì)評可接受范圍、 1/2 來源于生物變異的總允許誤差、 衛(wèi)生行業(yè)標

30、準、 準確度相 對偏差等相關(guān)要求設(shè)定允許誤差）。6. 結(jié)果差異樣本的驗證對于比較研究試驗中測定結(jié)果不符的樣本， 應(yīng)采用 “金標 準”或其他合理的方法進行復(fù)核， 以便對臨床試驗結(jié)果進行分 析。如無需復(fù)核，應(yīng)詳細說明理由。7. 臨床試驗總結(jié)報告撰寫 臨床試驗總結(jié)報告應(yīng)對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分 析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和 統(tǒng)計分析方法。具體撰寫內(nèi)容應(yīng)符合關(guān)于發(fā)布體外診斷試 劑臨床試驗技術(shù)指導原則的通告 （國家食品藥品監(jiān)督管理 總局通告 2014 年第 16 號）的要求。（八）產(chǎn)品風險分析資料 申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的

31、各個環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、 可能的使用錯誤、 與安全性有關(guān)的特征、 已知及可預(yù)見的危 害等方面的判定以及對患者風險的估計進行風險分析，應(yīng) 符合 YY/T 0316 2016/ISO 14971 ： 2007醫(yī)療器械風險管 理對醫(yī)療器械的應(yīng)用及附錄 H 的要求。風險分析資料應(yīng)包含以下內(nèi)容：1. 概述： 簡要介紹風險分析資料的編制依據(jù)、 適用范圍、 產(chǎn)品描述、風險管理計劃及實施情況等。2. 風險管理人員及其職責分工：明確風險管理小組成員 及職責，制定風險管理流程圖，明確風險管理活動的評審要 求等。3. 風險可接受準則：明確風險可接受的準則。4. 預(yù)期用途和安全性有關(guān)特征的判定：以YY/T 031620

32、16 附錄 H 為基礎(chǔ)，判定產(chǎn)品預(yù)期用途和與安全性有關(guān)的 特性，判定已知和可預(yù)見的危害、對患者風險的評估，并形 成問題清單。5. 風險評價、風險控制和風險控制措施：對每一判定為危 害的不正確結(jié)果的風險進行評價，并制定相應(yīng)的風險控制方案 及措施。6. 綜合剩余風險的可接受性評價：對比采取風險控制措 施前后的風險情況，對剩余風險的可接受性進行評價。7. 風險控制措施驗證：對風險控制措施的有效性進行驗證 分析。8. 生產(chǎn)和生產(chǎn)后監(jiān)測：對產(chǎn)品生產(chǎn)和生產(chǎn)后的性能進行 內(nèi)部和外部的監(jiān)測。內(nèi)部監(jiān)測包括生產(chǎn)過程控制，外部監(jiān)測 包括用戶投訴、不良事件、第三方性能評價等。本項內(nèi)容由 產(chǎn)品上市后補充，產(chǎn)品注冊時提供

33、監(jiān)測信息表格的設(shè)計內(nèi) 容。9. 風險管理評審結(jié)論： 風險管理小組下達風險評審結(jié)論（九）產(chǎn)品技術(shù)要求產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合 體外診斷試劑注冊管理辦法 （國 家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號）和關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械 產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導原則的通告（國家食品藥品監(jiān)督管 理總局通告 2014 年第 9 號）的相關(guān)規(guī)定。產(chǎn)品技術(shù)要求不得低于行業(yè)標準 YY/T 1458 2016抗 甲狀腺過氧化物酶抗體定量檢測試劑（盒）（化學發(fā)光免疫 分析法）的要求。作為定量檢測試劑盒，產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)主要包括以下性 能指標：外觀、裝量、檢出限、線性、準確度、重復(fù)性、批 間差等。若有國家標準品或國際標準品、參考品，準確度首 選國

34、家標準品或國際標準品、參考品進行評估。如注冊單元中包含校準品或質(zhì)控品，其性能指標的檢驗 方法應(yīng)在技術(shù)要求中予以描述。應(yīng)至少包含外觀、裝量（干 粉試劑可不做）、賦值準確度、均勻性。凍干型校準品和質(zhì) 控品還應(yīng)檢測批內(nèi)瓶間差和復(fù)溶穩(wěn)定性。（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告 根據(jù)關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準 證明文件格式的公告（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2014 年第 44 號）的要求，首次申請注冊的第二類產(chǎn)品應(yīng)該 在國家食品藥品監(jiān)督管理部門認可的、具有相應(yīng)承檢范圍的 醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進行樣品的注冊檢測。 Anti-TPO 已有國家 參考品、標準品，在注冊檢測時應(yīng)采用國家參考品、標準品 進行注冊

35、檢驗。注冊申報資料中應(yīng)包括相應(yīng)的注冊檢驗報告 和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價意見。注冊審查時提出補充檢驗要求 的，應(yīng)在原檢驗機構(gòu)進行檢驗。（十一）產(chǎn)品說明書 說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、樣本要求、檢驗方法、檢 測結(jié)果的解釋以及注意事項等重要信息，是指導使用者正確 操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學解釋的重要依 據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文 件之一。產(chǎn)品說明書的編寫應(yīng)符合關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑 說明書編寫指導原則的通告（國家食品藥品監(jiān)督管理總局 通告 2014 年第 17 號）的要求，境外試劑的中文說明書除格 式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯 力求準確且符合中文

36、表達習慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng) 與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致， 如某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行 標注，并單獨列明文獻的相關(guān)信息。根據(jù)關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通 告（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2014 年第 17 號）的 要求并結(jié)合抗甲狀腺過氧化物酶抗體本身的特點，對試劑說 明書的重點內(nèi)容進行詳細說明，以指導注冊申報人員更合理 地完成說明書編制。1. 【產(chǎn)品名稱】（1）通用名稱： 試劑盒名稱由三部分組成： 被測物名稱、 用途、方法或原理。例如：抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試 劑盒（化學發(fā)光免疫分析法）。名稱中不應(yīng)當出現(xiàn)樣本類型 及

37、定量等內(nèi)容。（2）英文名稱（如有）應(yīng)當正確、完整，可直譯，不宜 只寫縮寫。2. 【包裝規(guī)格】(1)應(yīng)與產(chǎn)品技術(shù)要求中所列的包裝規(guī)格及型號一致。(2) 注明裝量或可測試的樣本數(shù)， 如x測試/盒、xx mL(3) 注明各包裝規(guī)格的數(shù)量，如20mL X2( 4)如申報產(chǎn)品的包裝規(guī)格較多， 不同包裝規(guī)格之間應(yīng)按照分隔層次分別使用頓號、逗號、分號進行區(qū)分，統(tǒng)一以 句號結(jié)束。如僅單一包裝規(guī)格，其后可以不加標點符號。3. 【預(yù)期用途】 第一段：產(chǎn)品的預(yù)期用途建議描述為： 本產(chǎn)品用于定量檢 測人血清或血漿中抗甲狀腺過氧化物酶抗體的含量。適用的 樣本類型應(yīng)結(jié)合實際的臨床研究情況進行確認。第二段：簡要介紹抗甲狀腺

38、過氧化物酶抗體的臨床意義。注：臨床適應(yīng)癥相關(guān)信息應(yīng)提供文獻出處(標注并在 【參考文獻】列出) 。4. 【檢驗原理】詳細說明檢驗原理、 方法，必要時可采用圖示方法描述。5. 【主要組成成分】5.1 說明產(chǎn)品包含試劑組分的名稱、 數(shù)量等信息， 涉及的 英文縮寫首次出現(xiàn)應(yīng)全部以中文表述。5.2 對于多組分試劑應(yīng)明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。如可互換，應(yīng)提交相關(guān)驗證材料。5.3 如試劑盒中包含耗材，應(yīng)列明耗材名稱、數(shù)量等信5.4 對于產(chǎn)品中不包含，但對該試驗必需的試劑組分，列出此類試劑的名稱，提供稀釋或混合方法及其他相關(guān)信5.5 試劑盒中如包含校準品和 /或質(zhì)控品，應(yīng)說明其主要 組成成分

39、及其生物學來源：應(yīng)注明校準品的定值及其溯源 性，溯源性至少應(yīng)寫明溯源到的最高級別，包括：標準物質(zhì) 的發(fā)布單位。 質(zhì)控品的靶值范圍如為批特異， 可注明批特異， 并附單獨的靶值單。6. 【儲存條件及有效期】 根據(jù)產(chǎn)品的實時穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、在機穩(wěn)定性等穩(wěn) 定性研究結(jié)果，對產(chǎn)品的儲存條件及有效期做以下說明：6.1說明產(chǎn)品的儲存條件及有效期，女口： 2C8C、-18C以下或其他溫度條件保存的有效期限。6.2 如果打開包裝后產(chǎn)品或組分的穩(wěn)定性不同于原包裝 產(chǎn)品，則打開包裝后產(chǎn)品或組分的儲存條件也必須注明。6.3 如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應(yīng)對各組分的 儲存條件和有效期分別進行描述。6.4 對于可

40、以冷凍的試劑盒應(yīng)注明凍融次數(shù)限制。6.5增加“生產(chǎn)日期、 使用期限或者失效日期： 見標簽 ”的 字樣。注 1 ：保存條件不應(yīng)有模糊表述，穩(wěn)定期限應(yīng)以月或日 或小時為單位。注 2：保存條件不應(yīng)有模糊表述， 如“常溫”、 “室溫 ”，應(yīng) 明確貯存溫度，如2 C8,C有效期12個月。7. 【適用儀器】 說明可適用的儀器及型號，應(yīng)寫明具體適用儀器的型 號，不能泛指某一系列儀器。適用儀器需寫明廠家及型號， 如不同包裝規(guī)格適用于不同的機型，可寫明適用關(guān)系。8. 【樣本要求】重點明確以下內(nèi)容：8.1 明確本產(chǎn)品適用的樣本類型，血液樣本應(yīng)當說明對采 血管及抗凝劑的要求， 其他樣本應(yīng)說明樣本采集、 處理及保存

41、方式。8.2 樣本采集：采集時間點是否受臨床癥狀、用藥情況等 因素的影響，盡量減少由于樣本采集或處理不當對實驗造成的 影響。8.3 樣本處理、 運送及保存： 明確樣本處理方法、 樣本的 保存條件及期限（短期、長期）等。冷藏 /冷凍樣本檢測前是 否須恢復(fù)室溫，凍融次數(shù)的要求。8.4 應(yīng)與樣本穩(wěn)定性的研究一致。9. 【檢驗方法】詳細說明實驗操作的各個步驟，包括：9.1實驗條件： 實驗環(huán)境的溫度、 濕度等注意事項， 檢驗 試劑及樣本復(fù)溫、試劑孵育溫度等要求。9.2 試劑準備及配制方法、注意事項。9.3 待測樣本的預(yù)處理方法、步驟及注意事項。9.4 明確樣本檢測的操作步驟，如樣本滿足臨床檢測需 要的加

42、樣量及觀察時間。9.5 校準： 校準品的使用方法、 注意事項、 校準曲線的繪 制方法。對適用于具有校準曲線保存功能檢測儀器的產(chǎn)品， 應(yīng)注明校準周期。9.6 質(zhì)量控制：明確質(zhì)控品的選擇、質(zhì)控品的使用方法、 對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等；建議在本部 分注明以下字樣：如果質(zhì)控失控時，應(yīng)分析原因并采取糾正 措施。10. 【參考區(qū)間】10.1 應(yīng)注明常用樣本類型的正常參考區(qū)間，并簡要說明 參考區(qū)間確定的依據(jù)， 如樣本量、 人群、年齡、 統(tǒng)計方法等。10.2 建議注明以下字樣 “建議各實驗室根據(jù)實際條件及 接觸人群建立自己的參考區(qū)間 ”。11. 【檢驗結(jié)果的解釋】 對所有可能出現(xiàn)的結(jié)果進行合理的解釋：11.1 本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，不得作為患者 病情評價的唯一指標，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/ 體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。11.2 分析異常值出現(xiàn)的可能因素，明確說明何種情況下 需要進行重復(fù)檢測，以及在重復(fù)檢測時對待測樣本可能采取 的優(yōu)化條件等進行詳述。11.3 超出檢測范圍的樣本怎樣報告結(jié)果，如要得到準確 的結(jié)果需怎樣處理，如需稀釋，應(yīng)注明稀釋方法、最佳或最 大稀釋比例等。12. 【檢驗方法的局限性】12.1 干擾物質(zhì)及鉤狀效應(yīng)（ HOOK 效應(yīng)，如適用）對檢 測結(jié)果的影響，結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、嚴重等模糊表 述。12