微生物生物技術ppt

1、2021/6/161微生物生物技術及應用微生物生物技術及應用張張 松松 Email： 華南師范大學生命科學學院華南師范大學生命科學學院20102010年年6 6月月 2021/6/162教材及參考書：教材及參考書：(1)(1)黃秀梨、辛明秀黃秀梨、辛明秀.微生物學，高等教育出版社，微生物學，高等教育出版社，2009 2009 (2)(2)張張 松松. .微生物學多媒體教學軟件（網絡版）微生物學多媒體教學軟件（網絡版）. .北京：高等教育北京：高等教育出版社出版社.2006.2006.(3)(3)黃文芳，張黃文芳，張 松松. .微生物學實驗指導微生物學實驗指導. .廣州：暨南大學出版廣州：暨南大

2、學出版社社.2003.2003.(4)(4)黃秀梨、辛明秀黃秀梨、辛明秀.微生物學實驗指導微生物學實驗指導.高等教育出版社，高等教育出版社，2008 .(5)(5)張張 松松. .食用菌學食用菌學. .廣州：廣州：華南理工大學出版社廣州：廣州：華南理工大學出版社,2000,2000。(6)(6)周德慶，微生物學教程，高等教育出版社，周德慶，微生物學教程，高等教育出版社，20022002(7)沈萍，微生物學，高等教育出版社，沈萍，微生物學，高等教育出版社，20062006(8)Lansing M. Prescott, Microbiology 5th ed (8)Lansing M. Presc

3、ott, Microbiology 5th ed 影印版，高等影印版，高等教育出版社，教育出版社，20002000(9)Madigan M T (9)Madigan M T et alet al.BrockBiology of .BrockBiology of Microorganism,10/e,Prentice Hall,2003Microorganism,10/e,Prentice Hall,20032021/6/163微生物與我們的生活微生物與我們的生活2021/6/164微生物類型微生物類型1 1、原核微生物：細菌、放線菌、衣原體、原核微生物：細菌、放線菌、衣原體2 2、真核微生物：

4、酵母菌、霉菌、真核微生物：酵母菌、霉菌3 3、非細胞型微生物：病毒、亞病毒因子、非細胞型微生物：病毒、亞病毒因子病毒2021/6/1652021/6/1662021/6/167 古代釀酒古代釀酒2021/6/168酵母菌兼性厭氧微生物（有氧、無氧）酵母菌兼性厭氧微生物（有氧、無氧）乙醇發(fā)酵：乙醇發(fā)酵： 酵母菌酵母菌C6H12O6- 2CH3CH2OH+2CO2+2ATPC6H12O6- 2CH3CH2OH+2CO2+2ATP果酒果酒2021/6/1692021/6/1610果醋：醋酸菌：好氧（果醋：醋酸菌：好氧（O2O2）2021/6/16112021/6/1612毛霉形態(tài)：菌絲無隔膜孢囊孢子

5、接合孢子2021/6/1613應用：釀造腐乳應用：釀造腐乳1 1、前發(fā)酵：毛霉的生長，、前發(fā)酵：毛霉的生長，15-2015-20，菌膜形成；，菌膜形成； 毛霉（蛋白酶等）毛霉（蛋白酶等） 蛋白質蛋白質-氨基酸氨基酸2 2、后發(fā)酵：風味形成。、后發(fā)酵：風味形成。2021/6/1614乳酸發(fā)酵乳酸發(fā)酵泡菜、酸奶泡菜、酸奶2021/6/16152021/6/16162021/6/16172021/6/16182021/6/16192021/6/16202021/6/16212021/6/16222021/6/1623t 家居環(huán)境家居環(huán)境（菜板、抹布等）（菜板、抹布等）；t 人體體表及體內人體體表及體

6、內（口腔、皮膚、腸道等）（口腔、皮膚、腸道等） ：微生物無處不在，我們無時不生活在微生物無處不在，我們無時不生活在“微生物的海洋微生物的海洋”中。中。t土壤；土壤；t紙幣紙幣（成都制造出抗菌人民幣，（成都制造出抗菌人民幣，2003）；t 空氣空氣（每個噴嚏的飛沫含每個噴嚏的飛沫含4500-150000個細菌，重感冒患者為個細菌，重感冒患者為8500萬萬）；2021/6/1624微生物既是人類的敵人，更是人類的朋友！微生物既是人類的敵人，更是人類的朋友！時時刻刻與微生物時時刻刻與微生物“共舞共舞” 是是 禍禍？是是 福福？2021/6/1625t 物質循環(huán)；物質循環(huán)；微生物是人類的朋友！微生物是

7、人類的朋友！t 體內的正常菌群是人及動物健康的基本保證；體內的正常菌群是人及動物健康的基本保證； t 有用物質的生產；有用物質的生產；t 基因工程為代表的現(xiàn)代生物技術；基因工程為代表的現(xiàn)代生物技術；2021/6/1626少數(shù)微生物也是人類的敵人少數(shù)微生物也是人類的敵人！天花；天花；鼠疫；鼠疫；艾滋??；艾滋??；瘋牛??；瘋牛??；埃博拉病毒；埃博拉病毒；SARS；禽流感；禽流感；2021/6/16272021/6/16282021/6/1629“在近代科學中，對人類福利最大的一門科學，在近代科學中，對人類福利最大的一門科學，要算是微生物學了。要算是微生物學了?！?021/6/1630微生物生物技術微

8、生物生物技術2021/6/1631 微生物學基本操作技術微生物學基本操作技術 2021/6/1632基本操作技術基本操作技術1 1：培養(yǎng)基的制備：培養(yǎng)基的制備 2021/6/1633 培養(yǎng)基培養(yǎng)基為人工培養(yǎng)微生物而制備、提供微生為人工培養(yǎng)微生物而制備、提供微生物以合適營養(yǎng)條件的基質。物以合適營養(yǎng)條件的基質。 2021/6/1634 培養(yǎng)基成分培養(yǎng)基成分 微生物的生長需要有微生物的生長需要有碳源、氮源碳源、氮源、無機鹽、無機鹽、生長因子等營養(yǎng)物質。生長因子等營養(yǎng)物質。 碳源為微生物營養(yǎng)提供所需的碳架和能源來碳源為微生物營養(yǎng)提供所需的碳架和能源來源，主要有源，主要有葡萄糖葡萄糖、淀粉、淀粉、CO2

9、CO2等。等。 氮源為微生物提供所需氮素的營養(yǎng)來源，主氮源為微生物提供所需氮素的營養(yǎng)來源，主要有要有蛋白胨蛋白胨、硝酸鹽、銨鹽、分子態(tài)氮等。、硝酸鹽、銨鹽、分子態(tài)氮等。 無機鹽為微生物提供除碳、氮源以外的各種無機鹽為微生物提供除碳、氮源以外的各種元素，主要有元素，主要有KH2PO4 KH2PO4 、MgSO4MgSO4、NaClNaCl、CaCl2CaCl2等。等。 生長因子為微生物生長提供不可缺少的微量生長因子為微生物生長提供不可缺少的微量有機物質，主要有維生素等。有機物質，主要有維生素等。2021/6/1635 配制培養(yǎng)基的原則配制培養(yǎng)基的原則1.1.根據(jù)不同微生物類型配制不同的培養(yǎng)基。根

10、據(jù)不同微生物類型配制不同的培養(yǎng)基。 培養(yǎng)細菌、放線菌、酵母菌和霉菌的培養(yǎng)基是不同的。培養(yǎng)細菌、放線菌、酵母菌和霉菌的培養(yǎng)基是不同的。細菌細菌 采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 牛肉膏牛肉膏 3 g; 3 g; 蛋白胨蛋白胨 5 g; 5 g; 水水 1 000 mL; pH 7.21 000 mL; pH 7.27.4 7.4 放線菌放線菌 采用高氏采用高氏1 1號培養(yǎng)基號培養(yǎng)基 可溶性淀粉可溶性淀粉 20 g; KNO3 1 g; K2HPO4 1 g; 20 g; KNO3 1 g; K2HPO4 1 g; MgSO47H2O 0.5 g; NaCl 1 g; FeSO4H2O

11、 0.01 g; MgSO47H2O 0.5 g; NaCl 1 g; FeSO4H2O 0.01 g; 水水 1 000 mL; pH 7.21 000 mL; pH 7.27.4 7.4 酵母和霉菌酵母和霉菌 采用察氏培養(yǎng)基采用察氏培養(yǎng)基蔗糖蔗糖 30 g; NaNO3 3 g; KCl 0.5 g; K2HPO4 1 g; 30 g; NaNO3 3 g; KCl 0.5 g; K2HPO4 1 g; FeSO4H2O 0.01 g; FeSO4H2O 0.01 g; MgSO47H2O 0.5 g; MgSO47H2O 0.5 g; 水水 1 000 mL; pH 6.01 000 m

12、L; pH 6.0培養(yǎng)不同營養(yǎng)類型的微生物也各有不同的培養(yǎng)基。培養(yǎng)不同營養(yǎng)類型的微生物也各有不同的培養(yǎng)基。2021/6/16362.2.注意各種營養(yǎng)物質的濃度與配比注意各種營養(yǎng)物質的濃度與配比。 3.3.控制培養(yǎng)基的條件控制培養(yǎng)基的條件（pHpH、O2O2和和CO2CO2、螯合劑等）培養(yǎng)、螯合劑等）培養(yǎng)基?；?。 pH pH 控制在一定的范圍之內，通常在培養(yǎng)基里加控制在一定的范圍之內，通常在培養(yǎng)基里加一些緩沖劑，如一些緩沖劑，如K2HPO4K2HPO4、 KH2PO4KH2PO4等。等。 4.4.選擇培養(yǎng)材料選擇培養(yǎng)材料注意經濟節(jié)約注意經濟節(jié)約, ,價廉物美。價廉物美。 2021/6/1637

13、培養(yǎng)基的類型和應用培養(yǎng)基的類型和應用 按培養(yǎng)基的成分按培養(yǎng)基的成分 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基: : 順序加入準確稱量的高純化學試劑與順序加入準確稱量的高純化學試劑與蒸餾水配制而成，組成成分精確，重復性強。蒸餾水配制而成，組成成分精確，重復性強。 天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基: : 采用動植物組織或微生物細胞或它們采用動植物組織或微生物細胞或它們的提取物或粗消化產物配制成的，其所用物質的成分的提取物或粗消化產物配制成的，其所用物質的成分不穩(wěn)定，因而營養(yǎng)成分難控制，重復性差。不穩(wěn)定，因而營養(yǎng)成分難控制，重復性差。 半合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基: : 用純化學試劑和天然物質配成。用純化學試劑和天然物質配成。 202

14、1/6/1638按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)按培養(yǎng)基的物理狀態(tài) 固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基: : 加了凝固劑后制成的呈固體狀態(tài)的加了凝固劑后制成的呈固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。常見的凝固劑是瓊脂培養(yǎng)基。常見的凝固劑是瓊脂( (約約2%)2%)或明膠或明膠(5%(5%12%)12%)。 液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基: : 呈液態(tài)的培養(yǎng)基。呈液態(tài)的培養(yǎng)基。 半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基: : 液體培養(yǎng)基中加液體培養(yǎng)基中加0.5%0.5%或更低濃度或更低濃度的瓊脂就制成柔軟的漿糊狀半固體培養(yǎng)基。的瓊脂就制成柔軟的漿糊狀半固體培養(yǎng)基。 2021/6/1639 按培養(yǎng)基的用途分為按培養(yǎng)基的用途分為 加富培養(yǎng)基加富培養(yǎng)基: : 在普通培養(yǎng)基里

15、加進血、血清、動物在普通培養(yǎng)基里加進血、血清、動物( (或植物或植物) )組織液或其他營養(yǎng)物質組織液或其他營養(yǎng)物質( (或生長因子或生長因子) )的一類營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基的一類營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基, , 用以培養(yǎng)某種或某類營養(yǎng)要求苛刻的異養(yǎng)微生物。用以培養(yǎng)某種或某類營養(yǎng)要求苛刻的異養(yǎng)微生物。 選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基: : 根據(jù)某種或某一類群微生物的特殊營養(yǎng)需要或根據(jù)某種或某一類群微生物的特殊營養(yǎng)需要或對某種化合物的敏感性不同而設計出來的培養(yǎng)基，可以將某種或對某種化合物的敏感性不同而設計出來的培養(yǎng)基，可以將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來。某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來。 鑒別培養(yǎng)基

16、鑒別培養(yǎng)基: : 在培養(yǎng)基中添加某種營養(yǎng)物質或化學物質在培養(yǎng)基中添加某種營養(yǎng)物質或化學物質( (指示指示劑或抑制劑劑或抑制劑) )而將目的或對象微生物的菌落與同一平板上的其他而將目的或對象微生物的菌落與同一平板上的其他微生物菌落區(qū)別開來的培養(yǎng)基。如伊紅美藍培養(yǎng)基微生物菌落區(qū)別開來的培養(yǎng)基。如伊紅美藍培養(yǎng)基(EMB(EMB培養(yǎng)基培養(yǎng)基) ) 可鑒別腸道桿菌中的某些細菌。大腸桿菌在此培養(yǎng)基上形成有綠可鑒別腸道桿菌中的某些細菌。大腸桿菌在此培養(yǎng)基上形成有綠色金屬閃光的深紫色菌落。其培養(yǎng)基成分為色金屬閃光的深紫色菌落。其培養(yǎng)基成分為: : 蛋白胨蛋白胨 10 g10 g，伊，伊紅紅Y 0.4 gY 0

17、.4 g，乳糖，乳糖 5 g5 g，美藍，美藍 0.065 g0.065 g，蔗糖，蔗糖 5 g5 g，K2HPO4 2 gK2HPO4 2 g，水水 1 000 mL1 000 mL，pH 7.2 pH 7.2 2021/6/1640 常用培養(yǎng)基配方常用培養(yǎng)基配方1 1、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏：牛肉膏3g3g，蛋白胨，蛋白胨10g10g，NaCl 5g,NaCl 5g,瓊脂瓊脂20g, 20g, 水水1 000mL1 000mL，pH7.0pH7.07.27.2。常用于培養(yǎng)細菌。常用于培養(yǎng)細菌。2 2、高氏、高氏1 1號培養(yǎng)基：可溶性淀粉號培養(yǎng)基：可溶性淀粉20g20g

18、，KNO3 1gKNO3 1g，NaC1 0.5gNaC1 0.5g， K2HPO43H2O 0.5gK2HPO43H2O 0.5g，MgSO47H2O 0.5gMgSO47H2O 0.5g，F(xiàn)eSO47H2O 0.01gFeSO47H2O 0.01g，瓊脂，瓊脂20g20g，水，水1 000mL1 000mL，pH7.2pH7.27.47.4。常用于培養(yǎng)放線菌。常用于培養(yǎng)放線菌。3 3、察氏培養(yǎng)基：蔗糖、察氏培養(yǎng)基：蔗糖30g30g，NaNO3 2NaNO3 2，K2HPO4 1gK2HPO4 1g，KC1 0.5KC1 0.5MgSO47H2O 0.5gMgSO47H2O 0.5g，F(xiàn)eS

19、O47H2O 0.01gFeSO47H2O 0.01g，瓊脂，瓊脂 20g20g，水，水1 000mL 1 000mL pH6.7pH6.7。常用于培養(yǎng)霉菌。常用于培養(yǎng)霉菌。4 4、馬鈴薯培養(yǎng)基（馬鈴薯培養(yǎng)基（PDAPDA） ：馬鈴薯：馬鈴薯200200，蔗糖（或葡萄糖），蔗糖（或葡萄糖）2020，瓊，瓊脂脂2020，水，水1 000mL1 000mL， pH 6.5pH 6.5（或自然）。常用于培養(yǎng)酵母菌、霉菌、（或自然）。常用于培養(yǎng)酵母菌、霉菌、食藥用菌。食藥用菌。2021/6/1641牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制作流程：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制作流程： 計算用量稱量溶解調計算用量稱量溶解調pHpH過

20、濾分裝三角瓶包扎滅過濾分裝三角瓶包扎滅菌（菌（ 121 121 0 0C, 30minC, 30min）倒平板。）倒平板。2021/6/1642馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDAPDA）制作流程：）制作流程： 馬鈴薯去皮、切粒馬鈴薯去皮、切粒煮煮8-108-10分鐘后取分鐘后取汁使用汁使用加藥品溶化加藥品溶化瓊脂溶化瓊脂溶化混合定混合定容容調節(jié)調節(jié)pHpH值值分裝分裝滅菌滅菌倒平板。倒平板。2021/6/1643 高壓蒸汽鍋法是實驗室及生產中最常用的滅菌方高壓蒸汽鍋法是實驗室及生產中最常用的滅菌方法。使用高壓鍋時，要注意完全排除鍋內的冷空氣，法。使用高壓鍋時，要注意完全排除鍋內的冷

21、空氣，使之充滿飽和蒸汽，否則會因蒸汽中混有空氣而比相使之充滿飽和蒸汽，否則會因蒸汽中混有空氣而比相應純蒸汽的溫度降低，影響滅菌效果。應純蒸汽的溫度降低，影響滅菌效果。高壓蒸汽鍋的高壓蒸汽鍋的使用使用2021/6/1644基本操作技術基本操作技術2 2：無菌操作：無菌操作2021/6/1645 無菌操作無菌操作 為了防止其他微生物進入機體或物體造成為了防止其他微生物進入機體或物體造成污染，在制備培養(yǎng)基、使用接種箱及無菌室、污染，在制備培養(yǎng)基、使用接種箱及無菌室、接種、分離和培養(yǎng)微生物時，都要進行無菌操接種、分離和培養(yǎng)微生物時，都要進行無菌操作。作。 無菌操作技術主要有：培養(yǎng)基用高壓蒸汽無菌操作技

22、術主要有：培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌（滅菌（0.1MPa0.1MPa，121121，15-30min15-30min）；無菌室、）；無菌室、接種箱、超凈工作臺等用紫外線滅菌（照射接種箱、超凈工作臺等用紫外線滅菌（照射30min30min）；接種環(huán)、接種針用火焰灼燒滅菌；）；接種環(huán)、接種針用火焰灼燒滅菌；接種需在酒精燈火焰旁的無菌區(qū)進行，接種過接種需在酒精燈火焰旁的無菌區(qū)進行，接種過程中的無菌操作。程中的無菌操作。2021/6/1646 高溫滅菌方法高溫滅菌方法1 1、干熱滅菌、干熱滅菌 （1)1)焚燒滅菌法（焚燒滅菌法（incinerationincineration）：用火焰焚燒。）：用火焰焚燒。

23、 （2)2)烘箱熱空氣法：常用烘箱烘箱熱空氣法：常用烘箱160160處理處理2 2小時以上。小時以上。2 2、濕熱滅菌、濕熱滅菌（1)1)水煮沸法：水煮沸水煮沸法：水煮沸100100，1515分鐘以上。分鐘以上。 （2)2)高壓蒸汽鍋法（高壓蒸汽鍋法（autoclavingautoclaving）：高壓鍋）：高壓鍋（0.1013MPa0.1013MPa或或1.051.05/cm/cm2 2 或或1515磅磅/ /英寸英寸2 2 ）121121處理處理15153030分鐘分鐘 。 （3)3)間歇滅菌法間歇滅菌法(tyndallization) : 100(tyndallization) : 10

24、0處理處理15-3015-30分鐘，再置于分鐘，再置于28283737下，如此反復三次。下，如此反復三次。 （4)4)巴斯德消毒法（巴斯德消毒法（pasteurization)pasteurization)：71.671.6處理處理1515分鐘或分鐘或62.962.9處理處理3030分鐘。分鐘。2021/6/16472021/6/16482021/6/1649接種類型：斜面菌種；液體接種；穿刺接種接種類型：斜面菌種；液體接種；穿刺接種2021/6/16502021/6/1651基本操作技術基本操作技術3 3： 微生物分離培養(yǎng)技術微生物分離培養(yǎng)技術2021/6/1652 微生物分離純化微生物分離

25、純化在自然界，各種微生物常常混生在一起。為了在自然界，各種微生物常?；焐谝黄?。為了利用某種微生物，必須將這種微生物從混雜群利用某種微生物，必須將這種微生物從混雜群體中分離出來，在適合的營養(yǎng)和生長條件下培體中分離出來，在適合的營養(yǎng)和生長條件下培養(yǎng)，產生大量的個體。養(yǎng)，產生大量的個體。2021/6/1653 微生物的觀察微生物的觀察微生物個體微小，其個體形態(tài)一般需用顯微鏡才能看到。微生物個體微小，其個體形態(tài)一般需用顯微鏡才能看到。單個微生物細胞在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內部生長繁殖，會單個微生物細胞在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內部生長繁殖，會形成一個肉眼可見的、具有一定形態(tài)結構的子細胞群體，稱為形成一

26、個肉眼可見的、具有一定形態(tài)結構的子細胞群體，稱為菌落（菌落（colonycolony）。）。當固體培養(yǎng)基表面眾多菌落連成一片時，則稱為菌苔（當固體培養(yǎng)基表面眾多菌落連成一片時，則稱為菌苔（lawnlawn）。）。不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長形成的菌落或菌苔在大小、形不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長形成的菌落或菌苔在大小、形狀、光澤度、顏色、質地、硬度、邊緣情況、透明度等方面具狀、光澤度、顏色、質地、硬度、邊緣情況、透明度等方面具有不同的特征，是微生物分類鑒定的重要依據(jù)。如細菌菌落具有不同的特征，是微生物分類鑒定的重要依據(jù)。如細菌菌落具有濕潤、較光滑、較透明、較粘稠、易挑取、質地均勻和顏色有濕潤、較

27、光滑、較透明、較粘稠、易挑取、質地均勻和顏色一致等特征，霉菌、放線菌等微生物的菌落也具有各自相應的一致等特征，霉菌、放線菌等微生物的菌落也具有各自相應的特征。特征。在生產中，我們往往只需要某一種微生物，可采用涂布平板、在生產中，我們往往只需要某一種微生物，可采用涂布平板、平板劃線等方法獲得這種微生物的菌落。平板劃線等方法獲得這種微生物的菌落。 2021/6/1654用固體培養(yǎng)基分離方法：用固體培養(yǎng)基分離方法：1. 1. 涂布平板法涂布平板法2. 2. 平板劃線法平板劃線法3. 3. 稀釋倒平板法稀釋倒平板法2021/6/16552021/6/16562021/6/16572021/6/1658

28、分離純化操作步驟：分離純化操作步驟：1.1.用涂布平板法從土壤中分離細菌：制土壤菌懸液用涂布平板法從土壤中分離細菌：制土壤菌懸液涂布分離涂布分離倒置培養(yǎng)倒置培養(yǎng)2.2.用平板劃線法從腐爛水果中分離酵母和霉菌用平板劃線法從腐爛水果中分離酵母和霉菌2021/6/16592021/6/16602021/6/1661l 細菌菌落的分離要使用平板，而不采用斜面。細菌菌落的分離要使用平板，而不采用斜面。l 涂布平板分離法和平板劃線分離法為什么能分離涂布平板分離法和平板劃線分離法為什么能分離出細菌的單菌落？出細菌的單菌落？l 如果進行分區(qū)平行劃線，細菌單個菌落最可能出如果進行分區(qū)平行劃線，細菌單個菌落最可能

29、出現(xiàn)在哪一個區(qū)？如果進行連續(xù)畫線，細菌單個菌現(xiàn)在哪一個區(qū)？如果進行連續(xù)畫線，細菌單個菌落最可能出現(xiàn)在什么區(qū)域？落最可能出現(xiàn)在什么區(qū)域？l 在平板劃線分離操作中，每次劃平行線前都必須在平板劃線分離操作中，每次劃平行線前都必須燒掉接種環(huán)的剩余物。燒掉接種環(huán)的剩余物。l 平板倒置培養(yǎng)。平板倒置培養(yǎng)。2021/6/1662微生物分離培養(yǎng)技術活動拓展微生物分離培養(yǎng)技術活動拓展學習了細菌菌落的分離和培養(yǎng)后，請設計實驗學習了細菌菌落的分離和培養(yǎng)后，請設計實驗方案，從自然環(huán)境分離并培養(yǎng)與人類生活關系方案，從自然環(huán)境分離并培養(yǎng)與人類生活關系密切的其它微生物（如酵母菌、霉菌等）菌落。密切的其它微生物（如酵母菌、霉

30、菌等）菌落。（可根據(jù)生活環(huán)境尋找特定的微生物。酵母菌（可根據(jù)生活環(huán)境尋找特定的微生物。酵母菌喜歡生活在含糖高的環(huán)境，霉菌多生長在偏酸喜歡生活在含糖高的環(huán)境，霉菌多生長在偏酸的環(huán)境，如水果、蔬菜的表面及其栽培土壤的環(huán)境，如水果、蔬菜的表面及其栽培土壤中。中。 ）2021/6/1663基本操作技術基本操作技術4 4：培養(yǎng)基對微生物的選擇：培養(yǎng)基對微生物的選擇作用作用 2021/6/1664 培養(yǎng)基對微生物的選擇作用培養(yǎng)基對微生物的選擇作用 如果我們所需的微生物在樣品中的數(shù)量很少，如果我們所需的微生物在樣品中的數(shù)量很少，直接采用涂布平板法、平板劃線法就很難分離出來。直接采用涂布平板法、平板劃線法就很

31、難分離出來。為此，我們可以根據(jù)不同的微生物對營養(yǎng)物質（碳為此，我們可以根據(jù)不同的微生物對營養(yǎng)物質（碳源、氮源、生長因子等）、理化因素的不同要求，源、氮源、生長因子等）、理化因素的不同要求，設計出不同的培養(yǎng)基以抑制不需要的微生物的生長，設計出不同的培養(yǎng)基以抑制不需要的微生物的生長，促進所需微生物的生長。例如，要從土壤中分離獲促進所需微生物的生長。例如，要從土壤中分離獲得自生固氮菌時，常采用無氮源的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，得自生固氮菌時，常采用無氮源的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，可以抑制其他非固氮微生物的生長，從而將自生固可以抑制其他非固氮微生物的生長，從而將自生固氮菌分離出來。氮菌分離出來。2021/6/1665

32、利用培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)所需的微生物利用培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)所需的微生物 在自然界混雜的微生物群體中，如果所需的某種微在自然界混雜的微生物群體中，如果所需的某種微生物只占少數(shù)，但其生長要求是已知的，那就可制生物只占少數(shù)，但其生長要求是已知的，那就可制作一種特別適合于這種微生物生長的培養(yǎng)基，從而作一種特別適合于這種微生物生長的培養(yǎng)基，從而把它選擇培養(yǎng)出來。把它選擇培養(yǎng)出來。2021/6/1666選擇培養(yǎng)方法主要有：選擇培養(yǎng)方法主要有：（1 1）采用）采用加富培養(yǎng)基加富培養(yǎng)基進行選擇。加富培養(yǎng)基就是在進行選擇。加富培養(yǎng)基就是在培養(yǎng)基中加入所需微生物特別需要的某一營養(yǎng)物質，培養(yǎng)基中加入所需微生物特別需要的某一營

33、養(yǎng)物質，使它們的數(shù)量增加，以達到選擇目的而設計的培養(yǎng)使它們的數(shù)量增加，以達到選擇目的而設計的培養(yǎng)基。自然界中數(shù)量較少的微生物采用這種方法，可基。自然界中數(shù)量較少的微生物采用這種方法，可使該微生物大大增殖，在數(shù)量上超過原有占優(yōu)勢的使該微生物大大增殖，在數(shù)量上超過原有占優(yōu)勢的微生物，以達到加富培養(yǎng)的目的。用于加富的營養(yǎng)微生物，以達到加富培養(yǎng)的目的。用于加富的營養(yǎng)物質通常是所需微生物專門需要的碳源或氮源。例物質通常是所需微生物專門需要的碳源或氮源。例如，篩選纖維素分解菌可用纖維素，加富酵母菌可如，篩選纖維素分解菌可用纖維素，加富酵母菌可用較濃的糖液。用較濃的糖液。2021/6/1667（2 2）用）

34、用化學物質化學物質進行選擇。不同的微生物對某種化進行選擇。不同的微生物對某種化學物質或者理化因素的反應不同，依此設計培養(yǎng)基并學物質或者理化因素的反應不同，依此設計培養(yǎng)基并經培養(yǎng)后，所需微生物可大大增殖，使之在數(shù)量上占經培養(yǎng)后，所需微生物可大大增殖，使之在數(shù)量上占優(yōu)勢，而其他微生物的生長受到抑制，從而達到選擇優(yōu)勢，而其他微生物的生長受到抑制，從而達到選擇培養(yǎng)的目的。培養(yǎng)的目的。 化學物質常有染料（化學物質常有染料（ 結晶紫等）、結晶紫等）、 抗生素等，抗生素等，理化因素常有溫度、氧氣、理化因素常有溫度、氧氣、pHpH值等。例如，分離某種值等。例如，分離某種抗生素抗性菌株，可在加有抗生素的培養(yǎng)基上

35、分離?？股乜剐跃辏稍诩佑锌股氐呐囵B(yǎng)基上分離。2021/6/1668土壤是分離微生物最好的菌源材料土壤是分離微生物最好的菌源材料 土壤是微生物生活最適宜的環(huán)境，它具有微土壤是微生物生活最適宜的環(huán)境，它具有微生物所需要的一切營養(yǎng)物質和微生物進行生長繁生物所需要的一切營養(yǎng)物質和微生物進行生長繁殖的各種條件，因此，土壤具有殖的各種條件，因此，土壤具有“微生物天然培微生物天然培養(yǎng)基養(yǎng)基”之稱，這里的微生物數(shù)量最大，類型最多，之稱，這里的微生物數(shù)量最大，類型最多，包括有細菌、放線菌、真菌等類群，是最豐富的包括有細菌、放線菌、真菌等類群，是最豐富的“菌種資源庫菌種資源庫”。2021/6/1669基本

36、操作技術基本操作技術5 5：微生物數(shù)量測定：微生物數(shù)量測定2021/6/1670 測定微生物的數(shù)量測定微生物的數(shù)量 一方面，在利用微生物發(fā)酵生產食品、飲料一方面，在利用微生物發(fā)酵生產食品、飲料等產品的過程中，要通過測定微生物的數(shù)量來觀察產等產品的過程中，要通過測定微生物的數(shù)量來觀察產品是否達到質量要求，如酸奶的生產中，為了檢測產品是否達到質量要求，如酸奶的生產中，為了檢測產品中乳酸細菌數(shù)量是否達到產品標準，需進行細菌數(shù)品中乳酸細菌數(shù)量是否達到產品標準，需進行細菌數(shù)量的測定；量的測定； 另一方面，在食品、飲用水、生物醫(yī)藥制品另一方面，在食品、飲用水、生物醫(yī)藥制品的生產中，為防止病原微生物危害，需

37、要檢測微生物的生產中，為防止病原微生物危害，需要檢測微生物數(shù)量以評估其衛(wèi)生程度，如飲用水常通過檢測微生物數(shù)量以評估其衛(wèi)生程度，如飲用水常通過檢測微生物的數(shù)量來監(jiān)測其水質。的數(shù)量來監(jiān)測其水質。2021/6/1671微生物的數(shù)量微生物的數(shù)量測定方法：測定方法：血球計數(shù)板計數(shù)血球計數(shù)板計數(shù)平板菌落計數(shù)平板菌落計數(shù)2021/6/1672圖圖1 1 血球計數(shù)板構造血球計數(shù)板構造 圖圖 2 2 血球計數(shù)板構造血球計數(shù)板構造 A. A. 正面圖；正面圖；B.B.縱切面圖縱切面圖 放大后的方格網，中間大方格為計數(shù)室放大后的方格網，中間大方格為計數(shù)室1. 1. 血球計數(shù)板；血球計數(shù)板；2. 2. 蓋玻片；蓋玻片

38、；3.3.計數(shù)室計數(shù)室血球計數(shù)板計數(shù)血球計數(shù)板計數(shù)2021/6/16732021/6/1674 血球計數(shù)板血球計數(shù)板 血球計數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個特定血球計數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個特定的計數(shù)室，其的計數(shù)室，其面積為面積為mm2mm2，高為，高為0.1mm0.1mm，在，在mm2mm2的面的面積里又被刻劃成積里又被刻劃成2525個（或個（或1616個）中格，每個中格再劃分個）中格，每個中格再劃分成成1616個（或個（或2525個）小格，計數(shù)室都是由個）小格，計數(shù)室都是由400400個小格組成。個小格組成。 其血球計數(shù)板法的計數(shù)方法為：將稀釋的樣品滴在其血球計數(shù)板法的計數(shù)方法

39、為：將稀釋的樣品滴在血球計數(shù)板上，在顯微鏡下計算計數(shù)室中的個中格血球計數(shù)板上，在顯微鏡下計算計數(shù)室中的個中格( (一般選一般選4 4個角和中央的一個中格個角和中央的一個中格) )的總菌數(shù)（的總菌數(shù)（A A），按下），按下面公式求出每毫升樣品所含的菌數(shù)。每毫升樣品所含菌面公式求出每毫升樣品所含的菌數(shù)。每毫升樣品所含菌數(shù)數(shù)A/5A/52525（或（或1616）10 00010 000稀釋倍數(shù)。稀釋倍數(shù)。 但此法不能區(qū)分死菌與活菌，所得結果是包括死菌但此法不能區(qū)分死菌與活菌，所得結果是包括死菌在內的總菌數(shù)。在內的總菌數(shù)。2021/6/1675 平板菌落計數(shù)平板菌落計數(shù) 平板菌落計數(shù)法為一種活菌計數(shù)法

40、。方法的原平板菌落計數(shù)法為一種活菌計數(shù)法。方法的原理是將樣品適當稀釋接種在平板上，培養(yǎng)后可形成理是將樣品適當稀釋接種在平板上，培養(yǎng)后可形成菌落，一個菌落一般來源于一個細胞，統(tǒng)計菌落數(shù)菌落，一個菌落一般來源于一個細胞，統(tǒng)計菌落數(shù)即可知樣品的活菌數(shù)。即可知樣品的活菌數(shù)。 平板菌落計數(shù)法能測出樣品中的活菌數(shù)，現(xiàn)仍平板菌落計數(shù)法能測出樣品中的活菌數(shù)，現(xiàn)仍是生產上常用的一種測定菌數(shù)的有效方法，廣泛應是生產上常用的一種測定菌數(shù)的有效方法，廣泛應用于微生物數(shù)量的檢測。但該法較為耗時，需要培用于微生物數(shù)量的檢測。但該法較為耗時，需要培養(yǎng)一段時間才能取得結果。養(yǎng)一段時間才能取得結果。 2021/6/167620

41、21/6/1677u比較血球計數(shù)板法和平板菌落計數(shù)法的優(yōu)比較血球計數(shù)板法和平板菌落計數(shù)法的優(yōu)缺點。缺點。u說明用血球計數(shù)板法計數(shù)時造成誤差與哪說明用血球計數(shù)板法計數(shù)時造成誤差與哪些因素有關？些因素有關？2021/6/1678微生物數(shù)量測定活動拓展微生物數(shù)量測定活動拓展 學習了計數(shù)土壤中細菌數(shù)量的方法，請嘗學習了計數(shù)土壤中細菌數(shù)量的方法，請嘗試設計實驗方案，測定其他環(huán)境中微生物的數(shù)量，試設計實驗方案，測定其他環(huán)境中微生物的數(shù)量，如自來水、池塘水、空氣、酸奶、干酵母粉等。如自來水、池塘水、空氣、酸奶、干酵母粉等。2021/6/1679微生物生物技術的應用微生物生物技術的應用2021/6/1680微

42、生物技術在工業(yè)上的應用微生物技術在工業(yè)上的應用2021/6/16812021/6/1682微生物技術在醫(yī)藥上的應用微生物技術在醫(yī)藥上的應用2021/6/16832021/6/16842021/6/1685微生物與人類健康微生物與人類健康 生物制品（菌苗、疫苗等），微生物代謝產物生物制品（菌苗、疫苗等），微生物代謝產物（抗生素、維生素、酶等），由遺傳工程菌生產的（抗生素、維生素、酶等），由遺傳工程菌生產的各種藥物如胰島素、干擾素、白細胞介素，微生物各種藥物如胰島素、干擾素、白細胞介素，微生物生物轉化形成的甾體激素類藥物。生物轉化形成的甾體激素類藥物。2021/6/1686微生物技術在農業(yè)上的應用

43、微生物技術在農業(yè)上的應用2021/6/1687l食藥用真菌食藥用真菌 l微生物肥料（細菌肥料、微生物肥料（細菌肥料、54065406抗生菌肥料、復合微生抗生菌肥料、復合微生物肥料、菌根菌肥等）物肥料、菌根菌肥等）l微生物農藥（細菌殺蟲劑、真菌殺蟲劑、病毒殺蟲劑、微生物農藥（細菌殺蟲劑、真菌殺蟲劑、病毒殺蟲劑、農用抗生素等）農用抗生素等）l微生物飼料（單細胞蛋白和菌體蛋白飼料、秸稈飼料、微生物飼料（單細胞蛋白和菌體蛋白飼料、秸稈飼料、藻類飼料、微生物飼料添加劑）藻類飼料、微生物飼料添加劑）2021/6/1688食藥用真菌食藥用真菌2021/6/1689杏鮑菇杏鮑菇 白靈菇白靈菇 秀珍菇秀珍菇 鮑

44、魚菇鮑魚菇 2021/6/1690杏鮑菇杏鮑菇金針菇金針菇平菇平菇2021/6/1691茶樹菇茶樹菇2021/6/1692尖頂羊肚菌尖頂羊肚菌松松 茸茸2021/6/1693猴頭菇猴頭菇毛木耳毛木耳2021/6/1694靈 芝2021/6/1695蟲草蟲草蛹蟲草蛹蟲草2021/6/1696云云 芝芝香菇香菇2021/6/1697雙孢蘑菇雙孢蘑菇2021/6/1698草菇草菇2021/6/16992021/6/16100大禿馬勃大禿馬勃2021/6/16101印度塊菌印度塊菌微生物肥料微生物肥料根瘤根瘤棉鈴蟲幼蟲的環(huán)節(jié)處被核型多角體病毒感染棉鈴蟲幼蟲的環(huán)節(jié)處被核型多角體病毒感染.微生物農藥微生物

45、農藥2021/6/16105微生物在環(huán)境保護中的作用微生物在環(huán)境保護中的作用2021/6/16106微生物對農藥的降解微生物對農藥的降解微生物對有毒元素的轉化微生物對有毒元素的轉化微生物降解生活污水、工業(yè)污水和生活垃圾等微生物降解生活污水、工業(yè)污水和生活垃圾等 。微生物對合成聚合物的降解微生物對合成聚合物的降解微生物生態(tài)環(huán)境保護劑微生物生態(tài)環(huán)境保護劑利用微生物生產易降解的醫(yī)用塑料、快餐盒；利用微生物生產易降解的醫(yī)用塑料、快餐盒；微生物與污水處理微生物與污水處理 污水處理的方法有物理法、化學法和生物法。各種方法都有其特點，可污水處理的方法有物理法、化學法和生物法。各種方法都有其特點，可以相互配合

46、、相互補充。目前應用最廣是生物學方法，其優(yōu)點是效率高、以相互配合、相互補充。目前應用最廣是生物學方法，其優(yōu)點是效率高、費用低、簡單方便。費用低、簡單方便。好氧生物處理好氧生物處理 微生物在有氧條件下，吸附環(huán)境中的有機物，并將有機物氧化分解成無機微生物在有氧條件下，吸附環(huán)境中的有機物，并將有機物氧化分解成無機物，使污水得到凈化，同時合成細胞物質。物，使污水得到凈化，同時合成細胞物質。微生物在污水凈化過程，以活性污微生物在污水凈化過程，以活性污泥和生物膜的主要成分等形式存在。泥和生物膜的主要成分等形式存在。活性污泥法活性污泥法（activated sludge processactivated s

47、ludge process）又稱曝氣法。是利用含有好氧微生物的活性污泥又稱曝氣法。是利用含有好氧微生物的活性污泥 ，在通氣條件下，使污水凈，在通氣條件下，使污水凈化的生物方法。該法已成為處理有機廢水的最主要的方法?；纳锓椒?。該法已成為處理有機廢水的最主要的方法。 在污水處理過程中，活性污泥具有很強的吸附、氧化和分解有機物的能力。在污水處理過程中，活性污泥具有很強的吸附、氧化和分解有機物的能力。在靜止狀態(tài)時，又具有良好的沉降性能。它是一種特殊的、復雜的生態(tài)系統(tǒng)，在靜止狀態(tài)時，又具有良好的沉降性能。它是一種特殊的、復雜的生態(tài)系統(tǒng)，在多種酶的作用下進行著復雜的生化反應?；钚晕勰嘀械奈⑸镏饕羌?/p>

48、菌，在多種酶的作用下進行著復雜的生化反應。活性污泥中的微生物主要是細菌，占微生物總數(shù)的占微生物總數(shù)的90%90%95%95%。占地面積小，基建投資省，出水水質高的特點 厭氧生物處理厭氧生物處理 厭氧生物處理是在缺氧條件下，利用厭氧性微生物（包括厭氧生物處理是在缺氧條件下，利用厭氧性微生物（包括兼性厭氧微生物）分解污水中有機物污染物的方法。又稱厭氧兼性厭氧微生物）分解污水中有機物污染物的方法。又稱厭氧消化或厭氧發(fā)酵法。因為發(fā)酵產物產生甲烷，又稱消化或厭氧發(fā)酵法。因為發(fā)酵產物產生甲烷，又稱甲烷發(fā)酵甲烷發(fā)酵。此法既能消除環(huán)境污染，又能開發(fā)生物能源，所以備受人們重此法既能消除環(huán)境污染，又能開發(fā)生物能源

49、，所以備受人們重視。視。微生物對重金屬的轉化微生物對重金屬的轉化 自然界存在多種重金屬，例如，汞、砷、自然界存在多種重金屬，例如，汞、砷、鉛、鎘、鉻等，這些重金屬并非生物生活所必鉛、鎘、鉻等，這些重金屬并非生物生活所必需，但達到一定濃度時，會對生物產生抑制和需，但達到一定濃度時，會對生物產生抑制和致死作用。致死作用。微生物與石油污染微生物與石油污染微生物降解微生物降解微生物與環(huán)境監(jiān)測微生物與環(huán)境監(jiān)測 環(huán)境監(jiān)測環(huán)境監(jiān)測 包括環(huán)境分析、物理測定和生物監(jiān)測。包括環(huán)境分析、物理測定和生物監(jiān)測。所謂生物所謂生物監(jiān)測就是利用生物對環(huán)境污染所發(fā)生的各種信息作為判斷環(huán)境污監(jiān)測就是利用生物對環(huán)境污染所發(fā)生的各種

50、信息作為判斷環(huán)境污染狀況的一種手段。染狀況的一種手段。生物長期生活在自然界中，不僅可反映出多生物長期生活在自然界中，不僅可反映出多種因子污染的綜合效應，而且也能反映環(huán)境污染的歷史狀況。故種因子污染的綜合效應，而且也能反映環(huán)境污染的歷史狀況。故生物監(jiān)測可以彌補物理、化學分析測試的不足，特別是微生物，生物監(jiān)測可以彌補物理、化學分析測試的不足，特別是微生物，與環(huán)境關系極為密切，因此微生物學方法在環(huán)境監(jiān)測中占有特殊與環(huán)境關系極為密切，因此微生物學方法在環(huán)境監(jiān)測中占有特殊的地位。的地位。糞便污染指示菌糞便污染指示菌 糞便污染指示菌的存在，是水體受過糞便污染的指標。根糞便污染指示菌的存在，是水體受過糞便污染的指標。根據(jù)對正常人糞便中微生物的分析測定結果，采用大腸菌群及糞據(jù)對正常人糞便中微生物的分析測定結果，采用大腸菌群及糞鏈球菌作為指標較為合適，其中以前者較為廣用。鏈球菌作為指標較為合適，其中以前者較為廣用。 大腸菌群大腸菌群（coliform groupcoliform group， 簡稱簡稱coliformcoliform）是指一大群）是指一大群與大腸桿菌相似的好氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，與大腸桿菌相似的好氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，它們能在它們能在4848小時內發(fā)酵乳糖產酸產氣，包括埃希氏菌屬、檸檬小時內發(fā)酵乳糖產酸產氣，包括埃希氏菌屬、檸檬酸桿菌屬（酸桿菌屬