廈門(mén)大學(xué)遺傳與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)期末考試試卷及參考答案

1、廈門(mén)大學(xué)遺傳與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)期末考試試卷及參考答案一、填空題(每題 2分,共 50分1. 果蠅具有豐富的外表型態(tài)差異,包括 _、 _、 _, _與 _。2. FISH 技術(shù)的全稱(chēng)是 _。3. 細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中所用的菌株分別是:_和 _ ,用的 培養(yǎng)基是 _培養(yǎng)基。4. 轉(zhuǎn)座子引起的插入突變實(shí)驗(yàn)中所用的菌株分別是:_ 和_。5. 在 提 基 因 組 DNA 時(shí) , 為 保 證 DNA 的 完 整 性 應(yīng) 該 采 取 的 步 驟 有 , , 。6. DNA 凝膠電泳可以以 和 為凝膠介質(zhì),當(dāng) DNA 為> bp時(shí) , 用 作為介質(zhì),當(dāng) DNA 為< bp時(shí),用 作為介質(zhì)。7. 抽提 DN

2、A 純化時(shí),一般采用 抽提,采用 體積;沉淀 DNA 用 ,體積 ;洗滌沉淀時(shí)用 。8. DNA 純度一般用 比值來(lái)衡量, 當(dāng)比值在 表示 DNA 很純, 當(dāng) 表 示 不干凈,當(dāng) 表示含 過(guò)多。9. 衡量 DNA 得率或濃度時(shí)應(yīng)該用 值來(lái)進(jìn)行計(jì)算,公式表示為 。 10. 進(jìn)行電泳加樣時(shí),要將 DNA 樣品與 混合,其主要成分為 ,如要 加樣 10µlDNA 要加 µl 混合。11. 在提取 DNA 時(shí), 酚氯仿的作用是 , 其比例應(yīng)為 , 可選擇使用酚 氯仿異戊醇 , 酚的飽和是用 , 在使用酚時(shí)應(yīng)注意 , 一般用的酚需要 酚,要用 瓶子來(lái)裝。12. 酚是蛋白變性劑,用酚抽

3、提細(xì)胞 DNA時(shí),具有兩方面的作用:(1 (2 。象 ;加入溶液作用 ,現(xiàn)象 ,成分主要為 ,提 供 環(huán)境;加入溶液作用是 ,現(xiàn)象 ,成分主要是 ,目 的是 。14. 質(zhì)粒 DNA 有以下?tīng)顟B(tài) 、 、 、 ,進(jìn)行電泳時(shí)跑的最快在最前面,其次為 、 ,最后為 。15. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中常用的槍頭有以下幾種:µl 用 色槍頭, µl 用 色槍頭, µl 用 _色槍頭。16. 轉(zhuǎn)化時(shí)用的感受態(tài)細(xì)菌需要用 處理,轉(zhuǎn)化細(xì)菌時(shí)需要進(jìn)行 , 時(shí)間 為 秒,目的是 。17. 膠回收 DNA 時(shí)需注意 , ,應(yīng)盡量將 足夠小 徹底,其 中加入 與 ,質(zhì)量比應(yīng)為 。洗滌液中含有 ,洗脫液可

4、 以用 代替。18. 酶切 DNA 時(shí),如 DNA 不純可通過(guò) , , 進(jìn)行克服。 19. 連接反應(yīng)時(shí), 外源 DNA 與質(zhì)粒 DNA 的摩爾比例應(yīng)為 , 連接反應(yīng)時(shí)體 系常用 。20. 在 酶 切 反 應(yīng) 管 加 完 各 種 反 應(yīng) 物 后 , 需 要 離 心 2秒 鐘 , 其 目 的 是 _和 _。21. 用乙醇沉淀 DNA時(shí),通常要在 DNA 溶液中加入單價(jià)的陽(yáng)離子,如 NaCl和 NaAc,其目的是 。22. PCR 反應(yīng)過(guò)程分為三個(gè)步驟,即 , 和 。23. PCR 反應(yīng)受 , , , , 等因素的影響。(3 等。25. 限制性?xún)?nèi)切核酸酶通常保存在 濃度的甘油溶液中。二、簡(jiǎn)答題(每題

5、 5分,共 40分26. 請(qǐng)列出雌雄果蠅主要特征。27. 簡(jiǎn)述染色體組型分析的分組排隊(duì)原則。28. 噬菌體效價(jià)和轉(zhuǎn)導(dǎo)頻率如何計(jì)算?如何計(jì)算 Tn5易位插入突變總頻率? 29. 為了選擇下面兩種突變型,應(yīng)對(duì)只含有葡萄糖、硫酸銨以及無(wú)機(jī)離子的基本 培養(yǎng)基作何調(diào)整 ? leu ,亮氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型; gal ,不能以半乳糖作為 唯一碳源的突變型。30. 請(qǐng)你用 Hind 設(shè)計(jì)一個(gè)質(zhì)粒的 DNA 酶切反應(yīng)體系。31. 簡(jiǎn)述一個(gè)完整外源 DNA 的克隆過(guò)程。32. 一個(gè)攜帶有氨芐和卡那霉素抗性基因的質(zhì)粒被僅在卡那霉索基因中有識(shí)別 位點(diǎn)的 Eco R 消化。消化物與酵母 DNA連接后轉(zhuǎn)化對(duì)兩種抗生索都敏感

6、的 E coli菌株。(l利用哪一種抗生素抗性選擇接受了質(zhì)粒的細(xì)胞 ?(2怎樣區(qū)分接受了插入酵母 DNA的質(zhì)粒的克隆 ?33. 你打算擴(kuò)增下圖所示的兩段序列之間的 DNA,請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一對(duì)引物序列。 5 -GACCTGTGGAAGC-CATACGGGATTG-33 -CTGGACACCTTCG-GTATGCCCTAAC-5三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(10分種子在儲(chǔ)藏過(guò)程中發(fā)生了某種變化, 使得長(zhǎng)成的水稻很容易被一種病原菌感 染。 據(jù)推測(cè)可能是某一化學(xué)誘導(dǎo)的突變導(dǎo)致一個(gè)具有抗菌功能的關(guān)鍵酶丟失。 請(qǐng) 設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證這種推測(cè)是否正確,如何使種子重新獲得對(duì)這種病的抗性 ?提示:根瘤農(nóng)桿菌 (Agrobacterium

7、 tumefaciens具有通過(guò)其 Ti質(zhì)粒將細(xì) 菌 DNA帶入植物基因組的獨(dú)特功能。附加題:談?wù)勀銓?duì)該門(mén)實(shí)驗(yàn)課的建議或意見(jiàn)。參考答案:一、 填空題1. 眼色、眼形、翅形、剛毛的形狀和數(shù)目2. 熒光原位雜交技術(shù)3. gal +、 gal -、 EMB4. Tn5、 FD10065. 低溫、動(dòng)作輕柔、抑制酶活6. 瓊脂糖、聚丙烯酰胺, 100、瓊脂糖、 100、聚丙烯酰胺7. 苯酚、一倍、無(wú)水乙醇、兩倍、 70%乙醇8. OD 260/OD280、 1.8-2.0、 1.8、 DNA 、 1.6、蛋白質(zhì)9. OD 、 DNA 濃度 (g/ml =(OD260-OD330 ×50g/ml

8、×稀釋倍數(shù) (100 10. 上樣緩沖液、溴酚蘭、 111. 蛋白質(zhì)變性、 24:1、 25:24:1、 Tris 、防止氧化、飽和、棕色12. 蛋白質(zhì)變性、細(xì)胞破壁13. 緩沖液、溶菌、溶液渾濁、細(xì)胞破壁蛋白變性、溶液變粘稠、 SDS 、堿性、 中和、絮狀沉淀、乙酸、使染色體和蛋白質(zhì)變性沉淀,使質(zhì)粒 DNA 析出 14. ccc 、 oc 、 lc 、 l 、 ccc 、 oc 、 lc 、 l15. 1000、藍(lán)、 200、黃、 10、白16. CaCl 2、 42熱激、 90、使質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)化入細(xì)胞17. 去除雜質(zhì)、提高得率、 DNA 膠切塊、溶解、膠塊、溶解液、 1:3、

9、 70%乙醇、無(wú)菌水18. 酚抽提、乙醇沉淀、加 RNA 酶19. 1:1、 T 4DNA 連接酶20. 混勻、濃縮21. 中和 DNA 電荷促沉淀22. 變性、退火、延伸23. 溫度、 Mg +、 dNTP 、模板、引物24. 降低反應(yīng)溫度、縮短時(shí)間、減少用量25. 50%二、 簡(jiǎn)答題26.雌果蠅 個(gè)體較大 腹部末端較尖 腹部背面有五條黑條紋 外生殖器較簡(jiǎn)單,有陰道板和肛上板等結(jié)構(gòu) 腹部腹面有 6個(gè)腹片 無(wú)性梳雄果蠅 個(gè)體較小 腹部末端較鈍 腹部背面有三條黑條紋,最后一條極寬,并延伸到腹面 外生殖器較復(fù)雜,有生殖弧、肛上板、陰莖等結(jié)構(gòu) 腹部腹面有 4個(gè)腹片 前腿跗節(jié)上有性梳27.分組排隊(duì)原則著絲粒類(lèi)型相同,相對(duì)長(zhǎng)度相近的分一組同一組的按染色體長(zhǎng)短順序配對(duì)排列各指數(shù)相同的染色體配為一對(duì)可根據(jù)隨體的有無(wú)進(jìn)行配對(duì)l 將染色體按長(zhǎng)到短排隊(duì)，短臂向上 28效價(jià)(單位/ml=斑數(shù) x 稀釋倍數(shù) x 取樣量 轉(zhuǎn)導(dǎo)頻率=(轉(zhuǎn)導(dǎo)子數(shù)/ml/(噬菌體數(shù)/mlx100% Tn5 易位插入突變總頻率=F因子上 lac 基因插入突變數(shù)（B 板上菌落數(shù)） /F因子轉(zhuǎn)移數(shù)（A 板上菌落數(shù)）x100% 29在培養(yǎng)基中添加亮氨酸進(jìn)行負(fù)篩選；在培養(yǎng)基中以半乳糖代替葡萄糖 進(jìn)行負(fù)篩選 305-GACC