食品中菌落總數(shù)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)

1、食品中菌落總數(shù)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模毫私庀♂屍桨逵?jì)數(shù)的原理，掌握涂抹平板培養(yǎng)法和混合平板培養(yǎng) 法，認(rèn)識(shí)細(xì)菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。二、原理平板菌落計(jì)數(shù)法是將等測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，其中的微生物充分分散為單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每 個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成的肉眼可見的菌落， 即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原 樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即 可換算出樣品中的含菌數(shù)。但是，由于待測(cè)樣品往往不易完全分散成 單個(gè)細(xì)胞，所以，長(zhǎng)成的一個(gè)單菌落也可能來自樣品中的多個(gè)細(xì)胞。 因此平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果往往偏低。為了清楚地闡述平板菌落計(jì)數(shù)的 結(jié)果，現(xiàn)在已傾向使用菌落形

2、成單位 (colony-forming units，cfu)而不以絕對(duì)菌落數(shù)來表示樣品的活菌含量。該計(jì)數(shù)法的缺點(diǎn)是操作較繁，結(jié)果需要培養(yǎng)一段時(shí)間才能取得， 而且測(cè)定結(jié)果易受多種因素的影響，但是這種計(jì)數(shù)方法最大的優(yōu)點(diǎn)是 可以獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗(yàn)，以與食品、飲 料和水等含菌指數(shù)或污染度的檢測(cè)三、試劑和材料1.儀器恒溫培養(yǎng)箱：(36 C士 1 C, 30 C士 1 C。)均質(zhì)器或振蕩器無菌吸管：1 ml 0.01 ml刻度、10 ml 0.1 ml刻度或微量移液器與吸頭無菌錐形瓶：容量250 ml、500 ml、無菌培養(yǎng)皿：直徑90 mm菌落計(jì)數(shù)器2. 樣品1 平板計(jì)數(shù)瓊脂pl

3、ate count agar ，PCA培養(yǎng)基：蛋白胨 5.0 g、酵母浸膏2.5 g、葡萄糖1.0 g、瓊脂15.0 g、蒸餾水1 000 ml、pH 7.0 士 0.2。將所有成分加于蒸餾水中， 煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH分裝試管或錐形瓶，121 C高壓滅菌15 min。 注：用平板計(jì)數(shù)瓊脂，稱取 23.5 g于1 000 ml蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解， 121 C高 壓滅菌20min，冷卻至4547C左右備用。2 無菌生理鹽水：氯化鈉NaCI 5.875g蒸餾水純潔水500ml 稱取5.875 g NaCl溶于500ml蒸餾水中，121 C高壓滅菌20min。3. 器材100ml無菌水、9ml

4、無菌水、無菌平皿、天平、稱樣瓶、 記號(hào)筆、酒精燈等。四、操作與實(shí)驗(yàn)步驟1. 樣品的稀釋：25 gml樣品+225 ml稀釋液，均質(zhì)。10倍系列稀釋。每遞增稀釋一次，換用1次1 ml無菌吸管或吸頭。注意吸管或吸頭尖端不要觸與稀釋液面選擇2個(gè)3個(gè)適宜稀釋度 的樣品勻液，各取1 ml分別參加無菌培養(yǎng)皿。吸取1 ml空白稀釋液 作空白對(duì)照。每皿中參加15 ml20 ml平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，并轉(zhuǎn) 動(dòng)平皿使其混合均勻。2. 培養(yǎng)：待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36 士 1 C培養(yǎng)48 h 士 2 h。 水產(chǎn)品30 士 1 C培養(yǎng)72 h士 3 h°如果有彌漫生長(zhǎng)的菌落時(shí)，可 在凝固后的瓊脂外表覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基約 4 ml ，凝固后翻 轉(zhuǎn)平板。3. 菌落計(jì)數(shù)：記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位(colony-forming units，CFU 表示。五、計(jì)算公式-O.b?2)rf式中：N樣品中菌落數(shù)；刀C平板含適宜圍菌落數(shù)的平板菌落數(shù)之和;n1 第一稀釋度低稀釋倍數(shù)平板個(gè)數(shù)；