病原微生物實(shí)驗(yàn)室備案-艾滋病毒生物危害評(píng)估

1、艾滋病毒的生物危害評(píng)估一、危害程度分類(lèi) (一)分類(lèi)等級(jí)人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）屬第二類(lèi)病原微生物，是高致病性病原微生物。(二)不同實(shí)驗(yàn)操作生物安全實(shí)驗(yàn)室級(jí)別要求1 、HIV抗體檢測(cè)（包括篩查和確證實(shí)驗(yàn)）、抗原檢測(cè)和相關(guān)的免疫學(xué)檢測(cè)應(yīng)在符合級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）要求的艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。2、HIV分離培養(yǎng)、濃縮、中和試驗(yàn)、細(xì)胞培養(yǎng)及研究工作及其它需要應(yīng)用活病毒的研究工作，應(yīng)在級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-3）中進(jìn)行。3、HIV核酸提取和檢測(cè)均應(yīng)在符合級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）要求的艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。4 、HIV病毒株應(yīng)保存在符合級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-3）要求的艾滋病實(shí)驗(yàn)室

2、；HIV陽(yáng)性樣品，包括全血、血清、血槳和其他組織（液）、核酸提取物應(yīng)保存在符合BSL-2要求的艾滋病實(shí)驗(yàn)室。二、HIV背景資料（一）、形態(tài)結(jié)構(gòu)人類(lèi)免疫缺陷病毒直徑約120納米，大致呈球形。病毒外膜是磷脂雙分子層，來(lái)自宿主細(xì)胞，并嵌有病毒的蛋白gp120與gp41。向內(nèi)是由蛋白p17形成的球形基質(zhì)（Matrix），以及蛋白p24形成的半錐形衣殼（Capsid），衣殼在電鏡下呈高電子密度。衣殼內(nèi)含有病毒的RNA基因組、酶以及其他來(lái)自宿主細(xì)胞的成分。（二）、培養(yǎng)特性將病人自身外周或骨髓中淋巴細(xì)胞經(jīng)PHA刺激4872小時(shí)作體外培養(yǎng)（培養(yǎng)液中加IL2）12周后，病毒增殖可釋放至細(xì)胞外，并使細(xì)胞融合成多核

3、巨細(xì)胞，最后細(xì)胞破潰死亡。亦可用傳代淋巴細(xì)胞系如HT-H9、Molt-4細(xì)胞作分離及傳代。對(duì)黑猩猩或長(zhǎng)臂猿予以HIV感染后，連續(xù)8個(gè)月在血液和淋巴液中可持續(xù)分離到HIV。（三）、在外界環(huán)境的穩(wěn)定性HIV對(duì)熱敏感。5630分失去活性，但在室溫保存7天，仍保持活性。不加穩(wěn)定劑病毒-70冰凍失去活性，而35%山梨醇或50%胎牛血清中-70冰凍3個(gè)月仍保持活性。對(duì)消毒劑和去污劑亦敏感，0.2%次氯酸鈉0.1%漂白粉，70%乙醇，35%異丙醇、50%乙醚、0.3%H2O20.5%來(lái)蘇爾處理5能滅活病毒，1%NP-40和0.5%triton-X-100能滅活病毒而保留抗原性。對(duì)紫外線(xiàn)、射線(xiàn)有較強(qiáng)抵抗力。（

4、四）、傳染源和傳播途徑HIV感染者是傳染源，曾從血液、精液、陰道分泌液、眼淚、乳汁等分離得HIV。傳播途徑有：1性傳播：通過(guò)男性同性戀之間及異性間的性接觸感染。單次暴露的傳染概率為0.67%。生一次沒(méi)有保護(hù)的性交，在男性同性戀中的傳染HIV的概率約為0.5-3%。而在異性性接觸中，男性傳給女性的概率是0.1-0.2%，女性傳給男性的概率是0.03-0.1%2血液傳播：接受血液或血制品：主要是指接受污染有HIV的血液或血制品，單次暴露的傳染概率介于90-100%。通過(guò)輸血、血液制品或沒(méi)有消毒好的注射器傳播，靜脈嗜毒者共用不經(jīng)消毒的注射器和針頭造成嚴(yán)重感染，據(jù)我國(guó)云南邊境靜脈嗜毒者感染率達(dá)60%。

5、不慎被污染HIV的器具如針頭刺傷皮膚，或黏膜直接接觸到含有HIV的體液，單次暴露的傳染概率為0.3%-0.5%。3母嬰傳播：包括經(jīng)胎盤(pán)、產(chǎn)道和哺乳方式傳播。母嬰傳播的幾率約為30%。（五）、宿主范圍和致病機(jī)制1、宿主范圍：艾滋病病毒進(jìn)入人體后，首先遭到巨噬細(xì)胞的吞噬，但艾滋病病毒很快改變了巨噬細(xì)胞內(nèi)某些部位的酸性環(huán)境，創(chuàng)造了適合其生存的條件，在潛伏感染階段，HIV前病毒整合入宿主細(xì)胞基因組中，免疫會(huì)把忽略不被免疫系統(tǒng)識(shí)別，自身免疫無(wú)法清除。人體感染HIV后，其潛伏期一般35年或更長(zhǎng)至8年。2、致病機(jī)制：其機(jī)制尚未完全清楚。有可能是HIV進(jìn)入人體后，選擇性的侵犯帶有CD4分子的，主要有T4淋巴細(xì)

6、胞、單核巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等。造成T細(xì)胞,B細(xì)胞,自然殺傷細(xì)胞,單核細(xì)胞,巨噬細(xì)胞的數(shù)量和功能均受到影響，使細(xì)胞介導(dǎo)免疫功能失去作用。三、實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)活動(dòng)危險(xiǎn)性及預(yù)防措施（一）、實(shí)驗(yàn)活動(dòng)預(yù)防1、實(shí)驗(yàn)室針對(duì)HIV的所有活動(dòng)均應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。2、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)穿合適防護(hù)服（白大衣、隔離衣或一次性工作服）、戴手套和口罩、穿實(shí)驗(yàn)室專(zhuān)用的工作鞋。如接觸物的傳染性大、應(yīng)戴雙層手套；含有HIV的液體（樣品或病毒培養(yǎng)液）有可能?chē)姙R時(shí)，應(yīng)戴防護(hù)眼鏡、穿防水（如塑料）圍裙。3、工作完畢，先脫去手套，再脫去防護(hù)服，用肥皂和流動(dòng)水洗手。穿過(guò)的污染的防護(hù)服應(yīng)及時(shí)放入污物袋中，消毒后方可洗滌或廢棄。4、操作過(guò)程中，如

7、發(fā)現(xiàn)防護(hù)服被污染應(yīng)立即更換，如手套破損，應(yīng)立即丟棄、洗手并換上新手套。不能用戴手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵和頭發(fā)等。5、 禁止使用口腔吸液管，必須使用移液器來(lái)操作實(shí)驗(yàn)的所有液體。6、應(yīng)盡量避免在實(shí)驗(yàn)室使用針頭、刀片、玻璃器皿等利器，以防刺傷。如果必須使用，在處理或清洗時(shí)應(yīng)采取措施防止刺傷或劃傷，并應(yīng)對(duì)用過(guò)的物品進(jìn)行消毒。7、 應(yīng)將用過(guò)的銳器直接放入耐穿、防滲漏的利器盒，用過(guò)的針頭應(yīng)直接放入堅(jiān)固的容器內(nèi)，消毒后廢棄8、禁止將使用后的一次性針頭重新套上針頭套。禁止用手直接接觸使用過(guò)的針頭、刀片等利器。（二）、職業(yè)暴露的評(píng)估及暴露后預(yù)防1、 輕度暴露：指皮膚被實(shí)心針刺傷或表皮傷，或粘膜接

8、觸少量（幾滴）感染性液體。2、 重度暴露：指皮膚被空心針刺傷、深部刺傷，被可見(jiàn)到有血液的器械刺傷或器械曾放置于病人的動(dòng)脈和靜脈。粘膜接觸大量感染性液體（大量血液噴濺）。發(fā)生職業(yè)暴露以后，可以服用抗病毒藥物，進(jìn)行暴露后預(yù)防（三）、 實(shí)驗(yàn)室的清潔和消毒本實(shí)驗(yàn)室于每次實(shí)驗(yàn)活動(dòng)開(kāi)始前均準(zhǔn)備有0.2%和5%的次氯酸溶液。工作完畢應(yīng)對(duì)工作臺(tái)面消毒，用0.10.2%的次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥20min以上；操作過(guò)程中如有樣品、檢測(cè)試劑外濺，應(yīng)及時(shí)消毒。如有大量高濃度的傳染性液體濺出，在清潔之前應(yīng)先用1%的次氯酸鈉溶液浸泡，然后戴上手套擦凈。（四）、污染物處理本實(shí)驗(yàn)室配備有密封防漏容器及高壓蒸汽消

9、毒鍋。艾滋病實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)生的所有廢棄物，應(yīng)置于專(zhuān)用的密封防漏容器中，安全運(yùn)至消毒室，經(jīng)高壓消毒后再進(jìn)行處理或廢棄。（五）、實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)活動(dòng)危害評(píng)估本實(shí)驗(yàn)室只針對(duì)HIV抗體檢測(cè)的操作，該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)可能存在潛在危險(xiǎn)。實(shí)驗(yàn)操作實(shí)施過(guò)程中在無(wú)控制措施情況下可能產(chǎn)生高危害度。但經(jīng)對(duì)危害發(fā)生的可能性分析，認(rèn)為極少發(fā)生實(shí)驗(yàn)危害；但該危害能造成高度嚴(yán)重后果。本實(shí)驗(yàn)室在采取一級(jí)及二級(jí)屏障的預(yù)防控制措施后其殘留風(fēng)險(xiǎn)可降至最低四、工作人員素質(zhì)本實(shí)驗(yàn)室共有技術(shù)人員5名，其中申請(qǐng)進(jìn)入BSL-2實(shí)驗(yàn)室3名。5名技術(shù)人員均為檢驗(yàn)專(zhuān)業(yè)畢業(yè)并從事臨床檢驗(yàn)工作多年。2名曾經(jīng)從事細(xì)菌、真菌等微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，1名無(wú)微生物實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)經(jīng)歷。所有技術(shù)人員均接受過(guò)病原微生物生物安全培訓(xùn)，學(xué)習(xí)過(guò)生物安全手冊(cè)并簽署知情同意書(shū)，經(jīng)體檢無(wú)慢性病及其他傳染性疾病，健康狀態(tài)良好。五、評(píng)估結(jié)論1、本實(shí)驗(yàn)室對(duì)可能發(fā)生的感染可以有效控制。2、實(shí)驗(yàn)活動(dòng)中采取一級(jí)及二級(jí)屏障預(yù)防，生物安全柜、洗眼器等設(shè)