病原微生物實驗室備案-艾滋病毒生物危害評估

1、艾滋病毒的生物危害評估一、危害程度分類 (一)分類等級人類免疫缺陷病毒（HIV）屬第二類病原微生物，是高致病性病原微生物。(二)不同實驗操作生物安全實驗室級別要求1 、HIV抗體檢測（包括篩查和確證實驗）、抗原檢測和相關(guān)的免疫學檢測應在符合級生物安全實驗室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實驗室中進行。2、HIV分離培養(yǎng)、濃縮、中和試驗、細胞培養(yǎng)及研究工作及其它需要應用活病毒的研究工作，應在級生物安全實驗室（BSL-3）中進行。3、HIV核酸提取和檢測均應在符合級生物安全實驗室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實驗室中進行。4 、HIV病毒株應保存在符合級生物安全實驗室（BSL-3）要求的艾滋病實驗室

2、；HIV陽性樣品，包括全血、血清、血槳和其他組織（液）、核酸提取物應保存在符合BSL-2要求的艾滋病實驗室。二、HIV背景資料（一）、形態(tài)結(jié)構(gòu)人類免疫缺陷病毒直徑約120納米，大致呈球形。病毒外膜是磷脂雙分子層，來自宿主細胞，并嵌有病毒的蛋白gp120與gp41。向內(nèi)是由蛋白p17形成的球形基質(zhì)（Matrix），以及蛋白p24形成的半錐形衣殼（Capsid），衣殼在電鏡下呈高電子密度。衣殼內(nèi)含有病毒的RNA基因組、酶以及其他來自宿主細胞的成分。（二）、培養(yǎng)特性將病人自身外周或骨髓中淋巴細胞經(jīng)PHA刺激4872小時作體外培養(yǎng)（培養(yǎng)液中加IL2）12周后，病毒增殖可釋放至細胞外，并使細胞融合成多核

3、巨細胞，最后細胞破潰死亡。亦可用傳代淋巴細胞系如HT-H9、Molt-4細胞作分離及傳代。對黑猩猩或長臂猿予以HIV感染后，連續(xù)8個月在血液和淋巴液中可持續(xù)分離到HIV。（三）、在外界環(huán)境的穩(wěn)定性HIV對熱敏感。5630分失去活性，但在室溫保存7天，仍保持活性。不加穩(wěn)定劑病毒-70冰凍失去活性，而35%山梨醇或50%胎牛血清中-70冰凍3個月仍保持活性。對消毒劑和去污劑亦敏感，0.2%次氯酸鈉0.1%漂白粉，70%乙醇，35%異丙醇、50%乙醚、0.3%H2O20.5%來蘇爾處理5能滅活病毒，1%NP-40和0.5%triton-X-100能滅活病毒而保留抗原性。對紫外線、射線有較強抵抗力。（

4、四）、傳染源和傳播途徑HIV感染者是傳染源，曾從血液、精液、陰道分泌液、眼淚、乳汁等分離得HIV。傳播途徑有：1性傳播：通過男性同性戀之間及異性間的性接觸感染。單次暴露的傳染概率為0.67%。生一次沒有保護的性交，在男性同性戀中的傳染HIV的概率約為0.5-3%。而在異性性接觸中，男性傳給女性的概率是0.1-0.2%，女性傳給男性的概率是0.03-0.1%2血液傳播：接受血液或血制品：主要是指接受污染有HIV的血液或血制品，單次暴露的傳染概率介于90-100%。通過輸血、血液制品或沒有消毒好的注射器傳播，靜脈嗜毒者共用不經(jīng)消毒的注射器和針頭造成嚴重感染，據(jù)我國云南邊境靜脈嗜毒者感染率達60%。

5、不慎被污染HIV的器具如針頭刺傷皮膚，或黏膜直接接觸到含有HIV的體液，單次暴露的傳染概率為0.3%-0.5%。3母嬰傳播：包括經(jīng)胎盤、產(chǎn)道和哺乳方式傳播。母嬰傳播的幾率約為30%。（五）、宿主范圍和致病機制1、宿主范圍：艾滋病病毒進入人體后，首先遭到巨噬細胞的吞噬，但艾滋病病毒很快改變了巨噬細胞內(nèi)某些部位的酸性環(huán)境，創(chuàng)造了適合其生存的條件，在潛伏感染階段，HIV前病毒整合入宿主細胞基因組中，免疫會把忽略不被免疫系統(tǒng)識別，自身免疫無法清除。人體感染HIV后，其潛伏期一般35年或更長至8年。2、致病機制：其機制尚未完全清楚。有可能是HIV進入人體后，選擇性的侵犯帶有CD4分子的，主要有T4淋巴細

6、胞、單核巨噬細胞、樹突狀細胞等。造成T細胞,B細胞,自然殺傷細胞,單核細胞,巨噬細胞的數(shù)量和功能均受到影響，使細胞介導免疫功能失去作用。三、實驗室實驗活動危險性及預防措施（一）、實驗活動預防1、實驗室針對HIV的所有活動均應在生物安全柜內(nèi)進行。2、實驗操作時應穿合適防護服（白大衣、隔離衣或一次性工作服）、戴手套和口罩、穿實驗室專用的工作鞋。如接觸物的傳染性大、應戴雙層手套；含有HIV的液體（樣品或病毒培養(yǎng)液）有可能噴濺時，應戴防護眼鏡、穿防水（如塑料）圍裙。3、工作完畢，先脫去手套，再脫去防護服，用肥皂和流動水洗手。穿過的污染的防護服應及時放入污物袋中，消毒后方可洗滌或廢棄。4、操作過程中，如

7、發(fā)現(xiàn)防護服被污染應立即更換，如手套破損，應立即丟棄、洗手并換上新手套。不能用戴手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵和頭發(fā)等。5、 禁止使用口腔吸液管，必須使用移液器來操作實驗的所有液體。6、應盡量避免在實驗室使用針頭、刀片、玻璃器皿等利器，以防刺傷。如果必須使用，在處理或清洗時應采取措施防止刺傷或劃傷，并應對用過的物品進行消毒。7、 應將用過的銳器直接放入耐穿、防滲漏的利器盒，用過的針頭應直接放入堅固的容器內(nèi)，消毒后廢棄8、禁止將使用后的一次性針頭重新套上針頭套。禁止用手直接接觸使用過的針頭、刀片等利器。（二）、職業(yè)暴露的評估及暴露后預防1、 輕度暴露：指皮膚被實心針刺傷或表皮傷，或粘膜接

8、觸少量（幾滴）感染性液體。2、 重度暴露：指皮膚被空心針刺傷、深部刺傷，被可見到有血液的器械刺傷或器械曾放置于病人的動脈和靜脈。粘膜接觸大量感染性液體（大量血液噴濺）。發(fā)生職業(yè)暴露以后，可以服用抗病毒藥物，進行暴露后預防（三）、 實驗室的清潔和消毒本實驗室于每次實驗活動開始前均準備有0.2%和5%的次氯酸溶液。工作完畢應對工作臺面消毒，用0.10.2%的次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥20min以上；操作過程中如有樣品、檢測試劑外濺，應及時消毒。如有大量高濃度的傳染性液體濺出，在清潔之前應先用1%的次氯酸鈉溶液浸泡，然后戴上手套擦凈。（四）、污染物處理本實驗室配備有密封防漏容器及高壓蒸汽消

9、毒鍋。艾滋病實驗室產(chǎn)生的所有廢棄物，應置于專用的密封防漏容器中，安全運至消毒室，經(jīng)高壓消毒后再進行處理或廢棄。（五）、實驗室實驗活動危害評估本實驗室只針對HIV抗體檢測的操作，該項實驗活動可能存在潛在危險。實驗操作實施過程中在無控制措施情況下可能產(chǎn)生高危害度。但經(jīng)對危害發(fā)生的可能性分析，認為極少發(fā)生實驗危害；但該危害能造成高度嚴重后果。本實驗室在采取一級及二級屏障的預防控制措施后其殘留風險可降至最低四、工作人員素質(zhì)本實驗室共有技術(shù)人員5名，其中申請進入BSL-2實驗室3名。5名技術(shù)人員均為檢驗專業(yè)畢業(yè)并從事臨床檢驗工作多年。2名曾經(jīng)從事細菌、真菌等微生物學實驗，1名無微生物實驗室活動經(jīng)歷。所有技術(shù)人員均接受過病原微生物生物安全培訓，學習過生物安全手冊并簽署知情同意書，經(jīng)體檢無慢性病及其他傳染性疾病，健康狀態(tài)良好。五、評估結(jié)論1、本實驗室對可能發(fā)生的感染可以有效控制。2、實驗活動中采取一級及二級屏障預防，生物安全柜、洗眼器等設(shè)