毒死蜱的微生物降解研究進(jìn)展

1、毒死蜱當(dāng)前仍是全球應(yīng)用最廣泛的五種殺蟲劑之一，也是我國(guó)用量最大的農(nóng)藥品種，是對(duì)硫磷、甲胺磷等高毒有機(jī)磷農(nóng)藥的替代品種，主要作為農(nóng)用殺蟲劑防治水稻、蔬菜等作物的螟蟲、韭蛆等近百種害蟲，也作為衛(wèi)生殺蟲劑用于防治白蟻和蟑螂等5。美國(guó)在20世紀(jì)末期毒死蜱年用量就已達(dá)到約7000噸，其中3/4以上被應(yīng)用于植物保護(hù)，其余則用于家庭衛(wèi)生。毒死蜱系列產(chǎn)品（樂斯本乳油）于1984年在我國(guó)農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所取得登記，獲準(zhǔn)在水稻、棉花、蔬菜等作物上使用；同年，上海市政府在菜籃子工程建設(shè)中，推薦了樂斯本等幾種農(nóng)藥用于防治蔬菜害蟲，以徹底取代甲胺磷等高毒農(nóng)藥。雖然毒死蜱屬于中等毒性殺蟲劑，但危險(xiǎn)性仍然很大，它能夠通過(guò)皮膚

2、進(jìn)入人體，并且在人體內(nèi)有累積現(xiàn)象，長(zhǎng)期或重復(fù)給予亞毒性劑量即可對(duì)細(xì)胞、神經(jīng)軸突等產(chǎn)生影響，甚至可引起行為改變,WHO規(guī)定的毒死蜱可接受攝取量為10g/kg/d6,7。隨著健康及環(huán)保標(biāo)準(zhǔn)的提升，在許多發(fā)達(dá)國(guó)家毒死蜱已被禁止使用，2000年6月8日美國(guó)環(huán)保署（EPA）宣布，禁止在美國(guó)家庭和庭院內(nèi)使用毒死蜱殺蟲劑，指出這種常用的殺蟲劑會(huì)危害到兒童的健康安全。依據(jù)美國(guó)環(huán)保署的意見，新西蘭政府決定含有毒死蜱的產(chǎn)品自2005年12月31日將不再應(yīng)用于白蟻的防控，并號(hào)召取消毒死蜱在所有有可能導(dǎo)致孩子暴露的地方使用，2011年10月28日，新西蘭環(huán)保署提議禁止毒死蜱用于花園。為了保證兒童健康，幾乎所有的發(fā)達(dá)國(guó)

3、家都已經(jīng)禁止毒死蜱應(yīng)用于家居，但是并沒有完全禁止其在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域使用；在大多數(shù)發(fā)展中國(guó)家，毒死蜱仍是應(yīng)用最廣泛的農(nóng)用殺蟲劑、由于經(jīng)濟(jì)、技術(shù)發(fā)展的限制，短期內(nèi)也不可能完全禁止毒死蜱的應(yīng)用，那么如何減少應(yīng)用毒死蜱所導(dǎo)致的負(fù)面影響就成為一個(gè)亟待解決的課題。1.2 毒死蜱的微生物降解研究進(jìn)展微生物的降解作用被認(rèn)為是環(huán)境中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留降解的最主要因素，因此分離篩選能夠高效降解有機(jī)磷農(nóng)藥的微生物是解決農(nóng)藥污染，進(jìn)行環(huán)境修復(fù)的一項(xiàng)有效措施8,9。某些有機(jī)磷降解菌的降解作用具有廣譜性，能降解多種不同的有機(jī)磷農(nóng)藥，這是由于有機(jī)磷農(nóng)藥具有相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)，降解菌產(chǎn)生的相關(guān)酶類作用于有機(jī)磷農(nóng)藥的共有結(jié)構(gòu)所致，而降解速度

4、的快慢則可能與農(nóng)藥自身的化學(xué)穩(wěn)定性、降解酶接觸農(nóng)藥靶標(biāo)位點(diǎn)的難易程度、農(nóng)藥及降解產(chǎn)物對(duì)酶促反應(yīng)的反饋?zhàn)饔玫榷喾N因素有關(guān)10,11，有機(jī)磷農(nóng)藥初步水解路徑如圖1-2。篩選能降解多種有機(jī)磷農(nóng)藥的微生物菌株對(duì)于農(nóng)藥的污染治理也是一項(xiàng)意義重大的工作,現(xiàn)在也已經(jīng)分離到了一些這樣的菌株12。例如，黃桿菌屬細(xì)菌Flavobacterium sp. ATCC 27551的水解酶能有效的水解幾乎所有已知的O-P鍵13；缺陷假單胞菌Pseudomonas diminuta也具有相同降解功能14；近年來(lái)也有一些具有類似降解功能的菌株報(bào)道15,16。一般來(lái)說(shuō)，微生物長(zhǎng)期持續(xù)接觸某種農(nóng)藥就可能會(huì)誘導(dǎo)出降解該農(nóng)藥的能力，

5、所以經(jīng)常從被農(nóng)藥污染的土壤或施用過(guò)該農(nóng)藥的土壤中分離針對(duì)該農(nóng)藥的降解菌；也可通過(guò)人工措施使微生物適應(yīng)目標(biāo)農(nóng)藥，以獲取高耐受能力和降解能力的微生物菌株。較早關(guān)于毒死蜱降解菌的報(bào)道是Sethunathan N.等13于1973年從施用二嗪農(nóng)的土壤中篩選出的黃桿菌（Flavobacterium sp.）以及Serdar C.M.等14在1982年篩選出的缺陷假單胞菌（Pseudomonas diminuta），它們能以共代謝的方式降解毒死蜱，但是不能以毒死蜱作為唯一碳源和能源生長(zhǎng)。Mallick等17在1999年報(bào)道一株從土壤中篩選出的節(jié)桿菌（Arthrobacter sp.）能在無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中降解

6、毒死蜱，能在48 h內(nèi)將10mg/L毒死蜱完全降解。Ghanem等18和Li等19分別分離到了Klebsiella sp.和Sphingomonas sp.，這兩個(gè)菌株能以毒死蜱作為唯一碳源和磷源。除細(xì)菌外，也分離到一些能降解毒死蜱的真菌，Bending G.D.等20（2002年）篩選出2株能降解毒死蜱的真菌Hypholoma fascicularae和Coriolus versicolor。方華2007年從土壤中篩選到一株毒死蜱降解菌，經(jīng)鑒定為輪枝孢屬（Verticillium sp.）真菌。大量的研究表明，在土壤或水體中微生物降解毒死蜱的主要中間產(chǎn)物是3,5,6-三氯-2-吡啶酚(3,5

7、,6-trichloro-2-pyridinol,TCP)，如圖1-3 21,22。Racke等人將毒死蜱用14C標(biāo)記后進(jìn)行微生物降解實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果表明毒死蜱經(jīng)土壤微生物作用后的初步降解產(chǎn)物為3,5,6-三氯-2-吡啶酚(TCP)，TCP能被進(jìn)一步降解，終產(chǎn)物為CO223,24。但TCP的進(jìn)一步降解要緩慢得多，高濃度的TCP對(duì)毒死蜱的生物降解還有抑制作用，另外，TCP較毒死蜱水溶性更大，更容易污染水體和土壤，從而放大毒死蜱的危害23。毒死蜱的初級(jí)降解產(chǎn)物除了TCP外還有O,O-二乙基硫代磷酸(鹽)（diethylthiophosphate, DETP），它們均能被微生物完全代謝為無(wú)機(jī)物，Sing

8、h等人推測(cè)毒死蜱的微生物降解途徑如圖1-4，可能會(huì)產(chǎn)生約15種中間代謝物2。毒死蜱的微生物降解也與環(huán)境因素密切相關(guān)，影響到降解菌株生長(zhǎng)繁殖的因素都可能會(huì)對(duì)毒死蜱的微生物降解產(chǎn)生影響，例如:溫度、濕度、pH以及土著微生物等生物因子。在最近報(bào)道的一些研究中都顯示毒死蜱的最大降解率一般都發(fā)生在中性或者堿性條件下，這可能是由于降解毒死蜱的關(guān)鍵酶在中性或堿性條件下有更大的酶活性，另外，在堿性條件下毒死蜱的穩(wěn)定性會(huì)受到影響，其水解率變得更高25。Singh等也報(bào)道了應(yīng)用Enterobactor sp.降解毒死蜱，在堿性pH時(shí)實(shí)現(xiàn)了毒死蜱的快速降解，但在酸性pH時(shí)其速度則很慢26。目前，利用微生物降解毒死蜱

9、等農(nóng)藥殘留已經(jīng)成為環(huán)境及生物技術(shù)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，在這方面的研究也已經(jīng)取得了大量成果，分離出了大量降解菌株，并分析研究了相關(guān)降解酶及降解基因，但目前所開展的研究工作大多還只是局限在實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)入實(shí)踐應(yīng)用的并不多，這主要是由于存在以下問題：篩選獲得的農(nóng)藥降解菌的降解效率普遍較低，而且菌株容易發(fā)生變異、退化而喪失降解能力，難以滿足實(shí)際需求；降解菌株的應(yīng)用環(huán)境條件不確定，環(huán)境因素波動(dòng)較大，這在很大程度上影響到降解菌能否生長(zhǎng)繁殖并發(fā)揮降解作用；應(yīng)用到環(huán)境中的農(nóng)藥降解菌會(huì)與土著微生物發(fā)生相互作用，導(dǎo)致功效的不確定性；將降解菌株制作成便于儲(chǔ)運(yùn)和應(yīng)用的制劑是其真正進(jìn)入實(shí)踐應(yīng)用的基礎(chǔ)，但目前與之相關(guān)的制劑化研究進(jìn)

10、展緩慢，存在制劑活性低、難于保存、生產(chǎn)成本高等問題。為了做好實(shí)驗(yàn)室研究與實(shí)踐應(yīng)用之間的銜接，農(nóng)藥的微生物降解研究應(yīng)該不僅僅局限在降解菌的篩選、降解機(jī)理、降解動(dòng)力學(xué)等，還應(yīng)強(qiáng)化以下幾個(gè)方面：具有農(nóng)藥降解功能的天然復(fù)合菌系的研究與應(yīng)用；工程菌的構(gòu)建（拓寬降解譜、提高降解能力），降解酶基因的改造（降解酶的高效表達(dá)）等；降解酶及其制劑的研究與開發(fā)；降解菌與降解酶制劑的聯(lián)合應(yīng)用；多種降解菌的聯(lián)合應(yīng)用。1.3 生防菌及其在防治作物病害中的研究與應(yīng)用有些微生物對(duì)作物病蟲害具有抑制或殺滅作用，因此常被用于作物病蟲害的防治，這些有益微生物亦被稱為生防菌。按照防治對(duì)象的不同，可分為防治作物病原菌的生防菌和防治作物

11、害蟲的的生防菌。通常所說(shuō)的生防菌大多都是用于防治作物病原菌，其中以防治作物土傳病害最為普遍；而防治作物害蟲的生防菌則多是對(duì)害蟲有毒害或致病作用的微生物。生防菌應(yīng)用上的一項(xiàng)基本要求是不能對(duì)所應(yīng)用的作物對(duì)象有明顯負(fù)面作用。應(yīng)用生防菌防治作物病蟲害的歷史最早是從防治土傳病害開始的，在20世紀(jì)早期就有人開始研究用微生物防治土傳病害，例如，Hartley應(yīng)用一些常見的腐生真菌和細(xì)菌來(lái)嘗試防治根腐病。在20世紀(jì)30-50年代，技術(shù)人員開展了應(yīng)用放線菌及其代謝產(chǎn)物防治作物病害的大量研究；而在剛過(guò)去的50年中，生防菌的研究與應(yīng)用取得了更快的發(fā)展，已有不少成熟的生防菌制劑被應(yīng)用到農(nóng)業(yè)生產(chǎn)領(lǐng)域，可應(yīng)用于作物病害防

12、治的生防菌菌種也越來(lái)越多，甚至已經(jīng)構(gòu)建了一些生防工程菌。用作生防菌的菌種主要包括細(xì)菌和真菌兩個(gè)大類，另外也有一些病毒和噬菌體被當(dāng)作生防菌使用。近年來(lái)，由于人們的生態(tài)意識(shí)不斷增強(qiáng)，長(zhǎng)期應(yīng)用化學(xué)農(nóng)藥所導(dǎo)致的環(huán)境污染、農(nóng)藥殘留和病原菌抗藥性等問題得到了更多關(guān)注，以生防菌為代表的生物防治方法成為了近期作物病害防治研究的熱點(diǎn)之一。相關(guān)研究人員在生防菌篩選、生防菌菌劑的制備與應(yīng)用、以及生防菌控病原理等方面開展了廣泛的研究，取得了大量的成果，主要表現(xiàn)在兩個(gè)方面，一是生防菌菌種庫(kù)被不斷充實(shí)，生防菌制劑也越來(lái)越多，二是對(duì)其防病機(jī)理的認(rèn)識(shí)不斷深入。生防細(xì)菌與生防真菌當(dāng)前，應(yīng)用較多的生防細(xì)菌主要有假單胞菌屬(Pse

13、udomonas)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、農(nóng)桿菌屬(Agrobacterium)、鏈霉菌屬(Streptomyces)等。利用生防細(xì)菌防治作物病害最著名的例子是Kerr利用放射農(nóng)桿菌(Agrobacterium radiobacter K84)成功防治由致病性農(nóng)桿菌引起的冠癭病27,28。近來(lái)也有許多性能優(yōu)異的生防細(xì)菌被分離出來(lái)，其中不少菌株還被開發(fā)成商品制劑，得到廣泛的推廣應(yīng)用。這些商品化制劑中則以芽孢桿菌制劑居多，這應(yīng)歸因于芽孢桿菌所具有的良好生防性能、抗逆性和易加工性等特性。目前應(yīng)用的芽孢桿菌種類主要有枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌和短小芽孢桿菌等。例如

14、，Silveria等人的研究發(fā)現(xiàn)巨大芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌和凝結(jié)芽孢桿菌3種細(xì)菌對(duì)番茄青枯病具有較好的防治作用，同時(shí)還能提高番茄種子的發(fā)芽率。AGRAQUEST公司利用枯草芽孢桿菌QST713開發(fā)的活菌制劑SerenadeTM，被成功用于防治多種作物的霜霉病、白粉病和灰霉病等。諾維信公司生產(chǎn)的菌劑Taegro（含枯草芽孢桿菌）施用于溫室或者室內(nèi)樹苗、灌木和裝飾植物的根部，可有效防治由鐮刀菌屬和絲核菌屬引起的根腐病和枯萎病。截止目前，美國(guó)已經(jīng)有5株枯草芽孢桿菌生防菌株獲得環(huán)保局(EPA)商品化或有限商品化生產(chǎn)應(yīng)用許可。另外，我國(guó)的科技人員也對(duì)芽孢桿菌屬生防菌開展了大量研究工作，陳志誼等人研究了枯

15、草芽孢桿菌B-916對(duì)水稻紋枯病和稻曲病的防治機(jī)理，并開發(fā)了產(chǎn)品“紋曲寧”，其平均防效可達(dá)70%以上29。韓艷霞等人的研究表明蠟狀芽孢桿菌B3-7菌株對(duì)小麥全蝕病菌具有很強(qiáng)的抑制能力，可有效降低小麥全蝕病的發(fā)病程度30。童蘊(yùn)慧等人證實(shí)地衣芽孢桿菌W10對(duì)灰葡萄孢(Botrytis cinerea)引起的番茄灰霉病的防治效果與化學(xué)藥劑腐霉利相當(dāng)31。另一類被廣泛研究和應(yīng)用的生防細(xì)菌是假單胞菌，它們中有很多能產(chǎn)生抗菌物質(zhì)，如硝吡咯菌素、藤黃綠膿菌素、二乙酰藤黃酚等。Gupta等人（1999）發(fā)現(xiàn)銅綠假單胞菌GRC1能產(chǎn)生水溶性綠膿菌素，對(duì)由Macrophomina phaseolina和Fusar

16、ium oxysporum引起的土傳病害具有很強(qiáng)的拮抗能力32。鄭愛萍等人（2003）證實(shí)致黃假單胞菌（Pseudomonas aureofaciens）對(duì)水稻紋枯病菌菌絲有強(qiáng)烈的致畸作用，并能抑制菌核的萌發(fā)，田間防效高于井岡霉素33。Fernando等人（2007）應(yīng)用Pseudomonas chlororaphis防治蕓薹菌核病，其防效與殺菌劑異菌脲相當(dāng)34。另外，大量的鏈霉菌也被作為生防菌使用，例如，灰綠鏈霉菌K61菌株對(duì)康乃馨枯萎病有很好的防治效果，在歐美國(guó)家己經(jīng)商品化生產(chǎn)。 迄今為止，也已有大量的生防真菌被用于作物病害防治，由生防真菌開發(fā)的生防制劑甚至多于生防細(xì)菌制劑，并已在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)

17、中發(fā)揮了巨大的作用。主要的生防真菌品種有木霉、盾殼霉、無(wú)致病力的尖孢鐮刀菌等。木霉屬真菌由于具有生境廣泛、對(duì)養(yǎng)分的要求低，易于分離和培養(yǎng)、生防療效好等特點(diǎn)，已經(jīng)成為目前研究最為廣泛的一類生防真菌。Weindling等人早在20世紀(jì)30年代就發(fā)現(xiàn)木霉可以寄生許多土傳真菌病害，如絲核菌屬、鐮刀菌屬、小核菌屬等，在土壤中適當(dāng)添加木霉菌就能夠防治一些真菌病害。重寄生作用被認(rèn)為是木霉對(duì)作物病害生物防治的一個(gè)重要機(jī)制，該類木霉首先對(duì)真菌寄主進(jìn)行識(shí)別，之后纏繞于病原菌的菌絲上，并侵入菌絲內(nèi)而使其死亡?，F(xiàn)己發(fā)現(xiàn)的具有生防作用的木霉有哈茨木霉、綠色木霉、長(zhǎng)枝木霉、黃綠木霉等。例如，從土壤中獲得的哈茨木霉（Tri

18、choderma harzianum）T-22菌株，能有效防治番茄枯萎病、天竺葵立枯病以及由腐霉病菌（Pythium spp.）引起的碎倒病35, 36；綠色木霉T23菌株和TH-31菌株則分別對(duì)甜瓜枯萎病和豇豆褐斑病有很好的防治效果。盾殼霉是核盤菌的重要寄生菌，對(duì)控制核盤菌菌核存活和子囊盤萌發(fā)十分有效，可用于防控由核盤菌侵染引起的多種作物菌核病，并具有專一性強(qiáng)、有效時(shí)間長(zhǎng)、對(duì)作物無(wú)致病性等優(yōu)點(diǎn)。早在1989年，前蘇聯(lián)就開始生產(chǎn)盾殼霉制劑Coniothyrin用于向日葵菌核病的防治；另外，德國(guó)生產(chǎn)的Contans和匈牙利BIOVED公司生產(chǎn)的KONI都是非常知名的盾殼霉制劑，具有防效好、持效期

19、長(zhǎng)、費(fèi)用低等特點(diǎn)，在與同功能的化學(xué)農(nóng)藥的競(jìng)爭(zhēng)中亦具有優(yōu)勢(shì)。無(wú)致病力的尖孢鐮刀菌則通常被用于防治由鐮刀菌引起的植物萎蔫病，Ogawa(1985)采用無(wú)致病力的尖孢鐮刀菌預(yù)接種紅薯，結(jié)果表明這能有效防治尖孢鐮刀菌引起的萎蔫病37。國(guó)內(nèi)外的研究人員還對(duì)無(wú)致病力尖孢鐮刀菌FO47進(jìn)行了長(zhǎng)時(shí)間的應(yīng)用研究，發(fā)現(xiàn)該菌株能有效地控制黃瓜、西瓜和番茄等多種植物的萎蔫病和根腐病，該菌株目前在歐洲已被商業(yè)化生產(chǎn)，并應(yīng)用于作物土傳病害的防控。生防菌的控病機(jī)理 生防菌一般通過(guò)分泌抗（抑）菌物質(zhì)、競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)和生態(tài)位點(diǎn)、誘導(dǎo)抗性以及重寄生等方式來(lái)抑制或殺滅病原菌，達(dá)到防治作物病害的效果。分泌抗（抑）菌物質(zhì)是生防菌防治作物病害

20、最重要的機(jī)制之一，這些具有抗（抑）菌特性的物質(zhì)主要有：抗生素，毒素，抗菌肽及細(xì)胞壁降解酶，細(xì)菌素及其類似物。例如，許多芽孢桿菌都能分泌低分子量的抗菌肽，對(duì)紋枯病、赤霉病、白粉病、炭疽病等多種作物病害具有防治作用。在這些抗菌物質(zhì)的應(yīng)用中，以抗生素最為常見，目前農(nóng)用抗生素已經(jīng)成為生物農(nóng)藥的主體，約占生物農(nóng)藥份額的90%。通過(guò)與病原菌競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)和生態(tài)位點(diǎn)來(lái)實(shí)現(xiàn)其抗病作用是生防菌防治作物病害的另一重要機(jī)制。自然環(huán)境（如，土壤）中微生物種類繁多，很多有生防功能的有益菌與作物病原菌共存，并為了生存所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和空間進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)，若生防菌獲得競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)，就能起到抑制病原菌的作用38。例如，木霉的繁殖速度比鐮刀菌更

21、快，當(dāng)兩者爭(zhēng)奪生存空間時(shí)，木霉菌可使鐮刀菌生長(zhǎng)受到抑制，甚至導(dǎo)致其死亡39。Bacon等人分離的一株玉米內(nèi)生枯草芽孢桿菌與玉米病原菌串珠鐮孢菌有相同的生態(tài)位點(diǎn)，而枯草芽孢桿菌能在玉米體內(nèi)迅速定殖而占有更多生態(tài)位點(diǎn)，故能有效降低串珠鐮孢菌的發(fā)病率40。另外，還有誘導(dǎo)系統(tǒng)抗性和重寄生兩種重要的控病機(jī)制。有些生防菌在應(yīng)用后能誘導(dǎo)植物發(fā)生一系列生理生化反應(yīng)，并使其產(chǎn)生對(duì)多種病原菌的抗性，即誘導(dǎo)系統(tǒng)抗性(Induced systematic resistance, ISR)。如，Benhamou等人(1996年)用短小芽孢桿菌SE34預(yù)先接種豌豆，后期再接種病原菌，結(jié)果發(fā)現(xiàn)豌豆植株體內(nèi)會(huì)積累大量的木質(zhì)素

22、和酚類物質(zhì)，并使寄主細(xì)胞壁加厚，能有效阻止病原菌的侵入41。重寄生則是生防菌寄生于植物病原菌上的一種寄生現(xiàn)象，包括生防寄生菌與寄主菌的識(shí)別、接觸和寄生等一系列的連續(xù)過(guò)程。通常木霉就是通過(guò)重寄生的方式發(fā)揮生防作用，木霉與病原菌（寄主）接觸后，沿著寄主菌絲生長(zhǎng)，并分泌一些消化寄主細(xì)胞壁的酶，分解部分細(xì)胞壁后進(jìn)入到寄主細(xì)胞內(nèi)，吸取寄主細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)進(jìn)行生長(zhǎng)繁衍，最終導(dǎo)致寄主死亡。1.4 生防菌在應(yīng)用中存在的問題利用生防菌株防治作物病害尤其是土傳病害已經(jīng)取得了大量成果，成功的利用這些生防菌株開發(fā)了很多微生物制劑，其中大多是含單一菌種的活菌制劑，這些制劑也被廣泛的用于生產(chǎn)實(shí)踐，在應(yīng)用中取得了不錯(cuò)的效果，但也

23、存在一些問題，影響了生防菌的應(yīng)用與推廣。目前所應(yīng)用的生防菌基本都是在實(shí)驗(yàn)室篩選獲得的一些抑菌效果很強(qiáng)的菌株，這些菌株雖然在實(shí)驗(yàn)室篩選評(píng)估過(guò)程中都表現(xiàn)出了很好的防治病害效果，但在田間應(yīng)用時(shí)防病效果卻并不理想、或是性能不穩(wěn)定，特別是在應(yīng)用時(shí)間或應(yīng)用區(qū)域不同時(shí)，其防治效果重復(fù)性差。這主要是因?yàn)樯谰峭ㄟ^(guò)其生命活動(dòng)而發(fā)揮功效，在其應(yīng)用環(huán)境中的許多生物因子或非生物因子都會(huì)對(duì)生防菌的生命活動(dòng)產(chǎn)生影響，進(jìn)而影響到生防效果42。例如，在不同土壤中的微生物群落存在很大差異，這些土著微生物又會(huì)與施加的生防菌發(fā)生復(fù)雜的相互作用，在某些土壤條件下，生防菌容易獲得生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)而發(fā)揮較好的功效，但在其它土壤中卻不一定如此。

24、另外，也存在生防菌菌劑活性不高、穩(wěn)定性差等問題。 為了應(yīng)對(duì)生防菌在實(shí)踐應(yīng)用中所表現(xiàn)出的諸多不足，相關(guān)研究人員也展開了大量的研究，以期能更好的拓展生防菌的應(yīng)用。主要有以下幾個(gè)方面：優(yōu)化菌劑的制備工藝，生產(chǎn)出活性高、性能穩(wěn)定的生防菌活菌制劑。深入研究生防菌的生理生化特性、抗菌譜、抗逆性等，以便掌握其合適的應(yīng)用方式和條件，確保能有效發(fā)揮功效。兩種或多種生防菌株的混和使用，合理的混用有時(shí)不僅能提高防治病害的效果，還能發(fā)展多功能的菌劑，例如，Raupach等人將枯草芽孢桿菌GB03和短小芽孢桿菌INR7混合用于處理黃瓜種子，結(jié)果表明能顯著提高對(duì)多種病害的防治效果43。這可能是兩種菌株都有相似的功能，混用

25、后導(dǎo)致了效果的疊加，也可能是一種菌株的存在對(duì)另一菌株的生存有利，導(dǎo)致其能更好的生長(zhǎng)并發(fā)揮相關(guān)作用。但是菌株混用時(shí)必須要測(cè)試菌株之間的親和性，一般來(lái)說(shuō)，親和性較好的菌株混用后能提高其防治效果，而親和性差的菌株的混用效果則不明確。對(duì)已有的生防菌進(jìn)行改良，主要涉及到增強(qiáng)菌株抗逆性、提高抑菌物質(zhì)的表達(dá)、構(gòu)建工程菌等幾個(gè)方面。生防菌與其它輔劑或化學(xué)農(nóng)藥的聯(lián)合應(yīng)用。另外，生防菌的抗病害相關(guān)基因的應(yīng)用也值得關(guān)注，這些基因除了可用于構(gòu)建工程菌外，還可用于發(fā)展轉(zhuǎn)基因抗病植物。1.5 微生物活菌制劑概述 微生物活菌制劑是指含有特定的微生物活體細(xì)胞，并以特定（有益）微生物活菌數(shù)量為質(zhì)量指標(biāo)，且具有某些預(yù)知功能的微生

26、物活菌制品。產(chǎn)品主要有醫(yī)療保健用活菌制劑（含獸用）、微生物農(nóng)藥及肥料、用于環(huán)境保護(hù)及工業(yè)發(fā)酵等方面的活菌制劑等。法國(guó)科學(xué)家Louis Pasteur (1822-1895)在1857年發(fā)表關(guān)于乳酸發(fā)酵的記錄之后，研究了丁酸、乳酸、醋酸和乙醇的微生物發(fā)酵過(guò)程，證明了微生物活菌在發(fā)酵過(guò)程中的重要作用。1907年，俄國(guó)生物學(xué)家Elie Metchnikoff提出衰老是由于腸道細(xì)菌產(chǎn)物的毒害作用所致，并認(rèn)為酸奶中的乳酸菌活菌能降低這種毒害作用，由此展開了微生物活菌與健康相關(guān)的系列研究；1915年，Daviel Newman首次利用乳酸菌治療膀胱感染并獲得一定療效，隨后科學(xué)家們對(duì)以乳酸桿菌為主的活菌制劑

27、進(jìn)行了大量臨床研究，取得了大量成果。1947年，Mollgaard發(fā)現(xiàn)用乳酸桿菌活菌制劑飼喂仔豬可改善仔豬健康狀況，并有效增加仔豬體重，后續(xù)的進(jìn)一步研究促使活菌制劑進(jìn)入到了動(dòng)物養(yǎng)殖領(lǐng)域。20世紀(jì)中后期，微生物活菌制劑得到廣泛發(fā)展，并被大量用于醫(yī)療、農(nóng)業(yè)、工業(yè)發(fā)酵以及環(huán)境保護(hù)等多個(gè)領(lǐng)域。我國(guó)對(duì)于微生物活菌制劑的研究與應(yīng)用始于20世紀(jì)70年代何明清等對(duì)不產(chǎn)生腸毒素但產(chǎn)生大腸菌素的大腸埃希氏菌菌株的應(yīng)用。20世紀(jì)80年代初康白教授成功研制了促菌生(又稱樂腹康，主要成份是蠟樣芽孢桿菌)，用于治療嬰幼兒的腹瀉、腸炎等病癥，取得了良好的效果。從此，微生物活菌制劑在我國(guó)的研究、開發(fā)和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)拉開了序幕，各

28、種微生物活菌制劑相繼走進(jìn)市場(chǎng)，如常樂康（酪酸梭菌、嬰兒雙歧桿菌），整腸生（地衣芽孢桿菌），培菲康（雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸球菌）等，但這些制劑均是用于醫(yī)療保健領(lǐng)域，而用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)及環(huán)境保護(hù)等方面的則相對(duì)較少。20世紀(jì)70年代末期我國(guó)開始了光合細(xì)菌、飼料酵母、乳酸菌以及芽孢桿菌等活菌制劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖及畜牧業(yè)上的應(yīng)用研究，也取得了一定的成果，但受到產(chǎn)品應(yīng)用效果不夠穩(wěn)定、生產(chǎn)或使用成本高以及生產(chǎn)習(xí)慣等方面的影響，其發(fā)展較慢，僅有用作水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域凈水劑的活菌制劑產(chǎn)品相對(duì)較多。另外，幾乎在同一時(shí)期，以蘇云金芽孢桿菌和固氮菌為代表的用于種植業(yè)的活菌制劑也得到了較快發(fā)展，特別是作為生物農(nóng)藥的蘇云金芽孢桿菌的產(chǎn)量

29、在20世紀(jì)70年代末就已達(dá)到1000噸以上規(guī)模；在20世紀(jì)80-90年代固氮菌的應(yīng)用也比較廣泛，解磷、解鉀細(xì)菌制劑也得到發(fā)展，但在20世紀(jì)末期其生產(chǎn)及應(yīng)用規(guī)模一度出現(xiàn)萎縮；進(jìn)入21世紀(jì)，發(fā)展生態(tài)農(nóng)業(yè)、實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展成為共識(shí)，這帶給了農(nóng)用活菌制劑更多的發(fā)展機(jī)遇。周集體等人篩選到一株高效苯酚降解菌，經(jīng)鑒定為布魯氏桿菌屬(Brucella sp.)，除能降解苯酚外，還可利用苯胺、萘、氯苯等芳香化合物為唯一碳源生長(zhǎng)45；但受限于菌株穩(wěn)定性、安全性以及制劑生產(chǎn)技術(shù)不成熟等多方面的原因，這些菌株很少被開發(fā)成商業(yè)化產(chǎn)品，在實(shí)際應(yīng)用中多是使用國(guó)外公司的產(chǎn)品，知名產(chǎn)品如丹麥諾維信公司的諾碧清系列污水處理劑，

30、美國(guó)碧沃豐公司的BZT、OBT系列微生物制劑，美國(guó)通用環(huán)?？萍脊镜睦蒐LMO系列菌劑，這些制劑多應(yīng)用于污水處理、有機(jī)污染物降解、土壤修復(fù)、資源循環(huán)利用等方面。1.6 農(nóng)用微生物活菌制劑的研究與應(yīng)用現(xiàn)狀微生物活菌制劑已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于種植業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)以及農(nóng)副產(chǎn)品加工等農(nóng)業(yè)領(lǐng)域，在種植業(yè)中應(yīng)用的微生物活菌制劑主要包括微生物農(nóng)藥和微生物肥料兩大類。這里的微生物農(nóng)藥專指用于防治作物病蟲害、去除雜草、調(diào)節(jié)作物生長(zhǎng)或緩解作物連作障礙的微生物活菌制劑。而微生物肥料則主要是指具有肥料效應(yīng)的微生物活菌制劑，我國(guó)著名微生物學(xué)家陳華癸教授對(duì)微生物肥料所做的定義是“一類含有活微生物的特定制品，應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，作物能

31、夠獲得特定的肥料效應(yīng)，在這種效應(yīng)的產(chǎn)生過(guò)程中，制品中的活微生物起關(guān)鍵作用。” 除了在種植業(yè)中應(yīng)用的微生物農(nóng)藥和微生物肥料外，微生物活菌制劑目前也已經(jīng)應(yīng)用到動(dòng)物疾病防治、飼料加工、改善動(dòng)物生產(chǎn)環(huán)境等多個(gè)環(huán)節(jié)，養(yǎng)殖業(yè)也成為了微生物活菌制劑應(yīng)用最為廣泛的領(lǐng)域之一。用作農(nóng)藥的活菌制劑作為微生物農(nóng)藥的活菌制劑主要有殺蟲劑、殺菌劑、除草劑以及植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等多種。微生物殺蟲劑是其中使用最為廣泛的一類，它是利用對(duì)某些有害昆蟲有致死作用的病原微生物制成，以防治和殺死目標(biāo)害蟲為目的的生物制劑，常用的微生物有細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物及線蟲。蘇云金芽孢桿菌被認(rèn)為是微生物殺蟲劑發(fā)展史上最重要的部分，1901年日本人S.

32、Ishiwata在染病的家蠶幼蟲體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了蘇云金芽孢桿菌，并認(rèn)為該菌是導(dǎo)致家蠶致病和死亡的主要原因，后人不斷研究將蘇云金芽孢桿菌用于作物蟲害防治，美國(guó)于1928年啟動(dòng)了以應(yīng)用蘇云金芽孢桿菌為主的防治玉米螟計(jì)劃，1929年就進(jìn)行第一次大田應(yīng)用，在1938年法國(guó)第一個(gè)蘇云金芽孢桿菌產(chǎn)品Sporeine就面世了。除了細(xì)菌被廣泛用作微生物殺蟲劑，許多真菌也被開發(fā)成殺蟲劑，如白僵菌對(duì)多種農(nóng)林害蟲有致死作用，已經(jīng)大量用于防治玉米螟、水稻葉蟬、松毛蟲等害蟲。目前，在包括中國(guó)在內(nèi)的許多國(guó)家，真菌殺蟲劑已廣泛用于農(nóng)林害蟲和城市昆蟲的防治，相關(guān)研究表明真菌殺蟲劑在植物病蟲害的持續(xù)控制中具有巨大潛力，近年來(lái)已成為生

33、防制劑的研究熱點(diǎn)。另外，一些原生動(dòng)物以及昆蟲病原線蟲也被用于殺蟲劑開發(fā)，例如，原生動(dòng)物中微孢子蟲能用于防治棉鈴蟲、蜱蟲、松毛蟲等；昆蟲病原線蟲是昆蟲的寄生性天敵，能主動(dòng)尋找寄主，其侵染率高、致死力強(qiáng)、對(duì)人畜及環(huán)境安全，已被廣泛應(yīng)用于防治農(nóng)林害蟲。直至今日，人類利用微生物殺蟲已有100多年的歷史，已篩選的殺蟲微生物達(dá)幾百種，制成產(chǎn)品并大面積應(yīng)用的主要有蘇云金芽孢桿菌、日本金龜子芽孢桿菌、球形芽孢桿菌、白僵菌、綠僵菌、擬青霉等。微生物殺菌劑一般包括農(nóng)用抗生素和抗病微生物制劑，但在這里單指抗病微生物的活菌制劑，抗病微生物一般通過(guò)寄生、抗生、競(jìng)爭(zhēng)、溶菌等作用來(lái)抑制、甚至殺滅致病微生物。熒光假單胞菌(P

34、seudomonas fluorescens)是研究最多的生物防治細(xì)菌，它大量存在于植物根際，定殖于植物根面，繁殖快，可產(chǎn)生嗜鐵素和抗生素，在植物局部和空間微環(huán)境與目標(biāo)菌競(jìng)爭(zhēng)，對(duì)多種植物病原菌有抑制作用46?？莶菅挎邨U菌(Bacillus subtilis)制劑商業(yè)化生產(chǎn)與應(yīng)用已有30余年，這類制劑對(duì)鐮孢屬(Fusarium )和絲核菌屬(Rhizoctonia)植物病原菌防治效果較好，同時(shí)還具有促進(jìn)生長(zhǎng)的作用47。放射土壤桿菌K84的活菌制劑在1973年就被大規(guī)模生產(chǎn)，它能有效抑制致病性根癌土壤桿菌的生長(zhǎng)，主要用于預(yù)防植物冠癭病48。另外，也有一些具有抗菌能力的真菌被用于作為殺菌劑，如哈茨木

35、霉(T. harzianum) 對(duì)灰霉病、腐霉病、菌核病、立枯病等多種病害都有較好的防治效果，哈茨木霉T39 已在以色列等國(guó)家獲得成功登記49。鏈孢粘帚霉(Gliocladium catenulatum)也是一種重要的菌寄生真菌，可用于防治土壤里的腐霉菌和絲核菌。用作除草劑的活菌制劑是利用植物病原微生物致目標(biāo)雜草染病死亡的微生物制劑，一般由雜草病原菌的繁殖體和相應(yīng)的助劑組成。由寄主雜草分離得到的植物病原菌對(duì)寄主植物一般具有種間特異性，其選擇性高，對(duì)栽培植物比較安全，因而應(yīng)用較多。應(yīng)用最廣泛的一類是利用病原真菌生產(chǎn)的孢子除草劑，真菌的孢子也是目前認(rèn)為最適合作為除草劑的部分，對(duì)一些不產(chǎn)孢或產(chǎn)孢少的

36、真菌則用菌絲體片段來(lái)代替孢子。第一個(gè)注冊(cè)上市的真菌除草劑是1981年在美國(guó)登記的Devine制劑，它是將棕桐疫霉菌的厚垣孢子制成懸浮劑，用于防治柑桔園中的莫倫藤以及其它多年生作物田中的有害葡萄樹，其防治率可達(dá)96%；Collego制劑被認(rèn)為是最成功的商品化真菌除草劑之一，它是將長(zhǎng)孢狀刺盤孢的孢子加工成可濕性粉劑用來(lái)防治皂角，大田常規(guī)使用防治率在90%以上；Tasmart制劑的活性成分為稗內(nèi)臍蠕孢菌，用于防治水稻田中的稗草；1963年我國(guó)研制成功了真菌除草劑“魯保一號(hào)”，它是在大豆菟絲子上分離得到的一種寄生性病原菌膠孢炭疽菌菟絲子?；?，可用于防治大豆、亞麻、瓜類、以及蔬菜等作物田中的菟絲子。具

37、有雜草生物防治開發(fā)潛力的真菌類微生物主要集中在以下幾個(gè)屬：鐮刀菌屬、交鏈孢菌屬、疫霉屬、柄銹菌屬、殼單孢菌屬、刺盤孢菌屬、尾孢菌屬、黑粉菌屬、核盤菌屬等50。細(xì)菌類則主要有假單胞菌屬、黃單胞菌屬、黃桿菌屬、腸桿菌屬、檸檬酸細(xì)菌屬、無(wú)色桿菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬、歐文氏菌屬等。日本煙草公司開發(fā)的除草劑Camperico就屬于細(xì)菌除草劑，其有效成分是殺禾黃桿菌(Xanthomortsas campestris pv.poannua)，可用于防治高爾夫球場(chǎng)的早熟禾，防治率可達(dá)90%以上，且具有高選擇性。由于微生物除草劑對(duì)環(huán)境較為友好，持效期長(zhǎng)，并能在一定程度上解決化學(xué)除草劑所帶來(lái)的抗性雜草問題，因而一直廣受

38、關(guān)注，也開發(fā)了諸多產(chǎn)品，但又由于微生物除草劑存在防治效果不穩(wěn)定（受環(huán)境影響大）、靶標(biāo)單一、菌株易退化等問題而導(dǎo)致其難以規(guī)模推廣和應(yīng)用。隨著生物技術(shù)的發(fā)展和對(duì)雜草科學(xué)、除草微生物病原生物學(xué)及致病機(jī)理、遺傳學(xué)等方面研究的深入，相信微生物除草劑將會(huì)在除草劑市場(chǎng)占有更大份額。 還有一類能調(diào)節(jié)作物生長(zhǎng)的活菌制劑，它主要是利用微生物生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的具植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)功能的代謝物（如脫落酸、細(xì)胞分裂素、赤霉素等）來(lái)發(fā)揮作用。例如，赤霉菌（如藤倉(cāng)赤霉菌、菜豆根瘤菌、固氮螺菌等）能產(chǎn)生赤霉素，能促進(jìn)種子萌發(fā)、植株生長(zhǎng)、提早開花結(jié)果。微生物農(nóng)藥最大的優(yōu)勢(shì)在于能克服化學(xué)農(nóng)藥對(duì)生態(tài)環(huán)境的污染和減少農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留，同時(shí)能

39、有效提高農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)及所獲得的經(jīng)濟(jì)收益。正是基于它所具有的這一系列優(yōu)勢(shì)，許多歐美發(fā)達(dá)國(guó)家都將微生物農(nóng)藥的研究和應(yīng)用作為目前所推行的“生態(tài)農(nóng)業(yè)計(jì)劃”的核心內(nèi)容。近年來(lái)，美國(guó)、澳大利亞和巴西等國(guó)在推廣應(yīng)用微生物農(nóng)藥上發(fā)展迅速，并引領(lǐng)著微生物農(nóng)藥新產(chǎn)品的研究與開發(fā)；美國(guó)環(huán)境保護(hù)局（EPA）已經(jīng)注冊(cè)了控制根系細(xì)菌和真菌病害、冰核細(xì)菌霜害和害蟲的11個(gè)種的195個(gè)細(xì)菌菌株，注冊(cè)了6種控制雜草、植物病害和害蟲幼蟲的真菌。我國(guó)微生物農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展對(duì)于實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展和農(nóng)業(yè)現(xiàn)代化，以及保障人民的生命健康和保護(hù)生態(tài)環(huán)境都十分重要。因此，有必要加快微生物農(nóng)藥的研制、產(chǎn)業(yè)化和推廣應(yīng)用進(jìn)程，實(shí)現(xiàn)農(nóng)作物重大病蟲害

40、可持續(xù)控制，減少農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留及對(duì)生態(tài)環(huán)境的污染，促進(jìn)生態(tài)農(nóng)業(yè)的發(fā)展。用作肥料的活菌制劑由于長(zhǎng)期使用化學(xué)肥料而在環(huán)保等方面產(chǎn)生了一系列問題，促使人們給予生物肥料（尤其是微生物肥料）更多的關(guān)注，微生物肥料在減少化學(xué)肥料使用量、控制有機(jī)廢棄物污染、改善生態(tài)環(huán)境、提高農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)等方面均能發(fā)揮重要作用。微生物肥料的研究始于19世紀(jì)80年代根瘤菌固氮功能的發(fā)現(xiàn)，1888年荷蘭學(xué)者M(jìn)artinus Beijerinck首先獲得了根瘤菌的純培養(yǎng)51，1889年波蘭人Prazmowski用根瘤菌純培養(yǎng)接種豆科植物形成了根瘤，1895年Nobbe和Hiltner成功開發(fā)了純培養(yǎng)的根瘤菌制劑“Nitragin”產(chǎn)

41、品，標(biāo)志了微生物肥料走出實(shí)驗(yàn)室進(jìn)入商業(yè)化應(yīng)用52。1937年Azotobacter接種劑 “Azotogen”在蘇聯(lián)推廣應(yīng)用，據(jù)報(bào)道能顯著提高作物的產(chǎn)量，從此產(chǎn)生了自生固氮菌肥料。此后蘇聯(lián)又推出了具有解磷活性的巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium var.phosphaticum）活菌制劑，其能夠提高土壤磷的有效性，從此開始了磷細(xì)菌和鉀細(xì)菌肥料的廣泛研究與應(yīng)用。Dobereiner實(shí)驗(yàn)室在研究應(yīng)用巴西固氮螺菌（Azospirillum brasilense）的基礎(chǔ)上，于1976年提出了聯(lián)合共生固氮的概念，并將多種聯(lián)合固氮菌作為肥料用于作物生產(chǎn)53。截止目前已有大量的肥料菌劑在不

42、同的國(guó)家登記應(yīng)用，其相關(guān)研究和生產(chǎn)應(yīng)用也在不斷深入，Wilson等人統(tǒng)計(jì)報(bào)道，僅1992年全球就有約300項(xiàng)研究是關(guān)于微生物肥料在土壤和作物上的應(yīng)用。目前，微生物肥料的開發(fā)研究主要集中在以下幾個(gè)方面：固氮機(jī)理分子水平的研究，以提高微生物的固氮水平；以分子生物學(xué)技術(shù)改造共生細(xì)菌，提高其生存能力，最終可促進(jìn)根瘤的形成；探索微生物肥料中不同菌株之間的相互關(guān)系，以獲得最佳的菌株配伍；完善微生物肥料的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)，加強(qiáng)對(duì)微生物肥料的質(zhì)量監(jiān)督和管理。我國(guó)的微生物肥料研究開發(fā)水平總體比較落后，其開發(fā)的成品多是模仿國(guó)外產(chǎn)品，或利用已商業(yè)化的菌種復(fù)配而成，但近年來(lái)在新菌種篩選、菌劑復(fù)配及應(yīng)用效果評(píng)價(jià)等方面開展了較多

43、研究，也取得了一定的成果。有研究人員計(jì)算，若使我國(guó)微生物肥料的使用量占到化肥使用量的3%，則糧食產(chǎn)量可增加50億千克以上（目前我國(guó)微生物肥料的用量約300多萬(wàn)噸，不足化肥量的0.5%）；若中國(guó)種植的800萬(wàn)公頃大豆能采用根瘤菌接種固氮技術(shù)，則每年可以節(jié)省5000萬(wàn)美元以上的肥料投入。另外，由于大量施用化肥所帶來(lái)的土壤退化、水污染等一系列負(fù)面影響，也為微生物肥料的應(yīng)用與發(fā)展帶來(lái)了機(jī)遇。其它農(nóng)用活菌制劑獸藥用活菌制劑最初多是從人用微生態(tài)活菌制劑中引入，或直接使用，或經(jīng)改良后使用，主要用于預(yù)防和治療腹瀉、腸炎、消化不良等消化道疾病。目前最常見的是使用蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌等菌種的活菌制劑治療畜禽的消化道疾病以及水產(chǎn)養(yǎng)殖上的感染性疾病。例如，康白等人分離的蠟樣芽孢桿菌(DM423)的活菌制劑促菌生，獸醫(yī)上用來(lái)對(duì)畜禽的腸炎腹瀉等疾病進(jìn)行治療，獲得了滿意的療效54。王平等報(bào)道，在仔豬出生時(shí)即投喂乳酸桿菌TPY-211口服液，對(duì)防治7日齡內(nèi)仔豬腹瀉有明顯效果55。薛俊龍等證實(shí)市售禽用“益生素”（主要益生菌為嗜酸乳桿菌、糞鏈球菌、酵母菌、枯草芽孢桿菌等）能有效避免雛雞感染雞白痢沙門氏桿菌，顯著提高雛雞成活率56；Kozasa于1986年首次將活菌制劑應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域的疾病防治，利用東洋芽孢桿菌(Bacillus toy