小鼠胚胎操作

1、小小鼠鼠胚胚胎胎操操作作蘇鼠發(fā)育須知的數(shù)據(jù)小鼠發(fā)育須知的數(shù)據(jù) 實驗室用的一些歐洲家養(yǎng)小鼠的一些重要的統(tǒng)計數(shù)據(jù)實驗室用的一些歐洲家養(yǎng)小鼠的一些重要的統(tǒng)計數(shù)據(jù)妊娠時間1920d斷奶時間3周性成熟時間約6周大約的體重出生時：1g 斷奶時：812g 成熟時：3040g（雄性雌性）實驗室的壽命1.52.5年平均的窩仔數(shù)約68每個繁殖雌鼠所產(chǎn)的窩仔數(shù)48第一章第一章 小鼠發(fā)育概要小鼠發(fā)育概要1-細胞合子桑葚胚416細胞2-細胞胚胎桑葚胚胚泡01dpc1dpc2dpc3dpc4dpc4.5dpc5dpc6dpc孵化胚胎，無透明帶前原條期植入胚胎原始外胚層中形成前羊膜腔形成形態(tài)明顯的

2、胚胎軸晚原條期早-中原條期17體節(jié)812體節(jié)，胚胎旋轉(zhuǎn)2129體節(jié)1320體節(jié)3034體節(jié)；后肢芽在第2328體節(jié)段出現(xiàn)7dpc7.5dpc9.5dpc8.5dpc8dpc10dpc9dpc6.5dpc910mm，毛基1214mm1112mm1417mm3539體節(jié)，尾基67mm，前肢板4044體節(jié)79mm，后肢板11.5dpc11.0dpc12dpc13dpc16dpc15dpc14dpc10.5dpc1720mm2327mm19.522.5mm18dpc19dpc17dpc第一節(jié)第一節(jié) 生殖細胞系的起源生殖細胞系的起源 PGC起源于臨近前原條期胚胎表胚層區(qū)域1在在7.0dpc可以在原腸期的

3、后羊膜褶區(qū)域檢測到可以在原腸期的后羊膜褶區(qū)域檢測到PGC 在在10.5dpc-11.5dpc，PGC到達生殖嵴到達生殖嵴 13.0dpc，每個生殖嵴原基中約有，每個生殖嵴原基中約有25000個個PGC 4235進入生殖嵴后，進入生殖嵴后，PGC繼續(xù)發(fā)育，最終形成精子和卵子繼續(xù)發(fā)育，最終形成精子和卵子PGCPGC的大致遷移路徑的大致遷移路徑尿囊基部后腸上皮羊膜褶表胚層起源7.0dpc接下來8.0dpc8.0dpc11.0dpc11.0dpc生殖嵴睪丸卵巢12.5dpc雄性雌性第二節(jié)第二節(jié) 精子發(fā)生精子發(fā)生1.精子發(fā)生的特點精子發(fā)生的特點 (1) 精子發(fā)生是連續(xù)同步和空間有序分化的精子發(fā)生是連續(xù)同

4、步和空間有序分化的 (2) 精子發(fā)生依賴干細胞群體，這種干細胞群體精子發(fā)生依賴干細胞群體，這種干細胞群體 具有自我更新和產(chǎn)生后代為精子的能力具有自我更新和產(chǎn)生后代為精子的能力 (3) Y染色體在精子發(fā)生過程中，對性別決定起染色體在精子發(fā)生過程中，對性別決定起著著 十分重要的作用十分重要的作用2 2.精子發(fā)生的過程精子發(fā)生的過程第三節(jié)第三節(jié) 卵子發(fā)生卵子發(fā)生1.卵子發(fā)生的特點卵子發(fā)生的特點 (1) 在第一次減數(shù)分裂前，卵母細胞會在雙線在第一次減數(shù)分裂前，卵母細胞會在雙線期停滯很長時間期停滯很長時間 (2)11.5dpc11.5dpc的卵母細胞中，只有一條染色體是的卵母細胞中，只有一條染色體是有活

5、性的，但是到了有活性的，但是到了12.5dpc12.5dpc，兩條都變得活躍，兩條都變得活躍 (3)卵母細胞的基因組去甲基化程度高卵母細胞的基因組去甲基化程度高2.2.卵子發(fā)生的過程卵子發(fā)生的過程第四節(jié)第四節(jié) 排卵排卵1.1.排卵的過程排卵的過程 少數(shù)卵泡在少數(shù)卵泡在FSHFSH的刺激下，積累液體，體積膨脹，向卵巢外的刺激下，積累液體，體積膨脹，向卵巢外周移動，為卵母細胞最后的成熟和排放做好準備周移動，為卵母細胞最后的成熟和排放做好準備 卵母細胞在卵母細胞在LHLH的刺激下，發(fā)生核的成熟，即：細胞核失去的刺激下，發(fā)生核的成熟，即：細胞核失去核膜，染色體組裝在紡錘體中核膜，染色體組裝在紡錘體中

6、，向細胞外周移動，完成第，向細胞外周移動，完成第一次減數(shù)分裂一次減數(shù)分裂. . 第一次減數(shù)分裂后的阻滯時期，卵母細胞最終從卵泡中第一次減數(shù)分裂后的阻滯時期，卵母細胞最終從卵泡中排放出來，知道受精以后，才能刺激第二次減數(shù)分裂排放出來，知道受精以后，才能刺激第二次減數(shù)分裂即將排除的卵子即將排除的卵子第五節(jié)第五節(jié) 受精受精1.1.精子的獲能：精子進入輸卵管壺腹部以后，經(jīng)過精子的獲能：精子進入輸卵管壺腹部以后，經(jīng)過一段時間的成熟，獲得了受精的能力。精子獲能一段時間的成熟，獲得了受精的能力。精子獲能后將穿透卵丘團和透明帶，達到卵母細胞表面后將穿透卵丘團和透明帶，達到卵母細胞表面2.2.頂體反應(yīng)：頂體是覆

7、蓋于精子頭部細胞核前方、頂體反應(yīng)：頂體是覆蓋于精子頭部細胞核前方、介于核與質(zhì)膜間的囊狀細胞器。頂體與精子頭部介于核與質(zhì)膜間的囊狀細胞器。頂體與精子頭部質(zhì)膜融合，釋放出各種水解酶，稱之為頂體反應(yīng)質(zhì)膜融合，釋放出各種水解酶，稱之為頂體反應(yīng)3.3.受精：精子頭后區(qū)與卵母細胞膜的融合促進了一受精：精子頭后區(qū)與卵母細胞膜的融合促進了一系列反映的級聯(lián)發(fā)生，稱之為受精系列反映的級聯(lián)發(fā)生，稱之為受精4.4.透明帶反映：受精后，卵母細胞表面發(fā)生阻止后透明帶反映：受精后，卵母細胞表面發(fā)生阻止后來精子入卵的變化，這有助于阻止多精受精的發(fā)來精子入卵的變化，這有助于阻止多精受精的發(fā)生生第六節(jié)第六節(jié) 胚胎的早期發(fā)育胚胎的

8、早期發(fā)育1.卵裂：卵子受精后形成受精卵，受精卵發(fā)生核膜卵裂：卵子受精后形成受精卵，受精卵發(fā)生核膜解解 體，染色體重組等變化后，開始發(fā)生卵裂。體，染色體重組等變化后，開始發(fā)生卵裂。卵裂所產(chǎn)生的細胞稱為卵裂球，每個卵裂秋都具卵裂所產(chǎn)生的細胞稱為卵裂球，每個卵裂秋都具有全能性有全能性2.桑葚胚：桑葚胚：3次卵裂后的胚胎，各卵裂球相互靠近，次卵裂后的胚胎，各卵裂球相互靠近，形成一個緊密的細胞球，這樣的細胞球稱為桑葚形成一個緊密的細胞球，這樣的細胞球稱為桑葚胚。桑葚胚內(nèi)部的細胞與外界環(huán)境隔開，可以起胚。桑葚胚內(nèi)部的細胞與外界環(huán)境隔開，可以起到穩(wěn)定細胞球的作用到穩(wěn)定細胞球的作用3.囊胚的形成：桑葚胚形成后

9、，卵裂球分泌的液體囊胚的形成：桑葚胚形成后，卵裂球分泌的液體聚集在細胞間隙，最后在胚胎的中央形成一個充聚集在細胞間隙，最后在胚胎的中央形成一個充滿液體的腔，這個腔稱為囊胚腔。隨著囊胚腔的滿液體的腔，這個腔稱為囊胚腔。隨著囊胚腔的擴張，細胞的分化逐漸明顯：小而分裂活躍的細擴張，細胞的分化逐漸明顯：小而分裂活躍的細胞聚集在外周，形成胚胎外層，繼而成為滋養(yǎng)層胞聚集在外周，形成胚胎外層，繼而成為滋養(yǎng)層；大而分裂慢的細胞聚集在內(nèi)側(cè)，稱為內(nèi)細胞團；大而分裂慢的細胞聚集在內(nèi)側(cè)，稱為內(nèi)細胞團。此時的胚胎稱為囊胚。此時的胚胎稱為囊胚囊胚桑葚胚卵裂球8細胞期以后胚胎的早期發(fā)育卵裂開始16細胞期以后滋養(yǎng)外胚層內(nèi)細胞

10、團外側(cè)內(nèi)側(cè)第七節(jié)第七節(jié) 胚胎植入子宮胚胎植入子宮1.1.在在5.0dpc5.0dpc時，滋養(yǎng)層細胞合成的蛋白酶消化透明時，滋養(yǎng)層細胞合成的蛋白酶消化透明帶，使胚泡從透明帶中孵化出來，為附植做好準帶，使胚泡從透明帶中孵化出來，為附植做好準備備2.2.在胚胎植入時，子宮壁緊密閉合，使子宮腔密閉在胚胎植入時，子宮壁緊密閉合，使子宮腔密閉，子宮上皮表面也發(fā)生變化，使之接受胚泡的附，子宮上皮表面也發(fā)生變化，使之接受胚泡的附植。胚泡通過胚胎對側(cè)極附著到子宮系膜對側(cè)的植。胚泡通過胚胎對側(cè)極附著到子宮系膜對側(cè)的子宮壁上。胚泡植入子宮大致的分布受到子宮蠕子宮壁上。胚泡植入子宮大致的分布受到子宮蠕動的影響動的影響

11、第八節(jié)第八節(jié) 滋養(yǎng)外胚層及其衍生物滋養(yǎng)外胚層及其衍生物1.滋養(yǎng)外胚層：胚胎在植入子宮后，滋養(yǎng)外胚層不滋養(yǎng)外胚層：胚胎在植入子宮后，滋養(yǎng)外胚層不再維持單層上皮狀態(tài)，而是在形態(tài)學(xué)和生長潛能再維持單層上皮狀態(tài)，而是在形態(tài)學(xué)和生長潛能上發(fā)生區(qū)域性的分化上發(fā)生區(qū)域性的分化2.壁滋養(yǎng)外胚層：起源于圍繞胚泡腔的細胞，這些壁滋養(yǎng)外胚層：起源于圍繞胚泡腔的細胞，這些細胞停止分裂，體積變大，形成含有細胞停止分裂，體積變大，形成含有1000倍于單倍于單倍體倍體DNA的多線染色體，他們也被稱為初級滋養(yǎng)的多線染色體，他們也被稱為初級滋養(yǎng)層巨細胞層巨細胞3.極滋養(yǎng)外胚層：胚胎植入子宮后，極滋養(yǎng)外層向極滋養(yǎng)外胚層：胚胎植入

12、子宮后，極滋養(yǎng)外層向著多個方向擴展著多個方向擴展首先，一些細胞圍繞胚胎遷移，取代初級壁滋養(yǎng)層巨細胞，并且它們也成為多倍體然后，極滋養(yǎng)外胚層形成一個指狀突起，穿入胚泡腔，形成原腸期以前的胚外外胚層，并把ICM衍生物推向它的前方，這個突起發(fā)育成中心腔并形成上皮。胚外中胚層形成以后，胚外外胚層向胎盤退縮，在那里形成絨毛膜最后，一些滋養(yǎng)外胚層細胞繼續(xù)穿入子宮內(nèi)膜，形成胎盤的主體，一些胎盤細胞和絨毛膜細胞也變?yōu)槎啾扼w極滋養(yǎng)外胚層原始內(nèi)胚層壁滋養(yǎng)外胚層4.5dpc時的胚胎第九節(jié)第九節(jié) 原始內(nèi)胚層和外胚層的分化原始內(nèi)胚層和外胚層的分化1.原始內(nèi)胚層首先出現(xiàn)在無極性的內(nèi)細胞團表面，原始內(nèi)胚層首先出現(xiàn)在無極性的

13、內(nèi)細胞團表面，而剩下的內(nèi)細胞團核心細胞形成原始外胚層細胞而剩下的內(nèi)細胞團核心細胞形成原始外胚層細胞2.原始內(nèi)胚層細胞并不形成胚胎的內(nèi)胚層組織，而原始內(nèi)胚層細胞并不形成胚胎的內(nèi)胚層組織，而是只形成卵黃囊的胚外側(cè)壁內(nèi)胚層和臟內(nèi)胚層是只形成卵黃囊的胚外側(cè)壁內(nèi)胚層和臟內(nèi)胚層3原始外胚層細胞系形成胚胎的外胚層，中胚層，內(nèi)原始外胚層細胞系形成胚胎的外胚層，中胚層，內(nèi)胚層組織，生殖細胞以及胚外膜和胚胎的中胚層胚層組織，生殖細胞以及胚外膜和胚胎的中胚層成分成分內(nèi)細胞團內(nèi)胚層外胚層臟內(nèi)胚層壁內(nèi)胚層原始外胚層原始內(nèi)胚層中胚層卵黃囊胚外側(cè)胚胎第十節(jié)第十節(jié) 表胚層表胚層1.在胚胎植入時，胚泡由三種組織細胞系組成，即在

14、胚胎植入時，胚泡由三種組織細胞系組成，即滋養(yǎng)外胚層、原始內(nèi)胚層和表胚層。表胚層細胞滋養(yǎng)外胚層、原始內(nèi)胚層和表胚層。表胚層細胞最少，位于極滋養(yǎng)外胚層和原始內(nèi)胚層之間最少，位于極滋養(yǎng)外胚層和原始內(nèi)胚層之間2.胚胎植入后不久，表胚層細胞組織成一單層上皮胚胎植入后不久，表胚層細胞組織成一單層上皮，圍繞著其中心一個小的空腔，圍繞著其中心一個小的空腔前羊膜腔前羊膜腔3.表胚層是多發(fā)育潛能的組織，實驗表明，表胚層表胚層是多發(fā)育潛能的組織，實驗表明，表胚層是未來胎兒組織的唯一來源，包括體細胞組織，是未來胎兒組織的唯一來源，包括體細胞組織，也包括生殖細胞系也包括生殖細胞系第十一節(jié)原腸作用：中胚層和終末第十一節(jié)原

15、腸作用：中胚層和終末內(nèi)胚層的形成內(nèi)胚層的形成1.原腸作用：指囊胚細胞有規(guī)則的移動，使未來的原腸作用：指囊胚細胞有規(guī)則的移動，使未來的內(nèi)胚層和中胚層細胞遷入胚胎內(nèi)部，而未來的外內(nèi)胚層和中胚層細胞遷入胚胎內(nèi)部，而未來的外胚層細胞鋪展在胚胎的表面，從而形成原腸胚。胚層細胞鋪展在胚胎的表面，從而形成原腸胚。其結(jié)果是產(chǎn)生了三個胚層其結(jié)果是產(chǎn)生了三個胚層外胚層、內(nèi)胚層、外胚層、內(nèi)胚層、中胚層中胚層的分化，作為進一步分化的基礎(chǔ)的分化，作為進一步分化的基礎(chǔ)2.原條：從后端緣區(qū)向前伸展的條帶，是由表胚層原條：從后端緣區(qū)向前伸展的條帶，是由表胚層細胞向囊胚腔下陷造成的，引導(dǎo)表胚層細胞的遷細胞向囊胚腔下陷造成的，引

16、導(dǎo)表胚層細胞的遷移，形成中胚層組織和部分內(nèi)胚層組織。小鼠胚移，形成中胚層組織和部分內(nèi)胚層組織。小鼠胚胎中最早能夠識別的原始生殖細胞位于原條后端胎中最早能夠識別的原始生殖細胞位于原條后端3.原條的作用：原腸作用大約在原條的作用：原腸作用大約在6.5dpc開始，此時開始，此時原條在胚胎與胚外組織交界的表胚層區(qū)域形成，原條在胚胎與胚外組織交界的表胚層區(qū)域形成，原條的位置標(biāo)志著未來胚胎的后部原條的位置標(biāo)志著未來胚胎的后部4中胚層的形成：在原條區(qū)，表胚層細胞失去上皮的中胚層的形成：在原條區(qū)，表胚層細胞失去上皮的連續(xù)性，細胞通過運動或分層移動到表胚層和臟連續(xù)性，細胞通過運動或分層移動到表胚層和臟內(nèi)胚層之間

17、，形成一個新的胚層，即中胚層內(nèi)胚層之間，形成一個新的胚層，即中胚層5.終末內(nèi)胚層的形成：一些細胞也被內(nèi)卷到臟內(nèi)胚終末內(nèi)胚層的形成：一些細胞也被內(nèi)卷到臟內(nèi)胚層外側(cè)，形成最初的一群終末內(nèi)胚層，也稱為腸層外側(cè)，形成最初的一群終末內(nèi)胚層，也稱為腸內(nèi)胚層內(nèi)胚層6.原條的伸展：之后，中胚層細胞和終末內(nèi)胚層細原條的伸展：之后，中胚層細胞和終末內(nèi)胚層細胞會隨著原條細胞的擴展而進行移動，最終導(dǎo)致胞會隨著原條細胞的擴展而進行移動，最終導(dǎo)致胚胎前后體軸不均等形態(tài)變化胚胎前后體軸不均等形態(tài)變化7.羊膜褶的形成：擴展的中胚層細胞群推動表胚層羊膜褶的形成：擴展的中胚層細胞群推動表胚層的近端和外胚層的遠端向前羊膜腔的中部移

18、動，的近端和外胚層的遠端向前羊膜腔的中部移動，這導(dǎo)致形成了一個顯著的嵴，被稱為羊膜褶這導(dǎo)致形成了一個顯著的嵴，被稱為羊膜褶8.尿囊的形成：隨著體腔的形成，一些從原條后部尿囊的形成：隨著體腔的形成，一些從原條后部新生的胚外中胚層形成一個特殊的結(jié)構(gòu)新生的胚外中胚層形成一個特殊的結(jié)構(gòu)尿囊尿囊。尿囊在中胚層中生長，貫穿體腔并與絨毛膜融。尿囊在中胚層中生長，貫穿體腔并與絨毛膜融合。這就形成了尿囊絨毛膜胎盤的主要成分，并合。這就形成了尿囊絨毛膜胎盤的主要成分，并在在胎兒和母體之間提供了營養(yǎng)和廢物交換的直接途徑胎兒和母體之間提供了營養(yǎng)和廢物交換的直接途徑第十二節(jié)第十二節(jié) 尾芽尾芽1.在原腸作用第十天，尾芽取

19、代原條成為新組織的在原腸作用第十天，尾芽取代原條成為新組織的來源來源2.尾芽組織分裂迅速，在胚胎的后部發(fā)育形成體節(jié)尾芽組織分裂迅速，在胚胎的后部發(fā)育形成體節(jié)和側(cè)板中胚層、神經(jīng)管、脊索和原腸內(nèi)胚層和側(cè)板中胚層、神經(jīng)管、脊索和原腸內(nèi)胚層第十三節(jié)第十三節(jié) 胚胎旋轉(zhuǎn)胚胎旋轉(zhuǎn)在早體節(jié)期，小鼠胚胎呈在早體節(jié)期，小鼠胚胎呈U形，相對于羊膜腔而言，形，相對于羊膜腔而言，各個胚層在胚胎中是倒轉(zhuǎn)的。外胚層位于胚體的各個胚層在胚胎中是倒轉(zhuǎn)的。外胚層位于胚體的內(nèi)部，而內(nèi)胚層位于外部和卵黃囊腔中。胚胎旋內(nèi)部，而內(nèi)胚層位于外部和卵黃囊腔中。胚胎旋轉(zhuǎn)有效地逆轉(zhuǎn)了這種位置關(guān)系，使胚胎形成包括轉(zhuǎn)有效地逆轉(zhuǎn)了這種位置關(guān)系，使胚胎

20、形成包括動物胚胎經(jīng)典的動物胚胎經(jīng)典的C形結(jié)構(gòu)。它包括胚胎的頭、尾部形結(jié)構(gòu)。它包括胚胎的頭、尾部分別向相反的方向旋轉(zhuǎn)，也包括同時發(fā)生的胚體分別向相反的方向旋轉(zhuǎn)，也包括同時發(fā)生的胚體逆時針逆時針180旋轉(zhuǎn)。這些旋轉(zhuǎn)運動同時也代表著旋轉(zhuǎn)。這些旋轉(zhuǎn)運動同時也代表著胚胎外膜的完全發(fā)育胚胎外膜的完全發(fā)育第十四節(jié)第十四節(jié) 體節(jié)及其衍生物體節(jié)及其衍生物1.體節(jié)及其衍生物代表著脊椎動物胚胎最為明顯的體節(jié)及其衍生物代表著脊椎動物胚胎最為明顯的分節(jié)特征分節(jié)特征2.體節(jié)起源于中胚層的一條稱為前體節(jié)中胚層或體體節(jié)起源于中胚層的一條稱為前體節(jié)中胚層或體節(jié)板的結(jié)構(gòu)前體節(jié)中胚層及其衍生物被統(tǒng)稱為軸節(jié)板的結(jié)構(gòu)前體節(jié)中胚層及其衍

21、生物被統(tǒng)稱為軸旁中胚層旁中胚層3.體節(jié)的發(fā)生起始于體節(jié)的發(fā)生起始于7.75dpc，并持續(xù)到原腸作用，并持續(xù)到原腸作用的第的第14d，一共有大約，一共有大約65對體節(jié)出現(xiàn)，它們沿著對體節(jié)出現(xiàn)，它們沿著胚胎前后軸先后形成胚胎前后軸先后形成4.大部分的頭骨起源于神經(jīng)嵴，頭部軸旁中胚層的大部分的頭骨起源于神經(jīng)嵴，頭部軸旁中胚層的主要衍生物是眼睛和腮弓的肌肉組織主要衍生物是眼睛和腮弓的肌肉組織5.身體兩側(cè)的前體節(jié)中胚層周期性地同時形成一個身體兩側(cè)的前體節(jié)中胚層周期性地同時形成一個上皮圍繞的球體，從而產(chǎn)生一對新的體節(jié)。所以上皮圍繞的球體，從而產(chǎn)生一對新的體節(jié)。所以，體節(jié)區(qū)的伸長是由末端不斷添加新的體節(jié)而導(dǎo)

22、，體節(jié)區(qū)的伸長是由末端不斷添加新的體節(jié)而導(dǎo)致的致的6每個體節(jié)一旦形成以后即經(jīng)歷大致相同的成熟過程每個體節(jié)一旦形成以后即經(jīng)歷大致相同的成熟過程。上皮性結(jié)構(gòu)大約維持。上皮性結(jié)構(gòu)大約維持10h，然后位于腹側(cè)邊緣，然后位于腹側(cè)邊緣的細胞擴散開來并向脊索移動；這些細胞代表著的細胞擴散開來并向脊索移動；這些細胞代表著生骨節(jié)，即脊椎骨和肋骨的前體生骨節(jié)，即脊椎骨和肋骨的前體7.在背側(cè)，體節(jié)的上皮性組織在生皮肌節(jié)中得以維在背側(cè)，體節(jié)的上皮性組織在生皮肌節(jié)中得以維持。中間的生肌節(jié)成為將來形成背部和脊椎骨周持。中間的生肌節(jié)成為將來形成背部和脊椎骨周圍的肌肉，而側(cè)部的生肌節(jié)細胞形成體壁和四肢圍的肌肉，而側(cè)部的生肌節(jié)

23、細胞形成體壁和四肢的的肌肉的的肌肉8.生皮節(jié)將來形成軀干和尾巴皮膚的真皮部分生皮節(jié)將來形成軀干和尾巴皮膚的真皮部分第十五節(jié)第十五節(jié) 側(cè)板和間介中胚層以及它們側(cè)板和間介中胚層以及它們 的衍生物的衍生物1.體節(jié)側(cè)面的中胚層被進一步分為間介中胚層和側(cè)體節(jié)側(cè)面的中胚層被進一步分為間介中胚層和側(cè)中胚層中胚層2.側(cè)中胚層分裂為兩個部分，形成體腔。在背面，側(cè)中胚層分裂為兩個部分，形成體腔。在背面，胚體壁被外胚層覆蓋并與羊膜中胚層相連；在腹胚體壁被外胚層覆蓋并與羊膜中胚層相連；在腹面，胚胎壁與內(nèi)胚層相鄰并與卵黃囊中胚層相連面，胚胎壁與內(nèi)胚層相鄰并與卵黃囊中胚層相連3.側(cè)中胚層發(fā)育成參與內(nèi)臟和四肢結(jié)締組織發(fā)育的

24、側(cè)中胚層發(fā)育成參與內(nèi)臟和四肢結(jié)締組織發(fā)育的間充質(zhì)細胞、體腔的間皮以及腸系膜間充質(zhì)細胞、體腔的間皮以及腸系膜4.在在9.09.5的小鼠胚胎中，軀干后部和臨近尾巴的小鼠胚胎中，軀干后部和臨近尾巴的間介中胚層分化成原腎管腎原基的間介中胚層分化成原腎管腎原基5.緊接著，腎生殖嵴在軀干中部到尾中部區(qū)域出現(xiàn)緊接著，腎生殖嵴在軀干中部到尾中部區(qū)域出現(xiàn)。尿生殖嵴的側(cè)部形成中腎，而中部成分則形成。尿生殖嵴的側(cè)部形成中腎，而中部成分則形成生殖腺生殖腺6.此外，后部的中腎管形成了一個重要的分支此外，后部的中腎管形成了一個重要的分支輸尿管芽，它是誘導(dǎo)形成后腎所必需的。被誘導(dǎo)輸尿管芽，它是誘導(dǎo)形成后腎所必需的。被誘導(dǎo)形

25、成腎原基的中胚層是軀體后部的間接中胚層形成腎原基的中胚層是軀體后部的間接中胚層第十六節(jié)第十六節(jié) 四肢發(fā)生四肢發(fā)生1.組織切除和嫁接等實驗確定了肢芽中三個負責(zé)建組織切除和嫁接等實驗確定了肢芽中三個負責(zé)建立成體四肢形態(tài)特征的重要區(qū)域：頂端外胚層嵴立成體四肢形態(tài)特征的重要區(qū)域：頂端外胚層嵴、頂端外胚層下的前進區(qū)和極化活性區(qū)、頂端外胚層下的前進區(qū)和極化活性區(qū)2.肢芽是由表面外胚層包繞的側(cè)中胚層向外生長而肢芽是由表面外胚層包繞的側(cè)中胚層向外生長而產(chǎn)生的產(chǎn)生的3.前肢芽最早在大約前肢芽最早在大約9.09.5dpc出現(xiàn)在臨近第出現(xiàn)在臨近第712對體節(jié)處對體節(jié)處4.后肢芽在后肢芽在9.510.0dpc出現(xiàn)在出

26、現(xiàn)在2328對體節(jié)處對體節(jié)處出現(xiàn)出現(xiàn)第十七節(jié)第十七節(jié) 神經(jīng)化：神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)生神經(jīng)化：神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)生1.腦和脊髓起源于外胚層原條前部增厚的一條細胞腦和脊髓起源于外胚層原條前部增厚的一條細胞，即神經(jīng)板，它最早在，即神經(jīng)板，它最早在7.5dpc的小鼠胚胎中出現(xiàn)的小鼠胚胎中出現(xiàn)，并且伸長分化成為神經(jīng)外胚層，并且伸長分化成為神經(jīng)外胚層2.神經(jīng)板形成以后，其形態(tài)隨之發(fā)生劇烈的變化，神經(jīng)板形成以后，其形態(tài)隨之發(fā)生劇烈的變化，它的兩側(cè)邊緣逐漸升高，形成神經(jīng)褶它的兩側(cè)邊緣逐漸升高，形成神經(jīng)褶3.神經(jīng)褶的兩側(cè)邊緣上卷并相互接觸，最終融合形神經(jīng)褶的兩側(cè)邊緣上卷并相互接觸，最終融合形成神經(jīng)管成神經(jīng)管第十八節(jié)第十八節(jié)

27、神經(jīng)嵴神經(jīng)嵴1.神經(jīng)嵴是起源于神經(jīng)管背側(cè)、神經(jīng)上皮和表皮外神經(jīng)嵴是起源于神經(jīng)管背側(cè)、神經(jīng)上皮和表皮外胚層連接部的一個臨時細胞群體。神經(jīng)嵴細胞以胚層連接部的一個臨時細胞群體。神經(jīng)嵴細胞以單細胞形式進行廣泛的遷移，從神經(jīng)管遷移到背單細胞形式進行廣泛的遷移，從神經(jīng)管遷移到背部和腹部的很多部位，并同時分化為多種細胞類部和腹部的很多部位，并同時分化為多種細胞類型型2.它們的衍生物包括腎上腺髓質(zhì)細胞、骨和軟骨、它們的衍生物包括腎上腺髓質(zhì)細胞、骨和軟骨、黑色素細胞、神經(jīng)膠質(zhì)細胞和雪旺細胞，以及不黑色素細胞、神經(jīng)膠質(zhì)細胞和雪旺細胞，以及不同類型的神經(jīng)元同類型的神經(jīng)元第十九節(jié)第十九節(jié) 腮弓和咽區(qū)的發(fā)生腮弓和咽區(qū)

28、的發(fā)生1.從從8.0dpc開始，六對咽弓在胚胎咽區(qū)以頭尾順序開始，六對咽弓在胚胎咽區(qū)以頭尾順序依次發(fā)生，它們組成了頭頸部的主要構(gòu)造元件。依次發(fā)生，它們組成了頭頸部的主要構(gòu)造元件。每一個咽弓都是由外胚層覆蓋的間充質(zhì)條帶，它每一個咽弓都是由外胚層覆蓋的間充質(zhì)條帶，它們以弧形圍繞著未來的口腔側(cè)面和底面?zhèn)円曰⌒螄@著未來的口腔側(cè)面和底面2.最前端的以對腮弓最早形成，并且在遠端分叉，最前端的以對腮弓最早形成，并且在遠端分叉，分別形成上頜骨和下頜骨的原基。上頜骨和下頜分別形成上頜骨和下頜骨的原基。上頜骨和下頜骨的原基在骨的原基在11dpc分離，分別形成上頜和下頜分離，分別形成上頜和下頜3.第二對腮弓的生長

29、超過第三對和第四對腮弓，是第二對腮弓的生長超過第三對和第四對腮弓，是頸部的主要構(gòu)成成分頸部的主要構(gòu)成成分第二十節(jié)第二十節(jié) 腸的發(fā)育腸的發(fā)育1.胚胎的腸來自于表胚層，大多數(shù)的表胚層細胞通胚胎的腸來自于表胚層，大多數(shù)的表胚層細胞通過原條前部參與形成腸原基過原條前部參與形成腸原基2.在腸成為一個與其他組織分離的管道以前，終末在腸成為一個與其他組織分離的管道以前，終末內(nèi)胚層的兩側(cè)邊緣是與腹部的卵黃囊內(nèi)胚層向連內(nèi)胚層的兩側(cè)邊緣是與腹部的卵黃囊內(nèi)胚層向連續(xù)的，而且脊索插入在腸的頂壁之內(nèi)續(xù)的，而且脊索插入在腸的頂壁之內(nèi)3.然后，脊索與內(nèi)胚層分離開來，形成一個獨立的然后，脊索與內(nèi)胚層分離開來，形成一個獨立的器

30、官。在前方，腸管在咽部的盲端與外胚層形成器官。在前方，腸管在咽部的盲端與外胚層形成的原始口腔想接觸。由外胚層和內(nèi)胚層共同形成的原始口腔想接觸。由外胚層和內(nèi)胚層共同形成的膜在的膜在9.0dpc由于細胞死亡和細胞重新組織而破由于細胞死亡和細胞重新組織而破裂，從而使腸管開口于羊膜腔中裂，從而使腸管開口于羊膜腔中4.隨后，在同樣的時間后腸發(fā)生，并形成泄殖腔膜隨后，在同樣的時間后腸發(fā)生，并形成泄殖腔膜。泄殖腔膜后來破裂形成肛門開口。泄殖腔膜后來破裂形成肛門開口。第二十一節(jié)第二十一節(jié) 胚外組織胚外組織1.各種胚外組織形成一個統(tǒng)一的生命支持系統(tǒng)，在各種胚外組織形成一個統(tǒng)一的生命支持系統(tǒng)，在子宮中維持、營養(yǎng)并

31、保護胚胎子宮中維持、營養(yǎng)并保護胚胎2.這些胚外組織形成胎盤、壁卵黃囊、臟卵黃囊以這些胚外組織形成胎盤、壁卵黃囊、臟卵黃囊以及羊膜及羊膜3.胚外組織中合成蛋白質(zhì)的速率很高，用以執(zhí)行某胚外組織中合成蛋白質(zhì)的速率很高，用以執(zhí)行某些特定功能，包括：胎兒血清蛋白、臟內(nèi)胚層的些特定功能，包括：胎兒血清蛋白、臟內(nèi)胚層的載脂蛋白、細胞外基質(zhì)糖蛋白等載脂蛋白、細胞外基質(zhì)糖蛋白等第二十二節(jié)第二十二節(jié) 胎盤的結(jié)構(gòu)與功能胎盤的結(jié)構(gòu)與功能1.滋養(yǎng)層滋養(yǎng)層:分為海綿狀滋養(yǎng)層和合體滋養(yǎng)層。海綿狀分為海綿狀滋養(yǎng)層和合體滋養(yǎng)層。海綿狀滋養(yǎng)層中許多細胞是二倍體，而合體滋養(yǎng)層中大滋養(yǎng)層中許多細胞是二倍體，而合體滋養(yǎng)層中大多數(shù)細胞是

32、多倍體。兩層中都具有包含母體血細多數(shù)細胞是多倍體。兩層中都具有包含母體血細胞的血竇胞的血竇2.中胚層：在尿囊與絨毛膜融合以后，中胚層形成中胚層：在尿囊與絨毛膜融合以后，中胚層形成胚胎的血管。毛細血管與滋養(yǎng)層細胞交互盤繞在胚胎的血管。毛細血管與滋養(yǎng)層細胞交互盤繞在一起，從母體血竇中獲得營養(yǎng)一起，從母體血竇中獲得營養(yǎng)3.臟內(nèi)胚層和壁內(nèi)胚層：胎盤的裂隙中既有臟內(nèi)層臟內(nèi)胚層和壁內(nèi)胚層：胎盤的裂隙中既有臟內(nèi)層也有壁內(nèi)胚層，臟內(nèi)胚層合成甲胎蛋白，壁內(nèi)胚也有壁內(nèi)胚層，臟內(nèi)胚層合成甲胎蛋白，壁內(nèi)胚層形成基膜層形成基膜第二章第二章 轉(zhuǎn)基因小鼠和嵌合體小鼠的生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因小鼠和嵌合體小鼠的生產(chǎn)緒論：要成功和高效的生產(chǎn)

33、基因工程小鼠，就必須緒論：要成功和高效的生產(chǎn)基因工程小鼠，就必須能夠獲得大量的著床前胚胎和大量的假孕受體。能夠獲得大量的著床前胚胎和大量的假孕受體。此外，還必須確保動物健康和實施合理的育種計此外，還必須確保動物健康和實施合理的育種計劃。本章所描述的內(nèi)容適用于轉(zhuǎn)基因和基因打靶劃。本章所描述的內(nèi)容適用于轉(zhuǎn)基因和基因打靶實驗的鼠群，要求畜舍具備能夠控制通風(fēng)、濕度實驗的鼠群，要求畜舍具備能夠控制通風(fēng)、濕度、溫度、光照的設(shè)施，具備能夠進行籠具洗刷、溫度、光照的設(shè)施，具備能夠進行籠具洗刷、飼料儲存、充足供水和獸醫(yī)服務(wù)等條件?？筛鶕?jù)飼料儲存、充足供水和獸醫(yī)服務(wù)等條件?？筛鶕?jù)實驗者的實驗需要，對我們所敘述的小

34、鼠品系、實驗者的實驗需要，對我們所敘述的小鼠品系、年齡和數(shù)量進行調(diào)整。年齡和數(shù)量進行調(diào)整。第一節(jié)第一節(jié) 實驗鼠群的病原控制實驗鼠群的病原控制1.實驗鼠群一般都應(yīng)該飼養(yǎng)在無特定病原體（實驗鼠群一般都應(yīng)該飼養(yǎng)在無特定病原體（SPF）的環(huán)境中）的環(huán)境中2.越來越多的動物舍被建成越來越多的動物舍被建成SPF舍并實行封閉管理舍并實行封閉管理。一般在動物舍，所有人員在入舍前都必須先經(jīng)。一般在動物舍，所有人員在入舍前都必須先經(jīng)過淋浴和換上無菌的裝備，所有進入的物品都必過淋浴和換上無菌的裝備，所有進入的物品都必須經(jīng)過高壓或其他方法滅菌，筆記本和其他個人須經(jīng)過高壓或其他方法滅菌，筆記本和其他個人物品一般不允許帶

35、入舍內(nèi)物品一般不允許帶入舍內(nèi)3.所有用于轉(zhuǎn)基因動物的小鼠都要在規(guī)定的封閉區(qū)所有用于轉(zhuǎn)基因動物的小鼠都要在規(guī)定的封閉區(qū)內(nèi)配種，所有實驗操作都必須在舍內(nèi)進行。在檢內(nèi)配種，所有實驗操作都必須在舍內(nèi)進行。在檢疫后，斷奶的幼鼠才能進入封閉區(qū)疫后，斷奶的幼鼠才能進入封閉區(qū)4.有三種方法可以解決胚胎在體外操作后又移植到有三種方法可以解決胚胎在體外操作后又移植到SPF培養(yǎng)母體內(nèi)的實驗室和清潔問題培養(yǎng)母體內(nèi)的實驗室和清潔問題2.為方便對外面引進，胚胎供體可位于封閉之外，受體在封閉區(qū)內(nèi)配種，收集的胚胎在洗凈后進入封閉區(qū)內(nèi)進行操作3.實驗室位于封閉區(qū)之外，操作后的胚胎通過胚胎移植而進入封閉區(qū)1.把實驗室設(shè)置在封閉管

36、理的動物舍內(nèi)，設(shè)備、人員等都在經(jīng)過凈化后才能進入封閉區(qū)內(nèi)。胚胎供體和受體都在封閉區(qū)內(nèi)進行配種5.關(guān)于關(guān)于SPF和非和非SPF鼠群應(yīng)該考慮的重要問題包括鼠群應(yīng)該考慮的重要問題包括一下一下5個方面?zhèn)€方面1.飼養(yǎng)管理與存活率：SPF的小鼠更健康，存活時間更久2.實驗結(jié)果：特別是關(guān)于免疫系統(tǒng)的實驗，即使小鼠表面上看是健康的，病毒等感染也會影響實驗結(jié)果3.方便性：在SPF鼠群，接觸小鼠往往程序繁瑣且費時，必須要有周密的安排活動時間表4.費用：在封閉的條件下對小鼠要求更精細的管理步驟，因而需要更多的勞動和額外的設(shè)備5.小鼠品系的運輸：從其他研究單位獲得的小鼠品系可能攜帶病原體，因而必須通過胚胎移植或者剖腹

37、產(chǎn)重生，才能進入SPF舍第二節(jié)第二節(jié) 提供供體和（或）受體小鼠的提供供體和（或）受體小鼠的育種群育種群1.為提供供體小鼠和受體小鼠，應(yīng)準備若干個配種為提供供體小鼠和受體小鼠，應(yīng)準備若干個配種鼠籠，每只籠內(nèi)放公鼠和母鼠各一只。幼鼠出生鼠籠，每只籠內(nèi)放公鼠和母鼠各一只。幼鼠出生后后3周齡時斷奶并把公母分開周齡時斷奶并把公母分開2要想盡可能多地生產(chǎn)小鼠，幼鼠應(yīng)該在下一窩小鼠要想盡可能多地生產(chǎn)小鼠，幼鼠應(yīng)該在下一窩小鼠出生之前斷奶，以防年齡大的踐踏年齡小的和不出生之前斷奶，以防年齡大的踐踏年齡小的和不讓它們吃奶。一個有讓它們吃奶。一個有4050對公母鼠的育種群，對公母鼠的育種群，依品系不同，每周應(yīng)該生

38、產(chǎn)依品系不同，每周應(yīng)該生產(chǎn)2030只母鼠只母鼠3.為增加每籠產(chǎn)雌性幼鼠的數(shù)量，一個籠內(nèi)可放置為增加每籠產(chǎn)雌性幼鼠的數(shù)量，一個籠內(nèi)可放置2只母鼠，一只公鼠只母鼠，一只公鼠第三節(jié)第三節(jié) 自然交配的安排自然交配的安排1.獲得用于顯微鏡操作或者其他實驗的著床前胚胎獲得用于顯微鏡操作或者其他實驗的著床前胚胎的方法之一是通過自然交配，即排卵和受精的時的方法之一是通過自然交配，即排卵和受精的時間完全由環(huán)境條件控制間完全由環(huán)境條件控制2.在恒大的光照在恒大的光照黑暗周期下飼養(yǎng)的磁鼠一般黑暗周期下飼養(yǎng)的磁鼠一般45d排卵一次，時間是黑暗開始后排卵一次，時間是黑暗開始后35h。3.小鼠的發(fā)情周期分為小鼠的發(fā)情周期分為4個階段個階段:發(fā)情前期（卵泡發(fā)發(fā)情前期（卵泡發(fā)育）、發(fā)情期（排卵）、發(fā)情后期（黃體形成）育）、發(fā)情期（排卵）、發(fā)情后期（黃體形成）、發(fā)情間期（下次排卵的卵泡開始發(fā)育，清楚上、發(fā)情間期（下次排卵的卵泡開始發(fā)育，清楚上一次的卵泡細胞）一次的卵泡細胞）4.在同樣條件下飼養(yǎng)的雄鼠將于黑暗的中點前后與在同樣條件下飼養(yǎng)的雄鼠將于黑暗的中點前后與發(fā)情發(fā)情(排卵排卵)雌鼠交配。這意味著受精在排卵后雌鼠交配。這意味著受精在排卵后12h發(fā)生發(fā)生第三章第三章 外科手術(shù)方法外科手術(shù)方法緒論：本章所介紹的外科手術(shù)方法是進行轉(zhuǎn)基因和緒論：本章所介紹的外科手術(shù)方法是進行轉(zhuǎn)