實(shí)驗(yàn)測(cè)定指標(biāo)及儀器

1、1總糖的測(cè)定(手持糖量?jī)xGB/T 12295-1990)采用GB T6194 1986 斐林試劑法測(cè)定總糖含量。1）試劑菲林試劑甲液：稱取69.3g硫酸銅晶體，用蒸餾水溶解，定容至1000ml菲林試劑乙液：稱取346g酒石酸鉀鈉，100g氫氧化鈉，用蒸餾水溶解定容至1000ml次甲基藍(lán)溶液：1g次甲基藍(lán)溶于100ml水葡萄糖6mol/L鹽酸溶液。甲基紅指示劑：0.1%（體積分?jǐn)?shù)）乙醇溶液。稱取0.1g甲基紅溶于100ml 60%（體積分?jǐn)?shù)）乙醇中。200g/L（體積分?jǐn)?shù)）氫氧化鈉溶液2）儀器水浴鍋，pH計(jì)2 測(cè)定原理在沸熱條件下，用還原糖溶液滴定一定量的費(fèi)林試劑時(shí)將費(fèi)林試劑中的二價(jià)銅還原為一價(jià)

2、銅，以亞甲基藍(lán)為指示劑，稍過(guò)量的還原糖立即使藍(lán)色的氧化型亞甲基藍(lán)還原為無(wú)色的還原型亞甲基藍(lán)。3 儀器設(shè)備a. 告速組織搗碎機(jī)；b. 電熱恒溫水??；c. 1000W調(diào)溫電爐；d. 玻璃儀器：200ml容量瓶；50ml堿式滴定管。4 試劑配制4.1 費(fèi)林試劑甲：稱取硫酸銅（CUSO4 .5H2O, 分析純）34.6g溶于水中，稀釋至500ml,過(guò)濾，貯于棕色瓶?jī)?nèi)。4.2 費(fèi)林試劑乙：稱取氫氧化鈉50g和酒石酸鉀納（ 分析純 ）138g溶于水中，稀釋至500ml，用石棉墊漏斗抽濾。4.3 轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取9.5蔗糖（分子純）用水溶解后轉(zhuǎn)入1000ml容量中，加入6MHCl（分析純）10ml，加水

3、至100ml。在20250C下放置三天或在250C保溫24h，然后用水定溶（此為酸化的1%轉(zhuǎn)化糖液，可保存34個(gè)月）測(cè)定時(shí)，取1%轉(zhuǎn)化糖液25.00ml放入250ml容量瓶中，加入甲基紅指試劑一滴，用1MnaOH溶液中和后用水定溶，即為1ml/ml轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。4.4 亞甲基藍(lán)溶液：稱取0.5g亞甲基藍(lán)(分析純)溶于100ml水中。4.5 乙酸鋅溶液：稱取21.9g乙酸鋅Zn(OAC)2 . 2H2O,分析純?nèi)苡谒?，加冰乙?ml,稀釋至100ml。4.6 亞鐵氫化鉀溶液：稱取10.6g亞鐵氫化鉀K4Fe(CN)6 .3H2O,分析純?nèi)苡谒?，稀釋?00ml。5 樣品提取液制備取待側(cè)樣品適

4、量，洗凈，用不銹鋼刀將可食部分切成適當(dāng)小塊充分混合后，按四分法取樣。稱取100g鮮樣加入等重量的水，放入組織搗碎機(jī)中搗成1：1勻漿，有些材料勻漿比例可適當(dāng)調(diào)整，多汁果蔬類可直接搗漿。稱取勻漿25.0或50.0g（相當(dāng)于樣品12.5或25.0g）放入150ml燒杯中，含有機(jī)酸較多的材料加0.52.0g粉狀CaCO3調(diào)至中性（廣泛試紙檢試）。用水將樣液全部轉(zhuǎn)入250ml容量瓶中，并調(diào)整體積約為200ml。置80±20C水浴保溫30min,其間搖動(dòng)數(shù)次，取出加入乙酸鋅溶液及亞鐵氫化鉀溶液各25ml,冷卻至室溫后，用水定溶，過(guò)濾備用。6 還原糖測(cè)定6.1 費(fèi)林試劑的標(biāo)定取費(fèi)林試劑甲、乙各5.

5、00ml或在測(cè)定前先等體積混合后取10.00ml混合液于250ml錐形瓶中，放入玻璃住45粒，先加入比預(yù)測(cè)（按6.2進(jìn)行預(yù)測(cè)）僅少0.5ml的1ml/ml轉(zhuǎn)化糖標(biāo)準(zhǔn)液。將此混合液置1000W電爐上加熱，使其在2min左右沸騰，準(zhǔn)確煮沸2min,此時(shí)不離開(kāi)電爐，立即加入0.5%亞甲基藍(lán)指示劑6滴，并繼續(xù)以每45s的滴速滴加標(biāo)準(zhǔn)糖液的毫升數(shù)V1標(biāo)準(zhǔn)糖濃液mg/ml,即得10ml費(fèi)力試劑所相當(dāng)?shù)奶堑暮量藬?shù)。注：無(wú)色的還原型亞甲基藍(lán)極易被空氣的氧所氧化，應(yīng)調(diào)節(jié)電爐溫度使瓶?jī)?nèi)溶液始終保持沸騰狀態(tài)，液面覆蓋水蒸氣不與空氣接觸。整個(gè)滴定過(guò)程錐形瓶不能離開(kāi)電爐隨意搖動(dòng)。6.2 預(yù)測(cè)取費(fèi)林試劑甲、乙各5.00m

6、l或10.00ml混合液于250ml錐形瓶中，有滴定管加入待定測(cè)糖液約15ml,在電爐上加熱至沸，約費(fèi)15s后迅速滴加待測(cè)糖液，至呈現(xiàn)極輕微的藍(lán)色為止，此時(shí)加入0.5%亞加基藍(lán)指示劑6滴，繼續(xù)滴加待測(cè)糖液，直至溶液藍(lán)色褪盡為止，記下待測(cè)糖液的用量V2(毫升數(shù))。6.3 準(zhǔn)確測(cè)定取沸林試劑甲、乙各5.00ml或10.00ml混合液加入錐形瓶中，由滴定管加入比預(yù)測(cè)僅少0.5ml的待定測(cè)糖液，并補(bǔ)加V1-V2毫升數(shù)（標(biāo)定沸林試劑所消耗的標(biāo)準(zhǔn)糖液毫升數(shù)V1減去預(yù)測(cè)消耗的待測(cè)糖液毫升數(shù)V2，即為應(yīng)補(bǔ)加水的毫升數(shù)），使其與標(biāo)定沸林試劑時(shí)的反應(yīng)體積一致。以下按沸林試劑標(biāo)定同樣操作，繼續(xù)滴至終點(diǎn)。前后沸熱時(shí)間

7、須在3min左右。待測(cè)糖液消耗量應(yīng)控制在1550ml 范圍內(nèi)，不能大于標(biāo)定沸林試劑所用標(biāo)準(zhǔn)糖液體積V1。否則應(yīng)增減稱樣量重新制備待測(cè)液。7 可溶性總糖測(cè)定取已經(jīng)制備的待溶液100ml于200ml容量瓶中，加6MHCl10ml。在80±20C水于加熱10min,放入冷水槽中冷卻后，加甲基紅指示劑二滴用6MnaOH溶液中和，用水定溶。以下步驟同6.2、6.3。8 結(jié)果計(jì)算8.1 計(jì)算式a. 還原糖（%）按式（1）計(jì)算：還原糖（% ，以轉(zhuǎn)化糖計(jì)）=b. 可溶性總糖（%）按式（2）計(jì)算：可溶性總糖（%）以轉(zhuǎn)化糖計(jì)）=式中：W-樣品稱重，g;G-10ml沸林試劑相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)化糖，ml；V-準(zhǔn)確滴定

8、時(shí)所用待測(cè)液的體積，ml;A-稀釋倍數(shù)；250-容積體積，ml;1000-有毫克換算為克。c. 非還原糖（%）按式（3）計(jì)算：非還原糖（%）以蔗糖計(jì)）=（可溶性總糖還原糖）×0.95（3）式中：0.95-由轉(zhuǎn)化糖換算成蔗糖的因數(shù)。8.2 結(jié)果表示測(cè)定結(jié)果計(jì)算到小數(shù)點(diǎn)后二位，兩次平均試驗(yàn)結(jié)果相對(duì)相差：含量在5%以下的不超過(guò)3%；含量在510%的不超過(guò)2%；含量在10%以上的不超過(guò)1%。鮮洋以鮮基表示，風(fēng)干樣以風(fēng)干基表示。注：還原糖及可溶性總糖也可用葡萄糖表示，沸林試劑須另用葡萄糖標(biāo)定，非還原糖用轉(zhuǎn)化糖換算成蔗糖形勢(shì)表示。2.Vc 含量測(cè)定2,6-二氯酚靛酚(GB/T5009.159-2

9、003)1)2，6二氯酚靛酚染料，配制成每毫升所含維生素C的毫克數(shù)（T值）；2%草酸2000ml；1%草酸2000ml2）組織攪碎機(jī)；10m量筒1個(gè)；5ml移液管2根；酸式滴定管1個(gè)；50ml燒杯兩個(gè)；50ml三角燒瓶4個(gè)；漏斗2個(gè)；漏斗架1個(gè)；濾紙2張；洗耳球1個(gè)；玻璃棒（所有儀器使用前清洗，烘干備有）實(shí)驗(yàn)步驟：1. 取300500g新鮮水果，置于1000ml燒杯內(nèi)，稱重，精確至0.01g2 將樣品倒入組織攪碎機(jī)，加入等量2%草酸（w/v），加蓋旋緊，勻漿25min3 取出勻漿物質(zhì)（以上統(tǒng)一進(jìn)行）4. 用50ml燒杯稱取20g勻漿物質(zhì)，精確度1%，編號(hào)，記錄。5. 將稱取的勻漿物質(zhì)倒入具塞量

10、筒，用1%草酸反復(fù)洗滌燒杯（3次），其洗滌液倒入具塞量筒，并用1%草酸定容到100ml。6. 加塞后將勻漿物質(zhì)與1%草酸充分混合，靜置10min。7. 取上液過(guò)濾。8. 用5ml移液管吸取5ml濾液置于三角燒瓶?jī)?nèi)，加入5ml1%草酸（2個(gè)平行樣品）；用5ml移液管吸取5ml蒸餾水，加入5ml1%草酸（2個(gè)空白對(duì)照）。9. 2，6二氯酚靛酚染料滴定至終點(diǎn)（淡粉紅色，15s不褪色），記錄染料消耗量。10. 計(jì)算每100g樣品中維生素C的含量（ml）及平行樣品誤差范圍，公式如下：維生素C含量（ml/100g）=（V1-V2）×TW×1003.總酸的測(cè)定采用GB T12456-20

11、08 酸堿滴定的指示劑法測(cè)定總酸含量。1） 儀器堿式滴定管 250mL錐形瓶 25mL移液管2） 試劑1% 酚酞乙醇溶液 稱取1g酚酞,用95%乙醇溶解并定容到100mL.0.1mol/L NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液 稱取4g NaOH,加水約100mL,溶解后移入1000mL容量瓶中,用蒸餾水定容到刻度,貯存于橡膠塞試劑瓶中.4 呼吸強(qiáng)度的測(cè)定:靜置法0.4N氫氧化鈉、0.3N草酸、飽和氯化鋇溶液、酚酞指示劑、凡士林。干燥器、滴定管架、鐵夾、25ml滴定管、150ml三角瓶、500ml燒杯、8cm培養(yǎng)皿、小漏斗、10ml移液量管、洗耳球、100ml容量瓶、萬(wàn)用試紙、天平。用移液管吸取0.4N的NaOH

12、20ml放入培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿放進(jìn)呼吸室，放置隔板，放入1斤左右果蔬，封蓋，測(cè)定1小時(shí)左右（要記錄測(cè)量具體時(shí)間，放置到快要下課為止）取出培養(yǎng)皿把堿液移入錐心瓶中（沖洗35次），加飽和BaCl25ml和酚酞指示劑2滴，用0.3N草酸滴定，用同樣方法作空白滴定5 失水率失水率/ % = (失重質(zhì)量/ 原質(zhì)量) ×1006 好果率好果率/ % = (完好果數(shù)/ 檢查總果數(shù)) ×1007.可溶性固形物的含量步驟：吸取試液10.00于100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。（國(guó)標(biāo)法：重量法）吸取上述稀釋液5.00ml置于已烘至恒重的稱量瓶中移入（103±2）電熱恒溫干燥箱中，將瓶蓋斜置于瓶邊。4h后，將瓶蓋蓋好，取出，移入干燥箱內(nèi)，冷卻至室溫（約需0.5h），稱重。再烘0.5h，冷卻，稱量，直至兩次稱量不超過(guò)1mg即為恒重。計(jì)算：樣品中可溶性固形物的含量按下式計(jì)算