OLYMPUSIX51倒置顯微鏡操作規(guī)程廈門大學(xué)生物醫(yī)學(xué)儀器共享平臺

1、操作規(guī)程Olympus IX5廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院中心實驗室黃靜茹2016年10月說明：透射光主開關(guān)；汞燈高壓電源開關(guān)；透射光光強(qiáng)控制鈕；濾色片架；光路選擇桿；X軸和Y軸調(diào)節(jié)鈕；物鏡轉(zhuǎn)盤；粗/微調(diào)焦旋鈕；雙目觀察筒；屈光度調(diào)節(jié)環(huán)；聚光鏡高度調(diào)節(jié)鈕；聚光鏡對中旋鈕；視場光闌調(diào)節(jié)桿；孔徑光闌調(diào)節(jié)桿；聚光鏡轉(zhuǎn)盤；熒光光閘（SHUTTER）；熒光激發(fā)塊轉(zhuǎn)盤；熒光減光閥一、開機(jī)1、 打開透射光源（白光）主開關(guān)；2、 打開熒光光源（汞燈高壓電源）；3、 打開電腦，進(jìn)入cellSens Standard工作站；備注：標(biāo)本為HE染色、免疫組化時，不需要打開熒光光源；標(biāo)本為熒光染料染色時，一般也不需要打開白光光源。二

2、、明場觀察（Bright Field BF）1、正確放置標(biāo)本，BF主要用于HE染色、免疫組化標(biāo)本；2、轉(zhuǎn)動熒光激發(fā)塊轉(zhuǎn)盤到“6”的位置；3、轉(zhuǎn)動聚光鏡轉(zhuǎn)盤到“BF”位置，直到聽到咔嗒聲；4、將光路選擇桿推進(jìn)去（ 選擇目鏡觀察光路）；5、轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)盤，選用合適的物鏡，調(diào)節(jié)白光光強(qiáng)控制鈕至合適的強(qiáng)度，調(diào)節(jié)粗/細(xì)調(diào)焦旋鈕聚焦觀察,根據(jù)需要調(diào)節(jié)瞳間距和屈光度；三、相襯觀察（Phase contrast PH)1、正確放置標(biāo)本，PH主要用于沒有任何染色的、較透明的標(biāo)本；2、轉(zhuǎn)動熒光激發(fā)塊轉(zhuǎn)盤到“6”的位置；3、轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)盤，選用合適的物鏡；4、轉(zhuǎn)動聚光鏡轉(zhuǎn)盤，使相襯光學(xué)元件與所用物鏡相匹配（見表1）；5

3、、將光路選擇桿推進(jìn)去（ 選擇目鏡觀察光路）；6、調(diào)節(jié)光強(qiáng)控制鈕直至合適的強(qiáng)度，調(diào)節(jié)粗/細(xì)調(diào)焦旋鈕進(jìn)行聚焦觀察,根據(jù)需要調(diào)節(jié)瞳間距和屈光度。表1：物鏡、相差元件匹配表物鏡4X10X、20X40X相差元件PHLPH 1（PH C）PH 2四、熒光觀察1、如果需要，可先用明場觀察對標(biāo)本定位，再轉(zhuǎn)入熒光觀察；2、如果不再需要BF觀察，可關(guān)閉白光電源；或?qū)坠夤鈴?qiáng)調(diào)節(jié)鈕逆時針旋至最低，將孔徑光闌向右撥至最??；3、轉(zhuǎn)動熒光激發(fā)塊轉(zhuǎn)盤，根據(jù)所用的熒光染料選擇匹配的熒光激發(fā)塊；表2：熒光激發(fā)塊序號激發(fā)塊名稱激發(fā)光（nm）發(fā)射光（nm）濾掉光（nm）1WU330-3854204002WB450-48051550

4、03WG510-5505905704WBV400-4404754555WIY545-5806106006BF明場、相差4、打開熒光光閘（SHUTTER），使其置于“O”位置；5、將光路選擇桿推進(jìn)去（ 選擇目鏡觀察光路）；6、轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)盤，選用合適的物鏡，調(diào)節(jié)粗/細(xì)調(diào)焦旋鈕聚焦觀察，根據(jù)熒光強(qiáng)度選擇合適的ND濾鏡（熒光減光閥）進(jìn)入光路。（第一個ND100：100% 的熒光強(qiáng)度進(jìn)入光路；第二個ND6：6%的熒光強(qiáng)度進(jìn)入光路，第三個ND25:25%的熒光強(qiáng)度進(jìn)入光路）。五、CCD成像1、cellSens Standard工作站中，,點擊右側(cè)攝像控制中的實時觀察；2、將光路選擇桿拉出（，CCD成像光路

5、），調(diào)節(jié)粗/細(xì)調(diào)焦旋鈕進(jìn)行聚焦；3、曝光：可先選擇自動曝光，參照自動曝光時間，再通過手動調(diào)節(jié)曝光時間使圖像更清晰；4、背景校準(zhǔn)：進(jìn)行明場和相差成像時執(zhí)行白平衡 ，熒光成像時執(zhí)行黑平衡，在樣品空白背景處畫一個小區(qū)域，軟件自動以該處為背景對整幅圖像進(jìn)行調(diào)整，使所選區(qū)域顯示為白色或黑色；5、各成像參數(shù)設(shè)定完畢后，點擊拍照 ，儀器自動成像；6、右鍵文檔工具欄窗口或在文件處進(jìn)行保存（TIF或JPG格式）。六、關(guān)機(jī)1、實驗完畢，先退出工作站；2、將透射光光強(qiáng)調(diào)節(jié)鈕逆時針旋至最低，關(guān)閉透射光主開關(guān)（TH4）；3、確認(rèn)汞燈開啟超過0.5h，方能關(guān)閉汞燈高壓電源；4、用無水乙醇擦拭鏡頭，并將物鏡轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)至空位，清

6、理載物臺及桌面；5、刻錄數(shù)據(jù)：放入全新光盤，將數(shù)據(jù)發(fā)送至光盤，電腦右下角出現(xiàn)刻錄提示，點擊該提示進(jìn)入，確認(rèn)待刻錄數(shù)據(jù)，點擊“刻錄到光盤”-下一步，刻錄完畢，光盤自動退出。6、關(guān)電腦及顯示器。七、圖像處理1、標(biāo)尺：在工具欄上選擇正確的物鏡倍數(shù)，點擊“視圖”-標(biāo)尺，軟件自動將標(biāo)尺加在圖像上，再點擊“圖像”-印入信息，保存即可。2、測量：點擊“測量”-測量工具，軟件左側(cè)顯示出測量工具欄，點擊選擇所需的測量工具，在圖像上畫目標(biāo)區(qū)域，右鍵點擊結(jié)束測量即可顯示結(jié)果。測量結(jié)果可導(dǎo)出Excel：點擊測量工具欄圖標(biāo)。3、圖像疊加：打開擬疊加的圖，“圖像”-組合彩色圖像-“可用圖像”中選擇擬疊加的圖-合并層-確認(rèn)。4、圖像拼接：按一定順序 拍攝圖像，相鄰兩張圖像的邊緣要部分重疊， 所有圖像拍攝完畢后，選擇視圖-工具-畫廊-全選擬拼接的圖像，選擇運算-圖像拼接-設(shè)置水平方向圖像數(shù)量-根據(jù)拍攝順序擺好圖像位置 -確定；預(yù)覽后視情況選擇“裁剪邊緣”-確定。八、注意事項1、汞燈開啟后必須至少使用0.5h才能關(guān)閉！汞燈關(guān)閉后若還需使用，必須等后才能再次開啟！2、軟