河南農(nóng)業(yè)大學(xué)考研專業(yè)課《現(xiàn)代分子生物學(xué)》考試試卷(4086)

1、河南農(nóng)業(yè)大學(xué)考研專業(yè)課現(xiàn)代分子生物學(xué)課程試卷（含答案）學(xué)_年第 _學(xué)期考試類型：（ 閉卷）考試考試時(shí)間 ： 90 分鐘年級專業(yè)學(xué)號姓名1、分析題（ 5 分，每題5 分）1. 寫出從組織中抽取RNA勺關(guān)鍵步驟，并解釋如何判斷 RNA質(zhì)量。答案：1）從組織中提取 RNA 的步驟如下：將組織在混合氣體中磨碎，每 50 100mg組織加入1mlTRIzol 裂解液溶解樣品,充分吹打混勻。 每 1ml TRIzol 加入 2.0ml氯仿，劇烈震蕩 15s ，室溫放置5min 。 4 C, 10000g 離心 15min,此時(shí) RNA 主要集中在水相中。 將水相轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加入等重量異丙醇,室溫放

2、置10min 。 4C, 10000g 離心 10min,此時(shí)可在離心管底部觀察到白色沉淀,即為 RNA 。 用 75 冷勺乙醇洗滌沈淀,475C0,0g 以下,離心 5min ,棄上清。 超凈臺(tái)中吹干，加入無 RNase的水溶解。（2）檢測 RNA 質(zhì)量的方法如下： 凝膠成像：取適量RNA溶液選擇退出電泳緩沖液后，跑瓊脂糖 凝膠電泳，如果 28S 和 18S 條帶明亮、清晰，并且 28S 的亮度在 18S 條帶的兩倍以上，則認(rèn)為 RNA 的質(zhì)量是好的。 吸光度檢測：使用紫外分光光度計(jì)檢測 RNA樣品在260nm、 280nm 處的吸光度，若兩者的比值在 1.82.0時(shí)，可認(rèn)為RNA純 度良好

3、，蛋白質(zhì)等其他物質(zhì)的污染可以接受。解析：2、判斷題（ 55 分，每題 5 分）1. 癌細(xì)胞生長旺盛，因而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特別發(fā)達(dá)。（ ）答案：正確解析：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞內(nèi)除核酸的一系列重要的生物大分子，如蛋白質(zhì)、 脂類（如甘油三酯） 和糖類合成的基地。癌細(xì)胞生長旺盛，可能需要 大量的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖類等，因而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特別更發(fā)達(dá)。2. 生物體的部分組織或器官因創(chuàng)傷而丟失時(shí)，剩余部分的肌肉、骨骼、皮膚等組織的細(xì)胞均能繼續(xù)生長，從而形成與丟失部分形態(tài)和功 能上大致相同的結(jié)構(gòu)，這一過程稱為再生。（） 答案：錯(cuò)誤 解析：再生是生物體的整體或器官受外力作用發(fā)生創(chuàng)傷而部分丟失， 在剩余功能的基礎(chǔ)上又生長出與丟失部分在形態(tài)與

4、部分上相同的結(jié)構(gòu)， 這一修復(fù)過程稱為再生。受到創(chuàng)傷之后，剩余更進(jìn)一步個(gè)別的細(xì)胞并 不一定均能繼續(xù)生長。3. SDSPAGE 時(shí)，不同大小蛋白質(zhì)分子的電荷質(zhì)量比值趨近于相同。 （）答案：正確解析：4. 在原核基因操縱子中都有 CRP位點(diǎn)。（）答案：錯(cuò)誤解析：色氨酸操縱子無 CRP 位點(diǎn)。5. 真核生物的5S、18S和28S rRNA通常組成一個(gè)單位進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。（）答案：錯(cuò)誤解析：真核生物 5S rRNA 基因也是成簇排列的，中間被不轉(zhuǎn)錄區(qū)域隔開，由RNA聚合酶皿轉(zhuǎn)錄。1618S、5.8S和2628SrRNA基因組 成一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位，彼此被間隔區(qū)分開，由 RNA聚合酶I轉(zhuǎn)錄。利福霉素SV和利福平都是轉(zhuǎn)

5、錄起始抑制劑而不是 RNA鏈延長的 抑制劑。答案：正確 解析：在RNA聚合酶中，只有帶。因子的全酶才能專一地與 DNA 上的啟動(dòng)子結(jié)合，合成均一的產(chǎn)物，c脂質(zhì)的作用只是啟動(dòng)RNA的轉(zhuǎn) 錄，一旦轉(zhuǎn)錄開始，就脫離起始復(fù)合物，而由核心酶負(fù)責(zé) RNA 鏈的延 伸。利福霉素的作用機(jī)制是抑制菌體內(nèi) RNA聚合酶的活性，從而影 響核糖核酸的合成和蛋白質(zhì)代謝，導(dǎo)致細(xì)菌束絲藻生長繁殖停止而達(dá) 到殺菌作用。利福平的作用是與依賴于 DNA的RNA多聚酶的B亞 單位牢固結(jié)合，抑制細(xì)菌 RNA 的合成，防止該酶與 DNA 連接，從而 阻斷 RNA 轉(zhuǎn)錄過程，使 DNA 和酵素的合成停止。因此，利福霉素 SV 和利福平的

6、作用都是抑制轉(zhuǎn)錄起始。6. 在能識別一個(gè)細(xì)胞的分化以前，有一個(gè)預(yù)先保證細(xì)胞怎樣變化的 時(shí)期，這一階段被稱為細(xì)胞決定。（ ）答案：正確解析：細(xì)胞決定是所稱細(xì)胞在發(fā)生可識別的形態(tài)變化之前，就已受到 約束特殊而向特定方向分化， 這時(shí)細(xì)胞內(nèi)部已發(fā)生變化，弄清了未來 的發(fā)育命運(yùn)。7. cDNA文庫是包含有細(xì)胞中所有 mRNA因此該文庫能包含細(xì)胞所 有的遺傳信息。（ ）答案：錯(cuò)誤解析： cDNA 文庫不涵蓋有細(xì)胞中所有 mRNA ，因此該文庫也不能包 含細(xì)胞所有的遺傳信息。 cDNA 文庫只是包含有特定細(xì)胞類型和發(fā)育 時(shí)期細(xì)胞中的表達(dá)包涵信息。8. 由于遺傳密碼子的簡并性，一個(gè)氨基酸可以有幾種 tRNA但

7、通常只有一種氨酰tRNA合成酶。（）答案：正確解析：許多胺基酸的密碼子的第 1 和第 2 個(gè)堿基相同，只有第 3 個(gè)堿 基不同，即為核苷酸的簡并性。由于遺傳密碼子的簡并性，一個(gè)氨基 酸可以有幾種 tRNA ，但有時(shí)只有一種氨酰 tRNA 合成酶。9. 在雜交之前先用凝膠電泳把粗提取物中的 RNA或 DNA分子進(jìn)行 分離，假定雜交后只有一種或少數(shù)幾種大小的片段被探針雜交上了， 就能肯定這種雜交是特異性的。（ ）答案：正確解析：在雜交之前先用凝膠電泳把粗提取物中中曾的 RNA 或 DNA 分子進(jìn)行分離，分離為不同大小的片段。假定雜交后只有舉例來說一種 或少數(shù)幾種大小的片段被探針雜交上了，就能肯定這

8、種雜交是特異性 多態(tài)性的。10. DNA 是生物界中唯一的遺傳物質(zhì)。（ ）答案：錯(cuò)誤解析： RNA 也可以做遺傳物質(zhì)。3 、名詞解釋（ 50 分，每題 5 分）1. SD 序列 揚(yáng)州大學(xué) 2019 研答案：SD序列指存在于原核生物起始密碼子 AUG上游712個(gè)殘基 處的一種47個(gè)核苷酸的保守片段。它與16SrRNA3 '端反向互補(bǔ)，SD 序列幫助招募核糖體 RNA ，并將核糖體比對并結(jié)合到信使 RNA 的起始密碼子，從而開始蛋白合成。一旦被招募， tRNA 可以按照密 碼子的指令順序添加氨基酸，從翻譯起始位點(diǎn)向下游傳輸數(shù)據(jù)進(jìn)行蛋 白質(zhì)合成。解析：空2. 基因組 答案：基因組是指生物體內(nèi)

9、遺傳信息的集合，是植物某個(gè)特定物種細(xì) 胞內(nèi)全部 DNA 分子的總和。包括核中的染色體 DNA 和線粒體、葉綠 體等亞細(xì)胞器中曾的 DNA ?；蚪M大小與原核生物和低等真核生物的 形態(tài)復(fù)雜性呈正相關(guān)，在軟體動(dòng)物和其他高等真核生物中所，由于重 復(fù) DNA 的存在，基因組大小不再與生物的絕不形態(tài)復(fù)雜性呈正相關(guān)。解析：空3. 核酸原位雜交 答案：核酸原位雜交是指用標(biāo)記了的已知序列的核苷酸片段作為探針， 通過雜交直接在組織肉片、細(xì)胞涂片、培養(yǎng)細(xì)胞爬片、或分裂中期染 色體上檢測和定位同一個(gè)特定的靶核苷酸存在的靶技術(shù)。核酸原位雜 交的生物化學(xué)基礎(chǔ)是核酸的變性、復(fù)性和堿基互補(bǔ)配對結(jié)合。核酸原 位雜交有 DNA

10、RNA 雜交、 DNADNA 雜交和 RNARNA 雜交等。解析：空整合感染答案：整合感染是指某些 DNA 在感染復(fù)制過程個(gè)別中可以將自身全 部或部分 DNA 片段整合到宿主蛋白質(zhì) DNA 中，并隨宿主細(xì)胞的復(fù)制 遺傳給下一代的感染方式。逆轉(zhuǎn)錄病毒的 RNA 反向轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 cDNA 即前病毒也可以整合到宿主的 DNA 中的感染，這種感染參與病毒致 腫瘤機(jī)制。解析：空4. G 蛋白答案：G蛋白又稱三聚體GTP結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白，是指由a、B、迂個(gè) 亞基組成，能與 GDP 或 GTP 結(jié)合的外周蛋白。以三聚體存在并與 GDP結(jié)合者為即非活化型，位于細(xì)胞膜。當(dāng) a亞基與GTP結(jié)合并導(dǎo) 致By二聚體脫落時(shí)則

11、變成活化型，神經(jīng)遞質(zhì)可作用于膜受體的不同性 激素，通過不同的 G 蛋白負(fù)面影響介導(dǎo)影響質(zhì)膜上某些離子通道或酶 的活性，繼而影響細(xì)胞內(nèi)第二信使?jié)舛群秃罄m(xù)的生物學(xué)效應(yīng)。解析：空5. 癌基因答案：癌基因是朊病毒指體外能引起細(xì)胞轉(zhuǎn)化，在體內(nèi)繼發(fā)性腫瘤的 基因，它是細(xì)胞內(nèi)遺傳物質(zhì)動(dòng)物細(xì)胞的組成成分。在正常情況下，這 些基因處于靜止或低表達(dá)狀態(tài)，低毒性對高負(fù)荷細(xì)胞不僅無害而且不 可缺少。癌基因激活的方式包括表型點(diǎn)突變、基因擴(kuò)增、染色體重排、 病毒感染等。癌基因激活的失活結(jié)果是其數(shù)目增多或功能增強(qiáng)，使細(xì)胞過度增殖及獲得其他惡性特征，從而形成惡性腫瘤。癌基因主要分 病毒癌基因和細(xì)胞轉(zhuǎn)化基因。解析：空6. 原位

12、雜交技術(shù)（ ISH）答案：原位雜交技術(shù)是指運(yùn)用有分子單鏈之間核酸互補(bǔ)的堿基序列， 把有放射性或非放射性的外源核酸（即探針）和組織、蛋白或染色體 上待測 DNA 或 RNA 互補(bǔ)配對，大分子結(jié)合成專一的核酸雜交分子， 經(jīng)一定的檢測手段把待測核酸在組織、細(xì)胞或染色體上等位基因的位 置顯示出來的一種生物技術(shù)。原位雜交技術(shù)通?？煞譃?RNA 原位雜交 和染色體原位雜交兩大類。解析：空7. 外顯子 揚(yáng)州大學(xué) 2019研答案：外顯子也表示表達(dá)序列，是指一個(gè)基因表達(dá)為多肽鏈的部分， 是指在 RNA 剪接后仍會(huì)被保存下來，并可在蛋白質(zhì)生物合成過程中同 被表達(dá)為蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)的基因序列。外顯子最初是既存在于最初的

13、轉(zhuǎn) 錄中間體中，也存在于成熟的 RNA 分子中的核苷酸序列。所有子代的 外顯子一同組成了遺傳信息，該信息會(huì)體現(xiàn)在酶上。解析：空8. 滾環(huán)復(fù)制（ rolling circle replication ） 答案：滾環(huán)復(fù)制是單向復(fù)制的一種特殊方式，是指 DNA 的合成由對 正鏈原點(diǎn)的專一性切割開始，所形成的自由 5 '端被從雙鏈環(huán)中置換出 來并為多肽DNA結(jié)合蛋白所覆蓋，使其3 ' 0端在DNA聚合酶的作 用下不斷延伸。在這個(gè)過程中，單鏈尾巴的延伸與雙鏈 DNA 的繞軸 旋轉(zhuǎn)同步。滾環(huán)復(fù)制是噬菌體中所常見的 DNA 復(fù)制方式。解析：空9. Probe 寧波大學(xué) 2019 研答案： P

14、robe 的中文名稱是超聲波，即核酸探針，是指一段帶有檢測 標(biāo)記、且順序已知的、與目的基因互補(bǔ)的核酸序列。當(dāng)將探針與樣品 雜交時(shí)，探針和與其互補(bǔ)的核酸（ DNA 或 RNA ）序列通過氫鍵緊密 相連，隨后未被雜交的多余探針被無用洗去。最后，根據(jù)質(zhì)譜儀的標(biāo) 記物種類，可成功進(jìn)行放射自顯影、熒光發(fā)光、酶聯(lián)化學(xué)發(fā)光等方法 來氨基酸判斷樣品中是否或者何右邊含有被測序列。解析：空4、填空題（ 40 分，每題 5 分）1. RNA 是由核糖核苷酸通過鍵連接而成的一種多聚體。答案：磷酸二酯解析：RNA是由核糖核苷酸通過3 '羥基和5的磷酸基團(tuán)形成3 ' 5 '磷酸 二酯鍵。2. 原核

15、生物細(xì)胞中DNA甲基化位點(diǎn)主要是在序列上，而真核生物細(xì) 胞核DNA的甲基化位點(diǎn)則主要是在序列上。答案： GATC|CG 解析： DNA 甲基化為 DNA 化學(xué)修飾的一種形式，能夠在不改變 DNA 序列的前提下，改變遺傳表現(xiàn)。通常指在 DNA 甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下， 在基因組 CpG 二核苷酸的胞嘧啶 5 碳位共價(jià)鍵結(jié)合一個(gè)甲基基團(tuán)。原 核生物細(xì)胞中 DNA 甲基化位點(diǎn)主要是在 GATC 序列上，而真核生物 細(xì)胞核 DNA 的甲基化位點(diǎn)則主要是在 CG 序列上。3. DNA復(fù)制時(shí)的RNA引物是由的活性切除的。答案：DNA聚合酶I |53 '外切核酸酶解析：DNA聚合酶I具有5 7 3 &

16、#39;外切核酸酶活性，可以切除NA引 物。4. 大腸桿菌乳糖操縱子包括三個(gè)結(jié)構(gòu)基因：、 lacY 和 lacA ，以及、 操縱基因和。答案： lacZ| 啟動(dòng)子|阻遏子解析：大腸桿菌乳糖操縱子三個(gè)結(jié)構(gòu)基因：Z （編碼B半乳糖苷酶）、Y （編碼B半乳糖苷酶透過酶）、A （編碼B半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶），以及啟動(dòng)子（P）、操縱基因（0）、阻遏子（I）。5. 大腸桿菌在含有乳糖和葡萄糖的培養(yǎng)基中，只利用為碳源，這是 因?yàn)槲稽c(diǎn)的正調(diào)控開關(guān)被關(guān)閉。答案：葡萄糖 |乳糖操縱子啟動(dòng)子區(qū) CRPcAMP 結(jié)合位點(diǎn)解析：在大腸桿菌中，在有葡萄糖存在的市場條件下，其他碳源相關(guān) 基因表達(dá)的操縱子如乳糖操縱子的基因表達(dá)

17、受葡萄糖中間代謝產(chǎn)物的 抑制，是代謝物阻抑。葡萄糖的代謝中間產(chǎn)物會(huì)間接降低細(xì)胞內(nèi)腺苷 酸環(huán)化酶的活性，導(dǎo)致胞內(nèi) cAMP 的含量降低，與它相結(jié)合的正宏觀 調(diào)控蛋白（CRP）因找不到配體而不能形成復(fù)合物（CRPcAMP ），該 酵素是激活乳糖操縱子的重要組成部分，細(xì)菌對此復(fù)合物的資金需求 是獨(dú)立的，與阻遏體系無關(guān)，轉(zhuǎn)錄必須有此復(fù)合物結(jié)合在 DNA 的啟動(dòng) 子區(qū)域上。6. 一個(gè)兩股鏈都帶放射性的 DNA分子，在無放射性標(biāo)記物的體系中， 經(jīng)兩次復(fù)制，其產(chǎn)生的子代 DNA分子中，有個(gè)DNA分子不帶放射性。答案：2解析：DNA復(fù)制為半不保留復(fù)制。一次復(fù)制后，子代產(chǎn)物中幾條鏈中 兩條中間體帶有放射性，兩條

18、不帶。經(jīng)過兩次復(fù)制，產(chǎn)生的八條幾條 鏈中只有兩條帶有放射性元素。因此，由 2 個(gè) DNA 分子不帶放射性。7. 在切口移位標(biāo)記探針時(shí)，DNasel處理DNA的溫度應(yīng)控制在，溫度 過高會(huì)使，不利于標(biāo)記。答案：1416 C |DNase I的活性增強(qiáng)、導(dǎo)致切口過多、使DNA探 針的長度變短解析：薄片平移法是合成探針標(biāo)記的方法之一，即利用微量的 DNasel 使待標(biāo)記的雙鏈 DNA 氫原子產(chǎn)生若干切口，然后利用 DNasel 的 53 '外切酶活性從切口的端除去核苷酸；同時(shí)DNasel還有53 '的聚合酶活性可將反應(yīng)體系中多中所的核苷酸底物連接到切口的3 '羥基末端。由于在切

19、去核苷酸的同時(shí)又在切口的 3 '端補(bǔ)上核苷酸，從而 使切口沿著 DNA 鏈移動(dòng)，此時(shí)若反應(yīng)體系中含有標(biāo)記的核苷酸，它們 就會(huì)摻入到新合成的鏈中，獲得帶有標(biāo)記的 DNA 探針。在此投資過程 中需要注意DNasel處理DNA的溫度應(yīng)控制在1416 C,溫度過高 會(huì)使DNase I的活性增強(qiáng)、導(dǎo)致切口過多、使 DNA探針的長度變短, 不利于標(biāo)記。8. DNA 通過分子折疊形成的三股螺旋叫，它存在于區(qū)，因而具有重 要的生物學(xué)意義。答案： HDNA| 基因的調(diào)控區(qū)解析：5、簡答題（ 35 分，每題 5 分）1. 簡述翻譯的主要過程及特點(diǎn)。 武漢科技大學(xué) 2019 研答案：（1 ）翻譯的主要處理過

20、程如下： 起始：起始核糖體與mRNA結(jié)合并與氨酰tRNA形成翻譯起 始復(fù)合物。 延長：每加一個(gè)氨基酸經(jīng)過位次、成肽和轉(zhuǎn)位，使肽鏈從N端向 C 端延長。 終止：當(dāng)mRNA經(jīng)常出現(xiàn)分子中的終止密碼子出現(xiàn)后，多肽鏈 合成停止，肽鏈從肽酰 tRNA 中釋出， mRNA 、核蛋白體等分離。（2 ）翻譯的特點(diǎn)如下： 每生成一個(gè)肽鍵，要消耗2個(gè)高能磷酸鍵。 氨基酸活化要消耗 2 個(gè)高能磷酸鍵。 整個(gè)過程可能多于 4 個(gè)高能磷酸鍵。解析：空2. 簡述RNA的種類和各自的生理功能 答案： RNA 的種類及各自的性腺如下表所示。表 RNA 的種類及新陳代謝解析：空3. 什么是比較基因組學(xué)？簡述它們在遺傳學(xué)中的運(yùn)用

21、。答案：（1）比較基因組學(xué)是指基于基因組圖譜和測序基礎(chǔ)上，對已知的基因和基因組結(jié)構(gòu)進(jìn)行比較，來了解抗原的功能、表達(dá)機(jī)理和 物種進(jìn)化的學(xué)科。（2）比較基因組學(xué)在遺傳學(xué)中的應(yīng)用：利用模擬生物基因組與人 類基因組之間編碼順序上和結(jié)構(gòu)上的同源性，克隆人類細(xì)胞學(xué)說，無 腺揭示基因功能和疾病分子機(jī)制，闡明物種變異關(guān)系，及線粒體的內(nèi) 在結(jié)構(gòu)。解析：空4. 簡述蛋白質(zhì)的生物合成過程。 暨南大學(xué) 2018研答案： 蛋白質(zhì)生物合成是蛋白質(zhì)最為復(fù)雜的活動(dòng)之一。參與細(xì)胞 內(nèi)蛋白質(zhì)生物合成的物質(zhì)除氨基酸外，還需要 mRNA 作為模板、 tRNA 作為特異的氨基酸“搬運(yùn)工具”、核糖體作為蛋白質(zhì)合成的裝 配場所、有關(guān)的酶與

22、蛋白質(zhì)因子參與反應(yīng)、 ATP 或 GTP 提供能量。翻 譯過程包括起始、延長和終止三個(gè)發(fā)展階段。生物合成整個(gè)過程如下：1）起始：該過程是指 mRNA 、起始氨基酰 tRNA 分別與核糖體結(jié)合而形成翻譯起始復(fù)合物(2) 延長：翻譯起始復(fù)合物已經(jīng)形成后，核糖體從 mRNA的5 ' 端向3 '端移動(dòng)，依據(jù)密碼子順序，從N端開始向C端合成多肽鏈。這 是一個(gè)在核糖體上重復(fù)進(jìn)行的進(jìn)位、成肽和轉(zhuǎn)位的循環(huán)過程，每完成 1 次，肽鏈上即可增加 1 個(gè)氨基酸殘基。該過程也被稱為核糖體循環(huán)。 這一過程除了需要 mRNA 、tRNA 和核糖體外，還需要有數(shù)種延長因 子以及 GTP 等參與。( 3 )終

23、止：終止密碼子沒有被任何氨基酰 tRNA 識別，釋放因子 RF 能識別終止密碼子而進(jìn)入 A 位，這一識別過程需要水解 GTP。 RF 的結(jié)合可觸發(fā)核糖體構(gòu)象分子結(jié)構(gòu)改變，將肽基轉(zhuǎn)移酶活性轉(zhuǎn)變?yōu)轷?酶活性，水解組氨酸與結(jié)合在 P 位的 tRNA 之間的酯鍵，釋出合成的 肽，促使 mRNA 、tRNA 及 RF 從核糖體脫離。 mRNA 模板和各種蛋 白質(zhì)因子、其他組分都可被再次利用。解析：空5. 簡述染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)( chromatin immunoprecipitation ) 的原理和應(yīng)用。答案： 染色質(zhì)利用計(jì)算機(jī)免疫沉淀技術(shù)是指研究體內(nèi)蛋白質(zhì)和 DNA 相互作用的一種技術(shù)。它運(yùn)用抗原抗

24、體反應(yīng)的特異性，可以真實(shí) 地體內(nèi)蛋白因子和基因組 DNA 結(jié)合的狀況。( 1)染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)的基本原理在節(jié)律狀態(tài)下把細(xì)胞內(nèi)的 DNA 與蛋白質(zhì)合成物在一起，通過超 聲或酶處理將染色質(zhì)切為小片段后，利用抗原抗體的特異性識別反應(yīng)， 將與目的蛋白相結(jié)合的 DNA 片段沉淀下來，固相通過對目的片段的 色譜法與檢測，從而取得蛋白質(zhì)與 DNA 相互作用的信息。染色質(zhì)免 疫沉淀技術(shù)一般包括細(xì)胞固定，染色質(zhì)斷裂，染色質(zhì)免疫沉淀，交聯(lián) 反應(yīng)的逆轉(zhuǎn)， DNA 的純化，和 DNA 的鑒定。（2）染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)的應(yīng)用 檢測體內(nèi)酯因子和 DNA 的動(dòng)態(tài)作用。 CHIP 和體內(nèi)足跡重寄生結(jié)合，用于尋找反式因子的體

25、細(xì)胞結(jié)合 位點(diǎn)。 組蛋白的各種共價(jià)修飾和基因表達(dá)的關(guān)系。 染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)和其他方法的結(jié)合，擴(kuò)大了其應(yīng)用范圍，如 CHIP 和基因芯片相結(jié)合建立的 CHIPONCHIP 方法已廣泛用于特 定反式因子靶基因的高通量篩選。 RNACHIP 用于研究 RNA 在基因表達(dá)調(diào)控中會(huì)的作用。解析：空6. 在一定條件下，運(yùn)用基因敲除技術(shù)敲除掉某個(gè)基因并不一定就能 獲知該基因的功能，試分析其原因。答案： 基因敲除技術(shù)又稱基因打靶，是指通過一定的途徑使機(jī)體 特定的基因失活或缺失的技術(shù)。敲除掉某個(gè)基因并不一定就能獲知該 基因的功能，可能的原因如下：（1）許多基因在功能上是高速緩存冗余的，敲除掉一個(gè)在功能上 緩存

26、的基因，并不能辨認(rèn)造成容易識別的表型，因?yàn)榛蚣易宓钠渌?成員可以提供同樣的功能。（2）現(xiàn)有的技術(shù)實(shí)驗(yàn)技術(shù)和工具無法檢測其功能。（3）許多基因組在細(xì)胞分裂、生長和發(fā)育過程中均發(fā)揮重要作用， 如稀薟擬南芥有10002000個(gè)必需基因，敲除這些基因會(huì)配子體或 早期胚的致死性，因而無法獲得必需基因的純合突變體，也就沒有對 必需蛋白基因的純合突變體的表型進(jìn)行評價(jià)。（4）該基因在功能上“無用”或作用很小，以至于難于獲知其具 體功能。解析：空7. 重組DNA（基因工程）的主要步驟。答案： 重組 DNA 又稱基因工程，是指在惡意軟件體外將核酸核 酸插入病毒、質(zhì)?；蚱渌d體分子中所，行成遺傳物質(zhì)的重新組合，

27、使之進(jìn)入原先不能這類分子的寄主細(xì)胞內(nèi)并核酸進(jìn)行持續(xù)穩(wěn)定的繁殖 和表達(dá)的過程。重組 DNA 的主要包括步驟主要包括包括以下 4 個(gè)基本步驟： （1 ）提取目的基因：通過一定的方法得到需要進(jìn)行的目的 DNA ， 常用的方法有人工合成法、基因組文庫法和 cDNA 文庫法。（2）目的基因與運(yùn)載體融為一體：通過限制性內(nèi)切酶對含目標(biāo)片 段的 DNA 和載體進(jìn)行切割后，通過 DNA 連接酶進(jìn)行連接，完成基因 的重組計(jì)劃過程。（ 3 ）將目的基因?qū)霊?yīng)受體細(xì)胞：將人工重組的 DNA 分子導(dǎo)入 能成功進(jìn)行正常復(fù)制的寄主細(xì)胞，從而隨著寄主細(xì)胞的分裂而瓦解需 要進(jìn)行復(fù)制。（4）目的基因的檢測和表達(dá)：目的基因?qū)胧荏w

28、細(xì)胞后，檢測與 鑒定其是否可以穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性。受體細(xì)胞必須表現(xiàn)出特 定的性狀，才能說明目的基因完成了傳達(dá)過程。解析：空6、論述題（ 20 分，每題 5 分）1. 如果想讓人的胰島素基因在細(xì)菌中表達(dá)生產(chǎn)人胰島素，你認(rèn)為至 少應(yīng)當(dāng)滿足哪些條件？答案： 欲在細(xì)菌中喚起生產(chǎn)人的胰島素，需要將人的胰島素基因 克隆到一個(gè)細(xì)菌表達(dá)載體上，然后誘導(dǎo)表達(dá)，分離純化獲得蛋白質(zhì)。 在克隆整個(gè)過程中上列需要滿足以下條件：（1）將胰島素基因的編碼序列置于含有核糖體結(jié)合位點(diǎn)和起始密 碼子 ATG 的細(xì)菌強(qiáng)啟動(dòng)子的下游，因?yàn)榧?xì)菌的 RNA 聚合酶不能識別 真核生物的啟動(dòng)子；（2 ）使用胰島素基因的 cDNA 編碼

29、序列，因?yàn)榇蠖鄶?shù)真核抗原 大多數(shù)有內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄后被切除形成成熟 mRNA ，而細(xì)菌細(xì)胞動(dòng)手術(shù) 不能切除真核基因的內(nèi)含子；（3）選用合適的突變型宿主，如蛋白酶缺失的菌株，防范產(chǎn)生真 核的真核蛋白質(zhì)產(chǎn)物被細(xì)菌的蛋白酶所識別和降解；（ 4 ）人的胰島素由 A 、B 兩個(gè)肽鏈組成，是由胰島素原（無活性） 切除連接 A 鏈和 B 鏈的 C 肽后形成有活性的胰島素?？梢苑謩e克隆 A 、 B 兩鏈的編碼序列，在體外加工已經(jīng)形成二硫鍵；或者克隆胰島素原 的編碼序列，在體外切除 C 肽，加工而成。解析：空2. 試述DNA的主要理化性質(zhì)。答案： DNA 的主要理化性質(zhì)如下：（1）核酸的人帶電荷性質(zhì) 無論是 DNA

30、 還是 RNA ，核苷酸鏈內(nèi)既有酸性的基又有堿性的 含氮雜環(huán)堿基，因此核酸是兩性酸堿。 由于磷酸舒爾酸性較強(qiáng)，核酸通常學(xué)業(yè)成績?yōu)樗嵝浴?在中性或堿性溶液中其，核酸帶負(fù)電荷，在外加電場作用下向 電極移動(dòng)。 核酸的人帶電荷性質(zhì)可用于分離分子質(zhì)量大小不同的核酸。帶 負(fù)電荷的電荷核酸與帶正電荷的金屬離子成鹽，在有乙醇或異丙醇存 在時(shí)核酸即可從溶液中沉淀析出。 常用氯化鈉、乙酸鈉、乙酸鉀或乙酸銨等鹽溶液來制備核酸。（2）核酸的高分子性質(zhì) 核酸是陰離子質(zhì)量很大的高分子化合物，因此核酸溶液具有較 大的接觸面。 核酸溶液的黏性與分子的不對稱性有關(guān)，分子不對稱性愈大， 其黏度也就愈大，不規(guī)則原子比球形分子溶液的

31、黏度大，線性分子溶 液的粘度更大。 DNA 分子的長度與其直徑半徑之比可達(dá) 107 ，因此極稀的 DNA 溶液也有較大的表面張力。 RNA 溶液的黏度較 DNA 小。當(dāng)核酸溶液在受熱或酸堿等因素 作用下發(fā)生變性時(shí)，分子不對稱性變小，溶液黏度下降。因此可用黏 度測定作為 DNA 變性的指標(biāo)。（3）核酸的紫外吸收 核酸分子的堿基中含有的共軛雙鍵具有吸收紫外線的性質(zhì)。 蛋白質(zhì)的最大去除波長為 280nm ，而核酸的最大紫外吸收波長 為 260nm 。 利用核酸的紫外吸收特性可借助鑒別核酸樣品中的蛋白質(zhì)雜質(zhì)， 對核酸進(jìn)行定性、定量分析。也可以利用核酸的分子紫外吸收受最大 中間結(jié)構(gòu)影響極大的特性研究核酸

32、的變性。（4）核酸的變性和復(fù)性 核酸的變性是指在極端的 pH 和受熱條件下核酸分子中的氫鍵 斷裂、雙螺旋結(jié)構(gòu)解開的不良現(xiàn)象。因?yàn)樽冃詴r(shí)堿基對之間的氫鍵斷 開，積存力也受到破壞，但不伴有共價(jià)鍵的斷裂，所以變性后的核酸 在 260nm 的光吸收增強(qiáng)，稱為增色效應(yīng)。 變性核酸經(jīng)退火恢復(fù)原狀的過程稱為變性 DNA 的復(fù)性。一定 條件下才核酸的變性是可逆的。熱變性的 DNA 溶液慢慢冷卻，可使 解開的兩條互補(bǔ)單鏈重新直線型締合而形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，即退火。如 果將熱變性的 DNA 溶液驟然冷卻至低溫，則變性的 DNA 很難復(fù)性。 伴隨復(fù)性會(huì)出現(xiàn)核酸溶液紫外光吸收減弱的現(xiàn)象，稱為核酸的減色效 應(yīng)。解析：空試述

33、真核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)制。 武漢科技大學(xué) 2019研答案： 真核生物在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控主要核酸是通過反式作用因子、 順式作用元件和 RNA 聚合酶的相互作用來完成的，主要是反式作用因 子結(jié)合順式作用元件后影響核糖體起始復(fù)合物的形成過程。（1）核糖體起始復(fù)合物的形成真核生物 RNA 聚合酶識別的是由通用轉(zhuǎn)錄因子與 DNA 形成的蛋 白質(zhì) DNA 復(fù)合物，只有當(dāng)一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合緊密結(jié)合到 DNA 上，形成有功能的啟動(dòng)子，才能被 RNA 引物所識別并結(jié)合。核糖體起始復(fù)合物的形成過程為：結(jié)合FTATA區(qū)；RNA聚合酶識別并結(jié)合TF II DDNA復(fù)合物；促進(jìn)或抑制核糖體 起始復(fù)合物的形成。（2）

34、反式作用因子 一般兼具三個(gè)功能域（DNA識別結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域和結(jié)合其 他蛋白結(jié)合域）。 能識別并結(jié)合上游調(diào)控區(qū)中的作用元件。 對基因的表達(dá)有正性或負(fù)性調(diào)控作用。（3）轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控反式積極作用因子的活性調(diào)節(jié)a .表達(dá)式調(diào)節(jié)：反式作用因子合成出來就具有活性。b 共價(jià)修飾：磷酸化和去磷酸化，糖基化。c.配體結(jié)合：許多激素受體是反式作用因子。d .蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用：蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)復(fù)合物的解離與形成。反式作用因子與順式作用元件的結(jié)合反式作用因子被激活后才，需先識別并結(jié)合上游啟動(dòng)元件和增強(qiáng) 子實(shí)施中的保守性序列，對基因轉(zhuǎn)錄起調(diào)節(jié)作用。 反式作用因子的作用手法：成環(huán)、扭曲、滑動(dòng)。 反式作用獨(dú)立式因

35、子的組合式調(diào)控作用 每一種反式作用結(jié)合順式作用元件后雖然可以發(fā)揮促進(jìn)或抑制作用，但反式作用因子對基因調(diào)控不是由單一因子敲定的而是塵埃落定 幾種因子組合發(fā)揮特定的作用。解析：空3. DNA 分子標(biāo)記有哪些種類？答案： DNA 分子標(biāo)記有以下種類：（1）RFLP 標(biāo)記： DNA 某一位點(diǎn)上的變異有可能引起該位點(diǎn)特 異性的限制性內(nèi)切酶識別位點(diǎn)的改變，包括原有位點(diǎn)的消失或出現(xiàn)和 新的酶切位點(diǎn)，致使酶切片段長度隨之加之發(fā)生變化。這種變化引起 的多態(tài)現(xiàn)象即為限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）。對RFLP的檢測主 要是用 Southern 雜交的方法進(jìn)行，即利用限制善用酶酶解及凝膠電 泳分離不同生物體的 DN

36、A 分子，然后用經(jīng)標(biāo)記的特異 DNA 探針與之 雜交，通過發(fā)射自顯影或非同位素顯色技術(shù)來闡述 DNA 的多態(tài)性。（ 2） RAPD 標(biāo)記：隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性 DNA ，用隨機(jī)短引物（人工 合成的六核苷酸）進(jìn)行 DNA 的 PCR 擴(kuò)增。所擴(kuò)增的 DNA 區(qū)段是事 先未知的，具有舉例來說和任意性，因此隨機(jī)引物 PCR 標(biāo)記技術(shù)可用 于對任何未知基因組的研究。3） ISSR 標(biāo)記：簡單序列重復(fù)區(qū)間擴(kuò)增多態(tài)性。利用基因組中常出現(xiàn)的 SSR 本身設(shè)計(jì)引物，無需預(yù)先克隆和測序（4 ）SSR 標(biāo)記：簡單重復(fù)序列端粒酶。又稱微衛(wèi)星 DNA 多態(tài)性， 即由二核苷酸，三核苷酸或四核苷酸串聯(lián)重復(fù)的左右拷貝數(shù)目不等而

37、出現(xiàn)的多態(tài)現(xiàn)象。（5）STS 標(biāo)記：序列標(biāo)定位置。染色體上所位置已定的、核苷酸 序列已知的、且在基因組中只有一份拷貝的 DNA 短片段，一般長 200500bp 。STS標(biāo)記是根據(jù)單拷貝的DNA片段兩端的序列，設(shè) 計(jì)一對特異引物，經(jīng) PCR 擴(kuò)增基因組 DNA 而產(chǎn)生的一段長度為幾百 bp 的特異序列。（6）AFLP 標(biāo)記：擴(kuò)增片段長度特異性。通過對基因組 DNA 酵 素切片段的段選擇性擴(kuò)增來檢測 DNA 酶切片段長度的多態(tài)性。 AFLP 揭示的 DNA 多態(tài)性是酶切位點(diǎn)和其后的選擇性的變異。（7 ）CAPS 標(biāo)記：是特異引物 PCR 與限制性酶切相結(jié)合而產(chǎn)生 的一種DNA標(biāo)記，當(dāng)SCAR或S

38、TS的特異擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳譜帶不表 現(xiàn)多態(tài)性時(shí)，一種補(bǔ)救辦法就是第二種用限制性內(nèi)切酶對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn) 行酶切，然后通過瓊脂糖或聚丙烯胺凝膠電泳檢測其多態(tài)性，這種多 態(tài)性稱為 CAPS 標(biāo)記。它揭示的是特異 PCR 產(chǎn)物 DNA 序列鼻花內(nèi)則 限制性酶切位點(diǎn)變異的信息，也表現(xiàn)為限制性片段長度的多態(tài)性。（8）SNP 標(biāo)記：單核苷酸多態(tài)性。不同個(gè)體基因組 DNA 序列 同一位置上的單個(gè)多肽的差別。其比較的不是 DNA 的片段長度，而 是相同堿基長度里的單個(gè)堿基的差別。解析：空7、選擇題（ 12 分，每題 1 分）1. 下列哪一種蛋白質(zhì)或酶最不可能是癌基因的編碼產(chǎn)物？（ ）A 蛋白質(zhì)磷酸酶B 蛋白質(zhì)磷酸激酶

39、C 轉(zhuǎn)錄因子D. GTP 酶答案：A解析：蛋白磷酸酶是具有催化已經(jīng)磷酸化的蛋白質(zhì)分子發(fā)生去磷酸化反應(yīng)的一類酶分子，與蛋白激酶相對應(yīng)存在，共同構(gòu)成了磷酸化和磷酸化這一重要的蛋白質(zhì)活性的開關(guān)系統(tǒng)。癌基因編碼的產(chǎn)物大多無需 去磷酸化，因此答案選。2. 細(xì)胞分化時(shí)不發(fā)生（ ）。A. DNA去甲基化B. 組蛋白乙?；疌. 重編程（ reprogramming ）D. 基因沉默答案： C解析：3. DNA 變性是指（ ）。 浙江海洋大學(xué) 2019研A 多核苷酸鏈解聚B 互補(bǔ)堿基之間氫鍵斷裂C 分子中磷酸二酯鍵斷裂D. DNA分子由超螺旋-雙螺旋答案：B解析：4. 根據(jù)構(gòu)建方法的不同，基因文庫可分為基因組文庫、cDNA文庫等。下列文庫中，哪項(xiàng)屬于cDNA文庫？（）A. MAC文庫B. BAC文庫C. 扣除文庫D. YAC文庫答案： C解析： cN 文庫是指某生物某一發(fā)育時(shí)期所轉(zhuǎn)錄的 mRN 全部經(jīng)反轉(zhuǎn)錄 已經(jīng)形成的 cN 片段與某種載體連接而形成的催生州列的集合?？鄢?庫又稱為德圣茹文庫，是反映不同組織和細(xì)胞或同一細(xì)胞在不同功用 狀態(tài)下，基因表達(dá)差異的 cN 文庫。因此答案選。5. cAMP與CRP吉合形成復(fù)合物cAMPCR介導(dǎo)的正性調(diào)節(jié)發(fā)生在（ ）。A. 沒有葡