半夏中總生物堿及鳥苷含量動態(tài)變化研究-

1、半夏中總生物堿及鳥苷含量動態(tài)變化研究陳華國1,2,湯洪波1,周欣1,23,胡曉娜1(1.貴州師范大學天然藥物質量控制研究中心,貴州貴陽550001;2.貴州省山地環(huán)境信息系統(tǒng)與生態(tài)環(huán)境保護重點實驗室,貴州貴陽550001摘要目的對半夏中總生物堿及鳥苷的含量變化進行動態(tài)研究,為半夏的合理采收及G AP 種植提供科學依據(jù)。方法分別采用分光光度法和高效液相色譜法對貴州不同產(chǎn)地、不同采收季節(jié)、不同海拔高度半夏中總生物堿、鳥苷進行含量測定。結果半夏中總生物堿范圍在0.0090%0.0320%,鳥苷范圍在0.0004%0.0240%,貴州威寧縣10月采收的半夏總生物堿及鳥苷含量最高。結論該研究方法簡單快速

2、,結果可靠,可作為G AP 種植半夏藥材的質量控制方法。關鍵詞半夏藥材;總生物堿;鳥苷;UV;HP LC 中圖分類號R 284.1文獻標識碼A 文章編號0517-6611(201003-01242-03D ynam i c D eterm i n a ti on of A lka lo i d Content and Guanosi n e i n Rhizoma P inellia rerna taCHEN Hua 2guo et a l (The Research Center for Quality Control of Natural Medicine;Guizhou Nor mal

3、University;Guiyang,Guizhou 550001Abstract Objective The study ai med to p rovide scientific basis for reasonable harvest and G AP p lant of Pinellia rernata by dynam ic deter 2m ination of its alkaloid content and guanosine .Method U sing methods of UV and HPLC t o deter m ine alkaloid content and g

4、uanosine in Rhi 2zoma Pinellia rernata at different p laces,seasons and heights .Result The range of alkal oid content in Pinellia ternat was 0.0090%-0.0320%.The range guanosine was 0.0004%-0.0240%.The contents of the t wo chem ical compositi ons were the highest on Oct ober .Conclusion This method

5、has good rep roducibility .It can be used for quality contr ol of G AP p lant for Rhizoma Pinellia ternate .Key words Pinellia ternate ;A lkaloid content;Guanosine;UV;HPLC基金項目貴州省高層次人才科研條件特助經(jīng)費項目TZJF 22006226;貴州省中小企業(yè)局平臺建設項目(黔中小發(fā)200876號。作者簡介陳華國(1981-,男,貴州遵義人,碩士,講師,從事中藥、民族藥質量控制以及中藥新藥研發(fā)工作。3通訊作者,博士,教授,E 2

6、mail:alice9800sina .com 。收稿日期2009209221半夏為天南星科植物半夏Pinellia ternata (Thunb .B re 2it .的干燥塊莖,具有燥濕化痰、降逆止嘔、消痞散結之功效,其臨床應用十分廣泛。研究人員曾對不同居群半夏中2谷甾醇、精氨酸和纈氨酸進行平行比較1,對半夏不同發(fā)育期的總生物堿以及炮制方法對半夏質量的影響進行研究2-5。筆者采用平行比較方法對貴州不同產(chǎn)地、不同采收季節(jié)、不同海拔高度半夏中總生物堿及鳥苷的含量進行動態(tài)比較,為半夏的合理采收及G AP 種植提供部分科學依據(jù)。1材料與方法1.1材料普,HP1100高效液相色譜儀,自動進樣器,二極

7、管陣列(DAD 檢測器。色譜柱為Hy persil ODS 2(大連依利特;K Q 2250B 型超聲波清洗器;LDZ420.8型臺式離心機;1/100000電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司。定為天南星科植物半夏Pinellia ternata (Thunb .B reit .的干燥塊莖。香草酚藍標準溶液6,甲醇為色譜純(美國TE D I A 公司,水為重蒸水,其余試劑為分析純。1.2方法樣器,DAD 檢測器,色譜柱為Hy persil ODS 2(大連依利特,流動相為Me OH -0.01%HAC (397,檢測波長254n m 。上清液。合并3次超聲提取的上清液,水浴濃縮,定容至10.

8、0m l 容量瓶中,過0.45m 濾膜,備用。制成濃度為0.1042mg/m l 的鳥苷標準溶液。分別精密吸取上述標準溶液0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00、3.50、4.50、6.00、7.50m l,置于10.00m l 容量瓶中,用蒸餾水稀釋至刻度,搖勻,得到不同濃度的標準品溶液。分別用以上各標準品溶液進樣,每個濃度進樣3次,取峰面積的平均值,以標準品濃度對平均峰面積值進行回歸。溶液,進樣量10l,重復測定6次。法制備樣品溶液,隔0、1.5、2.5、3.5、4.5、5.5、6.5、7.5h 進樣1次,進樣量10l 。定,平行6份,按供試品制備方法制備樣品溶液,每份

9、進樣1次,進樣10l,計算含量。平行9份,按80%、100%、120%量加入標準品溶液,按供試品制備方法制備成待測的樣品溶液,每份樣品進樣3次,進樣量10l 。責任編輯李菲菲責任校對盧瑤安徽農(nóng)業(yè)科學,Journal of Anhui Agri .Sci .2010,38(3:1242-1244的對照品溶液0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9m l于分液漏斗內,補加蒸餾水至1.0m l,加入10.0m l pH值6.0的緩沖溶液,再加入10.0m l氯仿和1.0m l溴麝草酚藍標準溶液,充分振搖后靜置0.5h,分取氯仿層。水層再用氯仿萃取2次,每次10.0m l。合并氯仿層,水

10、浴80以下回收至干,再用氯仿溶解定容至10.0m l。同法制備空白樣品,于420n m波長處測定吸收度A。以鹽酸麻黃堿的濃度C為橫坐標、吸收度A為縱坐標做標準曲線。2結果與分析2.1半夏中鳥苷含量測定結果線性關系考察,得到回歸方程為y=33.6710x+9.0321,=0.9998,鳥苷在2.09 31.28mg/m l范圍內線性關系良好。精密度試驗得,RSD為0.7%,表明儀器精密度良好。穩(wěn)定性試驗結果表明,樣品中的鳥苷峰面積在7.5h內穩(wěn)定,RSD為1.8%。重復性試驗得出RSD為1.8%,結果表明重復性良好。回收率試驗得出,根據(jù)峰面積值及加入的標準品量計算回收率為(100.03±

11、;1.40%,RSD為1.4%,樣品含量測定結果見表1、2、3,鳥苷含量動態(tài)變化見圖1。2.2半夏中總生物堿含量測定結果制得供試品及對照品溶液后,求得標準曲線為y=42.578x+0.0318(= 0.9999,結果表明在pH值6.0時,鹽酸麻黃堿濃度在6.0 18.0g/L呈良好的線性關系。其樣品中總生物堿含量測定結果見表1、2、3,半夏中總生物堿含量動態(tài)變化見圖2。3討論(1半夏的成分比較復雜,生物堿及鳥苷均是半夏藥理作用的主要有效成分8,故該研究選用總生物堿和鳥苷含量為考查指標對不同產(chǎn)地、不同采收季節(jié)及不同海拔高度的半夏進行試驗研究。(2試驗結果表明,不同產(chǎn)地半夏中總生物堿及鳥苷含量均不

12、同,其中總生物堿范圍在0.0090%0.0320%,高低相差3.5倍多,以貴州威寧10月采收的半夏總生物堿含量最高;鳥苷范圍在0.0004%0.0240%,高低相差60多倍,以貴州威寧10月采收的半夏鳥苷含量最高。表1不同產(chǎn)地半夏總生物堿及鳥苷的含量(n=3Table1Tot a l a lka lo i d and the guanosi n e content of d i fferen t Produ2c i n g area s i n P inellia terna te編號Code產(chǎn)地來源Pr oducingarea res ource采收時間Harvestti m e總生物堿%T

13、 otalalkal oid鳥苷%Guano2sine表2貴州省赫章縣不同海拔高度半夏總生物堿及鳥苷的含量(n=3 Table2Tot al a lka lo i d and the guanosi n e con ten t of di fferen t altitudesi n P inellia terna te w ith Gui zhou provi n ce Hezhang county編號Code產(chǎn)地來源Pr oducingarea res ource海拔高度mA ltitudeheight總生物堿%T otalalkal oid鳥苷%Guano2sine表3貴州省威寧縣不同采收

14、時間半夏總生物堿及鳥苷的含量(n=3 Table3Tot al a lka lo i d and the guanosi n e content of d i fferent s ampli n g ti m e i n P inellia terna te w ith Gui zhou provi n ce W ei n i n gcoun ty 編號Code產(chǎn)地來源Pr oducingarea res ource采收時間Harvestti m e平均總生物堿含量%Average t otalalkal oid content平均鳥苷含量%Average guano2sine content

15、注:每個采收時間在貴州省威寧縣半夏規(guī)范管理種植基地取10采樣點,每個采樣點樣品測定3次。Note:Each harvest ti m e takes10sa mp ling points at Pinellia ternate stand2 ard manage ment planting base inWeining County,Guizhou Pr ovince,Each sa mpling point measured three ti m es.342138卷3期陳華國等半夏中總生物堿及鳥苷含量動態(tài)變化研究 圖1半夏鳥苷含量動態(tài)變化F i g .1The dynam i c of a

16、 lkalo i d content i n P inellia terna te圖2半夏總生物堿動態(tài)變化F i g .2The dynam i c changes of guanosi n e con ten t i n P inelliaterna te(3不同海拔高度半夏中總生物堿及鳥苷的含量也存在差異,以貴州赫章產(chǎn)半夏為例,海拔1700m 生長的半夏中總生物堿含量是海拔1500m 生長的半夏的1.3倍;海拔1200m 生長的半夏中鳥苷含量是海拔1500m 生長的半夏的2.4倍。(4半夏總生物堿的含量的動態(tài)變化在812月這段時間是先下降然后上升再下降的過程,這可能與半夏的栽培有關系,因為

17、半夏的種植經(jīng)過“3次倒苗”9,在第3次倒苗時采集的半夏樣品的總生物堿的含量較高。(5上述試驗結果表明,半夏的鳥苷含量在10與11月之交達到最高值,所以應該在10與11月之間選擇天氣晴朗的時間采收半夏。參考文獻1郭巧生,段金廒,賀善安,等.半夏不同居群3種化學成分的動態(tài)比較研究J .中國中藥雜志,2001,26(5:296-299.2修彥鳳,楊守娟,張永太.姜半夏質量標準的研究J .中華中醫(yī)藥雜志,2007,22(2:87-89.3姜舜堯,田頌九,劉瓊,等.用2種高效液相色譜分離模式分析測定半夏露糖漿中麻黃堿、偽麻黃堿成分J .藥物分析雜志,2005,25(5:487-489.4吳皓,文紅梅,郭

18、戎,等.半夏姜制對鳥苷含量的影響J .中國中藥雜志,1998,23(11:661-663.5李西文,馬小軍,宋經(jīng)元,等.半夏不同生長發(fā)育時期總生物堿含量動態(tài)變化的研究J .中國中藥雜志,2006,31(8:687-688.6國家藥典委員會.中國藥典,一部M .北京:化學工業(yè)出版社,2005:100.7于超,張明,王宇,等.栽培、野生及不同產(chǎn)地半夏總生物堿測定J .中國中藥雜志,2004,29(6:583-584.8李玉先,劉曉東,朱照靜.半夏藥理作用的研究述要J .遼寧中醫(yī)學院學報,2004,11(6:459-460.9陸善旦,胡廷松,陳振杰.名貴中藥材高產(chǎn)栽培技術M .南寧:廣西科學出版社,

19、1990:130-136.(上接第1228頁表1回流提取與超聲波提取結果Table 1The results of reflux extracti on and ultra son i c extracti on方法Extracti onmethod 溶劑S olvent溫度Te mpe 2rature 液固比L iquid 2s olid rati o 時間h Ti m e 提取率%Extracti onrate 超聲波提取76%乙醇50410.58.52U ltras onic extracti on熱回流提取Hot reflux extracti on作。結果表明,蘆丁加標回收率達96.

20、65%105.85%,平均回收率為100.07%,相對標準誤差為2.64%。由此可知,采用該方法對綠茶中總黃酮進行定量分析是可行的,結果可靠。2.6樣品測定選取5個四川產(chǎn)綠茶樣品,按“1.2”測定總黃酮含量。由表2可知,與貴州產(chǎn)綠茶3中總黃酮類含量相比較,川產(chǎn)綠茶含量較高。因此,值得進一步開發(fā)四川產(chǎn)綠茶。參考文獻1周正邦.黔西南州茶葉開發(fā)的優(yōu)勢與可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略J .貴州農(nóng)業(yè)科學,1998,26(4:51-53.2李任強,吳志煒.茶、紅茶、銀杏葉的黃酮類物質的比較分析初報J .福建茶葉,1997(3:30-31.表2樣品測定結果Table 2The results of d i fferen t s am ples產(chǎn)地Place of origin名稱Sa mp les na me總黃酮含量mg/gt otal flavonoid