血清蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳

1、會(huì)計(jì)學(xué)1血清蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳血清蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果結(jié)果聚丙烯酰胺凝膠電泳可分為聚丙烯酰胺凝膠電泳可分為連續(xù)連續(xù)電泳電泳和和不連續(xù)不連續(xù)電泳電泳兩類兩類 連續(xù)電泳連續(xù)電泳指整個(gè)電泳系統(tǒng)中所用指整個(gè)電泳系統(tǒng)中所用緩沖緩沖液，液，pH值和凝膠網(wǎng)孔的值和凝膠網(wǎng)孔的孔徑孔徑都是相同的。都是相同的。不連續(xù)電泳不連續(xù)電泳是指在電泳系統(tǒng)中采用了是指在電泳系統(tǒng)中采用了兩種或兩種以上的緩兩種或兩種以上的緩沖沖液，液，pH值和孔徑值和孔徑。不連續(xù)電泳能使稀的樣品在電泳過(guò)程不連續(xù)電泳能使稀的樣品在電泳過(guò)程中中濃縮濃縮成層，從而提高分辨能力成層，從而提高分辨能力電極緩沖液：電極緩沖液：Tris-Gly溶液

2、（溶液（pH8.3）濃縮膠緩沖液：濃縮膠緩沖液：Tris-Cl溶液（溶液（pH6.7）分離膠緩沖液：分離膠緩沖液：Tris-Cl溶液（溶液（pH8.9）溶液中主要的負(fù)離子：溶液中主要的負(fù)離子：pI:血清蛋白質(zhì)（血清蛋白質(zhì)（5.0左右）左右）甘氨酸（甘氨酸（5.97）以及完全解離的以及完全解離的Cl離子離子形成先導(dǎo)離子（快離子）、尾隨離子（慢離子）形成先導(dǎo)離子（快離子）、尾隨離子（慢離子） 在緩沖系統(tǒng)中的弱酸，如甘氨酸，在pH6.7時(shí)很少解離，其有效泳動(dòng)速率很低，而氯離子卻有很高的泳動(dòng)速率，蛋白質(zhì)的泳動(dòng)速率介于兩者之間。加上電壓以后，作為先導(dǎo)離子的氯離子和尾隨離子的甘氨酸離子分離開(kāi)來(lái)，并在其后面

3、留下一個(gè)導(dǎo)電性較低的區(qū)帶。由于導(dǎo)電性和電場(chǎng)強(qiáng)度成反比，這一區(qū)帶便獲得較高的電壓梯度，加速甘氨酸離子的泳動(dòng)，使其趕上氯離子，建立起甘氨酸和氯離子的電壓梯度和泳動(dòng)速率乘積相等的穩(wěn)定態(tài)，使這些帶電顆粒以相同的速度泳動(dòng)，兩種離子之間有明顯的邊界。當(dāng)甘氨酸、氯離子界面通過(guò)樣品進(jìn)入濃縮膠時(shí)，在移動(dòng)界面前有一低電壓梯度，界面后有一高電壓梯度。由于在移動(dòng)界面前的蛋白質(zhì)分子泳動(dòng)速率比氯離子低，因此氯離子能迅速越過(guò)。移動(dòng)界面后的蛋白質(zhì)處于較高的電壓梯度中，其泳動(dòng)速率比甘氨酸快。因此，移動(dòng)的界面將蛋白質(zhì)分子堆積到一起，形成一條狹窄的區(qū)帶。由于濃縮膠為大孔凝膠，故對(duì)蛋白樣品沒(méi)有分子篩作用。當(dāng)移動(dòng)的界面到達(dá)濃縮膠和分離

4、膠的界面時(shí)，凝膠的pH明顯增加，導(dǎo)致甘氨酸大量解離。此時(shí)，甘氨酸的有效泳動(dòng)速率明顯增加，超越蛋白分子，直接在氯離子后移動(dòng)。由于凝膠孔徑變小，蛋白質(zhì)分子的遷移速率降低，落在后面的蛋白質(zhì)便在均一的電壓梯度和pH環(huán)境中泳動(dòng)，并根據(jù)其固有的電荷與分子大小進(jìn)行分離。 可見(jiàn)，甘氨酸并非作為緩沖成分甘氨酸并非作為緩沖成分參與，而是作為尾隨離子來(lái)參與電泳過(guò)程。分離膠分離膠濃縮膠濃縮膠（過(guò)硫酸銨后加）（過(guò)硫酸銨后加）1%AP：過(guò)硫酸銨（引發(fā)劑）過(guò)硫酸銨（引發(fā)劑）1%TEMED：四甲基乙二胺（催化劑）四甲基乙二胺（催化劑）引發(fā)劑在凝膠形成中提供自由基，通過(guò)自由基的傳遞，引發(fā)劑在凝膠形成中提供自由基，通過(guò)自由基的傳遞，使丙烯酰胺成為自由基，導(dǎo)致聚合反應(yīng)。使丙烯酰胺成為自由基，導(dǎo)致聚合反應(yīng)。催化劑則可加快引發(fā)劑產(chǎn)生自由基的速度。催化劑則可加快引發(fā)劑產(chǎn)生自