雞場(chǎng)抗體水平檢測(cè)與解讀

1、雞場(chǎng)抗體檢測(cè)與解讀雞場(chǎng)抗體檢測(cè)與解讀 PVMPVM動(dòng)保中心動(dòng)保中心-出欄肉雞抗體檢測(cè)周報(bào)出欄肉雞抗體檢測(cè)周報(bào) ( (第第4747周周 1111月月1616日日-11-11月月2222日日) )公司公司 序號(hào)序號(hào) 客戶客戶日齡日齡項(xiàng)目項(xiàng)目HIHIELISAELISA免疫計(jì)劃免疫計(jì)劃-4-4-5-5H9H9NDNDIBVIBVIBDIBDREOREO天津天津1 1陳久長(zhǎng)陳久長(zhǎng) 41ds41dsMAXMAX3 30 01 110104699469945534553455645561 1日齡日齡 公司首免公司首免MIXMIX1 10 00 02 2388388116811688788789 9日齡日齡

2、 新支妥新支妥 瑞普瑞普 點(diǎn)眼點(diǎn)眼GMTGMT1.8 1.8 1.0 1.0 1.0 1.0 4.3 4.3 1579.1761579.1767 72296.22296.21919.25571919.2557CV%CV%27 27 0 0 212 212 45 45 71.4165471.416545 5414151.54965651.5496562 2李家來(lái)李家來(lái) 42ds42dsMAXMAX2 20 01 19 92291229125672567282228221 1日日 公司首免公司首免MIXMIX0 00 00 04 4164164143214322372377 7日齡日齡 新支妥新支

3、妥 瑞普瑞普 點(diǎn)眼點(diǎn)眼 GMTGMT1.4 1.4 1.0 1.0 1.0 1.0 5.9 5.9 1070.5 1070.5 1851.2 1851.2 1152.4 1152.4 2121日齡日齡 新威靈新威靈 梅里梅里亞亞 飲水飲水 CV%CV%100 100 0 0 173 173 27 27 53 53 22 22 52 52 3 3劉廣利劉廣利 43ds43dsMAXMAX3 30 06 67 71657165756985698274627461 1日齡日齡 公司首免公司首免MIXMIX1 10 01 12 22332331404140472729 9日齡日齡 新支妥新支妥 瑞普瑞

4、普 點(diǎn)眼點(diǎn)眼GMTGMT1.3 1.3 1.0 1.0 1.7 1.7 3.6 3.6 512.1 512.1 3131.6 3131.6 532.0 532.0 CV%CV%58 58 0 0 91 91 42 42 69 69 37 37 101 101 抗體檢測(cè)周報(bào)血凝（血凝（HA）和血凝）和血凝(HI)抑制試驗(yàn)抑制試驗(yàn)-以新城疫為例以新城疫為例血凝試驗(yàn)（血凝試驗(yàn)（HA），），目的：滴定病毒的血凝效價(jià)；原理：某些病毒或病毒的血凝素能選擇性地使某種動(dòng)物的紅細(xì)胞發(fā)生凝集，這種凝集紅細(xì)胞的現(xiàn)象稱為血凝（HA）,也稱直接血凝反應(yīng)。病病毒毒顆顆粒粒紅細(xì)胞紅細(xì)胞4血凝效價(jià)測(cè)定步驟血凝效價(jià)測(cè)定步驟12

5、345678910111224816326412825651210242048紅細(xì)胞對(duì)照生理鹽水505050505050505050505050抗原5050505050505050505050棄50紅細(xì)胞505050505050505050505050結(jié)果1.在血凝板上第一排的112孔內(nèi)各加入50ul生理鹽水2. 在第1孔內(nèi)加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀釋至第11孔，最后棄50ul。3.每孔加入1雞紅細(xì)胞懸液50ul4.輕輕振蕩均勻，后放于室溫或37中靜置30分鐘5.結(jié)果判定結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：1、：紅細(xì)胞呈細(xì)沙樣均勻鋪于孔底，即100凝集；2、：紅細(xì)胞均勻鋪于孔底，當(dāng)邊緣不整齊而稍向孔底集中

6、，即75凝集；3、 ：紅細(xì)胞形成一個(gè)環(huán)狀，四周有凝集塊，即50凝集；4、 ：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣不夠光滑，四周稍有凝集塊，即25凝集；5、 ：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣光滑整齊，即無(wú)凝集。以100% 凝集的病毒最大稀釋度為該病毒的血凝價(jià)，即為一個(gè)凝集單位。上表看出，該新城疫病毒液的血凝價(jià)為1:32，則l:32為1個(gè)血凝單位，1:16、l:8分別為2、4個(gè)血凝單位，或?qū)?2/4=8，即1:8稀釋的病毒液為4個(gè)血凝單位。根據(jù)判定結(jié)果，吸取1毫升已稀釋的病原溶液再以8倍稀釋，即為4個(gè)血凝單位的標(biāo)準(zhǔn)抗原，以備凝血抑制試驗(yàn)使用。+ + + + -血凝試驗(yàn)（HA）結(jié)果判定血凝抑制試驗(yàn)（血凝抑制試驗(yàn)（

7、HI），目的，確定抗體水平；原理：當(dāng)在病毒的懸液中加入特異性抗體，且這種抗體的量足以抑制病毒顆?；蚱溲貢r(shí)，則紅細(xì)胞表面的受體就不能與病毒顆?；蜓刂苯咏佑|。這時(shí)紅細(xì)胞的凝集現(xiàn)象就被抑制，稱為紅細(xì)胞凝集抑制（HI）反應(yīng)，也稱血凝抑制反應(yīng)。I am late！抗體抗體抗原抗原71、在血凝板上112孔內(nèi)各加入50ul生理鹽水；2、在第1孔內(nèi)加入被檢血清50ul，然后倍比稀釋至第11孔，最后棄50ul；3、第112孔內(nèi)加入4個(gè)單位血凝抗原50ul（第12孔為病毒對(duì)照）；4、每孔加入1雞紅細(xì)胞懸液50ul；5、輕輕振蕩均勻，后放于室溫或37中靜置30分鐘6、結(jié)果判定血凝抑制試驗(yàn)步驟血凝抑制試驗(yàn)步驟

8、12345678910111224816326412825651210242048病毒對(duì)照生理鹽水505050505050505050505050血清5050505050505050505050棄504單位抗原505050505050505050505050紅細(xì)胞505050505050505050505050結(jié)果血凝抑制試驗(yàn)（HI）結(jié)果判定結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)同血凝試驗(yàn)（結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)同血凝試驗(yàn)（HAHA）。將反應(yīng)板傾斜成將反應(yīng)板傾斜成4545度角，沉于管底的細(xì)細(xì)胞沿著傾斜面向下呈線狀流動(dòng)者為沉淀度角，沉于管底的細(xì)細(xì)胞沿著傾斜面向下呈線狀流動(dòng)者為沉淀，表明紅細(xì)胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的紅細(xì)胞

9、鋪平孔底，凝成均勻薄，表明紅細(xì)胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的紅細(xì)胞鋪平孔底，凝成均勻薄層，傾斜后紅細(xì)胞不流動(dòng)，說(shuō)明紅細(xì)胞被病毒所凝集。能將層，傾斜后紅細(xì)胞不流動(dòng)，說(shuō)明紅細(xì)胞被病毒所凝集。能將4 4單位病毒物質(zhì)凝集紅單位病毒物質(zhì)凝集紅細(xì)胞的作用完全抑制的血清最高稀釋倍數(shù)，稱為該血清的紅細(xì)胞凝集抑制效價(jià)，用細(xì)胞的作用完全抑制的血清最高稀釋倍數(shù)，稱為該血清的紅細(xì)胞凝集抑制效價(jià)，用被檢血清的稀釋倍數(shù)或以被檢血清的稀釋倍數(shù)或以2 2為底的對(duì)數(shù)為底的對(duì)數(shù)(10g2)(10g2)表示。如上例，該血清的紅細(xì)胞凝集表示。如上例，該血清的紅細(xì)胞凝集抑制效價(jià)為抑制效價(jià)為1 1：4 4或或HIHI效價(jià)為效價(jià)為2

10、(10g2)2(10g2)。稀釋倍數(shù)24816326412825651210242048血清對(duì)照結(jié)果(1)(1)一般認(rèn)為雞的免疫臨界水平為一般認(rèn)為雞的免疫臨界水平為1:8(1:8(成年成年) )或或1:16(1:16(雛雞雛雞) )，隨地區(qū)不同而稍有差異，隨地區(qū)不同而稍有差異。(2)(2)雞血清雞血清HIHI抗體效價(jià)高于抗體效價(jià)高于1:161:16時(shí)可適當(dāng)推遲新城疫免疫的時(shí)間，時(shí)可適當(dāng)推遲新城疫免疫的時(shí)間，HIHI抗體效價(jià)在抗體效價(jià)在1:161:16以下，以下，須進(jìn)行新城疫疫苗接疫種，在新城疫流行的地區(qū)或雞場(chǎng)，雞的免疫臨界水平應(yīng)稍提高。須進(jìn)行新城疫疫苗接疫種，在新城疫流行的地區(qū)或雞場(chǎng)，雞的免疫

11、臨界水平應(yīng)稍提高。(3)(3)雞群的雞群的HIHI抗體水平（血凝抑制滴度）是以抽檢樣品的抗體水平（血凝抑制滴度）是以抽檢樣品的HIHI抗體效價(jià)抗體效價(jià)(log2)(log2)的幾何平均值表的幾何平均值表示的。如果某雞群的示的。如果某雞群的1010份樣品中，份樣品中，HIHI抗體效價(jià)抗體效價(jià)(log2)(log2)為為8 8的有的有3 3份樣品，為份樣品，為7 7的有的有5 5份樣品，份樣品，為為6 6的有的有2 2份樣品，它們的平均值為：（份樣品，它們的平均值為：（ 8 83 37 75 56 62 2）/ /（3 35 52 2）7.1;7.1;平均水平平均水平在在4(10g2)4(10g2

12、)以上，說(shuō)明該雞群為免疫雞群。若在檢樣中以上，說(shuō)明該雞群為免疫雞群。若在檢樣中HIHI抗體效價(jià)的最高值與最低值相差太抗體效價(jià)的最高值與最低值相差太大時(shí)，則不能用上法計(jì)算平均水平，應(yīng)根據(jù)臨界水平以下的樣品數(shù)在全部樣品中所占的百大時(shí)，則不能用上法計(jì)算平均水平，應(yīng)根據(jù)臨界水平以下的樣品數(shù)在全部樣品中所占的百分比決定免疫與否。分比決定免疫與否。(4)(4)大型養(yǎng)雞場(chǎng)，每次進(jìn)行抽測(cè)時(shí)，抽樣率一般不低于大型養(yǎng)雞場(chǎng)，每次進(jìn)行抽測(cè)時(shí)，抽樣率一般不低于0.10.1一一0.50.5，小型雞群，抽樣率應(yīng)，小型雞群，抽樣率應(yīng)有所增加，一般認(rèn)為理想的抽樣率應(yīng)為有所增加，一般認(rèn)為理想的抽樣率應(yīng)為2.02.0。(5)(5)

13、雞群接種新城疫疫苗后，經(jīng)雞群接種新城疫疫苗后，經(jīng)2 23 3周測(cè)血清中的周測(cè)血清中的HIHI抗體效價(jià)，若提高抗體效價(jià)，若提高2 2個(gè)滴度以上，表示個(gè)滴度以上，表示雞的免疫應(yīng)答良好，疫苗接種成功；若雞的免疫應(yīng)答良好，疫苗接種成功；若HIHI抗體效價(jià)無(wú)明顯提高，表示免疫失敗?？贵w效價(jià)無(wú)明顯提高，表示免疫失敗。（6 6）若有）若有10%10%以上的雞群出現(xiàn)以上的雞群出現(xiàn)1111 (log2)以上的高血凝抑制滴度，說(shuō)明雞群已受新城疫強(qiáng)毒以上的高血凝抑制滴度，說(shuō)明雞群已受新城疫強(qiáng)毒感染。若監(jiān)測(cè)雞群的免疫水平，用血凝抑制滴度在感染。若監(jiān)測(cè)雞群的免疫水平，用血凝抑制滴度在4(log2)4(log2)的雞群保

14、護(hù)率為的雞群保護(hù)率為50%50%左右；在左右；在4(log2)4(log2)以上保護(hù)率達(dá)以上保護(hù)率達(dá)90-100%90-100%；在；在4(log2)4(log2)以下的非免疫雞群保護(hù)率約以下的非免疫雞群保護(hù)率約9%9%，免疫過(guò)的雞群為，免疫過(guò)的雞群為43%43%。公司公司序號(hào)序號(hào)客戶客戶日齡日齡項(xiàng)目項(xiàng)目HIHI-4-4-5-5H9H9NDND天津天津1 1陳久長(zhǎng)陳久長(zhǎng)41ds41dsMAXMAX3 30 01 11010MIXMIX1 10 00 02 2GMTGMT1.8 1.8 1.0 1.0 1.0 1.0 4.3 4.3 CV%CV%27 27 0 0 212 212 45 45 2

15、 2李家來(lái)李家來(lái)42ds42dsMAXMAX2 20 01 19 9MIXMIX0 00 00 04 4GMTGMT1.4 1.4 1.0 1.0 1.0 1.0 5.9 5.9 CV%CV%100 100 0 0 173 173 27 27 3 3劉廣利劉廣利43ds43dsMAXMAX3 30 06 67 7MIXMIX1 10 01 12 2GMTGMT1.3 1.3 1.0 1.0 1.7 1.7 3.6 3.6 CV%CV%58 58 0 0 91 91 42 42 如上表所示：如上表所示：MAX為多個(gè)樣品中的為多個(gè)樣品中的HI抗體滴度最大值；抗體滴度最大值；MIX為為HI抗體滴度最

16、小值；抗體滴度最小值；GMT為為多個(gè)樣品的多個(gè)樣品的HI幾何平均滴度；幾何平均滴度；CV%為變異系數(shù)或離散度。為變異系數(shù)或離散度。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,其基本過(guò)程是將抗原或抗體吸附于同相載體，在載體上進(jìn)行免疫酶反應(yīng)，底物顯色后用肉眼或分光光度計(jì)判定結(jié)果。整個(gè)反應(yīng)都必須在抗原結(jié)合抗體的最適條件下進(jìn)行。每次試驗(yàn)時(shí)都需設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。ELISA的核心是利用抗原抗體的特異性吸附，在固相載體上一層層的疊加，可是是兩層、三層甚至多層，猶如搭積木一樣。雙抗體夾心法雙抗體夾心法ELISA結(jié)果表示1、用陽(yáng)性用陽(yáng)性“+ +”與陰性與陰性“- -”表示表示 若樣本的OD值超

17、過(guò)規(guī)定吸收值判為陽(yáng)性，否則為陰性。（規(guī)定吸收值=一組陰性樣本的吸收值之均值+2倍或3倍SD,SD為標(biāo)準(zhǔn)差）。2、以以P/NP/N比值表示比值表示 樣本的OD值與一組陰性樣本OD值均值之比即為P/N比值，若樣本的P/N值1.5、2或3倍，即判為陽(yáng)性。3、以終點(diǎn)滴度（即以終點(diǎn)滴度（即ELISAELISA效價(jià)，簡(jiǎn)稱效價(jià)，簡(jiǎn)稱ETET）表示）表示 將樣本倍比稀釋，測(cè)定各稀釋度的OD值，高于規(guī)定吸收值（或P/N1.5、2或3倍）的最大稀釋度即仍出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)的最大稀釋度，即為樣本的ELISA滴度或效價(jià)。可以做出OD值與效價(jià)之間的關(guān)系，樣本只需做一個(gè)稀釋度即可推算出其效價(jià)。4、定量測(cè)定定量測(cè)定 事先用標(biāo)準(zhǔn)抗

18、原制備一條OD值與濃度的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)曲線；測(cè)出樣本的OD值，根據(jù)曲線查出抗原濃度。序號(hào)序號(hào) 檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果分析檢測(cè)結(jié)果分析備注備注1ND（新城疫）1、 蛋/種雞群：ND抗體在正常檢測(cè)離散范圍應(yīng)為6log212log2，離散范圍越小越能說(shuō)明雞群免疫應(yīng)答反應(yīng)好，如抗體滴度13log2，且離散范圍大如：6log215log2，提示雞群可能受外界毒株感染所致。2、 肉雞群：ND抗體正常檢測(cè)離散范圍在0log2-10log2之間，如抗體滴度11 log2，提示雞群可能受外界毒株感染所致。提示：兩者離散范圍大小是評(píng)價(jià)雞群免疫應(yīng)答反應(yīng)效果和野毒感染的評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)。發(fā)病前后714天抗體滴度升高2log24log2基本可以確定。2H9（禽流感）1、 蛋/種雞群H9抗體正常的檢測(cè)離散范圍應(yīng)為4log210log2，雞群持續(xù)接種疫苗后，雞群抗體離散范圍出現(xiàn)4log212og2也屬于正常，離散范圍越小越能說(shuō)明雞群免疫應(yīng)答反應(yīng)好，如抗體體滴度13log2，且離散范圍大如：6log215log2，提示雞群可能受外界毒株感染所致。2、 肉雞群：同ND相似。3H5（禽流感）1、 蛋/種雞群H5抗體正常檢測(cè)離散范圍應(yīng)為4log210log2，雞群感染后，抗體異常上升，且離散范圍大。2、 肉雞群：因該病感染和死亡涉及非常快，且病變典型，抗體對(duì)比意思不大。序號(hào)序號(hào) 檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果