微生物食源性疾病第二節(jié)

1、微生物食源性疾病第二節(jié) 1.葡萄球菌呈球形或稍呈橢圓形，直徑0.41.2分裂面不規(guī)則，菌體常常無規(guī)則堆積一起，呈葡萄串狀。 2.葡萄球菌無鞭毛，不能運(yùn)動(dòng)。無芽胞，除少數(shù)菌株外一般不形成莢膜。 3.革蘭氏染色為陽性。其衰老、死亡或被白細(xì)胞吞噬后，以及耐藥的某些菌株可被染成革蘭氏陰性。1.營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，在含有血液和葡萄糖的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)更佳，需氧或兼性厭氧，少數(shù)專性厭氧。2838均能生長(zhǎng)，致病菌最適溫度為37，PH為4.59.8，最適為7.4。2.在肉湯培養(yǎng)基中24小時(shí)后呈均勻混濁生長(zhǎng)，在瓊脂平板上形成圓形凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤(rùn)，不透明的菌落。二、培養(yǎng)與生理生化特性二

2、、培養(yǎng)與生理生化特性 3.不同種的菌標(biāo)產(chǎn)生不同的色素，如金黃色、白色、檸檬色。色素為脂溶性。葡萄球菌在血瓊脂平板上形成的菌落較大，有的菌株菌落周圍形成明顯的完全透明溶血環(huán)（溶血），也有不發(fā)生溶血者。凡溶血性菌株大多具有致病性。 3.生化特性 本屬菌觸酶試驗(yàn)陽性，對(duì)糖的發(fā)酵反應(yīng)不規(guī)則，多數(shù)能分解葡萄糖、麥芽糖及蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。多數(shù)致病性葡萄球菌能分解甘露醇產(chǎn)酸、液化明膠和產(chǎn)生血漿凝固酶。 葡萄球菌抗原構(gòu)造復(fù)雜，已發(fā)現(xiàn)的在30中以上，但是其目前了解化學(xué)組成及生物活性的只有以下幾種： 1.葡萄球菌A蛋白（） 2.多糖抗原 3.莢膜抗原1.SPA是大多數(shù)金色葡萄球菌細(xì)胞表面的一種蛋白，為完全抗原SP

3、A可與人類和多種哺乳動(dòng)物IgG的Fc段結(jié)合。SPA與IgG結(jié)合后的復(fù)合物具有抗吞噬、促細(xì)胞分裂、引起超敏反應(yīng)、損傷血小板等多種生物學(xué)活性。 此外，SPA與IgG Fc結(jié)合后IgG（除了IgG3）的Fab段仍能特異性結(jié)合抗原，可用于協(xié)同凝集試驗(yàn)，檢測(cè)多種細(xì)菌抗原或抗原抗體復(fù)合物。 SPA也是一種B細(xì)胞絲裂原，可使多克隆B細(xì)胞活化和增殖。.多糖抗原：為半抗原，具有群特異性，存在于細(xì)胞壁，借此可以分群，A群多糖抗原體化學(xué)組成為磷壁酸中的N-乙酰葡胺核糖醇?xì)埢群化學(xué)組成是磷壁酸中的N-乙酰區(qū)糖胺甘油殘基。.莢膜抗原：其幾乎所有金黃色葡萄球菌菌株的表面有莢膜多糖抗原的存在。表皮葡萄球菌僅個(gè)別是菌株有

4、此抗原。1.具有免疫原性與免疫反應(yīng)性的物質(zhì)，稱為完全抗原(complete antigen)，如大多數(shù)蛋白質(zhì)、細(xì)菌、病毒、細(xì)菌外毒素、動(dòng)物血清等。既能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞，并能與其在體內(nèi)、體外發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)。2.半抗原：其能與對(duì)應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)抗原-抗體反應(yīng)、又不能單獨(dú)激發(fā)人或動(dòng)物體產(chǎn)生抗體的抗原。它只有免疫反應(yīng)性，不具免疫原性，又稱不完全抗原。（一）金黃色葡萄球菌的毒素 金黃色葡萄球菌腸毒素：是金黃色葡萄球菌一種重要的致病物質(zhì)。本菌引起的食物中毒是因?yàn)槭称肺廴玖私瘘S葡萄球菌后，由細(xì)菌產(chǎn)生大量腸毒素而導(dǎo)致的。 腸毒素是一種可溶性蛋白質(zhì)，由單個(gè)無分枝的肽鏈組成。分子量約為3000左右

5、。易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑。 近年報(bào)導(dǎo)表明，50%以上的金黃色葡萄球菌菌株在實(shí)驗(yàn)室條件下可產(chǎn)生腸毒素，并且1個(gè)菌株能產(chǎn)生兩種或兩種以上的腸毒素。（二）金黃色葡萄球菌腸炎 金黃色葡萄球菌腸炎是金黃色葡萄球菌引起的，多因原發(fā)疾病長(zhǎng)期用抗生素引起腸道菌群失調(diào)所致，抗生素敏感菌株受到抑制，耐藥的金黃色葡萄球菌株趁機(jī)繁殖。金黃色葡萄球菌為侵襲性細(xì)菌，能產(chǎn)生毒素，對(duì)腸道破壞性大，所以金黃色葡萄球菌腸炎起病急，中毒癥狀嚴(yán)重，主要表現(xiàn)為嘔吐、發(fā)熱、腹瀉。（1）臨床癥狀 嘔吐常在發(fā)熱前出現(xiàn)，發(fā)熱很高。輕癥大便次數(shù)稍多，為黃綠色糊狀便；重癥大便次數(shù)頻繁，每日可達(dá)數(shù)十次，大便呈暗綠色水樣便，外觀像海水，所以叫海水樣

6、便。粘液多，有腥臭味，有時(shí)可排出片狀偽膜，將偽膜放入生理水，脫落的腸粘膜即漂在水面上，對(duì)診斷幫助很大。體液損失多，患兒脫水、電解質(zhì)紊亂和酸中毒嚴(yán)重，可發(fā)生休克。（2）檢測(cè)手段 挑選大便粘液部分涂片，在顯微鏡下檢查可見大量膿細(xì)胞，如經(jīng)革蘭氏染色，顯微鏡檢查可見成堆的大量革蘭氏陽性球菌。大便培養(yǎng)金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)，即可明確診斷。（三）引起金黃色葡萄球菌腸毒素中毒的食品1.糕、涼拌切粉、剩大米飯和米酒等2.熟肉類食品污染了致病葡萄球菌，又在20-30C的環(huán)境下放置較長(zhǎng)時(shí)間，極易引起食物中毒3.乳和乳制品以及用乳制作的冷飲4.被葡萄球菌污染的油煎雞蛋、熏魚、油浸魚罐頭等含油脂較多的食品（四）預(yù)防措施1

7、.主要對(duì)產(chǎn)乳牲畜應(yīng)嚴(yán)格檢疫，對(duì)患有乳房炎的奶牛產(chǎn)的乳不能作為食用2.要定期對(duì)食品從業(yè)人員進(jìn)行健康檢查。3.乳制品，特別是含乳的冷飲食品，必須使用經(jīng)消毒的優(yōu)質(zhì)乳為原料，加工、保藏必須按照衛(wèi)生操作規(guī)程進(jìn)行，防止再度污染。4.已被金黃色葡萄球菌污染的食品，不能再食用，因一般的烹調(diào)溫度不足以破壞腸毒素操作步驟：操作步驟：1.1.増菌増菌2.2.分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)3.3.血漿凝固酶試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn)4.4.腸毒素實(shí)驗(yàn)?zāi)c毒素實(shí)驗(yàn)5.5.致病性試驗(yàn)致病性試驗(yàn)（上述試驗(yàn)可初步判定葡萄球菌數(shù)目以及是否存在致病性葡萄球菌）吸取1：10的檢樣稀釋液5ml注入75g/L氯化鈉肉湯50ml中，3724h進(jìn)行増菌培養(yǎng)返回返

8、回將培養(yǎng)物劃線接種于卻甫曼氏平板或血瓊脂平板上。經(jīng)37培養(yǎng)2448h后觀察。挑取可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢。返回返回玻片法：玻片法：取一塊潔凈的載玻片，一端滴加1:4新鮮兔(人)血漿，另一端滴加生理鹽水，然后以接種環(huán)挑取可疑菌落的細(xì)菌少許，分別于血漿和生理鹽水相混合，若血漿出現(xiàn)顆粒生理鹽水渾濁，則凝固菌呈陽性。試管法：試管法：取1:4新鮮兔(人)血漿0.5ml放入小試管中，再加入培養(yǎng)24h的葡萄球菌肉湯培養(yǎng)物0.5ml，振搖均勻放入36水浴鍋內(nèi)每半小時(shí)觀察一次，觀察6小時(shí)，呈凝塊為陽性。返回返回 將分離到的可以菌株，經(jīng)培養(yǎng)制備成腸毒素進(jìn)行檢驗(yàn)，也可使用待測(cè)樣品做成1:10、1:100的稀釋液

9、后，直接進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)最適動(dòng)物為68周齡的幼貓，如有葡萄球菌腸毒素存在，幼貓與15min4h內(nèi)發(fā)生嘔吐、寒顫、輕度腹瀉，經(jīng)45h后逐漸恢復(fù)正常。返回返回 將分離到的葡萄球菌接種于肉湯中，37培養(yǎng)24h，取1.0ml培養(yǎng)液注射于家兔皮下，如有致病性葡萄球菌存在，則可引起局部皮膚潰瘍壞死。靜脈接種肉湯培養(yǎng)液0.10.5ml，2448h后，如有致病性葡萄球菌存在，解剖后可見漿膜出血，腎臟、心臟及其他臟器出現(xiàn)大小不等的膿腫，切取組織塊觸片鏡檢。返回返回（一）主要方法1.動(dòng)物學(xué)試驗(yàn)法動(dòng)物學(xué)試驗(yàn)法2.血清學(xué)試驗(yàn)法血清學(xué)試驗(yàn)法3.分子生物學(xué)試驗(yàn)法分子生物學(xué)試驗(yàn)法1.動(dòng)物學(xué)試驗(yàn)法動(dòng)物學(xué)試驗(yàn)即用幼貓和猴作為研究對(duì)象，喂食腸毒素，然后觀察動(dòng)物可能出現(xiàn)的各種異常的生理或形態(tài)變化，這是測(cè)定食物中腸毒素較早采用的一種方法。特點(diǎn)：結(jié)果判斷直觀、準(zhǔn)確，在某些情況下可采用，但由于試驗(yàn)動(dòng)物來源因難、靈敏度低、檢測(cè)結(jié)果不夠理想等使其應(yīng)用受到極大的限