實(shí)驗(yàn)二微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌ppt課件

1、實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 二二微生物培育基的配制和微生物培育基的配制和滅菌滅菌一、實(shí)一、實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 目目 的的n了解培育基的配制原理和方法，掌握其配制過了解培育基的配制原理和方法，掌握其配制過程。程。n掌握加壓蒸汽滅菌法的原理及其運(yùn)用方法。掌握加壓蒸汽滅菌法的原理及其運(yùn)用方法。一培育基的配制一培育基的配制二二. .實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 原原 理理1. 培育基是供微生物生長、繁衍、代謝的混合養(yǎng)料。不同微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的要求各不一樣，加之實(shí)驗(yàn)和研討的目的不同，所以培育基的種類很多，運(yùn)用的原料也各有差別，但從營養(yǎng)角度分析，培育基中普通含有微生物所必需的碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長素以及水分等。另外，培育基還應(yīng)具有適宜的pH值、一

2、定的緩沖才干、一定的氧化復(fù)原電位及適宜的浸透壓。 n培育基按成分可分為天然培育基、合成培育基和半合成培育基；按物理形狀可分為固體培育基、半固體培育基0.2%0.5%的瓊脂和液體培育基；按用途可分為根底培育基、營養(yǎng)培育基、鑒別培育基和選擇培育基等。n培育基培育基n 是指由人工配制的、適宜微生物生長繁衍或產(chǎn)是指由人工配制的、適宜微生物生長繁衍或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物用的混合營養(yǎng)料。生代謝產(chǎn)物用的混合營養(yǎng)料。培育基簡介培育基簡介碳源、氮源、無機(jī)鹽、能源、生長因子、水碳源、氮源、無機(jī)鹽、能源、生長因子、水營養(yǎng)物質(zhì)的濃度要適宜營養(yǎng)物質(zhì)的濃度要適宜營養(yǎng)物質(zhì)之間的配比要適宜營養(yǎng)物質(zhì)之間的配比要適宜培育基的培育基的pH

3、值、浸透壓、值、浸透壓、水活度和氧化復(fù)原電勢(shì)等水活度和氧化復(fù)原電勢(shì)等物理化學(xué)條件要適宜。物理化學(xué)條件要適宜。細(xì)菌：細(xì)菌： pH 7.08.0放線菌：放線菌：pH 7.58.5酵母菌：酵母菌： pH 3.86.0霉菌：霉菌：pH 4.05.8藻類：藻類： pH 6.07.0原生動(dòng)物：原生動(dòng)物： pH 6.08.0初始初始pHpH通常培育條件：通常培育條件：培育基的種類培育基的種類按照培育基的物理形狀可分為按照培育基的物理形狀可分為 1.1.液體培育基：不加凝固劑的液體形狀培育基。液體培育基：不加凝固劑的液體形狀培育基。 2.2.固體培育基：在液體培育基中參與固體培育基：在液體培育基中參與2%2%

4、左右的凝固劑的固左右的凝固劑的固體形狀的培育基。體形狀的培育基。 3.3.半固體培育基：在液體培育基中參與半固體培育基：在液體培育基中參與0.20.5%0.20.5%凝固劑凝固劑而成的半固體狀培育基。而成的半固體狀培育基。 瓊脂是最優(yōu)良的凝固劑，自瓊脂是最優(yōu)良的凝固劑，自18801880年開場(chǎng)用于配制微年開場(chǎng)用于配制微生物培育基以來，至今經(jīng)久不衰。生物培育基以來，至今經(jīng)久不衰。實(shí)驗(yàn)室的常用培育基：實(shí)驗(yàn)室的常用培育基：細(xì)菌：細(xì)菌： 牛肉膏蛋白胨培育基；牛肉膏蛋白胨培育基；放線菌：高氏放線菌：高氏1 1號(hào)合成培育基培育；號(hào)合成培育基培育；酵母菌：麥芽汁培育基；酵母菌：麥芽汁培育基；霉菌：霉菌： 查

5、氏合成培育基；查氏合成培育基；稱量稱量-配置配置-調(diào)理調(diào)理pHpH值值-過濾過濾-分裝分裝-滅菌滅菌1.1.稱量稱量 按照培育基配方，準(zhǔn)確稱量各成份放于燒杯中。對(duì)于不按照培育基配方，準(zhǔn)確稱量各成份放于燒杯中。對(duì)于不是粉狀如肉膏，運(yùn)用燒杯稱量。是粉狀如肉膏，運(yùn)用燒杯稱量。培育基配制的根本步驟培育基配制的根本步驟2.2.配調(diào)配調(diào) 向燒杯中參與適量的水，攪拌，使其溶解可加熱助溶。向燒杯中參與適量的水，攪拌，使其溶解可加熱助溶。 如是配制固體培育基，在瓊脂的熔化時(shí)，需不斷攪拌，并如是配制固體培育基，在瓊脂的熔化時(shí)，需不斷攪拌，并控制火力不要使培育基溢出或燒焦。待完全熔化后，補(bǔ)足所失控制火力不要使培育基

6、溢出或燒焦。待完全熔化后，補(bǔ)足所失水分。水分。 假設(shè)配方中含有淀粉，先將淀粉用少量冷水調(diào)成糊狀并在假設(shè)配方中含有淀粉，先將淀粉用少量冷水調(diào)成糊狀并在火上加熱攪拌，然后加足水分及其他藥品，待完全熔化后補(bǔ)足火上加熱攪拌，然后加足水分及其他藥品，待完全熔化后補(bǔ)足所失水分。所失水分。3.3.調(diào)理調(diào)理pHpH值值 培育基溶解均勻并冷卻至室溫時(shí)用培育基溶解均勻并冷卻至室溫時(shí)用pHpH試紙測(cè)試紙測(cè)pHpH，然后根，然后根據(jù)要求加酸或堿普通用據(jù)要求加酸或堿普通用1molHcl1molHcl和和1molNaOH1molNaOH，要緩慢少量，要緩慢少量且多加攪拌。培育基配方為自然且多加攪拌。培育基配方為自然pHp

7、H時(shí)，不用調(diào)理。時(shí)，不用調(diào)理。 4.4.過濾過濾 用濾紙或多層紗布過濾，普通無特殊要求可省去。用濾紙或多層紗布過濾，普通無特殊要求可省去。5.5.分裝分裝 將制好的培育基分裝入試管內(nèi)或三角瓶內(nèi)，管瓶將制好的培育基分裝入試管內(nèi)或三角瓶內(nèi)，管瓶口塞上棉塞。固體培育基要趁熱裝?？谌厦奕?。固體培育基要趁熱裝。 分裝時(shí)要防止培育基粘染管瓶口，引起污染。分分裝時(shí)要防止培育基粘染管瓶口，引起污染。分裝量可分為下面幾方面：裝量可分為下面幾方面：1 1斜面：裝量為管長的斜面：裝量為管長的1/4-1/51/4-1/5。2 2液體培育基、高層培育基、半固體培育基：裝載量不液體培育基、高層培育基、半固體培育基：裝載

8、量不超越管長的超越管長的1/31/3。3 3三角瓶：裝量不超越容積三角瓶：裝量不超越容積1/21/2。6.6.滅菌滅菌 塞棉塞，包扎，滅菌。塞棉塞，包扎，滅菌。 高壓蒸汽滅菌法：是在密閉的加壓容器內(nèi)進(jìn)展，加熱高壓蒸汽滅菌法：是在密閉的加壓容器內(nèi)進(jìn)展，加熱使器內(nèi)的水產(chǎn)生蒸汽，由于密閉，添加了器內(nèi)的壓力，使使器內(nèi)的水產(chǎn)生蒸汽，由于密閉，添加了器內(nèi)的壓力，使水的沸點(diǎn)升高，從而獲得高于水的沸點(diǎn)升高，從而獲得高于100100度的蒸汽溫度。度的蒸汽溫度。牛肉膏蛋白胨固體培育基配方：牛肉膏蛋白胨固體培育基配方：牛肉膏牛肉膏 0.3g 0.3g 蛋白胨蛋白胨 1g 1g 氯化鈉氯化鈉 0.5g 0.5g 瓊脂

9、瓊脂 2g 2g 水水 100mL 100mL pH pH 7.27.4 7.27.4 滅菌滅菌 121121，20min20min牛肉膏蛋白胨半固體培育基配方：牛肉膏蛋白胨半固體培育基配方： 瓊脂瓊脂 0.3g牛肉膏蛋白胨液體培育基配方：牛肉膏蛋白胨液體培育基配方： 瓊脂瓊脂 0g牛肉膏蛋白胨培育基的配制牛肉膏蛋白胨培育基的配制1 1、固體培育基平板制造、固體培育基平板制造2 2、固體培育基斜面制造、固體培育基斜面制造2 2、半固體培育基、半固體培育基3 3、液體培育基、液體培育基三三. .操作步驟及本次實(shí)驗(yàn)詳細(xì)安排操作步驟及本次實(shí)驗(yàn)詳細(xì)安排一平板固體培育基制造一平板固體培育基制造 1. 1

10、. 按配方稱取各組分按配方稱取各組分( (按按100ml100ml計(jì)算計(jì)算) )到的三角瓶中到的三角瓶中. . 2. 2. 參與參與100mL100mL水水. . 3. 3. 在酒精燈上完全融化，取部分制造斜面培育基在酒精燈上完全融化，取部分制造斜面培育基 3. 3.其他部分塞上硅膠塞其他部分塞上硅膠塞, ,用牛皮紙包扎好用牛皮紙包扎好; ; 4. 4.高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 5. 5.滅菌后滅菌后, ,當(dāng)培育基冷卻至當(dāng)培育基冷卻至5050左右時(shí)左右時(shí), ,傾注平皿傾注平皿( (每每100ml100ml可制備可制備5-65-6個(gè)平皿個(gè)平皿) ) 6. 6.凝固后放冰箱備用凝固后放冰箱備用 二

11、斜面培育基制造二斜面培育基制造1. 1. 在空試管內(nèi)倒入在空試管內(nèi)倒入2 23mL3mL上述曾經(jīng)溶解好的培育基，上述曾經(jīng)溶解好的培育基，【留意盡量不要讓培育基沾到試管口】塞好硅膠塞【留意盡量不要讓培育基沾到試管口】塞好硅膠塞. .2.2.放入燒杯中放入燒杯中, ,高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌. .3.3.擺斜面擺斜面, ,凝固后放冰箱備用凝固后放冰箱備用. .用于活化菌種，或培育菌種的斜面用于保管菌種的斜面擱置斜面擱置斜面 當(dāng)培育基冷卻至當(dāng)培育基冷卻至5050左右時(shí)，將試管帶棉塞的一左右時(shí)，將試管帶棉塞的一端擱在一根木棒上。擱置的長度要適宜，使培育基構(gòu)成的端擱在一根木棒上。擱置的長度要適宜，使培育

12、基構(gòu)成的斜面的長度不超越試管總長的一半。斜面的長度不超越試管總長的一半。三液體培育基制造三液體培育基制造1.1.按牛肉膏蛋白胨液體培育基配方稱取相應(yīng)成分到按牛肉膏蛋白胨液體培育基配方稱取相應(yīng)成分到250ml250ml的三的三角瓶中角瓶中. .2. 2. 參與參與100mL100mL水水. .3. 3. 充分溶解充分溶解. .取出取出50ml50ml用于半固體培育基制造用于半固體培育基制造4. 4. 在空試管內(nèi)倒入在空試管內(nèi)倒入2 23mL3mL曾經(jīng)溶解好的培育基，【留意盡量曾經(jīng)溶解好的培育基，【留意盡量不要讓培育基沾到試管口】塞好硅膠塞不要讓培育基沾到試管口】塞好硅膠塞. .5.5.放入燒杯中

13、放入燒杯中, ,高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌. .6. 6. 冷卻后放冰箱備用冷卻后放冰箱備用. .三半固體培育基制造三半固體培育基制造1. 1. 在在25ml25ml液體培育基中參與液體培育基中參與0.3%0.3%的瓊脂粉的瓊脂粉3. 3. 完全溶解完全溶解. .4. 4. 在空試管內(nèi)倒入在空試管內(nèi)倒入2 23mL3mL曾經(jīng)溶解好的培育基，曾經(jīng)溶解好的培育基，【留意盡量不要讓培育基沾到試管口】塞好硅膠【留意盡量不要讓培育基沾到試管口】塞好硅膠塞塞. .5.5.放入燒杯中放入燒杯中, ,高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌. .6.6.凝固后放冰箱備用凝固后放冰箱備用. .注：試管加棉塞注：試管加棉塞( (最

14、好最好) ) 培育基分裝終了以后，在管口培育基分裝終了以后，在管口上加一個(gè)棉塞。棉塞能防止雜菌污染，保證通氣良好。上加一個(gè)棉塞。棉塞能防止雜菌污染，保證通氣良好。加棉塞時(shí)，應(yīng)使棉塞長度的加棉塞時(shí)，應(yīng)使棉塞長度的2/32/3在試管口內(nèi)，如以下圖所在試管口內(nèi)，如以下圖所示。示。n配制好后，寫好培育基稱號(hào)、班級(jí)、組配制好后，寫好培育基稱號(hào)、班級(jí)、組別，再滅菌別，再滅菌n每組留部分同窗等滅菌終了之后，倒固每組留部分同窗等滅菌終了之后，倒固體平板和擺斜面體平板和擺斜面n任何一種培育基一經(jīng)制成就應(yīng)及時(shí)徹底滅菌，以備任何一種培育基一經(jīng)制成就應(yīng)及時(shí)徹底滅菌，以備純培育用。普通培育基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。純培

15、育用。普通培育基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。n常用的滅菌的方法有：干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、常用的滅菌的方法有：干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、常壓蒸汽滅菌、常壓間歇式滅菌超高溫滅菌、過濾常壓蒸汽滅菌、常壓間歇式滅菌超高溫滅菌、過濾除菌、輻射滅菌、化學(xué)藥品滅菌等方法。除菌、輻射滅菌、化學(xué)藥品滅菌等方法。n本實(shí)驗(yàn)培育基的滅菌常運(yùn)用的是高壓蒸汽滅菌，它本實(shí)驗(yàn)培育基的滅菌常運(yùn)用的是高壓蒸汽滅菌，它是利用高溫濕熱空氣使菌體蛋白質(zhì)凝固變性而到達(dá)是利用高溫濕熱空氣使菌體蛋白質(zhì)凝固變性而到達(dá)滅菌的。滅菌的。二培育基的滅菌二培育基的滅菌高壓蒸氣滅菌高壓蒸氣滅菌 普通培育基普通培育基: : 1.05 Kg/cm2, 121.

16、3, 15-30 min 1.05 Kg/cm2, 121.3, 15-30 min 含糖培育基含糖培育基: : 0.56 Kg/cm2, 112.6 , 15-30 min 0.56 Kg/cm2, 112.6 , 15-30 min 培育基的滅菌培育基的滅菌器皿的滅菌：器皿的滅菌： 干熱空氣：干熱空氣： 160 160， 2 2 小時(shí)小時(shí)無菌室的消毒：無菌室的消毒： 紫外光紫外光 化學(xué)藥物熏蒸苯酚；高錳酸鉀化學(xué)藥物熏蒸苯酚；高錳酸鉀+ +甲醛甲醛滅菌鍋濕熱滅菌運(yùn)用的設(shè)備濕熱滅菌運(yùn)用的設(shè)備 操作過程操作過程 加水加水裝鍋裝鍋蓋蓋蓋蓋加熱加熱當(dāng)壓力升為當(dāng)壓力升為0.5kg/cm20.5kg/cm2時(shí)排放冷空氣時(shí)排放冷空氣正式升壓正式升壓保壓保壓1.1kg/cm21.1kg/cm2，121121，堅(jiān)持，堅(jiān)持20-30min20-30m