聯檢項目可行性報告

1、九項呼吸道感染病原體IgM抗體檢測試劑盒（間接免疫熒光法）項目推薦書注冊證號：國食藥監(jiān)械（進）字2010第3400365號生產廠家：西班牙VIRCELL公司中國獨家代理：鄭州安圖生物工程股份有限公司公司簡介代理公司：安圖生物專業(yè)從事體外診斷產品的研發(fā)、生產和銷售的高新技術企業(yè)體外診斷試劑GMP認證（2001年，2003年，2008年）體外診斷試劑ISO13485認證（2006年UL,2009年）SFDA認證中心體外診斷試劑生產質量體系考核（2008年）河南省二類體外診斷試劑生產質量體系考核（2008年）醫(yī)療檢測儀器（酶標儀/發(fā)光儀等）ISO13485/CE/IVDD認證鄭州安圖生物成立于199

2、8年，是從事體外診斷產品的研發(fā)、生產和銷售的高新技術企業(yè)。安圖生物已經通過國家藥品GM!認證、ISO13485-2003國際質量體系認證、國家體外診斷試劑質量體系考核。通過河南省50戶成長型高技術企業(yè)、河南省體外診斷試劑工程研究中心、河南省級企業(yè)技術中心、河南省免疫診斷試劑工程技術研究中心認定。是河南省體外診斷行業(yè)的龍頭企業(yè)，綜合實力國內同行業(yè)中名列前茅。公司主營業(yè)務涵蓋體外診斷試劑、醫(yī)學檢驗儀器、軟件和臨床醫(yī)學檢驗服務領域。產品品種包括：傳染病檢測系列、腫瘤檢測系列、內分泌檢測系列、甲狀腺功能檢測系列、糖尿病檢測系列、細菌和耐藥檢測系列、兒童發(fā)育檢測等七大系列檢測試劑，以及酶標儀、洗板機、發(fā)

3、光儀、免疫自動化系統等四大系列檢測儀器。安圖生物定位于發(fā)展民族產業(yè)：高點起步，打造安圖品牌；定位于專業(yè)性公司：專注免疫和微生物診斷產品；定位于技術創(chuàng)新型企業(yè)：保證核心競爭力的可持續(xù)性；定位于市場先導型企業(yè)：保證企業(yè)健康、高速發(fā)展。西班牙VIRCEL公司簡介：VIRCELL成立于1991年，專業(yè)從事微生物診斷試劑的開發(fā)和生產。公司目前擁有近200個品種，涵蓋多種檢測方法：酶聯免疫分析免疫熒光分析細胞培養(yǎng)分子生物等，產品在全球范圍銷售，目前已銷往50多個國家。2008年銷售分布：VIRCELL公司相關質量認證：1999年通過ISO9002:1994質量認證；2009年更新ISO9001:2008質

4、量認證；2003年獲得CE認證；2005年獲得ISO13485:2005認證產品銷往全球50多個國家：目錄1、檢驗項目現狀分析2、VIRCELL產品優(yōu)勢及性能分析3、收費標準及效益分析4、產品技術參數1、檢驗項目現狀分析目前市面上所見同類項目產品存在著以下幾點缺陷：1、一般產品多為國產酶聯法，在產品靈敏度、特異性方面不是十分符合臨床診斷；2、沒有一個廠家產品能同時涵括此9個項目，而且方法學不統一，使用科室在使用的過程中因操作的繁瑣、復雜，難以做好有效的質量控制；3、目前國內此九個項目文號齊全的廠家只有我公司擁有，其中幾個項目（如肺炎衣原體、副流感病毒等）國內除我公司外其他廠家均為無證產品，按照

5、我國目前現行法律，使用單位在使用時無法得到產品質量的有效保證，這樣就使得使用單位使用后存在法律風險：如因產品質量問題帶來的醫(yī)患糾紛時，使用單位無法得到法律的有效保護；而且面臨著藥監(jiān)部門罰款，這樣的話也使用單位不僅面臨法律的制裁及經濟上的損失，而且其專業(yè)地位也會因此而受到影響。2、VIRCELL產品優(yōu)勢、臨床意義及性能分析產品優(yōu)勢：全國獨家九項全部擁有國家批準文號且方法學經典、統一，操作簡單，質量可靠，既滿足臨床需要又規(guī)避法律風險；性能穩(wěn)定、無交叉反應；產品經ISO9002CE認證，品質保證；一卡九項，避免漏檢；有效期長達18個月。臨床意義：呼吸道感染性疾病的早期、快速、準確診斷；對病原體的鑒別

6、診斷提供導向性依據;指導臨床合理用藥。產品性能：九項呼吸道感染病原體IgM抗體檢測試劑盒，采用間接免疫熒光法（IFA），同時檢測人血清中呼吸道感染主要病原體的IgM抗體，可檢的病原體包括：嗜肺軍團菌血清1型、肺炎支原體、Q熱立克次體、肺炎衣原體、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型。用于呼吸道感染疾病的輔助診斷。1. 檢測原理間接免疫熒光法（IFA）（圖1）是基于待測樣本中的抗體與吸附在載玻片上的抗原發(fā)生的反應。樣本中存在的特異性抗體和抗原反應，未與抗原結合的免疫球蛋白在洗滌步驟中除去。在下一步驟中，抗原-抗體復合物與熒光素標記的抗人球蛋白反應，用免疫熒光

7、顯微鏡觀察結果。圖1:九項呼吸道感染病原體IgM抗體檢測試劑盒檢測原理2. 試劑盒組成及用途組分成分和用途載玻片檢測的物理載體，覆有聚四氟乙烯并包被有針對檢測物的特異性抗原，包裝袋內有一袋硅膠以防潮。質控品用于證明試劑盒及試驗的有效性，含有人血清及防腐劑。吸附劑羊抗人IgG用來吸附人IgG避免干擾IgM檢測，含有防腐劑。FITC結合物熒光素標記的抗人免疫球蛋白結合物，含有染色液、防腐劑和蛋白穩(wěn)定齊購和抗原抗體復合物反應，并顯色。圭封閉介質甘油緩沖液，便于觀察。磷酸鹽緩沖液（PBS）用于洗滌步驟，從反應介質中除去未結合的免疫球蛋白和結合物。3. 操作步驟實驗前準備1）實驗所需物品準備：1000m

8、l量筒、1000ml燒杯、離心管、微量移液器、溫育濕盒、洗瓶、水平搖床、恒溫箱、蓋玻片、熒光顯微鏡。2）PBS洗液的準備：將1瓶PBS粉末倒入燒杯中，加入1L蒸餾水中，搖勻直至完全溶解，配好后儲存在2-8oC備用。3）使用前，將所有試劑平衡至室溫，將恒溫箱調至37C。實驗步驟1）樣本的稀釋：按1:1比例稀釋血清標本，即25L血清加入25卩LPBS中。陰陽性對照不需要稀釋。2）用吸附劑處理稀釋后的血清：將30譏稀釋后的血清加入150譏吸附劑中，徹底混勻。陰陽性對照不需吸附劑處理。處理后的血清要離心（13000r,10min）除去沉淀，以防干擾檢測。3）在載玻片的每孔中加15譏吸附劑處理過的血清。

9、在一個載玻片的每孔中加入15卩1不稀釋的陽性對照，在另一個載玻片的每孔中加入15L不稀釋的陰性對照。4）將載玻片放入濕盒中，37C溫育90分鐘。5）用PBS洗液的緩慢水流沖洗載玻片（避免直接沖入孔內）后，浸泡在PBS中并放置在水平搖床上輕輕搖動10分鐘。將載玻片用蒸餾水緩慢水流沖洗（避免直接沖入孔內）。6）載玻片自然風干。7）每孔加入15卩LFITC結合物溶液（不需稀釋）。8）將載玻片放入濕盒，37C溫育30分鐘。9）重復6和7的洗滌步驟。10）加幾小滴封閉介質，小心蓋上蓋玻片。11）盡快用熒光顯微鏡在400倍放大率下觀察結果。如果不能立即觀察，可將其避光放置于2-8oC不超過24小時。簡明操

10、作程序:4結果判斷有效性判斷每一次試驗都應設立陽性和陰性對照，以確認試驗和試劑盒的有效性。觀察到的熒光模式應為：陽性對照：腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒對陽性質控的1-15%細胞陰性對照：出現蘋果綠細胞核、胞漿或胞膜熒光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同時觀察到著色的合胞）；軍團菌、衣原體或立克次體中所有的細菌呈現出蘋果綠熒光；支原體對陽性質控在細胞外圍呈現蘋果綠色熒光。軍團菌、肺炎衣原體和立克次體無熒光，支原體、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的細胞呈現紅色。陽性結果熒光圖譜：陰性結的熒光圖譜：樣本結果判斷陽性結果：可以觀察到腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞

11、病毒或副流感病毒對陽性血清的1-15%細胞的細胞核、胞漿或胞膜出現蘋果綠色熒光（在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同時觀察到著色的合胞）；軍團菌、衣原體或立克次體中所有的細菌呈現出蘋果綠色熒光；支原體對陽性血清在細胞外圍呈現蘋果綠色熒光。陰性結果：可觀察到軍團菌、肺炎衣原體和立克次體無熒光，支原體、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的細胞呈現紅色1.性能指標.靈敏度和特異性采用方法學對比進行陰陽性符合率分析，陽性符合率代表靈敏度，陰性符合率代表特異性，結果如下：病原體對比方法樣本數量陽性符合率陰性符合率嗜肺軍團菌IFA82%肺炎支原體ELISA62%Q熱立克次體IFA74%肺

12、炎衣原體IFA61%腺病毒ELISA74%呼吸道合胞病毒ELISA97%甲型流感病毒ELISA46%乙型流感病毒ELISA40%副流感病毒ELISA36%5.2精密度分析內精密度在相同實驗條件下由同一個操作人員在同一次試驗中對3份血清（2份陽性和1份陰性）經驗證，吸附劑也可以有效地避免IgG抗體過量造成的假陰性。分別進行5組加樣檢測。結果：滴度變化不超過一個稀釋度。分析間精密度在5種不同條件下（不同操作人員或不同試驗日期）對3份血清（2份陽性和1份陰性）進行檢測。結果：滴度變化不超過一個稀釋度。交叉反應和干擾病原體干擾物質樣本例數結果病原體干擾物質樣本例數結果嗜肺軍團菌肺炎支原體、肺炎衣原體和

13、Q熱立克次體、革蘭氏陰性細菌（布魯氏菌，沙門氏菌）和抗核抗體嗜肺軍團菌、肺炎衣原體和Q熱立克20肺炎支原體次體12立克次體肺炎支原體、肺炎衣原體和嗜肺軍團菌、同種屬的細菌（發(fā)疹傷寒等的病原體）和抗核抗體20肺炎衣原體嗜肺軍團菌、Q熱立克次體和肺炎支原體，同種屬的細菌（發(fā)疹傷寒等的病原體）和抗核抗體20無交叉反應或干擾腺病毒RSV甲型和乙型流感病毒和副流感病毒8呼吸道合胞病毒腺病毒、甲型和乙型流感病毒和副流感病毒或根據病毒分類（麻疹）10甲型流感病毒RSV乙型流感病毒、腺病毒和副流感病毒8乙型流感病毒RSV甲型流感病毒、腺病毒和副流感病毒8副流感病毒RSV甲型和乙型流感病毒和腺病毒8其它干擾研究

14、對25份類風濕因子陽性血清進行了2種病毒和2種細菌抗原IgG和IgM抗體的檢測。對另外兩份血清進行了每種抗原IgG和IgM抗體的檢測。在IgM檢測中，用抗IgG抗體對血清進行了吸附處理。結果顯示，吸附劑可以有效避免類風濕因子的干擾。3、收費標準及效益分析目前江西省九項收費標準合計為425元/例，該項目無需過多的設備投資，主要設備為熒光顯微鏡，此項目不僅能給使用單位帶來可觀的經濟效益，更重要的是，規(guī)避了使用單位使用無證產品帶來的法律風險、提高了使用單位的檢測水平也就相應的提高了使用單位的專業(yè)地位，這樣的社會效益和經濟效益必將給使用單位帶來更美好的發(fā)展前景！贛發(fā)改收費字2005175號項目項目編號三級醫(yī)院二級醫(yī)院一級醫(yī)院套用方法合胞病毒6呼吸道合胞病毒抗體測疋201512副流感8副流感