機能學(xué)創(chuàng)新性試驗設(shè)計報告書

1、機能實驗學(xué)實驗設(shè)計報告實驗名稱：人指甲對慢性化膿性中耳炎的藥用價值實驗設(shè)計人：專業(yè)：年級班級：聯(lián)系電話：指導(dǎo)教師：2017年11月15日實驗內(nèi)容：一、立題理論依據(jù)及研究現(xiàn)狀。理論依據(jù)：根據(jù)草醫(yī)草藥簡便驗方匯編中所述，人指甲(煨存性)，冰片少許，共研細粉。用時先將耳道潔凈，后吹藥粉?？芍温曰撔灾卸?。在某一偏方中也有說將人指甲烤干后磨粉，然后摻入一定比例的白磯。用時將耳道潔凈，后吹藥粉。從以上依據(jù)可知，人指甲對慢性化膿性中耳炎有一定的藥用價值，但其科學(xué)性有待考察。研究現(xiàn)狀：針對慢性化膿性中耳炎，王冰和許垠在國際耳鼻咽喉頭頸外科雜志中表示，慢性化膿性中耳炎與細菌生物膜密切相關(guān)。他們認為低毒力的

2、細菌或病毒感染是分泌性中耳炎的重要致病因素，而細菌生物膜的形成和發(fā)展包括調(diào)節(jié)膜的形成、細菌可逆性附著、細菌繁殖、細菌播散5個過程，可通過屏障作用、生物膜特殊的微環(huán)境、耐藥表型的表達對抗機體免疫、密度感應(yīng)系統(tǒng)等多種方式導(dǎo)致抗生素耐藥，從而導(dǎo)致慢性感染遷延不愈或反復(fù)性發(fā)作。通過對患者的分泌液進行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)最主要的致病菌為金葡萄菌和銅綠假單胞菌。故針對慢性化膿性中耳炎的治療方面提出假設(shè)：通過抑制細菌的黏附，破壞保護性基質(zhì)、脂質(zhì)體包裹抗生素穿透生物膜的目的，從而對慢性感染的治療提供新的突破。二、主要研究內(nèi)容及實驗過程。1、實驗對象、性別、規(guī)格、數(shù)量健康豚鼠70只，雌雄不拘，體重250-300g。所選豚

3、鼠均為耳廓反應(yīng)靈敏，電耳鏡檢查可見鼓膜完整，光錐清晰，排除外耳道、鼓膜、中耳等感染。2、儀器與藥品儀器：籠子、電耳鏡、試管、注射器、生化培養(yǎng)箱、方形濾紙試劑：銅綠假單胞菌落、3%戊巴比妥鈉溶液、生理鹽水、人指甲粉末、白磯粉末、冰片粉末、氧氟沙星洗耳液3、實驗步驟(1)將豚鼠分為七組，分別進行編號(1-7)放置于鼠籠中。(2)制備豚鼠的慢性化膿性中耳炎模型。取真空保藏銅綠假單胞菌菌種活化24h后、取一個單菌落于盛5mlMH肉湯培養(yǎng)液的試管中、35c靜止培養(yǎng)12h左右，取3ml轉(zhuǎn)入盛150mlMH肉湯培養(yǎng)液的錐形瓶中，35C、120r/min振蕩培養(yǎng)12h.制成菌懸液，并將此菌輕液作為母液。采用邊

4、配制邊測定的方法，用MH肉湯培養(yǎng)液作對照溶液，用光程為1cm的立方石英比色杯校準(zhǔn)其線，然后依次2倍稀釋加母液的MH肉湯培養(yǎng)液，測定其OD值?！瓣愐鷥骸苯?jīng)過實驗，測算出波長在585mm寸，銅綠假單月菌菌液濃度與ODfi之間關(guān)系的問歸方程式為Y=0.0711X+0.5018.式中Y為ODfi,X為菌液濃度，基本單位為108CFU/ml.本實驗所需菌液濃度為1.0x106CFU/ml。當(dāng)X等于1時，具菌液濃度為8-、1.0x10CFU/ml,對應(yīng)的ODfi為0.5729.我們計算最接近此ODfi時母披的稀釋倍數(shù)，將母液用PBSffi釋同樣倍數(shù)并再稀釋100倍，所得到的菌液濃度即為1.0x106CFU

5、/ml,4C冰箱保存?zhèn)溆?。所有豚鼠月M腔注射3%勺戊巴比妥鈉溶液35-50mg/kg實施全身麻醉，用75%酉精消毒雙側(cè)外耳道。用1ml無菌注射器抽取1.0*106CFU/ml銅綠假單胞菌菌液，接5號半腰椎穿刺針，在光纖電耳鏡的直視下，經(jīng)鼓膜緊張部后下象限穿刺，向鼓室內(nèi)注射，每側(cè)各100口菌液。(3)向1組豚鼠耳中吹入人指甲粉末，2組豚鼠吹入白磯粉末，3組豚鼠吹入冰片粉末，4組豚鼠吹入人指甲和白帆的混合粉末，5組豚鼠吹入人指甲和冰片的混合粉末，6組豚鼠向耳中滴入氧氟沙星液，7組豚鼠不作處理。前6組豚鼠均一日兩次。(暫時以此劑量，最佳劑量可通過預(yù)實驗調(diào)整)具體如卜表所?。涸噭㎎劑量組別第一組第二組

6、第三組第四組第五組第六組第七組指甲3mg白磯3mg冰片3mg指甲+白研3mg指甲+冰片3mg氧氟沙星3滴(4)對7組豚鼠進行觀察并記錄數(shù)據(jù)。4、觀察指標(biāo)鼓膜炎癥狀念評分標(biāo)準(zhǔn)如下表所示：(1)0分：1分：輕度充機，伴輕度內(nèi)陷2分：中度充血，伴中度內(nèi)陷或凸起，并有輕度中耳積液3分：重度充血和內(nèi)陷，并有中到重度的中耳積液4分：鼓膜穿孔并流膿(2)進行聽閾測驗，檢驗其傳導(dǎo)性耳聾的嚴重程度。三、實驗研究的技術(shù)路線制定課題收集、查找資料制定實驗計劃做預(yù)實驗，檢驗可行性正式實驗對各個豚鼠的恢復(fù)情況進行記錄分析結(jié)果四、預(yù)期實驗結(jié)果(1)若4、5、6組豚鼠治愈所需的時間相同或比6組所需時間短(說明4、5、6號所

7、使用的試劑效果相當(dāng)或比抗生素效果好)(2)若在(1)成立的條件下，1、2、3組所需時間較長甚至與7組一般長短(說明1、2、3號所使用的試劑對慢性化膿性中耳炎無效)(3)若1、2、3、4、5在6組豚鼠痊愈后仍未痊愈而與7組豚鼠所需時間相當(dāng)甚至比7組豚鼠情況更嚴重(說明1、2、3、4、5所用試劑無效甚至?xí)又馗腥?(4)若1、4、5、6所需時間相同或1、4、5所需時間少于6組，而2、3組所需時間較長但也能痊愈(說明人指甲粉起主要的作用，且與抗生素效果相當(dāng)或更好)(5)若2、3、4、5、6組所需時間相當(dāng)或2、3、4、5組所需時間少于6組而1組所需時間與7組相當(dāng)(說明人指甲粉的作用不大或無效，而冰片或

8、白帆的效果比抗生素好)五、可行性分析(1)實驗所需儀器、試劑以及實驗動物不難獲得。(2)該動物模型已有前人使用過并成功使用。(3)在正式實驗之前，會進行預(yù)實驗然后及時調(diào)整正式實驗中可能出現(xiàn)的問題。綜上所述，實驗可行。六、統(tǒng)計學(xué)分析用SPSS17.0進行隨機區(qū)組設(shè)計的方差分析方法進行檢驗；通過對處理組和區(qū)組的數(shù)據(jù)處理得到P值，然后推斷藥物對總體的影響。七、可能遇到的問題及解決方案(1)進行實驗的時間不恰當(dāng)導(dǎo)致實驗結(jié)果誤差大；多次觀察，確定進行實驗的最佳時機。(2)操作不熟練，在麻醉時或制作豚鼠模型時導(dǎo)致大鼠死亡或大鼠狀態(tài)不佳影響實驗結(jié)果；故在實驗之前需要練習(xí)直到能夠熟練的操作。(3)在實驗時細菌對抗生素產(chǎn)生了耐藥性導(dǎo)致抗生素效果不佳而影響實驗結(jié)果。暫時未想到解決方案，若出現(xiàn)這種情況應(yīng)該需要重新實驗然后換用新的抗生素。(4)試劑劑量把握不好，導(dǎo)致實驗