P-7(JY)2018001清潔驗證中化學(xué)殘留物(貝諾酯)檢測分析方法驗證方案

1、成都 * 制藥有限責(zé)任公司確認(rèn)與驗證頁碼：1文件編碼：P-7(JY)2018001版 本 號：00題目： 清潔驗證中化學(xué)殘留物檢測分析方法驗證方案驗證類別：檢驗方法驗證項目負(fù)責(zé)人：QC主管驗證實施小組主要成員：部門質(zhì)量部質(zhì)量部質(zhì)量部姓名職位QC主管QC化驗員QA主管驗證領(lǐng)導(dǎo)小組審查匯簽：姓名部門職務(wù)或崗位簽字日期質(zhì)量部部長質(zhì)量部QC主管質(zhì)量部QA主管質(zhì)量部質(zhì)量受權(quán)人成都 * 制藥有限責(zé)任公司確認(rèn)與驗證頁碼：2文件編碼：P-7(JY)2018001版 本 號：00題目： 清潔驗證中化學(xué)殘留物（貝諾酯）檢測分析方法驗證方案1 主題內(nèi)容生產(chǎn)過程中所用的生產(chǎn)設(shè)備均可能有殘留物遺留，為了最大程度的避免由

2、于上一批次生產(chǎn)產(chǎn)品的殘留影響下一批次或其他品種，故必須對生產(chǎn)所用的設(shè)備進(jìn)行清潔。清潔后要對該清洗方法進(jìn)行取樣檢測殘留量，一般通常的取樣方法為棉簽擦拭法。2適用范圍本方案適用于清潔驗證過程中化學(xué)殘留物（貝諾酯）檢測分析方法驗證。3概述3.1 生產(chǎn)中一條生產(chǎn)線往往能生產(chǎn)幾個品種，因此在藥品生產(chǎn)過程中必須對生產(chǎn)設(shè)備進(jìn)行有效清潔，以防止本產(chǎn)品對后續(xù)生產(chǎn)的產(chǎn)品造成微生物及化學(xué)物質(zhì)的污染，這樣就必須做設(shè)備清潔驗證。設(shè)備清潔后化學(xué)殘留物很少，檢測有難度，方法的可靠性決定了患者用藥安全，因此清潔驗證中必須進(jìn)行殘留物檢測方法的驗證。3.2 目的：是考察清洗驗證涉及取樣過程和所用檢測方法的過程，是對人員取樣操作、

3、殘留物轉(zhuǎn)移、測試過程的考察，考察項目行線性和范圍、檢測限、溶液穩(wěn)定性等。3.3 驗證方法：分兩部進(jìn)行，即取樣方法驗證和分析方法驗證。4實施驗證所需條件人員已經(jīng)培訓(xùn)合格；檢驗儀器已校驗合格并在有效期內(nèi)。5參加驗證主要人員及職責(zé)部門崗位姓名職責(zé)及分工質(zhì)量管理部質(zhì)量部經(jīng)理負(fù)責(zé)批準(zhǔn)驗證方案和驗證報告。QC主管全面組織驗證工作，參與 驗證方案的編制，并于驗證前對驗證小組其他成員進(jìn)行該驗證方案的培訓(xùn)，并于驗證過程中對操作者進(jìn)行擦拭取樣知識的培訓(xùn)，及驗證報告的編制。QC檢驗員負(fù)責(zé)進(jìn)行抽樣檢查，出具檢驗報告。QA主管負(fù)責(zé)審核驗證方案，審核清潔驗證方案和報告，協(xié)助驗 證方案的實施，并審核驗證報告。6驗證目的本驗

4、證是通過取樣方法驗證和檢測分析方法驗證，確認(rèn)清潔驗證過程中化學(xué)殘留物檢測方法的可行 性。7. 人員培訓(xùn)成都 * 制藥有限責(zé)任公司確認(rèn)與驗證頁碼：3文件編碼：P-7(JY)2018001版 本 號：00題目： 清潔驗證中化學(xué)殘留物（貝諾酯）檢測分析方法驗證方案在驗證實施前組織人員培訓(xùn)。參加培訓(xùn)的人員應(yīng)有參加驗證的質(zhì)量監(jiān)督人員、質(zhì)量檢驗人員等。培訓(xùn)的內(nèi)容應(yīng)有本驗證方案、取樣SOP、設(shè)備清潔SOP。培訓(xùn)記錄見附表1。8取樣方法驗證：采用棉簽擦拭取方法，確認(rèn)該方法的有效性。8.1 驗證方法：8.1.1 取樣方法將藥簽頭按在取樣表面上，用力使其稍彎曲，平穩(wěn)而緩慢地擦拭取樣表面。在向前移動的同時將其從一邊

5、移到另一邊。擦拭過程應(yīng)覆蓋整個表面。翻轉(zhuǎn)藥簽，讓藥簽的另一面也進(jìn)行擦拭。但與前次擦拭移動方向垂直。（如圖1）。擦拭完后，將藥簽放入試管，并用螺蓋蓋緊密封。六份備檢（收集各樣液的試管應(yīng)預(yù)先編好序號）。擦拭取樣示意圖：8.1.2 影響因素：進(jìn)行擦拭取樣驗證試驗時應(yīng)注意擦拭工具和不銹鋼板的干擾。常用的擦拭工具為棉簽，棉簽易吸附殘留物，其上面的隱形留物也易被溶劑洗脫，但棉簽易脫落纖維，故在使用前應(yīng)用溶劑預(yù)先清洗，以免纖維遺留在取樣表面；不銹鋼板應(yīng)平整光潔，清洗干凈后用電吹風(fēng)吹干凈再滴溶液，以免取樣不均勻和引進(jìn)雜質(zhì)，而產(chǎn)生較大的RSD 。還應(yīng)注意取樣方式，應(yīng)盡可能采用固定的力度、擦拭速度和線路，以免產(chǎn)生

6、較大的RSD。8.1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)用經(jīng)驗的檢查方法檢測，計算回收率不得低于50%， RSD 不得大于20%。8.2 以檢測活性物貝諾酯殘留為例的驗證方法8.2.1 儀器、設(shè)備、試藥本驗證棉簽擦試法所用主要儀器、設(shè)備均符合檢驗的要求附表 2 試驗儀器設(shè)備確認(rèn) 表序號名稱型號（編號）備注2（貝諾酯）對照品成都 * 制藥有限責(zé)任公司確認(rèn)與驗證頁碼：4文件編碼：P-7（JY）2018001版 本 號：00題 目： 清潔驗證中化學(xué)殘留物（貝諾酯）檢測分析方法驗證方案3高效液相色譜儀4棉簽藥簽8.2.2 相關(guān)文件、規(guī)程、依據(jù)附表3：相關(guān)文件序號文件編號文件名稱備注1（）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)2高效液相色譜操作規(guī)程3驗證

7、依據(jù)藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范與驗證指南8.2.3 檢測方法：8.2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以水（用磷酸調(diào)節(jié)PH 值至3.5）-甲醇（44： 56）為流動相；檢測波長為240nm。理論板數(shù)按貝諾酯峰計算不低于3000，貝諾酯峰與相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度應(yīng)符合要求。8.2.3.2 回收率試驗：精密稱取貝諾酯原料10mg至 100 mL量瓶，加乙醇約12ml，置超聲波浴中使溶解，再加流動相稀釋至刻度，搖勻。 精密量取1ml 置于潔凈的不銹鋼板上，使其自然風(fēng)干，用乙醇濕潤的棉簽按8.1.1的取樣方法擦拭不銹鋼板（供試品 1ml均勻覆蓋5cm× 5cm區(qū)域

8、內(nèi)）， 取擦拭棉簽用乙醇三 次沖洗至25ml量瓶中，每次盡量將棉簽擠干，棄去棉簽，加乙醇至刻度，作為供試品溶液（重復(fù)操作試驗6次）；再稱取貝諾酯對照品10mg至 100 mL量瓶，加乙醇約12ml，置超聲波浴中使溶解，再加流動相稀釋至刻度，搖勻，吸取1ml到 25ml容量瓶，用流動相稀釋至刻度，作為對照溶液。分別吸取對照溶液和6個供試品溶液各20l ，進(jìn)樣，記錄色譜圖，測得平均回收率和RSD。實際測定值A(chǔ)樣8.2.3.3 計算公式：回收率 = 理論測得值100 % = A對100 %8.2.3.4 檢測結(jié)果（檢驗記錄附后）。附表4：取樣回收率試驗記錄板號供試品編號供試品溶液峰面積對照溶液峰面積

9、回收率123成都 * 制藥有限責(zé)任公司確認(rèn)與驗證頁碼：5文件編碼：P-7（JY）2018001版 本 號：00題目： 清潔驗證中化學(xué)殘留物（貝諾酯）檢測分析方法驗證方案456平均回收率回收率RSD結(jié)論 :檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期：9. 殘留物檢測方法驗證9.1 驗證項目：按照中國藥典通則9101 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則，主要驗證的項目有準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、檢測限、定量限、線性和范圍、耐用性等，還要考慮供試品溶液的穩(wěn)定性。生產(chǎn)清潔后化學(xué)殘留物檢驗方法一般采取該產(chǎn)品的法定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測，在法定標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)過確認(rèn)的前提下，清潔殘留物檢測方法的驗證項目僅進(jìn)行線性和范圍、檢測限、溶液穩(wěn)定

10、性驗證。9.2 以化學(xué)殘留物“貝諾酯”為例的檢測方法驗證9.2.1 線性和范圍：9.2.1.1 方法：采用HPLC法，根據(jù)“產(chǎn)品生產(chǎn)設(shè)備清潔程序驗證方案”中計算得到的棉簽擦拭法下的最大允許殘留量1.9ug/ml ，該濃度即為在清洗后取樣檢測時的濃度。擬定規(guī)定限度的±20為測定范圍，用該殘留物原料制備5 份不同濃度的供試品溶液進(jìn)行測定，以測定的響應(yīng)信號對被測物的濃度作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。9.2.1.2 色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以水（用磷酸調(diào)節(jié)PH值至3.5 ） -甲醇（ 44： 56）為流動相；檢測波長為24

11、0nm。理論板數(shù)按貝諾酯峰計算不低于3000，貝諾酯峰與相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度應(yīng)符合要求。9.2.1.3 樣品制備和試驗方法：精密稱取貝諾酯原料10mg于100ml 量瓶中，用乙醇12ml 溶解，再用流動相稀釋至刻度，精密量取1.5ml 、 1.8ml 、 2.0ml 、 2.2ml 、 2.5ml 于 100ml 量瓶中，用流動相稀釋至刻度即制成每 1ml 中各約含1.5 g、 1.8 g、 2.0 g、 2.2 g、 2.5 g 的溶液，作為線性溶液，分別取20ul 注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸處理，計算回歸方程及相關(guān)系數(shù)。9.2.1.4 驗證

12、結(jié)論：相關(guān)系數(shù)值應(yīng)大于0.99 ，線性范圍應(yīng)為殘留物限度的±20 。檢測結(jié)果（檢驗記錄附后）附表5：線性和范圍驗證記錄序號12345成都 * 制藥有限責(zé)任公司確認(rèn)與驗證頁碼：6文件編碼：P-7（JY）2018001版 本 號：00題 目： 清潔驗證中化學(xué)殘留物（貝諾酯）檢測分析方法驗證方案濃度 （ ug/ml ）峰面積回歸方程相關(guān)系數(shù)結(jié)論 :檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期：9.2.2 檢測限：9.2.2.1 定義：檢測限系指試樣中被測物能被檢測出的最低量，本方案采用信噪比法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)行比較，計算出能被可靠地檢測出的被測物質(zhì)最低濃度和量。一

13、般以信噪比為3： 1 時相應(yīng)濃度的量確定檢測限。9.2.2.2 方法：取貝諾酯原料適量，精密稱定，加水溶解并逐級稀釋制成較低濃度的溶液（可參考線性溶液濃度），搖勻。精密量取上述溶液20 l ，注入高效液相色譜儀中進(jìn)行測定，記錄色譜圖，選取色譜圖中主峰峰高約為基線噪音的3倍濃度的值，計算檢測限。9.2.2.3 驗證結(jié)論：該方法的檢測限應(yīng)滿足清潔驗證化學(xué)殘留物限度標(biāo)準(zhǔn)需求。附表6：檢測限驗證記錄：序號123456濃度 （ ug/ml ）信噪比檢測限結(jié)論 :檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期：9.2.3 溶液的穩(wěn)定性9.2.3.1 精密稱取貝諾酯原料10mg于 100ml量瓶中，用乙醇12ml溶解，

14、再用流動相稀釋至刻度，精密量取2.0ml 于 100ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度即制成每1ml中約含2.0 g的溶液，放置室溫，分別于0h、 6h、8h、 10h、 12h，精密量取上述溶液20 l ，注入高效液相色譜儀中進(jìn)行測定，記錄色譜圖，以峰面積計算RSD值。成都 * 制藥有限責(zé)任公司確認(rèn)與驗證頁碼：7文件編碼：P-7(JY)2018001版 本 號：00題目： 清潔驗證中化學(xué)殘留物（貝諾酯）檢測分析方法驗證方案9.2.3.2 驗證結(jié)論：峰面積RSD值2，即可視為溶液穩(wěn)定。附表7：溶液穩(wěn)定性考察記錄表放置時間（h）061012峰面積RSD結(jié)論 :檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期：10

15、變更和偏差處理確認(rèn)過程中如果出現(xiàn)偏差和變更，應(yīng)立即通知確認(rèn)與驗證小組并對偏差和變更進(jìn)行詳細(xì)記錄（參見偏差處理單，變更處理單），分析偏差產(chǎn)生的根本原因并提出解決方法。所有偏差和變更得到有效處理后，確認(rèn)方可進(jìn)入下一步驟。偏差處理單和變更處理單經(jīng)過批準(zhǔn)后其原件必須附在驗證報告中。記錄見附表8。成都 * 制藥有限責(zé)任公司確認(rèn)與驗證頁碼：8文件編碼：P-7(JY)2018001版 本 號：00題目： 清潔驗證中化學(xué)殘留物（貝諾酯）檢測分析方法驗證方案附表 1:培訓(xùn)記錄培訓(xùn)時間培訓(xùn)內(nèi)容授課人參加培訓(xùn)人員備注附表2：試驗儀器設(shè)備確認(rèn)序號名稱型號（編號）備注2（貝諾酯）對照品3高效液相色譜儀4棉簽藥簽附表3：

16、文件規(guī)程序號文件編號文件名稱備注1（）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)2高效液相色譜操作規(guī)程3驗證依據(jù)藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范與驗證指南成都 * 制藥有限責(zé)任公司確認(rèn)與驗證頁碼：9文件編碼：P-7(JY)2018001版 本 號：00題目： 清潔驗證中化學(xué)殘留物（貝諾酯）檢測分析方法驗證方案附表4：取樣回收驗證記錄板號供試品編號供試品溶液峰面積對照溶液峰面積回收率123456平均回收率回收率RSD結(jié)論 :檢查人 / 日期：復(fù)核人 / 日期：附表5：線性和范圍驗證記錄序號12345濃度 （ ug/ml ）峰面積回歸方程相關(guān)系數(shù)結(jié)論 :復(fù)核人 / 日期：檢查人 / 日期：成都 * 制藥有限責(zé)任公司確認(rèn)與驗證頁碼：10文件編碼：P-7(JY)2018001版 本 號：00題目： 清潔驗證中化學(xué)殘留物（貝諾酯）檢測分析方法驗證方案附表6：檢測限驗證記錄序號1234