分析方法學(xué)驗證及確認(rèn)管理規(guī)程

1、質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)部門：質(zhì)量部標(biāo)題：分析方法學(xué)驗證及確認(rèn)管理規(guī)程起草人：日期：審核人：日期：批準(zhǔn)人：日期：編號：JSMS-QC-020-00前版編號：新增頁數(shù)：9執(zhí)行日期：2014年8月1日下次審核日期：2016年8月1日頒發(fā)部門：質(zhì)量部1 .目的：制定分析方法學(xué)驗證及確認(rèn)的管理規(guī)程。2 .范圍：適用于分析方法學(xué)的驗證及確認(rèn)。3 .責(zé)任：QC檢測員，QGfc管。4 .內(nèi)容：4.1 方法驗證方法驗證就是根據(jù)檢驗項米的要求，預(yù)先設(shè)置一定的驗證內(nèi)容和驗證標(biāo)準(zhǔn)要求，并通過設(shè)計合理的試驗來驗證所采用的分析方法是都符合檢驗項目的要求。4.1.1 方法驗證的一般原則通常情況下，分析方法需進行方法驗證。對于僅需按照

2、實驗室日常測試操作步驟即可測定的檢驗項目不需要進行驗證，如外觀、崩解時限、密度、重量、pH值、灰分、方法學(xué)驗證的內(nèi)容應(yīng)根據(jù)檢驗項目的要求，結(jié)合所采用分析方法的特點確定。同一分析方法用于不同的檢驗項目會有不同的驗證要求。4.1.2 需要驗證的檢驗項目檢驗項目是為控制藥品質(zhì)量，保證藥品安全有效而設(shè)定的測試項目，根據(jù)檢驗項目的設(shè)定目的和驗證內(nèi)容的不同要求，需驗證的檢驗項目分為四類：1 .鑒別試驗；2 .雜質(zhì)的限度檢查；3 .雜質(zhì)的定量測定；4 .含量測定，包含原料藥或制劑中有效成分的含量，制劑中其他成分（如防腐劑等）的含量，溶出度與釋放度等檢查中的溶出量。以及含量均勻度。除此之外還有一些物理項目的檢

3、測如粒徑分布、旋光度、熔點和硬度，其要求與其他檢驗項目有所不同，通常其分析方法驗證應(yīng)有不同的要求。鑒別的目的在于判定被分析物是目標(biāo)化合物，而非其他物質(zhì)。用于鑒別的分析方法要求具有較強的專屬性和耐用性。雜質(zhì)檢查主要用于控制主成分意外的雜質(zhì)，如無機雜質(zhì)、有機雜質(zhì)等。雜質(zhì)檢查分為限度檢查和定量測定這兩部分。用于限度檢查的分析方法驗證側(cè)重專屬性、檢測限和耐用性。用于定量測定的分析方法驗證強調(diào)專屬性、準(zhǔn)確度、精確度、線性、范圍、定量限和耐用性。含量測定對準(zhǔn)確度要求較高，因此所采用的分析方法要求具有一定的專屬性、準(zhǔn)確度和線性要求。中國藥典2010年版中規(guī)定了不同的檢驗項目需要驗證不同的內(nèi)容，詳見表表一驗證

4、項目和驗證內(nèi)容驗證內(nèi)容檢驗項目鑒別雜質(zhì)測定含量測定士舁Ab里限度準(zhǔn)確度否是否是精密度重復(fù)性否是否是中間精密度否是*否是*專屬性*是是是是檢測限否是*是否定量限否是否否線性否是否是范圍否是否是耐用性是是是是備注：1.*:已有重現(xiàn)性驗證，不需驗證中間精密度；5 .*:如一種方法不夠?qū)?，可由其他分析方法予以補充；6 .*:視具體情況予以驗證；7 .“是”代表該項內(nèi)容需要驗證，“否”代表該項內(nèi)容不需要驗證。4.1.3 方法驗證內(nèi)容4.1.3.1 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度系指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度。一般用回收率表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測試。(1)驗證方法準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)建立，至少用

5、9個測定結(jié)果進行評價。例如，設(shè)計3個不同濃度，每個濃度各分別制備3份供試品溶液，進行測定。準(zhǔn)確度是定量測定的必要條件，因此含量測定、雜質(zhì)定量測定均需驗證準(zhǔn)確度。原料藥與制劑所用的具體方法見表二。表二準(zhǔn)確度驗證方法檢驗項目原料藥制劑備注含量測定方法1:用已知純度的對照品或供試品進行測定方法2:用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確的另一方法測定結(jié)果進行比較方法1:用含已知被測物的各組分混合物進行測定方法：如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進行測定方法3:用本法所得的結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一方法測定的結(jié)果進行比較如該分析方法已經(jīng)測試并求出精密度、線性和專屬性，在準(zhǔn)確度也可推薦的情況下，準(zhǔn)確度可

6、/、必再做雜質(zhì)的定量測定方法1:可同原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進行測定方法2:如果不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測定結(jié)果與另一成熟的方法進行比較，如藥典方法或經(jīng)過驗證的方法在不能測得雜質(zhì)降解產(chǎn)物的響應(yīng)因子或小能測得對應(yīng)原料藥的響應(yīng)因子。應(yīng)明確單個雜質(zhì)的雜質(zhì)總量詳單與主成分的重量比(%或面積比(%例如：測定含量的準(zhǔn)確度，按標(biāo)示的80%100%口120喇己制三個濃度的溶液，每個濃度各分別制備3份供試品溶液，進行測定。根據(jù)測定結(jié)果與配制濃度計算出平均回收率以及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。(2)數(shù)據(jù)要求需報告已知加入量的回收率(,或測定結(jié)果平均值與真實值之差及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差或可信限。4.1.3.2 精密度精密度系

7、指在規(guī)定的測試條件下，同一均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。精密度與準(zhǔn)確度不同。精密度體現(xiàn)了多次重復(fù)測定同一被分析物時各測定值之間的接近程度，但它不能表達(dá)與已建立的真實值或者參考值之間的符合程度，后者由準(zhǔn)確度來測定。通過一系列的測定值，可以得到良好的精密度，但是由于所用分析方法存在的偏差，所得的平均值不一定與真實值或參考值相符，在這種狀況下，需要修改方法以消除偏差。(1)驗證方法精密度可從重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性三個層次考察。詳見表三。表三精密度驗證方法名稱定義驗證方法重復(fù)性在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度成為重

8、復(fù)性在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個測定結(jié)果進行評價。例如，設(shè)計3個不問濃度，每個濃度各分別制備3份供試品溶液或?qū)⑾喈?dāng)于100魅度水平的供試品溶液，用至少測定6次的結(jié)果進行評價中間精密度在同一實驗室，/、同時間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果之間的精密度，成為中間精密度為考察隨機變動因素對精密度的影響，應(yīng)設(shè)計方案進行中間精密度試驗。變動因素為不同日期、不同分析人員，不同設(shè)備重現(xiàn)性小同實驗室之間由小同分析人員測定結(jié)果之間的精密度，成為重現(xiàn)性法定標(biāo)準(zhǔn)采用的分析方法或在不同實驗室之間進行方法轉(zhuǎn)移時，應(yīng)進行重現(xiàn)性試驗。例如建立藥典分析方法時，通過協(xié)同檢驗得出重現(xiàn)性結(jié)果。協(xié)同檢驗的目的、過程和重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載

9、在起草說明中，應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗用的樣品本身的質(zhì)量均勻性和貯存運輸中的環(huán)境影響因素，以免影響重現(xiàn)性結(jié)果(2)數(shù)據(jù)要求均應(yīng)報告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差和可信限4.1.3.3 專屬性專屬性系指在其他成分(如：雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等)可能存在下，采用的方法能正確測定出被測物的特性。通常，鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測定均應(yīng)考察其專屬性。如一種方法不夠?qū)?可由其他分析方法予以補充。例如檢測具有旋光特性的活性物質(zhì)，除采用非手性薄層色譜法或高效液相色譜法外，還應(yīng)增加旋光度的檢查。驗證方法見表四。表四專屬性驗證方法檢驗項目概述驗證方法備注鑒別試驗鑒別試驗用于確認(rèn)被測成分符合其特征專屬性要求證明其能與可能共存的物質(zhì)

10、或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分含被測成分的供試品呈正反應(yīng)，而/、含被測成分的供試品以及結(jié)構(gòu)相似或組分中對與藥品，輔料不得干擾其有效成分的鑒別作為純度檢查，方法1:在雜質(zhì)可獲得的情況卜，引向試驗中加入一所采用的分析方定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)與共存物質(zhì)能得到分離和檢雜質(zhì)測定（包括限度檢查和法應(yīng)確?？蓹z出被分許物中雜質(zhì)的含量測定，如出，并具有適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確度與精密度方法2:在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不恩能獲得的情況下，專屬性可通過測定含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，與另一定量測定）有關(guān)物質(zhì)、重金屬、有機溶劑等。因此雜質(zhì)檢查要個已驗證的方法或藥典方法比較結(jié)果?；?qū)υ嚇佑脧姽庹丈?、高溫、高濕、酸（堿）水解或氧化的方法進行加速破壞，以研究

11、可能的降解產(chǎn)物和降解途徑，并色譜法和其他分離方法，應(yīng)附代表性求分析方法后,比較破壞前后檢出的雜質(zhì)個數(shù)。必要時可米用二極管圖譜，以說明定的專屬性陣列檢測和質(zhì)譜檢測，進行峰純度檢查方法的專屬方法1:在雜質(zhì)可獲得的情況卜，引向試樣中加入雜性，并應(yīng)標(biāo)明質(zhì)或輔料，考察測定結(jié)果是否受干擾，并可與未知諸成分在途雜質(zhì)和輔料的試樣比較測定結(jié)果。中的位置，色含量測定的目的方法2:在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，專屬譜法的分離是得到試樣中被性可通過測定含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，與另一個度應(yīng)符合要含量測定分析物的含量測已驗證的方法或藥典方法比較結(jié)果?；?qū)υ嚇佑脧姽馇蠖ɑ蛐?分準(zhǔn)確結(jié)照射、高溫、高濕、酸（堿）水解或氧

12、化的方法進行果加速破壞，用兩種方法進行含量測定，比較測定結(jié)果。必要時可采用二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測進行峰純度檢查，證明含量測定成分的色譜峰中不包含其他成分4.1.3.4 檢測限檢測限(LOD或DD系指試驗中的被測物能夠被檢測出的最低量。藥品的雜質(zhì)測定，應(yīng)通過測試確定方法的檢測限。(1)驗證方法(表五)表五雜質(zhì)測定檢測限驗證方法檢測項目驗證方法雜質(zhì)測定方法1:非儀器分析目視法用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量方法2:信噪比法用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，計算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為3:1或2:

13、1時相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限(2)數(shù)據(jù)要求應(yīng)附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結(jié)果。4.1.3.5 定量限定量限(LOCMEQD系指試樣中的被測物能夠被定量測定的最低量，其被測結(jié)果應(yīng)具有一定的準(zhǔn)確度和精密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量測定方法研究時，應(yīng)確定方法的定量限。(1)驗證方法(表六)表六雜質(zhì)定量測定驗證方法檢驗項目驗證方法雜質(zhì)定量測定信噪比法：一般以信噪比為10:1時相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定定量限4.1.3.6 線性線性是指在設(shè)計的測定范圍內(nèi)，檢測結(jié)果與試樣中被測物的濃度直接呈正比關(guān)系的程度。線性是定量測定的基礎(chǔ)，涉及定量測定的項目，如雜質(zhì)定量測定和含量測定均需驗證線性。(1)驗證方

14、法應(yīng)在規(guī)定的測定范圍內(nèi)測定線性關(guān)系。可用一貯備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列供試樣品的方法進行測定，至少制備5個濃度的供試樣品每個濃度各一份，每份供試樣品測定3次，以測得的響應(yīng)信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，用最小二乘法進行線性回歸。必要時，響應(yīng)信號可經(jīng)數(shù)字轉(zhuǎn)換，再進行線性回歸計算。（2）數(shù)據(jù)要求應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線形圖。4.1.3.7 范圍范圍系指能夠達(dá)到一定的精密度、準(zhǔn)確度和線性，測試方法使用的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定，要求見線性內(nèi)容4.1.3.6。4.1.3.8 耐用性耐用性系指測定條件有小的變

15、動時，測定結(jié)果不收影響的承受程度，為使方法可用于常規(guī)檢驗提供依據(jù)。4.2 方法確認(rèn)4.2.1 適用范圍適用于：物料和產(chǎn)品中不需要進行驗證的檢驗方法以及藥典方法和其他已驗證的法定標(biāo)準(zhǔn)。通過方法確認(rèn)來證明方法在本實驗室條件下的適用性。不適用于：實驗室日常測試操作步驟不需要進行方法確認(rèn)，例如（包括但不限于）干燥失重、熾灼殘渣。各種濕法化學(xué)步驟如酸值和檢定的儀器方法如pH計，除非有特殊要求。4.2.2 確認(rèn)方法對于方法確認(rèn)，通常采用如下兩種方式：方式一：由亮膜檢驗人員分別獨立對同一批產(chǎn)品進行檢驗（如可能，使用不同儀器），比較兩人的檢測結(jié)果來證明方法在本實驗室（人員，分析儀器、試劑等）的適用性。方式二：

16、根據(jù)驗證目的和評估結(jié)果選擇相關(guān)項目進行確認(rèn)，如表七（僅供參考）。表七檢驗項目確認(rèn)內(nèi)容示例檢驗項目準(zhǔn)確度精密度專屬性檢測限定量限線性范圍耐用性原料藥鑒另ij（HPLC法）否否可能否否否否否有美物質(zhì)（HPLC法）否可能是否是否否否含量測定（HPLC法）否可能可能否否否否否制劑鑒另ij（HPLC法）否否是否否否否否溶出度可能是是否可能否否否有關(guān)物質(zhì)可能是是否是否否否含量測定可能是是否否否否否備注：“是”代表該項類容需要確認(rèn)，“否”代表該項內(nèi)容不需要確認(rèn)?！翱赡堋贝碓擁梼?nèi)容需根據(jù)實際情況評價確定。4.3 方法驗證、方法確認(rèn)的管理企業(yè)必須制定方法驗證、方法確認(rèn)的操作規(guī)程，應(yīng)涵蓋范圍，方案的起草、審批和批準(zhǔn)，方案的實施，報告的起草、審批和批準(zhǔn)，以及文件的管理等方面內(nèi)容。4.3.1 方案的準(zhǔn)備在方法驗證、方法確認(rèn)前，必須依據(jù)操作規(guī)程進行方案的起草、審批和批準(zhǔn)。對于方案，有如下要求：詳細(xì)描述被執(zhí)行程序；明確規(guī)定被測參數(shù)的接受標(biāo)準(zhǔn)；明確職責(zé)。4.3.2