我用DNA重組技術的基本工具

1、 1 1、大腸桿菌的一種限制酶大腸桿菌的一種限制酶（EcoREcoR)能識別能識別GAATTCGAATTC序列，序列，并在并在G G和和A A之間切開形成之間切開形成黏性黏性末端。末端。 2 2、SmaSma能識別能識別CCCGGGCCCGGG序列，序列，并在并在C C和和G G之間切割形成之間切割形成平平末端末端 。常見的兩種限制酶AATCTGAATGCT限制性內切酶作用過程黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端基因的針線：DNADNA連接酶G A A T T CC T T A A GG A A T T CC T T A A GG C T T A A A A T T C GG C T T A A

2、A A T T C GG C T T A A A A T T C G用同種限制酶切割用同種限制酶切割連接連接黏性黏性末端末端連接連接黏性黏性末端末端和和平平末端末端分類分類作用作用E.coli DNA連接酶連接酶連接酶種類：連接酶種類：T4DNA連接酶連接酶DNA聚合酶聚合酶和和DNA連接酶有何相同點和連接酶有何相同點和不同點？不同點？DNA連接酶連接酶DNA聚合酶聚合酶連接連接DNA鏈鏈連接部位連接部位雙鏈雙鏈在兩在兩DNADNA片片斷斷之間形之間形成成磷酸二磷酸二脂鍵脂鍵單鏈單鏈將將單個單個核苷酸核苷酸加到已存在的加到已存在的核酸片段末端核酸片段末端形成形成磷酸二脂磷酸二脂鍵鍵三、分子運輸

3、車基因進入受體細胞的載體 要讓一個從甲生物細胞內取出來的基因在乙生要讓一個從甲生物細胞內取出來的基因在乙生物體內進行表達，首先得將這個基因送到乙生物的物體內進行表達，首先得將這個基因送到乙生物的細胞內去！細胞內去！能將外源基因送入受體細胞的工具能將外源基因送入受體細胞的工具就是就是載體載體。1 1、基因工程的載體被喻為、基因工程的載體被喻為：分子運輸車分子運輸車2 2、基因工程的載體來源、基因工程的載體來源：作為基因工程的載體需要怎樣的條件呢？作為基因工程的載體需要怎樣的條件呢？作為載體的必要條件1. 1.能自我復制能自我復制能進入受體生物細胞并在受體生物細胞內復制并表達能進入受體生物細胞并在

4、受體生物細胞內復制并表達；2.2.有一個至多個限制酶切割位點有一個至多個限制酶切割位點能與目的基因結合能與目的基因結合3.3.有遺傳標記基因有遺傳標記基因便于觀察便于觀察4.4.對受體細胞無害、易分離對受體細胞無害、易分離安全、比較容易得到安全、比較容易得到課本知識回顧 1 1、基因工程又叫做基因工程又叫做 或或 。通俗地說，就是按照。通俗地說，就是按照人們的意愿，把一種生物的某種人們的意愿，把一種生物的某種 提取出來，加以提取出來，加以 ， 然后放到另一種生物的細胞里，然后放到另一種生物的細胞里， 改造生物的遺傳性狀改造生物的遺傳性狀。基因拼接技術基因拼接技術DNA重組技術重組技術基因基因修

5、飾改造修飾改造定向地定向地2、DNA 重組技術的基本工具重組技術的基本工具“分子手術刀分子手術刀” “分子縫合針分子縫合針” “分子運輸車分子運輸車”限制（性核酸內切）酶限制（性核酸內切）酶DNA連接酶連接酶基因進入受體細胞的載體基因進入受體細胞的載體原核生物中分離純化出來原核生物中分離純化出來特定的核苷酸序列特定的核苷酸序列磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵黏性末端黏性末端平末端平末端1、種類：、種類：2、作用部位：、作用部位：兩類兩類連接黏性末端連接黏性末端Ecoli DNA連接酶連接酶T4 DNA連接酶連接酶磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵連接黏性末端和平末端連接黏性末端和平末端通常有三種通常有三種: :作為載體

6、的條件：作為載體的條件： 在進行基因工程操作中在進行基因工程操作中, ,真正被用作載體的質粒都真正被用作載體的質粒都是在是在 質粒質粒噬菌體衍生物噬菌體衍生物動植物病毒動植物病毒天然質粒天然質粒人工改造人工改造的的能自我復制；有切割位點；能自我復制；有切割位點；有遺傳標記基因；對受體細胞無害、易分離有遺傳標記基因；對受體細胞無害、易分離基礎上進行過基礎上進行過1 1、在基因工程中，切割運載體和、在基因工程中，切割運載體和含有目的基因的含有目的基因的DNADNA片段，需使片段，需使用（用（ ）A.A.同種限制酶同種限制酶 B. B. 兩種限制酶兩種限制酶C.C.同種連接酶同種連接酶 D. D. 兩種連接酶兩種連接酶(2012高考)4.根據(jù)基因工程的有關知識，回答：（1）限制酶切割DNA分子后產生的片段，其末端類型有_和_。（2）質粒運載體用EcoR 切割后產生的片段如下: AATTCG GCTTAA為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoR 切割外，還可用另一種限制酶切割，該酶必須具有的特點是_（3）按其來源不同，基因工程找那個所使用