腸桿菌科細菌鑒定

1、腸桿菌科細菌鑒定組員：李木生，顏大鈞，鄭偉壇，朱俊林，胡思妙，王榮迎，陳琳蔓腸桿菌科細菌一般性鑒定程序未知腸桿菌未知腸桿菌分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)挑取可疑菌落挑取可疑菌落純培養(yǎng)純培養(yǎng)革蘭染色鏡檢革蘭染色鏡檢生化實驗鑒定生化實驗鑒定藥敏試驗藥敏試驗血清學試驗血清學試驗一.分離培養(yǎng) 無菌操作用接種環(huán)提取可疑腸道桿菌，在EMB上分區(qū)劃線接種。送37培養(yǎng)24小時。二.純培養(yǎng)（一）確定可疑菌落。1.觀察EMB表面的菌落特征：（1）.凡紫黑色的單個菌落可初步定為可疑大腸桿菌菌落，標號為。（2）.凡光滑無色透明的單個小菌落可初步定為痢疾桿菌屬菌落或傷寒桿菌屬菌落，標號為。（二）.可疑菌落純化培養(yǎng) 無菌操作用接種針挑

2、取已編號可疑菌落，分別接種在雙糖鐵高層瓊脂斜面和半固體培養(yǎng)基上，送37溫箱培養(yǎng)2448小時。（三）.雙糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)特征觀察與動力觀察初步確定為傷寒桿菌初步確定為傷寒桿菌初步確定為大腸桿菌初步確定為大腸桿菌革蘭染色鏡檢 挑取純培養(yǎng)后的可疑菌落進行革蘭染色，確定為革蘭陰性菌后進行革蘭陰性菌革蘭陰性菌短桿狀，分散排列短桿狀，分散排列生化試驗鑒定 將需全面鑒定的可疑細菌從雙糖鐵瓊脂斜面挑菌分別接將需全面鑒定的可疑細菌從雙糖鐵瓊脂斜面挑菌分別接種于各種生化反應培養(yǎng)基。每株可疑菌需接種的培養(yǎng)基計種于各種生化反應培養(yǎng)基。每株可疑菌需接種的培養(yǎng)基計有糖發(fā)酵管（有糖發(fā)酵管（葡葡. .乳乳. .麥麥. .甘甘

3、. .蔗蔗）各）各1 1支，支，蛋白胨水蛋白胨水1 1支支（I I），），葡萄糖蛋白胨水葡萄糖蛋白胨水2 2支（支（M.VpM.Vp），），枸櫞酸鹽瓊脂斜面枸櫞酸鹽瓊脂斜面1 1支（支（C C）。接種完畢后，試管置于試管架上，送）。接種完畢后，試管置于試管架上，送3737溫箱溫箱培養(yǎng)培養(yǎng)24482448小時后觀察記錄結果。小時后觀察記錄結果。1.1.不變黃，小管無氣泡：糖發(fā)不變黃，小管無氣泡：糖發(fā)酵為酵為陰性（陰性（）。2.2.黃色，小管有氣泡（產(chǎn)酸，黃色，小管有氣泡（產(chǎn)酸，產(chǎn)氣）：糖發(fā)酵為產(chǎn)氣）：糖發(fā)酵為陽性（陽性（+ +）。 黃色，小管無氣泡（產(chǎn)酸，黃色，小管無氣泡（產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣）：糖發(fā)酵

4、為不產(chǎn)氣）：糖發(fā)酵為陽性（陽性（+ +）。VPVP試驗試驗紅色為紅色為VPVP陽性陽性。表1 腸桿菌科細菌生化反應鑒定結果記錄表細菌細菌編號編號葡萄葡萄糖糖 乳乳糖糖麥芽麥芽糖糖甘露甘露醇醇 蔗蔗糖糖 吲吲哚哚甲基甲基紅紅 VP枸櫞枸櫞酸鹽酸鹽H2S動力動力大腸桿菌 + + + - - - +傷寒桿菌 - - - + - + + +細菌細菌編號編號葡萄葡萄糖糖 乳乳糖糖麥芽麥芽糖糖甘露甘露醇醇 蔗蔗糖糖 吲吲哚哚甲基甲基紅紅 VP枸櫞枸櫞酸鹽酸鹽H2S動力動力大腸桿菌 -/+ + + - - - +傷寒桿菌 + - + + - - + - - -/+ +表2 腸桿菌科細菌生化反應鑒定數(shù)據(jù)參考表

5、 實驗原理：含有定量抗菌藥物的紙片貼在己接種測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后便不斷地向紙片周圍區(qū)域擴散，形成遞減的梯度濃度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內的細菌的生長被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對測試菌的最低抑菌濃度 （MIC）呈負相關，即抑菌圈愈大，MIC愈小。藥物敏感試驗實驗方法 （一）接種肉湯培養(yǎng)基 （二）菌液均勻涂抹平板培養(yǎng)基 （三）分別夾取青霉素、鏈霉素、慶大霉素和頭孢拉定四種抗生素紙片貼在平板上進行培養(yǎng)實驗結果實驗結果青霉素(mm）鏈霉素（mm）頭孢拉定（mm）慶大霉素（mm）大腸桿菌-1815(敏感）-2415(敏感）沙門菌-1615(敏感）-1915(敏感