各論4禽流感新城疫

1、禽的病毒性疾病概述禽的病毒性疾病概述新城疫病毒新城疫病毒 (Newcastle disease viruses, NDV)禽流感病毒（禽流感病毒（Avian influenza virus, AIV）馬立克病病毒（馬立克病病毒（ Mareks disease virus ,MDV）傳染性囊病病毒（傳染性囊病病毒（Infectious bursal disease virus, IBDV）？禽流感病毒（禽流感病毒（Avian influenza virusAvian influenza virus，AIVAIV）l19011901年即分離禽流感病毒，但直到年即分離禽流感病毒，但直到1955195

2、5年才明確它與人及年才明確它與人及哺乳動(dòng)物流感的關(guān)系，哺乳動(dòng)物流感的關(guān)系，2020世紀(jì)世紀(jì)7070年代開始注意在水禽廣泛年代開始注意在水禽廣泛存在的禽流感病毒是流感病毒的存在的禽流感病毒是流感病毒的“基因庫基因庫”，并對家禽業(yè)，并對家禽業(yè)構(gòu)成潛在威脅。構(gòu)成潛在威脅。l禽流感的高致病力毒株對雞有致病性，舊稱禽流感的高致病力毒株對雞有致病性，舊稱“真性雞瘟真性雞瘟”（fowl plaguefowl plague），現(xiàn)名高致病性禽流感（），現(xiàn)名高致病性禽流感（Highly Highly pathogenic avian influenza, HPAIpathogenic avian influenz

3、a, HPAI）是）是OIEOIE規(guī)定的通報(bào)規(guī)定的通報(bào)疫病。疫病。病原特征病原特征致病機(jī)理致病機(jī)理診斷診斷防控防控禽流感病毒（禽流感病毒（Avian influenza virus, AIV）高致病性禽流感的病原是一種分節(jié)段的高致病性禽流感的病原是一種分節(jié)段的RNA病毒，病毒，屬于正粘病毒科（屬于正粘病毒科（Orthomyxoviridae），甲型流感病毒屬。），甲型流感病毒屬。流感病毒的血凝素（流感病毒的血凝素（HA）及神經(jīng)氨酸酶（）及神經(jīng)氨酸酶（NA）是兩個(gè)最）是兩個(gè)最為重要的分類指標(biāo)，為重要的分類指標(biāo)，所有所有16個(gè)個(gè)HA與與9個(gè)個(gè)NA的組合都在禽類發(fā)現(xiàn)的組合都在禽類發(fā)現(xiàn)病毒顆粒多形性，

4、多為球形，但新分離病毒顆粒多形性，多為球形，但新分離的多為絲狀。顆粒的最小直徑的多為絲狀。顆粒的最小直徑80-120nm，有囊膜和纖突。，有囊膜和纖突。核衣殼螺旋形對稱。核衣殼螺旋形對稱。分類地位分類地位l高致病性禽流感的病原是一種分節(jié)段的高致病性禽流感的病原是一種分節(jié)段的RNARNA病毒，屬于正粘病毒，屬于正粘病毒科（病毒科（OrthomyxoviridaeOrthomyxoviridae），），甲型流感病毒屬。甲型流感病毒屬。l正粘病毒科有正粘病毒科有5 5個(gè)屬個(gè)屬 甲型流感病毒屬：是馬、豬、貂、海豹、鯨、禽及甲型流感病毒屬：是馬、豬、貂、海豹、鯨、禽及 人的病原人的病原 乙型流感病毒屬：

5、僅感染人乙型流感病毒屬：僅感染人 丙型流感病毒屬：感染人與豬丙型流感病毒屬：感染人與豬 托高土病毒屬托高土病毒屬 ：以蜱為媒介的蟲媒病毒，感染家畜：以蜱為媒介的蟲媒病毒，感染家畜 及人類及人類 鮭傳貧病毒屬：感染魚類的鮭傳染性貧血病毒鮭傳貧病毒屬：感染魚類的鮭傳染性貧血病毒病毒命名病毒命名l流感病毒的血凝素（流感病毒的血凝素（HA）及神經(jīng)氨酸酶（及神經(jīng)氨酸酶（NA）是兩個(gè)最為重要的分類指標(biāo)是兩個(gè)最為重要的分類指標(biāo)l甲型流感病毒：甲型流感病毒：16個(gè)個(gè)HA亞型亞型 9個(gè)個(gè)NA亞型亞型還可根據(jù)病毒的宿主、地理來源、毒株號及分離年代進(jìn)一步還可根據(jù)病毒的宿主、地理來源、毒株號及分離年代進(jìn)一步分類命名，

6、例如分類命名，例如 l甲型流感病毒甲型流感病毒/ /馬馬/ /布拉格布拉格/1/56/1/56（H7N7H7N7）馬流感病毒馬流感病毒1 1型原型原型型l甲型流感病毒甲型流感病毒/ /香港香港/1/68/1/68（H3N2H3N2）人流感人流感19681968年大流行株年大流行株出現(xiàn)重要的病原出現(xiàn)重要的病原lH7N7H7N7及及H3N8H3N8，引致馬呼吸道疾病，過去稱為馬流感病引致馬呼吸道疾病，過去稱為馬流感病毒毒1 1型與型與2 2型型lH1N1H1N1及及H3N2H3N2，通常從豬分離通常從豬分離lH7N7H7N7及及H4N5H4N5，從患呼吸道及全身疾病的海豹分離從患呼吸道及全身疾病的

7、海豹分離lH10N4H10N4從患呼吸道病的貂分離從患呼吸道病的貂分離lH1N1H1N1、H2N2H2N2、H3N2H3N2以及以及H5N1H5N1，可能還有可能還有H3N8H3N8，引致人引致人呼吸道疾病呼吸道疾病l所有所有1616個(gè)個(gè)HAHA與與9 9個(gè)個(gè)NANA的組合都在禽類發(fā)現(xiàn)的組合都在禽類發(fā)現(xiàn)l病毒顆粒多形性，多為球形，但新分離的多為絲狀。顆粒病毒顆粒多形性，多為球形，但新分離的多為絲狀。顆粒的最小直徑的最小直徑80-120nm80-120nm，有囊膜和纖突。，有囊膜和纖突。l核衣殼螺旋形對稱。核衣殼螺旋形對稱。l為線狀負(fù)鏈單股為線狀負(fù)鏈單股RNARNA，大小，大小10000-136

8、00nt10000-13600nt。l分分8 8個(gè)節(jié)段。每個(gè)節(jié)段的兩端具有末端重復(fù)序列，所有節(jié)個(gè)節(jié)段。每個(gè)節(jié)段的兩端具有末端重復(fù)序列，所有節(jié)段的段的33端相同。端相同。l基因組的各個(gè)節(jié)段一端形成環(huán)，由核衣殼蛋白（基因組的各個(gè)節(jié)段一端形成環(huán)，由核衣殼蛋白（NPNP，分子，分子量量560 000560 000）包裹。）包裹。病毒的主要特性 NAHAM1脂質(zhì)囊膜NPRNAP蛋白M2 甲型流感病毒結(jié)構(gòu)模式圖甲型流感病毒結(jié)構(gòu)模式圖lRNA 1 2 3 RNA 1 2 3 編碼編碼 P P蛋白（蛋白（PA PB1 PB2PA PB1 PB2）在細(xì)胞質(zhì)中形成多）在細(xì)胞質(zhì)中形成多聚酶復(fù)合體，催化聚酶復(fù)合體，催

9、化RNARNA的合成的合成lNP :NP :核蛋白，與核蛋白，與RNARNA結(jié)合后形成核酸核蛋白體再與結(jié)合后形成核酸核蛋白體再與P P蛋白結(jié)蛋白結(jié)合成為整個(gè)病毒粒子的核心。合成為整個(gè)病毒粒子的核心。 纖突糖蛋白有兩種，一種為棒狀的血凝素蛋白（纖突糖蛋白有兩種，一種為棒狀的血凝素蛋白（HAHA，分子，分子量量63 00063 000），由同源三聚體組成；另一種為蘑菇狀的神經(jīng)），由同源三聚體組成；另一種為蘑菇狀的神經(jīng)氨酸酶蛋白（氨酸酶蛋白（NANA，分子量，分子量50 000)50 000) HA:HA1,HA2 HA1 HA:HA1,HA2 HA1與細(xì)胞表面的受體結(jié)合促進(jìn)粘附；與細(xì)胞表面的受體結(jié)

10、合促進(jìn)粘附；HA2HA2與與細(xì)胞膜融合促進(jìn)其穿入。細(xì)胞膜融合促進(jìn)其穿入。 NA NA具有唾液酸酶的活性，清除病毒顆粒表面特異性糖蛋具有唾液酸酶的活性，清除病毒顆粒表面特異性糖蛋白末端唾液酸，防止病毒自我凝集，促使病毒釋放。白末端唾液酸，防止病毒自我凝集，促使病毒釋放。l囊膜與基質(zhì)蛋白（囊膜與基質(zhì)蛋白（M1M1，分子量，分子量28 00028 000）相連，）相連，M1M1參與病毒參與病毒轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)的過程，主要參與被感染細(xì)胞的細(xì)胞核與胞質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)的過程，主要參與被感染細(xì)胞的細(xì)胞核與胞質(zhì)的物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)。物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)。l另一種基質(zhì)蛋白另一種基質(zhì)蛋白M2M2（分子量（分子量11 00011 000）的四聚體插

11、入）的四聚體插入M1M1，構(gòu)，構(gòu)成少量的離子通道，在核內(nèi)的病毒子脫離核衣殼時(shí)發(fā)揮離成少量的離子通道，在核內(nèi)的病毒子脫離核衣殼時(shí)發(fā)揮離子通道作用，促使離子進(jìn)入病毒粒子，解除蛋白之間的相子通道作用，促使離子進(jìn)入病毒粒子，解除蛋白之間的相互作用?；プ饔?。l非結(jié)構(gòu)蛋白非結(jié)構(gòu)蛋白NS1NS1和和NS2NS2，該基因是基因組中結(jié)構(gòu)最小的節(jié)段，該基因是基因組中結(jié)構(gòu)最小的節(jié)段，存在于被感染的細(xì)胞的胞核和胞質(zhì)中，抑制存在于被感染的細(xì)胞的胞核和胞質(zhì)中，抑制polyApolyA結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)的mRNAmRNA從細(xì)胞核內(nèi)向外運(yùn)輸，從而抑制宿主細(xì)胞蛋白的合成從細(xì)胞核內(nèi)向外運(yùn)輸，從而抑制宿主細(xì)胞蛋白的合成。圖圖22-5 流感

12、病毒的吸附、穿入與脫殼（據(jù)流感病毒的吸附、穿入與脫殼（據(jù)Greber）核膜核膜血凝素神經(jīng)血凝素神經(jīng)氨酰酶氨酰酶（HNHN）M1M1vRNPsvRNPs胞漿膜胞漿膜凹窩凹窩內(nèi)吞小體內(nèi)吞小體核孔復(fù)合物核孔復(fù)合物基質(zhì)蛋白基質(zhì)蛋白2 2（M2M2）基質(zhì)蛋白基質(zhì)蛋白1 1（M1M1）病毒病毒RNA-RNA-核衣殼蛋白核衣殼蛋白（vRNAvRNA-NP-NP）抵抗力l與所有有囊膜的病毒一樣，抵抗力不強(qiáng)。流感病與所有有囊膜的病毒一樣，抵抗力不強(qiáng)。流感病毒對熱、脂溶劑敏感毒對熱、脂溶劑敏感l(wèi)在外環(huán)境中極不穩(wěn)定在外環(huán)境中極不穩(wěn)定病毒的變異病毒的變異甲型流感病毒變異的顯著特點(diǎn)是甲型流感病毒變異的顯著特點(diǎn)是HAHA

13、和和NANA發(fā)生發(fā)生l遺傳性或抗原性漂移遺傳性或抗原性漂移（genetic or antigenicgenetic or antigenic driftdrift）l遺傳性或抗原性轉(zhuǎn)移遺傳性或抗原性轉(zhuǎn)移（genetic or antigenic shift）l抗原性變異是抗原性變異是HAHA和和NANA二者的遺傳性或抗原性漂移二者的遺傳性或抗原性漂移（genetic or antigenic driftgenetic or antigenic drift）及遺傳性或抗原性轉(zhuǎn)移）及遺傳性或抗原性轉(zhuǎn)移（genetic or antigenic shiftgenetic or antigenic s

14、hift）導(dǎo)致的。）導(dǎo)致的。l漂移發(fā)生在某個(gè)亞型之內(nèi)漂移發(fā)生在某個(gè)亞型之內(nèi)，是點(diǎn)突變的積蓄，其中和表位是點(diǎn)突變的積蓄，其中和表位與未突變株稍有差異。與未突變株稍有差異。l轉(zhuǎn)移則驟然獲得一個(gè)全新的轉(zhuǎn)移則驟然獲得一個(gè)全新的HAHA或或NANA基因基因，從而產(chǎn)生新的亞從而產(chǎn)生新的亞型，可能在全世界引致新型流感的暴發(fā)流行。型，可能在全世界引致新型流感的暴發(fā)流行。 l抗原漂移和抗原轉(zhuǎn)移是病毒毒力變異的基礎(chǔ)?？乖坪涂乖D(zhuǎn)移是病毒毒力變異的基礎(chǔ)。l前者主要是指發(fā)生在病毒基因中的點(diǎn)突變前者主要是指發(fā)生在病毒基因中的點(diǎn)突變, ,其中以編碼其中以編碼HAHA的基因突變率最高的基因突變率最高, ,其次是其次是N

15、ANA。發(fā)生在不同位點(diǎn)上的突變。發(fā)生在不同位點(diǎn)上的突變對病毒的影響是不同的對病毒的影響是不同的:HA:HA受體結(jié)合點(diǎn)上的突變可能改變受體結(jié)合點(diǎn)上的突變可能改變病毒宿主特異性病毒宿主特異性, ,而發(fā)生在而發(fā)生在HAHA上糖基化位點(diǎn)及裂解位點(diǎn)的上糖基化位點(diǎn)及裂解位點(diǎn)的突變則可能導(dǎo)致病毒發(fā)生根本性變化。此外突變則可能導(dǎo)致病毒發(fā)生根本性變化。此外, ,不同于病毒不同于病毒內(nèi)部其他蛋白質(zhì)的變異一直處于相對穩(wěn)定的狀態(tài)內(nèi)部其他蛋白質(zhì)的變異一直處于相對穩(wěn)定的狀態(tài), HA, HA和和NANA基因的改變則可以隨時(shí)間的延長發(fā)生積累?？乖频淖兓虻母淖儎t可以隨時(shí)間的延長發(fā)生積累。抗原漂移的變異幅度較小異幅度較小,

16、 ,一般不引起暴發(fā)流行。一般不引起暴發(fā)流行。l后者是指后者是指, ,由于基因節(jié)段間的重配使病毒結(jié)構(gòu)發(fā)生較大幅由于基因節(jié)段間的重配使病毒結(jié)構(gòu)發(fā)生較大幅度的突變而導(dǎo)致新的毒株或新的亞型出現(xiàn)。這種不同毒株度的突變而導(dǎo)致新的毒株或新的亞型出現(xiàn)。這種不同毒株間基因節(jié)段的重配可引起病毒基因的間基因節(jié)段的重配可引起病毒基因的“質(zhì)變質(zhì)變”, ,當(dāng)產(chǎn)生對當(dāng)產(chǎn)生對其缺乏免疫力的新毒株時(shí)其缺乏免疫力的新毒株時(shí), ,將引起新的暴發(fā)流行。將引起新的暴發(fā)流行。毒力變異的分子基礎(chǔ)lHAHA是否富含堿性氨基酸。是否富含堿性氨基酸。HAHA裂解為裂解為HA1HA1和和HA2HA2，暴露融合肽暴露融合肽段，通過融合進(jìn)入宿主細(xì)胞，

17、為入侵的關(guān)鍵步驟。段，通過融合進(jìn)入宿主細(xì)胞，為入侵的關(guān)鍵步驟。l高致病力毒株高致病力毒株HAHA的切割位點(diǎn)有多個(gè)氨基端毗連，決定該病的切割位點(diǎn)有多個(gè)氨基端毗連，決定該病毒可被機(jī)體大多數(shù)組織細(xì)胞的蛋白酶裂解。低致病力的裂毒可被機(jī)體大多數(shù)組織細(xì)胞的蛋白酶裂解。低致病力的裂解位點(diǎn)均只有一個(gè)單一的堿性氨基酸解位點(diǎn)均只有一個(gè)單一的堿性氨基酸精氨酸，只能被胰精氨酸，只能被胰蛋白酶切割，存在于消化道和呼吸道。蛋白酶切割，存在于消化道和呼吸道。l球體表面糖基化位點(diǎn)（影響細(xì)胞親和性），多聚酶復(fù)合體球體表面糖基化位點(diǎn)（影響細(xì)胞親和性），多聚酶復(fù)合體的作用（的作用（H5N1,NS1H5N1,NS1變化，破壞細(xì)胞內(nèi)關(guān)

18、鍵信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)通道）變化，破壞細(xì)胞內(nèi)關(guān)鍵信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)通道）等。等。l病毒毒力有很大差異。病毒毒力有很大差異。l高致病力毒株主要有高致病力毒株主要有H5N1H5N1和和H7N7H7N7亞型的某些毒株。亞型的某些毒株。l禽流感病毒能感染人，某些毒株甚至可不經(jīng)過豬體混合重禽流感病毒能感染人，某些毒株甚至可不經(jīng)過豬體混合重配再傳染的過程，直接感染人。配再傳染的過程，直接感染人。l重組的甲型流感在人群中三次大流行：重組的甲型流感在人群中三次大流行：19181918年西班牙流感年西班牙流感19571957年亞洲流感年亞洲流感19681968年香港流感年香港流感 人類的感染l西班牙型流行性感冒是人類歷史上最致命

19、的傳染病，在西班牙型流行性感冒是人類歷史上最致命的傳染病，在1918191919181919年曾經(jīng)造成全世界約年曾經(jīng)造成全世界約1010億人感染，億人感染，2 2千千5 5百萬到百萬到4 4千萬人死亡（當(dāng)時(shí)世界人口約千萬人死亡（當(dāng)時(shí)世界人口約1717億人）；億人）；l其全球平均致死率約為其全球平均致死率約為2.5%-5%2.5%-5%，和一般流感的，和一般流感的0.1%0.1%比較比較起來較為致命。起來較為致命。l其名字的由來并不是因?yàn)榇肆鞲袕奈靼嘌辣l(fā)；而是因?yàn)槠涿值挠蓙聿⒉皇且驗(yàn)榇肆鞲袕奈靼嘌辣l(fā)；而是因?yàn)楫?dāng)時(shí)西班牙有約當(dāng)時(shí)西班牙有約8 8百萬人感染了此病，甚至連西班牙國王百萬人感染了此

20、病，甚至連西班牙國王也感染了此病，所以被稱為西班牙型流行性感冒。至于在也感染了此病，所以被稱為西班牙型流行性感冒。至于在西班牙則稱此為法國型流行性感冒。西班牙則稱此為法國型流行性感冒。 流感期間流感期間 Camp Funston 的緊急軍事醫(yī)院的緊急軍事醫(yī)院。l國外學(xué)者認(rèn)為，在中國南部生活著密集的人群及養(yǎng)殖大量國外學(xué)者認(rèn)為，在中國南部生活著密集的人群及養(yǎng)殖大量的豬和鴨，彼此密切接觸提供了上述的機(jī)遇。的豬和鴨，彼此密切接觸提供了上述的機(jī)遇。l其實(shí)除華南之外，東南亞也具有類似情況，其實(shí)除華南之外，東南亞也具有類似情況，20042004年禽流感年禽流感在該地區(qū)的廣泛流行，似可為佐證。在該地區(qū)的廣泛流

21、行，似可為佐證。野生水禽是禽流感病毒的基因庫野生水禽是禽流感病毒的基因庫l19971997年年8 8月，首次證明月，首次證明H5N1H5N1可不經(jīng)豬作為中介直接傳染人的可不經(jīng)豬作為中介直接傳染人的病例，是香港一名與寵物雞密切接觸的兒童?；颊咚劳?，病例，是香港一名與寵物雞密切接觸的兒童?；颊咚劳?，分離到分離到H5N1H5N1l當(dāng)年在香港總共當(dāng)年在香港總共1818個(gè)人的病例，個(gè)人的病例，6 6人死亡人死亡人類感染禽流感l(wèi)19991999年至年至20032003年在香港發(fā)現(xiàn)年在香港發(fā)現(xiàn)H9N2H9N2也可由禽直接傳染人，也可由禽直接傳染人， 3 3名幼童發(fā)生了輕微病癥名幼童發(fā)生了輕微病癥l20032

22、003年荷蘭發(fā)生年荷蘭發(fā)生H7N7H7N7引致的引致的HAPIHAPI，造成一名獸醫(yī)死亡，造成一名獸醫(yī)死亡，8383人感染患結(jié)膜炎和其它輕度疾病人感染患結(jié)膜炎和其它輕度疾病l20042004年年1 1月月HPAIHPAI在東南亞暴發(fā)流行，日本、韓國、我國臺(tái)在東南亞暴發(fā)流行，日本、韓國、我國臺(tái)灣及大陸也有發(fā)生。在東南亞發(fā)現(xiàn)由禽傳染人的病例，越灣及大陸也有發(fā)生。在東南亞發(fā)現(xiàn)由禽傳染人的病例，越南最為嚴(yán)重，引致至少南最為嚴(yán)重，引致至少2121死亡死亡l截至截至20062006年年1 1月月1010日，已證實(shí)全世界感染日，已證實(shí)全世界感染5 51 1型禽流感病型禽流感病毒的患者達(dá)毒的患者達(dá)146146

23、人，其中有人，其中有7676人死亡。人死亡。l出現(xiàn)這些病例的國家有越南、泰國、柬埔寨、中國、印尼和出現(xiàn)這些病例的國家有越南、泰國、柬埔寨、中國、印尼和土耳其。其中越南的疫情最為嚴(yán)重，有土耳其。其中越南的疫情最為嚴(yán)重，有9393人感染禽流感，其人感染禽流感，其中中4242人死亡。人死亡。l至至0606年年3 3月月1515日，中國日，中國1515人感染禽流感，其中人感染禽流感，其中1010人死亡。人死亡。診診 斷斷l(xiāng)分離病毒分離病毒l一般從泄殖腔或采樣，接種一般從泄殖腔或采樣，接種8-108-10日齡雞胚尿囊腔，取尿囊日齡雞胚尿囊腔，取尿囊液用雞紅細(xì)胞作液用雞紅細(xì)胞作HA-HIHA-HI、ELI

24、SAELISA或或RT-PCRRT-PCR等等 圖3426-1 雞胚接種途徑示意圖（據(jù)Flint等）雞胚雞胚lOIEOIE規(guī)定的高致病性毒株的標(biāo)準(zhǔn)為：規(guī)定的高致病性毒株的標(biāo)準(zhǔn)為： 將含病毒的雞胚尿囊液原液用滅菌生理鹽水作將含病毒的雞胚尿囊液原液用滅菌生理鹽水作110110稀釋，靜脈內(nèi)接種稀釋，靜脈內(nèi)接種4848周齡周齡SPFSPF雞雞8 8只，每只只，每只0.2ml0.2ml，隔離飼隔離飼養(yǎng)觀察養(yǎng)觀察10d10d，死亡死亡6 6只者，判定為只者，判定為HPAIHPAIl鑒于鑒于H5H5及及H7H7亞型毒力易于變強(qiáng)的特點(diǎn)，國際禽病專家已于亞型毒力易于變強(qiáng)的特點(diǎn)，國際禽病專家已于20032003年

25、建議年建議OIEOIE修改上述修改上述HPAIHPAI病毒的判定標(biāo)準(zhǔn)，取而代之病毒的判定標(biāo)準(zhǔn)，取而代之的是，將的是，將H5H5及及H7H7亞型的所有毒株一概劃歸為亞型的所有毒株一概劃歸為HPAIHPAI的范疇，的范疇，不再作雞胚接種測定毒力不再作雞胚接種測定毒力高致病性禽流感診斷技術(shù)高致病性禽流感診斷技術(shù)Diagnostic techniques for highly pathogenic avian influenzaGB/T 18936-2003禽流感病毒通過熒光禽流感病毒通過熒光RT-PCR檢測方法檢測方法Method of the real-time RT-PCR for the de

26、tection of avian influenza virusGB/T 19438.1-2004H5亞型禽流感病毒熒光亞型禽流感病毒熒光RT-PCR檢測方法檢測方法Method of the real-time RT-PCR for the detection of avian influenza virus subtype H5GB/T 19438.2-2004H7亞型禽流感病毒熒光亞型禽流感病毒熒光RT-PCR檢測方法檢測方法Method of the real-time RT-PCR for the detection of avian influenza virus subtype

27、H7GB/T 19438.3-2004H9亞型禽流感病毒熒光亞型禽流感病毒熒光RT-PCR檢測方法檢測方法Method of the real-time RT-PCR for the detection of avian influenza virus subtype H9GB/T 19438.4-2004H5亞型禽流感病毒熒光亞型禽流感病毒熒光NASBA檢測方法檢測方法Protocol of detection avian influenza virus subtype H5 using NASBA GB/T 19439-2004禽流感病毒熒光禽流感病毒熒光NASBA檢測方法檢測方法Prot

28、ocol of detection avian influenza virus using NASBA GB/T 19440-2004進(jìn)出境禽鳥及其產(chǎn)品高致病性禽流感檢疫規(guī)范進(jìn)出境禽鳥及其產(chǎn)品高致病性禽流感檢疫規(guī)范Quarantine requirement of entry-exit avian and its products for highly pathogenic vian influenzaGB 19441-2004預(yù)防與控制預(yù)防與控制 我國農(nóng)業(yè)部規(guī)定我國農(nóng)業(yè)部規(guī)定l對患對患HPAIHPAI的病雞和疫點(diǎn)周圍的病雞和疫點(diǎn)周圍3km3km范圍內(nèi)所有禽類要全部撲殺，范圍內(nèi)所有禽類要全部撲

29、殺，對于帶有對于帶有HPAIHPAI病毒的禽類及同群禽要全部撲殺，禽類尸體病毒的禽類及同群禽要全部撲殺，禽類尸體和產(chǎn)品的無害化處理和產(chǎn)品的無害化處理l對于對于HPAIHPAI疫區(qū)周圍疫區(qū)周圍5km5km范圍內(nèi)，所有禽類按照規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)范圍內(nèi)，所有禽類按照規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行強(qiáng)制免疫行強(qiáng)制免疫l對于對于HPAIHPAI疫區(qū)周圍疫區(qū)周圍10km10km范圍內(nèi)禁止活禽交易范圍內(nèi)禁止活禽交易OIEOIE法典（法典（20022002）規(guī)定：）規(guī)定：lHPAIHPAI的潛伏期為的潛伏期為21d21dl某一區(qū)域在最后一例某一區(qū)域在最后一例HPAIHPAI病例確診實(shí)施撲殺政策和消毒措病例確診實(shí)施撲殺政策和消毒措施，

30、并至少過去施，并至少過去21d21d，或不采取撲殺政策時(shí)，最后一例感或不采取撲殺政策時(shí)，最后一例感染動(dòng)物臨床康復(fù)或死亡染動(dòng)物臨床康復(fù)或死亡6 6個(gè)月后，可視為非個(gè)月后，可視為非HPAIHPAI疫區(qū)疫區(qū)l某一國家至少在過去某一國家至少在過去3 3年內(nèi)未發(fā)生過年內(nèi)未發(fā)生過HPAIHPAI，可視為無可視為無HPAIHPAI國家；如采取撲殺政策，不論是否實(shí)施國家；如采取撲殺政策，不論是否實(shí)施HPAIHPAI疫苗接種，期疫苗接種，期限為最后一例感染動(dòng)物撲殺后限為最后一例感染動(dòng)物撲殺后6 6個(gè)月，可視為無個(gè)月，可視為無HPAIHPAI國家國家l禽流感的預(yù)防禽流感的預(yù)防 目前已經(jīng)研制出目前已經(jīng)研制出H9N2

31、H9N2和和H5N2H5N2亞型的禽流感滅活疫苗，亞型的禽流感滅活疫苗，5-75-7日齡進(jìn)行初次免疫，頸部皮下注射日齡進(jìn)行初次免疫，頸部皮下注射0.3ml/0.3ml/只，只，2020日齡日齡以后加強(qiáng)免疫，肉雞至出欄可確保安全。蛋雞以后加強(qiáng)免疫，肉雞至出欄可確保安全。蛋雞120120日齡左日齡左右加強(qiáng)免疫，可保護(hù)整個(gè)產(chǎn)蛋期。右加強(qiáng)免疫，可保護(hù)整個(gè)產(chǎn)蛋期。 其他還有各類的基因工程疫苗，但均處于研制階段。其他還有各類的基因工程疫苗，但均處于研制階段。l禽流感的治療禽流感的治療 禽流感特別是高致病力禽流感目前還沒有特異的治禽流感特別是高致病力禽流感目前還沒有特異的治療方法，因此，在該病的流行過程中，

32、不主張治療。療方法，因此，在該病的流行過程中，不主張治療。 目前用來治療的藥物有金剛烷胺、金剛乙胺，但他們目前用來治療的藥物有金剛烷胺、金剛乙胺，但他們是人醫(yī)上用于治療流感的常用藥物，獸醫(yī)濫用后病毒易對是人醫(yī)上用于治療流感的常用藥物，獸醫(yī)濫用后病毒易對其產(chǎn)生耐藥性，且畜禽產(chǎn)品中的殘留容易進(jìn)入人體，因此其產(chǎn)生耐藥性，且畜禽產(chǎn)品中的殘留容易進(jìn)入人體，因此該藥不應(yīng)輕易作為獸藥，且獸醫(yī)上還沒有批準(zhǔn)該藥。其作該藥不應(yīng)輕易作為獸藥，且獸醫(yī)上還沒有批準(zhǔn)該藥。其作用的具體機(jī)理尚不清楚。用的具體機(jī)理尚不清楚。對低致病力禽流感的治療，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：對低致病力禽流感的治療，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：l該病沒有特效藥物，使用

33、的藥物均為對癥治療。該病沒有特效藥物，使用的藥物均為對癥治療。l使用藥物要與改善畜禽的飼養(yǎng)管理相結(jié)合。使用藥物要與改善畜禽的飼養(yǎng)管理相結(jié)合。l任何藥物的使用，必須遵照國家的獸藥管理的有關(guān)規(guī)定。任何藥物的使用，必須遵照國家的獸藥管理的有關(guān)規(guī)定。重點(diǎn)回顧l正粘病毒科正粘病毒科, ,基因組為線狀負(fù)鏈單股基因組為線狀負(fù)鏈單股RNA,RNA,八個(gè)節(jié)段八個(gè)節(jié)段l血凝素（血凝素（HAHA）及神經(jīng)氨酸酶（）及神經(jīng)氨酸酶（NANA）是兩個(gè)最為重要的分類）是兩個(gè)最為重要的分類指標(biāo)指標(biāo)l抗原漂移和抗原轉(zhuǎn)移抗原漂移和抗原轉(zhuǎn)移lH5H5及及H7H7亞型的所有毒株一概劃歸為亞型的所有毒株一概劃歸為HPAIHPAI新城疫病

34、毒新城疫病毒即即”雞瘟雞瘟”的病原，副粘病毒的病原，副粘病毒科科新城疫病毒新城疫病毒 (Newcastle disease viruses, NDV)病原特征病原特征致病機(jī)理致病機(jī)理診斷診斷防控防控有囊膜及纖突有囊膜及纖突病毒顆粒多形性，可呈絲狀病毒顆粒多形性，可呈絲狀基因組為單分子負(fù)鏈單股基因組為單分子負(fù)鏈單股RNA纖突具有兩種糖蛋白：血凝素神經(jīng)氨酸酶（纖突具有兩種糖蛋白：血凝素神經(jīng)氨酸酶（HN）及融合蛋白（）及融合蛋白（F）。）。無毒株的無毒株的HN及及F為無活性的前體，有毒株的這些前體可被組織內(nèi)的蛋白酶切割為無活性的前體，有毒株的這些前體可被組織內(nèi)的蛋白酶切割并活化。并活化。病史病史lN

35、D 1926ND 1926年首次暴發(fā)于印度尼西亞的年首次暴發(fā)于印度尼西亞的JavaJava 次年在英國的次年在英國的NewcastleNewcastle爆發(fā)。經(jīng)證明，新城疫與歐洲雞爆發(fā)。經(jīng)證明，新城疫與歐洲雞瘟（禽流感病毒）病原不同，為與雞瘟區(qū)別，根據(jù)該病發(fā)瘟（禽流感病毒）病原不同，為與雞瘟區(qū)別，根據(jù)該病發(fā)生地名命名為生地名命名為“新城疫新城疫”. .l首次確診以來的八十多年里，世界范圍內(nèi)曾發(fā)生過四次首次確診以來的八十多年里，世界范圍內(nèi)曾發(fā)生過四次NDVNDV大規(guī)模的流行。大規(guī)模的流行。首次大流行源于上世紀(jì)二十年代的東首次大流行源于上世紀(jì)二十年代的東南亞和英國南亞和英國自然條件下，自然條件下，

36、NDVNDV主要通過呼吸道、眼結(jié)膜及消化道侵主要通過呼吸道、眼結(jié)膜及消化道侵入宿主。入宿主。病毒首先在呼吸道及腸道粘膜上皮復(fù)制，借病毒首先在呼吸道及腸道粘膜上皮復(fù)制，借助血流擴(kuò)散到脾及骨髓，產(chǎn)生二次病毒血癥，從而感助血流擴(kuò)散到脾及骨髓，產(chǎn)生二次病毒血癥，從而感染肺、腸及中樞神經(jīng)系統(tǒng)。染肺、腸及中樞神經(jīng)系統(tǒng)。F F和和HNHN兩種糖蛋白是兩種糖蛋白是NDVNDV致病的分子基礎(chǔ)（特別是致病的分子基礎(chǔ)（特別是F F蛋白）。蛋白）。即即HNHN蛋白通過識(shí)別，吸附于細(xì)胞表面的受體來參與病毒粒蛋白通過識(shí)別，吸附于細(xì)胞表面的受體來參與病毒粒子感染，而子感染，而F F蛋白則通過融合多肽，穿入細(xì)胞膜而發(fā)揮致病蛋

37、白則通過融合多肽，穿入細(xì)胞膜而發(fā)揮致病作用。作用。病毒只有在具有嗜性的感染組織才能裂解活化和擴(kuò)病毒只有在具有嗜性的感染組織才能裂解活化和擴(kuò)散。散。致病機(jī)理致病機(jī)理P P基因是副粘病毒唯一能夠編碼多蛋白的基因?；蚴歉闭巢《疚ㄒ荒軌蚓幋a多蛋白的基因。P P基因重疊的基因重疊的ORFsORFs通過通過“RNARNA編輯編輯”的方式編碼第二種蛋白的方式編碼第二種蛋白V V蛋白。蛋白。IFNIFN信號抑制、阻止凋亡、細(xì)胞周期改變、抑制雙鏈信號抑制、阻止凋亡、細(xì)胞周期改變、抑制雙鏈RNARNA信號信號以及阻止以及阻止IFNIFN合成，都與副粘病毒合成，都與副粘病毒V V蛋白有關(guān)蛋白有關(guān)新城疫后期出現(xiàn)神經(jīng)

38、癥狀新城疫后期出現(xiàn)神經(jīng)癥狀, ,且并發(fā)鼻炎且并發(fā)鼻炎發(fā)病后出現(xiàn)大量白皮蛋發(fā)病后出現(xiàn)大量白皮蛋診斷診斷l(xiāng)必須作病毒分離及血清學(xué)試驗(yàn)或必須作病毒分離及血清學(xué)試驗(yàn)或RT-PCRRT-PCR。l可取脾、腦或肺勻漿，接種可取脾、腦或肺勻漿，接種1010日齡雞胚尿囊腔分離病毒，日齡雞胚尿囊腔分離病毒，病毒能凝集雞、人及小鼠等紅細(xì)胞，再作血吸附及病毒能凝集雞、人及小鼠等紅細(xì)胞，再作血吸附及HIHI試驗(yàn)試驗(yàn)鑒別。鑒別。l當(dāng)存在循環(huán)抗體時(shí)，可從腸道分離病毒?？贵w檢測只適用當(dāng)存在循環(huán)抗體時(shí)，可從腸道分離病毒?？贵w檢測只適用于對未進(jìn)行免疫接種雞群的診斷，可用于對未進(jìn)行免疫接種雞群的診斷，可用HIHI試驗(yàn)。試驗(yàn)。l在

39、慢性新城疫流行的地區(qū)，可用在慢性新城疫流行的地區(qū)，可用HIHI試驗(yàn)作為監(jiān)測手段。試驗(yàn)作為監(jiān)測手段。l分離株有必要進(jìn)一步測定其毒力分離株有必要進(jìn)一步測定其毒力。防控防控l免疫通常采用由天然弱毒株篩選制備的活疫苗及弱毒或強(qiáng)免疫通常采用由天然弱毒株篩選制備的活疫苗及弱毒或強(qiáng)毒株的油乳劑滅活苗。毒株的油乳劑滅活苗。l弱毒苗可采用飲水、氣霧、滴眼或滴鼻途徑。免疫后約一弱毒苗可采用飲水、氣霧、滴眼或滴鼻途徑。免疫后約一周可產(chǎn)生免疫保護(hù)，產(chǎn)蛋母雞應(yīng)每周可產(chǎn)生免疫保護(hù)，產(chǎn)蛋母雞應(yīng)每4 4個(gè)月免疫一次。個(gè)月免疫一次。l實(shí)際生產(chǎn)中，弱毒苗與滅活疫苗配合使用，方能收到較好實(shí)際生產(chǎn)中，弱毒苗與滅活疫苗配合使用，方能收

40、到較好的免疫效果。的免疫效果。l由于雞在免疫接種后由于雞在免疫接種后15d15d仍能排出疫苗毒，因此有些國家仍能排出疫苗毒，因此有些國家規(guī)定雞在免疫接種規(guī)定雞在免疫接種21d21d后才可調(diào)運(yùn)。后才可調(diào)運(yùn)。l活苗活苗l死苗死苗l多聯(lián)苗多聯(lián)苗l多價(jià)苗多價(jià)苗馬立克病病毒（馬立克病病毒（Mareks disease virus） 病毒是細(xì)胞結(jié)合性皰疹病毒，靶細(xì)胞為病毒是細(xì)胞結(jié)合性皰疹病毒，靶細(xì)胞為T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞,具有致腫瘤特性。具有致腫瘤特性。病原特征病原特征致病機(jī)理致病機(jī)理診斷診斷防控防控皰疹病毒科的皰疹病毒科的B亞群皰疹病毒，雙股亞群皰疹病毒，雙股DNA，有囊膜。，有囊膜。l病毒對雞及鵪鶉有致

41、病性，其它禽類無致病意義。病毒對雞及鵪鶉有致病性，其它禽類無致病意義。l4 4周齡雛雞即可感染發(fā)病，周齡雛雞即可感染發(fā)病，2525月齡高發(fā)，月齡高發(fā)，l致病的嚴(yán)重程度與病毒毒株的毒力、雞的日齡、性別、免致病的嚴(yán)重程度與病毒毒株的毒力、雞的日齡、性別、免疫狀況及遺傳品系有關(guān)。疫狀況及遺傳品系有關(guān)。l隱性感染雞可終生帶毒并排毒，其羽囊角化層的上皮細(xì)胞隱性感染雞可終生帶毒并排毒，其羽囊角化層的上皮細(xì)胞含有病毒，是污染源，易感雞通過吸入此種毛屑感染含有病毒，是污染源，易感雞通過吸入此種毛屑感染。脾臟病變，腫大 腫瘤Left - normal chicken eye. Right - Eye of a

42、chicken 眼型可見虹膜增生，瞳孔變小，邊緣不整眼型可見虹膜增生，瞳孔變小，邊緣不整診斷l(xiāng)免疫熒光試驗(yàn)等血清學(xué)方法可檢出病毒。病毒分離可用全免疫熒光試驗(yàn)等血清學(xué)方法可檢出病毒。病毒分離可用全血白細(xì)胞層接種細(xì)胞，血白細(xì)胞層接種細(xì)胞，l或接種或接種4日齡雞胚卵黃囊或絨尿膜，再作熒光抗體染色或日齡雞胚卵黃囊或絨尿膜，再作熒光抗體染色或電鏡檢查作出診斷。電鏡檢查作出診斷。l禽白血病病毒往往與本病毒同時(shí)存在，要注意鑒別。禽白血病病毒往往與本病毒同時(shí)存在，要注意鑒別。lPCR檢測檢測防控l由于由于HVT(火雞皰疹病毒凍干苗火雞皰疹病毒凍干苗 )與本病毒與本病毒95%DNA同源，同源，常用作疫苗進(jìn)行預(yù)防

43、接種。常用作疫苗進(jìn)行預(yù)防接種。l某些天然無致病力毒株也篩選為疫苗，但需液氮保存，使某些天然無致病力毒株也篩選為疫苗，但需液氮保存，使用不便。用不便。l常規(guī)方法是對常規(guī)方法是對1日齡雛雞進(jìn)行免疫接種，試行日齡雛雞進(jìn)行免疫接種，試行18日齡的雞日齡的雞胚卵內(nèi)接種有良效。胚卵內(nèi)接種有良效。l對雞群除采取全進(jìn)全出的管理體制外，抗病育種也是措施對雞群除采取全進(jìn)全出的管理體制外，抗病育種也是措施之一。之一。傳染性囊病病毒（傳染性囊病病毒（Infectious bursal disease virus, IBDV） 病原特征病原特征致病機(jī)理致病機(jī)理診斷診斷防控防控又名傳染性法氏囊病病毒。全世界均有發(fā)現(xiàn)，又名傳染性法氏囊病病毒。全世界均有發(fā)現(xiàn)，很少雞群能保持無病毒狀態(tài)很少雞群能保持無病毒狀態(tài)。雙