HPLC測(cè)定酚類化合物實(shí)驗(yàn)報(bào)告(完整版)

1、專業(yè)報(bào)告模板 | REPORT TEMPLATEHPLC 測(cè)定酚類化合物實(shí)驗(yàn)報(bào)告(完整版)1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?） 了解儀器各部分的構(gòu)造和功能及分析的原理（2） 掌握樣品、流動(dòng)相的處理、儀器的維護(hù)等基本知識(shí)（3） 學(xué)會(huì)簡(jiǎn)單樣品的分析操作過(guò)程（4） 掌握 HPLC 分析的定性、定量方法2.基本原理高效液相色譜儀以液體作為流動(dòng)相，并采用顆粒極細(xì)的高效固定相的主色譜分離技術(shù)，在基本理論方面與氣相色譜沒(méi)有顯著不同，它們之間的重大差別在于作為流動(dòng)相的液體與氣體之間的性質(zhì)差別。與氣相色譜相比，高效液相色譜對(duì)樣品的適用性強(qiáng)，不受分第7頁(yè)/總6頁(yè)析對(duì)象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，可以彌補(bǔ)氣相色譜法的不足。對(duì)于酚類化合物

2、的測(cè)定，其基本原理是這樣的： 先用固相小柱吸附水中酚類化合物，然后用溶劑洗脫， 經(jīng)氮吹氣濃縮至一定體積后，用反相高壓液相色譜法分析。在反相色譜柱上以甲醇/（水+乙酸）為流動(dòng)相把經(jīng)預(yù)處理的酚類化合物分離，用二極陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器，測(cè)定各種酚的峰高或峰面積，以外標(biāo)法定量。3. 儀器與試劑3.1 儀器：高效液相色譜儀：可編程紫外檢測(cè)器微量注射器：50L、100L色譜柱：C18 或 C8 柱化學(xué)工作站尖底濃縮瓶：10ml 具刻度富集柱3.2 試劑：流動(dòng)相：甲醇/高純水(需0.22m 濾膜過(guò)濾)標(biāo)準(zhǔn)物：六種酚類混合物洗脫液：正己烷、 四氫呋喃(需重蒸) 硫酸冰醋酸無(wú)水亞硫酸鈉4. 所用儀器的主要組件

3、(1) 高壓輸液泵主要部件之一，壓力：150105350105 Pa。為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相(10m)，液體的流動(dòng)相高速通過(guò)時(shí)，將產(chǎn)生很高的壓力， 因此高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一。應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性。(2) 梯度淋洗裝置外梯度（高壓梯度）：用兩臺(tái)高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后進(jìn)入色譜柱。內(nèi)梯度（低壓梯度）：一臺(tái)高壓泵，通過(guò)比例調(diào)節(jié)閥，將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。(3) 進(jìn)樣裝置流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置。(4) 高效分離柱柱體為直形不銹鋼管，內(nèi)徑 1

4、6 mm，柱長(zhǎng) 540 cm。發(fā)展趨勢(shì)是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。(5) 液相色譜檢測(cè)器 紫外檢測(cè)器應(yīng)用最廣，對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。特點(diǎn)：靈敏度高，線形范圍寬；流通池可做得很小(1mm10mm，容積 8L)；對(duì)流動(dòng)相的流速和溫度變化不敏感；波長(zhǎng)可選，易于操作；可用于梯度洗脫。 光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器：1024 個(gè)二極管陣列，各檢測(cè)特定波長(zhǎng)，計(jì)算機(jī)快速處理，三維立體譜圖。 示差折光檢測(cè)器除紫外檢測(cè)器之外應(yīng)用最多的檢測(cè)器?？蛇B續(xù)檢測(cè)參比池和樣品池中流動(dòng)相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度成正比。 熒光檢測(cè)器高靈敏度，高選擇性。對(duì)多環(huán)芳烴，維生素 B、黃曲霉素、卟啉類化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類化合物等有響應(yīng)。5. 數(shù)據(jù)處理（1）原始數(shù)據(jù)實(shí)驗(yàn)所得色譜圖根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，做出峰面積隨濃度變化的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算實(shí)際單標(biāo)中的物質(zhì)濃度 單標(biāo)為 8ppm 的標(biāo)樣物質(zhì)實(shí)際濃度： C=7.990ppm