USP291116潔凈室和其它受控環(huán)境的微生物評(píng)估中文稿

1、 1 / 23潔凈室和其他受控環(huán)境的微生物學(xué)評(píng)估本章信息旨在綜述與散裝原料藥、劑型以及某些醫(yī)療用具無菌操作相關(guān)的各種問題；并對(duì)控制環(huán)境進(jìn)行制定、保持和控制其微生物學(xué)特性。本章包括的討論有關(guān)以下方面：(1) 基于顆粒計(jì)數(shù)限制上的潔凈室分級(jí)；(2)控制環(huán)境的微生物學(xué)評(píng)估程序；(3) 人員培訓(xùn)；(4) 設(shè)計(jì)和實(shí)施微生物學(xué)評(píng)估程序中的關(guān)鍵因素；(5) 取樣策略的制定；(6) 建立微生物警告和行動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)；(7) 應(yīng)用于微生物取樣的方法學(xué)和儀器操作；(8) 培養(yǎng)基和稀釋劑；(9) 微生物隔離群的鑒別；(10) 經(jīng)培養(yǎng)基填充的操作評(píng)估；以及 (11) 詞匯表。本章以外的討論是有執(zhí)照藥房制備家用無菌產(chǎn)品應(yīng)用控制

2、環(huán)境的問題，其包含在藥用配方無菌制備（Pharmaceutical poundingSterile Preparations）797 中。對(duì)于無菌操作的控制環(huán)境中微生物狀況的控制和評(píng)估存在方法選擇性。本章中的數(shù)字評(píng)估并非有意代表絕對(duì)的評(píng)估或規(guī) X，而僅是一種信息上的表示?？紤]到微生物取樣設(shè)備和方法的多樣性，不能說達(dá)到這些值就能保證微生物控制的需求標(biāo)準(zhǔn)，或者與本章這些值有偏差、高于本章的值就認(rèn)為是失去控制。微生物取樣和分析應(yīng)用不當(dāng)，可能會(huì)引起顯著的差異和不慎污染的潛在性。本章標(biāo)明的取樣培養(yǎng)基、設(shè)備和方法，不是特定的規(guī) X 而只是一種信息參考。通過無菌操作可產(chǎn)生高比率的無菌產(chǎn)品。因?yàn)闊o菌操作依賴的

3、是流程中微生物的排除和阻止包裝過程中微生物進(jìn)入敞口容器，制造環(huán)境中的微生物負(fù)擔(dān)和產(chǎn)品的生物負(fù)擔(dān)對(duì)于保證這些產(chǎn)品的無菌水平來說，是相關(guān)的重要因素。潔凈室分級(jí)的確立潔凈室和控制環(huán)境的設(shè)計(jì)和構(gòu)建，在聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn) 209E 中被提及。此空氣潔凈標(biāo)準(zhǔn)通過空氣播散顆粒絕對(duì)濃度定義。其中包括用于控制環(huán)境空氣級(jí)別分配和監(jiān)測(cè)空氣播散顆粒的方法。這一聯(lián)邦文件僅適用于控制環(huán)境內(nèi)的空氣播散顆粒，且并非有意的強(qiáng)調(diào)顆粒的活性與非活性屬性特征。 2 / 23制藥工業(yè)中的潔凈室和其他控制環(huán)境的聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn) 209E 已經(jīng)被潔凈室制造商所采用，以提供這些設(shè)施的組裝、試車和維護(hù)的規(guī) X。然而，制藥工業(yè)中的有效數(shù)據(jù)并不能給非活性顆粒數(shù)量和

4、活性微生物濃度之間的關(guān)系提供科學(xué)的一致性。電子工業(yè)的非活性顆粒數(shù)量的關(guān)鍵程度使得應(yīng)用聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn) 209E 成為必需，雖然制藥工業(yè)在與聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)中特定的總顆粒相比較而言，更關(guān)心的是活性顆粒(即微生物) 。制藥行業(yè)中對(duì)注射制劑中的總顆粒數(shù)有明確規(guī)定。(見注射品中的顆粒物質(zhì)（Particulate Matter inInjections）788)。潔凈室的顆粒數(shù)越少，空氣播散微生物的可能性越小。這一理論是經(jīng)認(rèn)可的，且能夠?yàn)橹扑幧a(chǎn)商和潔凈室及受控環(huán)境的建造者提供功能設(shè)施建造方面的工程學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。應(yīng)用在制藥工業(yè)的連邦標(biāo)準(zhǔn) 209E，是以所有顆粒大小的限定為依據(jù)的，即，大小等于或大于 0.5 m 的。表1 描述

5、了聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn) 209E 適用于制藥工業(yè)的空氣播散顆粒潔凈級(jí)別。制藥工業(yè)適用 M3.5 以及更高級(jí)別。M1 級(jí)別和 M3 級(jí)別相關(guān)于電子工業(yè)，表 1 所示僅為出于比較目的。通常認(rèn)為，假設(shè)不存在氣流、溫度和濕度的改變，則使用中的潔凈室或其他控制環(huán)境中存在的顆粒越少，操作條件下的微生物計(jì)數(shù)將會(huì)越少。潔凈室被維持在以動(dòng)態(tài)的 (運(yùn)作的)數(shù)據(jù)為根據(jù)的操作控制狀態(tài)下。表 1. 空氣播散顆粒潔凈級(jí)別*級(jí)別名等于或大于 0.5 m 的顆粒SIU.S.習(xí)慣(m3)(ft3)M1 10.00.283M1.51 35.31.00M2 1002.8M2.510 35310.0M3 1,00028.3M3.5100 3,5

6、30100M4 10,000283M4.51,000 35,3001,000M5 100,0002,830 3 / 23級(jí)別名等于或大于 0.5 m 的顆粒M5.510,000 353,00010,000M61,000,00028,300M6.5100,000 3,530,000100,000M7 10,000,000283,000* 來自 U.S. 聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn) 209E, 1992 年 9 月 11 日“潔凈室及潔凈區(qū)內(nèi)空氣播散顆粒潔凈級(jí)別?！?控制環(huán)境中微生物學(xué)評(píng)估程序的重要性監(jiān)測(cè)控制環(huán)境中總顆粒計(jì)數(shù)，甚至應(yīng)用連續(xù)電子儀器計(jì)數(shù)，仍不能提供關(guān)于環(huán)境中微生物含量的信息。顆粒計(jì)數(shù)器的基本限制在于它

7、們測(cè)量顆粒為 0.5 m 或者更大的。而空氣播散微生物并不是自由浮動(dòng)的或是單細(xì)胞的，它們經(jīng)常聯(lián)合成 10 到 20 m 的顆粒?？刂骗h(huán)境中的顆粒計(jì)數(shù)和微生物計(jì)數(shù)是隨著取樣位置和取樣期間采取的活動(dòng)而改變的。監(jiān)測(cè)環(huán)境中的非活性顆粒和微生物是一項(xiàng)重要的控制措施，因?yàn)樗鼈儗?duì)達(dá)到顆粒物質(zhì)（Particulate Matter）和注射（Injections）1 條件下無菌（Sterility）的產(chǎn)品要求來說，都是重要的?？刂骗h(huán)境的微生物監(jiān)測(cè)程序應(yīng)當(dāng)對(duì)人員的以及由人員執(zhí)行的可能對(duì)控制環(huán)境造成生物負(fù)擔(dān)影響的清潔衛(wèi)生處理的實(shí)行以及潔凈效應(yīng)予以評(píng)估。不管系統(tǒng)多么復(fù)雜，微生物監(jiān)測(cè)將不再、也不需要對(duì)這些控制環(huán)境中存在

8、的所有微生物污染進(jìn)行鑒別和定量。然而，常規(guī)的微生物監(jiān)測(cè)應(yīng)該提供用以確定控制環(huán)境是在適當(dāng)?shù)目刂茽顟B(tài)下運(yùn)作的有效信息。具備資格人員對(duì)環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)和數(shù)據(jù)分析，應(yīng)該在容許潔凈室和其他受控環(huán)境保持在控制狀態(tài)下進(jìn)行。考慮到有意義數(shù)據(jù)的收集，則應(yīng)當(dāng)在環(huán)境正常運(yùn)行過程中取樣。微生物取樣應(yīng)當(dāng)發(fā)生在原料在場(chǎng)、加工處理在進(jìn)行中且操作人員在崗時(shí)。適當(dāng)?shù)臅r(shí)候，潔凈室和一些其他控制環(huán)境的微生物監(jiān)測(cè)應(yīng)當(dāng)包括室內(nèi)空氣以及進(jìn)入關(guān)鍵區(qū)域、表面、設(shè)備、清潔衛(wèi)生處理容器、地板、墻壁和人員著裝(如工作服和手套)的壓縮空氣的微生物含量定量。微生物監(jiān)測(cè)程序的目的對(duì)環(huán)境生物負(fù)載來說具有代表性的評(píng)估。當(dāng)數(shù)據(jù)被收 4 / 23集和分析時(shí)，受過

9、訓(xùn)練的人員應(yīng)對(duì)任何趨勢(shì)進(jìn)行評(píng)估。盡管以推薦和特定的頻率為根據(jù)來考查環(huán)境的結(jié)果是重要的，可是考查擴(kuò)展時(shí)期的結(jié)果對(duì)于確認(rèn)趨勢(shì)是否為目前的也同樣的關(guān)鍵。趨勢(shì)可以通過構(gòu)建包括警告和行動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)圖表而形象化?？刂骗h(huán)境的微生物控制可以以這些趨勢(shì)數(shù)據(jù)為根據(jù)，進(jìn)行部分的評(píng)估。應(yīng)當(dāng)做定期報(bào)告或總結(jié)借以警示責(zé)任管理人員。當(dāng)受控環(huán)境中特定微生物水平超標(biāo)時(shí)，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行文件性的綜述和調(diào)查。在調(diào)查的細(xì)節(jié)上可能會(huì)有所不同，這要根據(jù)室內(nèi)制造產(chǎn)品的類型和加工過程的不同來確定。調(diào)查應(yīng)當(dāng)包括區(qū)域維護(hù)文件考查；清潔衛(wèi)生處理文件；固有物理的或操作的參數(shù)，如環(huán)境溫度和相對(duì)濕度的改變；以及相關(guān)人員的培訓(xùn)狀況。調(diào)查之后，采取的行動(dòng)可能會(huì)

10、包括加強(qiáng)人員培訓(xùn)以強(qiáng)調(diào)微生物控制的重要性；增加頻率添加取樣；添加清潔衛(wèi)生處理；添加產(chǎn)品測(cè)試；鑒定微生物污染及其可能來源；如果必要的話，需對(duì)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程進(jìn)行再評(píng)價(jià)并使其重新生效。根據(jù)調(diào)查綜述和結(jié)果測(cè)試，微生物水平超標(biāo)的顯著性和在那種條件下操作或產(chǎn)品處理的可接受性可能是需要查明的。任何對(duì)于行動(dòng)過程的調(diào)查和理論都應(yīng)當(dāng)通過文件證明，且應(yīng)作為整個(gè)質(zhì)量管理系統(tǒng)的一部分?？刂骗h(huán)境，如潔凈區(qū)或潔凈室，是依照相關(guān)潔凈室運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)證明確定的。評(píng)估參數(shù)包括過濾的完整性、空氣流速、通風(fēng)模式、換氣以及壓力差別。這些參數(shù)能夠影響潔凈室運(yùn)行中的微生物生物負(fù)載。潔凈室的設(shè)計(jì)、構(gòu)建以及運(yùn)行存在多樣性，這使得對(duì)這些參數(shù)的泛化

11、變得困難。Ljungquist 和 Reinmuller1發(fā)展了通過增加鄰近關(guān)鍵工作區(qū)域和設(shè)備的周圍粒子濃度對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行顆粒激發(fā)測(cè)試的方法。首先，煙的產(chǎn)生使得潔凈室或一個(gè)控制環(huán)境的各處空氣流動(dòng)成為可見。旋渦或紊流區(qū)段的存在能夠完全可見，且氣流模式可以微調(diào)到消除或最小化不良影響的狀態(tài)。然后，顆粒物質(zhì)就產(chǎn)生于關(guān)鍵區(qū)和無菌區(qū)的附近了。此評(píng)估是在模擬生產(chǎn)條件下進(jìn)行的，但是設(shè)備和人員均在場(chǎng)。 5 / 23在微生物監(jiān)測(cè)程序生效之前，完成適當(dāng)?shù)臏y(cè)試和優(yōu)化潔凈室或控制環(huán)境的物理特征是必要的。確保適當(dāng)?shù)目刂骗h(huán)境并依照其工程規(guī) X 運(yùn)作，將會(huì)更高效的確?？刂骗h(huán)境中對(duì)于無菌操作而言能有適當(dāng)?shù)纳镓?fù)載。在潔凈室或受控環(huán)

12、境的日常確認(rèn)過程中，應(yīng)當(dāng)重復(fù)進(jìn)行這些測(cè)試；在進(jìn)行如人員流動(dòng)、加工過程、操作過程、原料流程、空氣處理系統(tǒng)或設(shè)備布局等顯著性的操作改變時(shí)，也應(yīng)當(dāng)重復(fù)進(jìn)行這些測(cè)試。人員的培訓(xùn)無菌處理產(chǎn)品需要生產(chǎn)商密切關(guān)注人員管理的細(xì)節(jié)，保持嚴(yán)格的紀(jì)律以及對(duì)其進(jìn)行嚴(yán)格的監(jiān)督，以確保維持適當(dāng)?shù)沫h(huán)境質(zhì)量水平，并確保最終產(chǎn)品的無菌性。對(duì)控制環(huán)境中工作人員進(jìn)行培訓(xùn)是個(gè)關(guān)鍵。這種培訓(xùn)對(duì)微生物監(jiān)測(cè)程序的責(zé)任人員同樣也是重要的，因?yàn)槲⑸锶舆^程如不注意操作，很容易引起潔凈工作區(qū)域污染的發(fā)生。在高度自動(dòng)化的操作中，監(jiān)測(cè)人員可能是加工處理區(qū)域內(nèi)與關(guān)鍵區(qū)帶有最直接聯(lián)系的人員。在加工處理區(qū)域內(nèi)工作前和工作后，都應(yīng)當(dāng)對(duì)人員進(jìn)行監(jiān)督檢查。微

13、生物取樣是導(dǎo)致微生物污染的潛在因素，如果取樣方法不當(dāng)，會(huì)導(dǎo)致微生物污染的發(fā)生。正式有效的人員培訓(xùn)計(jì)劃會(huì)使這種危險(xiǎn)性因素減到最小。這一正式有效培訓(xùn)應(yīng)當(dāng)是針對(duì)所有進(jìn)入受控環(huán)境的人員的，并形成文件性規(guī)定。對(duì)于設(shè)備的管理必須保證潔凈室和控制環(huán)境內(nèi)所有的相關(guān)操作人員能夠很好的精通相關(guān)微生物學(xué)原理。培訓(xùn)應(yīng)當(dāng)包括無菌處理基本原則以及對(duì)產(chǎn)品潛在污染源處理過程的關(guān)聯(lián)訓(xùn)練。此培訓(xùn)應(yīng)當(dāng)包括微生物基本原則、微生物生理學(xué)、消毒和衛(wèi)生、培養(yǎng)基選擇和制備、分類學(xué)以及滅菌等指導(dǎo)，這些對(duì)涉及無菌操作的人員本身都是必需的。涉及微生物鑒別的人員，還需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室所需方法的專業(yè)培訓(xùn)。此外，還必須給相關(guān)人員提供所收集環(huán)境數(shù)據(jù)的管理方面

14、的附加培訓(xùn)。對(duì)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程的認(rèn)識(shí)和理解是很關(guān)鍵的，尤其是那些與當(dāng)環(huán)境條件這樣要求時(shí)采用的糾偏措施相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。了解關(guān)于生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī) X(GMPs)中每 6 / 23一個(gè)體責(zé)任以及順應(yīng)性調(diào)整政策，同指導(dǎo)調(diào)研和分析數(shù)據(jù)的培訓(xùn)一樣，都應(yīng)該作為整體培訓(xùn)計(jì)劃的一部分來實(shí)行?？刂骗h(huán)境中微生物污染的主要污染源是工作人員。微生物可以通過人體傳播而引起污染的發(fā)生，尤其是那些處于活動(dòng)傳染期個(gè)體。因此控制環(huán)境只能準(zhǔn)許健康的個(gè)體進(jìn)入。由這些事實(shí)來看，良好的個(gè)人衛(wèi)生以及對(duì)個(gè)人進(jìn)入控制環(huán)境所用的無菌衣處理過程細(xì)節(jié)上的注意都顯得十分重要。這些人員一旦穿戴整齊，包括完全的面部覆蓋處理，就必須在整個(gè)期間內(nèi)小心的保

15、持他們手套和制服的完整性。由于無菌處理過程中產(chǎn)品的主要污染威脅來自操作人員，使得控制與這些人員相關(guān)聯(lián)的微生物污染成為環(huán)境控制程序中一個(gè)重要的因素。包括無菌操作在內(nèi)，對(duì)控制環(huán)境的工作人員進(jìn)行徹底的培訓(xùn)是重要的，但是也不能去過分的強(qiáng)調(diào)。因?yàn)榄h(huán)境監(jiān)測(cè)程序僅通過自身是無法檢測(cè)無菌操作的所有對(duì)環(huán)境微生物品質(zhì)可能的妥協(xié)事件的。因此，周期性的培養(yǎng)基填充或過程模擬研究，對(duì)于使方法重新生效以確保適當(dāng)?shù)牟倏v管理和保持有效培訓(xùn)來說是必需的。微生物學(xué)環(huán)境控制程序設(shè)計(jì)和實(shí)施中的關(guān)鍵因素一項(xiàng)環(huán)境控制程序應(yīng)當(dāng)具有實(shí)時(shí)檢測(cè)微生物狀態(tài)中逆變的能力，這樣才能保證采取有意義并有效的改善行動(dòng)。廠商有責(zé)任制定、啟動(dòng)、執(zhí)行這樣的環(huán)境控制

16、程序并使其成文件性規(guī)定。盡管對(duì)于環(huán)境控制程序的一般性建議將被討論，但對(duì)于特定設(shè)備和特殊條件，仍急需制定這樣的程序。一般的微生物菌株生長(zhǎng)培養(yǎng)基，如大豆酪蛋白消化培養(yǎng)基，在大多數(shù)情況是適用的。如果這些環(huán)境中使用或應(yīng)用了消毒劑或抗生素，這種培養(yǎng)基可以通過補(bǔ)充添加劑來克服消毒劑或抗生素的效應(yīng)或使其效應(yīng)最小化。酵母菌和霉菌的檢測(cè)和定量應(yīng)當(dāng)給以考慮。一般的真菌培養(yǎng)基，如薩布羅氏培養(yǎng)基、改良薩布羅氏培養(yǎng)基或抑制霉菌瓊脂，都是可以接受的。其它已經(jīng)確證的促進(jìn)真菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，如大豆-酪蛋白消化瓊脂，也可以應(yīng)用。一般而言，對(duì)于專性厭氧菌，不進(jìn)行常規(guī)的檢測(cè)。然而，應(yīng)當(dāng)有適當(dāng)?shù)臈l件或研究做保證，比如無菌試 7 / 2

17、3驗(yàn)裝置中這些微生物的頻繁檢測(cè)證明的鑒別等。應(yīng)當(dāng)對(duì)選擇性培養(yǎng)基檢測(cè)和定量這些厭氧或微需氧微生物的能力進(jìn)行評(píng)估。一旦選定適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，就要進(jìn)行時(shí)間和孵育溫度的選擇。典型的孵育溫度為 22.5 2.5和 32.5 2.5 ，孵育時(shí)間分別為 72 和 48 小時(shí)。為環(huán)境程序所制備的生長(zhǎng)培養(yǎng)基的滅菌過程應(yīng)當(dāng)是有效的，且應(yīng)當(dāng)對(duì)其進(jìn)行無菌檢測(cè)和生長(zhǎng)促進(jìn)檢測(cè)，詳述可見無菌檢查（SterilityTests）71。另外，對(duì)于生長(zhǎng)促進(jìn)檢測(cè)，從控制環(huán)境中分離得到具代表性的微生物群或從 ATCC 菌株制備這些分離菌株也可能用來檢測(cè)培養(yǎng)基。培養(yǎng)基在接種量小于 100個(gè)菌落形成單位（cfu）時(shí)，必須能保證支持菌種生長(zhǎng)。

18、適當(dāng)?shù)沫h(huán)境控制程序應(yīng)當(dāng)包括確認(rèn)和評(píng)估取樣點(diǎn)以及確認(rèn)環(huán)境的微生物取樣方法。鑒別被分離菌株的方法應(yīng)當(dāng)用微生物指示劑(見微生物限度檢查（Microbial Limit Tests）61)驗(yàn)證。取樣策略和位置的確立在潔凈室或其它控制環(huán)境啟動(dòng)或試車初始階段，就應(yīng)當(dāng)確定空氣和表面取樣的特定位置。應(yīng)當(dāng)考慮到與產(chǎn)品的接近度、空氣和表面是否會(huì)與產(chǎn)品或者容器閉包系統(tǒng)的敏感表面有接觸的可能性。這樣的區(qū)域應(yīng)當(dāng)作為關(guān)鍵區(qū)域，需要進(jìn)行比非產(chǎn)品接觸區(qū)更多的監(jiān)測(cè)。在安泰樂裝瓶操作中，典型的操作區(qū)域包括容器閉包配備、容器開啟路徑以及其它工作人員常規(guī)處理的無機(jī)物體(如污染物)。取樣頻率要依據(jù)特定位點(diǎn)的重要性和對(duì)于產(chǎn)品無菌操作后的

19、后繼處理來定。表 2 顯示的為與被取樣的控制環(huán)境中區(qū)域重要性相關(guān)的降序排列的建議取樣頻率。表 2. 基于控制環(huán)境重要性的建議取樣頻率樣地面積取樣頻率潔凈級(jí) 100 或更好的設(shè)計(jì)室每個(gè)操作交接 8 / 23樣地面積取樣頻率剛靠近潔凈級(jí) 100 的支持區(qū) (如 10,000 潔凈級(jí))每個(gè)操作交接其它支持區(qū)(100,000 潔凈級(jí))每周兩次潛在的產(chǎn)品/容器接觸區(qū)每周兩次其它無菌操作區(qū)但非產(chǎn)品接觸區(qū)支持區(qū)(100,000 潔凈級(jí)或較低)每周一次由于操作過程中手工介入的增加以及人員接觸產(chǎn)品潛在性的增加，使得環(huán)境監(jiān)測(cè)程序的相對(duì)重要性增加。環(huán)境監(jiān)測(cè)對(duì)于無菌操作生產(chǎn)的產(chǎn)品來說，遠(yuǎn)比生產(chǎn)后進(jìn)行終端滅菌的產(chǎn)品要重

20、要得多。確定和定量對(duì)后繼滅菌處理具有抗性的微生物，遠(yuǎn)比在制造環(huán)境周圍進(jìn)行微生物環(huán)境監(jiān)測(cè)要重要得多。如果終端滅菌循環(huán)不是基于過度殺傷循環(huán)，而是基于生物負(fù)擔(dān)優(yōu)先滅菌，那么生物負(fù)擔(dān)的評(píng)估就是關(guān)鍵性的。取樣策略應(yīng)當(dāng)是動(dòng)態(tài)性的，即監(jiān)測(cè)頻率和取樣策略位置的動(dòng)態(tài)性。其動(dòng)態(tài)調(diào)整是以趨勢(shì)特征為根據(jù)的。根據(jù)這一趨勢(shì)可以進(jìn)行適當(dāng)?shù)脑黾踊驕p少取樣。建立控制系統(tǒng)的微生物警告和行動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)過程控制的概念和原理，對(duì)于建立警告和行動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)以及趨勢(shì)應(yīng)答是有用的。微生物環(huán)境監(jiān)測(cè)的警告標(biāo)準(zhǔn)，即微生物水平呈現(xiàn)源自標(biāo)準(zhǔn)操作條件的潛在變化。超過警告標(biāo)準(zhǔn)并不一定需要最后的改善行動(dòng)，但是它至少應(yīng)該提示進(jìn)行繼而的書面調(diào)查，其內(nèi)容包括取樣策略的修

21、正。微生物環(huán)境監(jiān)測(cè)的行動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)，是微生物水平超過此標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，如需要?jiǎng)t應(yīng)立即采取改善行動(dòng)。行動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)通常是根據(jù)特定控制環(huán)境常規(guī)運(yùn)轉(zhuǎn)期間所得歷史信息來確定的。對(duì)于新設(shè)備，這些標(biāo)準(zhǔn)通常是根據(jù)從相似設(shè)備和操作過程所得的先前經(jīng)驗(yàn)來確定的，并且至少應(yīng)依據(jù)幾個(gè)星期的微生物環(huán)境水平數(shù)據(jù)的評(píng)估來建立基線。 9 / 23在確定頻率的情況下，為了確保適當(dāng)性，對(duì)這些標(biāo)準(zhǔn)通常要進(jìn)行再考查。當(dāng)歷史數(shù)據(jù)表明條件改善時(shí)，對(duì)這些標(biāo)準(zhǔn)可以進(jìn)行再考查并做能反映實(shí)際條件的改變。如果有趨勢(shì)表明環(huán)境質(zhì)量惡化，則需要注意檢測(cè)直接原因并建立改善行動(dòng)計(jì)劃以使條件回到原期望值 X 圍。無論如何，應(yīng)實(shí)行調(diào)查，且對(duì)產(chǎn)品造成影響的潛在性因素做出評(píng)估。控制環(huán)

22、境微生物的考察及行動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)潔凈室及其它控制環(huán)境的分級(jí)依據(jù)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn) 209E，此標(biāo)準(zhǔn)是基于對(duì)這些環(huán)境總顆粒計(jì)數(shù)來確定的。藥用和醫(yī)療用具企業(yè)通常采用分級(jí)為 100 級(jí)、10,000 級(jí)和 100,000 級(jí)，特別的針對(duì)設(shè)備的建設(shè)規(guī) X。雖然在 209E 控制環(huán)境級(jí)別和微生物水平之間沒有建立直接的聯(lián)系，可制藥工業(yè)采用與這些級(jí)別相關(guān)的微生物標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)有許多年了。并且這些標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前已用于 GMP 認(rèn)證的評(píng)估。2在控制環(huán)境中應(yīng)用當(dāng)前的技術(shù)來達(dá)到這些標(biāo)準(zhǔn)是很容易的。有相關(guān)報(bào)道顯示，由于取樣系統(tǒng)的不同、培養(yǎng)基的差異以及孵育溫度的不同，可導(dǎo)致這些測(cè)量值的不同。應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到，雖然沒有絕對(duì)完美的檢測(cè)系統(tǒng)，但它的存在確實(shí)能夠

23、幫助我們檢測(cè)環(huán)境質(zhì)量的變化，進(jìn)而了解其趨勢(shì)。表 3, 4,和 5 中所示的值代表個(gè)別測(cè)驗(yàn)的結(jié)果，僅作為指導(dǎo)性建議。每一廠家的數(shù)據(jù)必須作為整個(gè)監(jiān)測(cè)程序的一部分來進(jìn)行評(píng)估。表 3. 以菌落形成單位（cfu）表示的控制環(huán)境中空氣潔凈指導(dǎo)方針(用 Slit-to-Agar 取樣器或同等物) 級(jí)別*每立方米空氣的 cfu*每立方英尺空氣的 cfuSIU.S. 習(xí)慣M3.5100少于 3少于 0.1M5.510,000少于 20少于 0.5M6.5 100,000 少于 100少于 2.5* 定義于聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn) 209E, 1992 年 9 月. * 應(yīng)該取足夠體積的空氣樣品，以檢測(cè)超特定限度的偏差。 10

24、/ 23表表 4. 以以 cfu 表示的控制表示的控制環(huán)環(huán)境中境中儀儀器和器和設(shè)備設(shè)備表面表面潔凈潔凈指指導(dǎo)導(dǎo)方方針針級(jí)別每接觸板的 cfu*SIU.S. 習(xí)慣 M3.51003 (包括底面)M5.510,000510 (底面)* 接觸板區(qū)域從 24 到 30 cm2不同。當(dāng)取樣過程用到?jīng)_洗時(shí)，區(qū)域面積應(yīng)大于或等于 24 cm2，但是不能超過 30 cm2。表 5. 以 cfu 表示的控制環(huán)境中工作人員活動(dòng)表面潔凈指導(dǎo)方針。級(jí)別每接觸板的 cfu*SI U.S. 習(xí)慣手套 工作人員衣著&裝束M3.510035M5.510,0001020* 見表 4 下注 (*)。活性空氣播散微生物定量

25、的方法學(xué)和儀器操作控制環(huán)境中空氣播散微生物能夠?qū)@些區(qū)域內(nèi)半成品或最終產(chǎn)品的微生物質(zhì)量起到影響。這一觀點(diǎn)已被科學(xué)家們所普遍接受。另外人們也普遍接受這種觀點(diǎn)，即空氣播散微生物的估測(cè)也會(huì)受到執(zhí)行這些分析所用儀器和相關(guān)操作的影響。因此，當(dāng)方法和儀器有所變化時(shí)，應(yīng)當(dāng)確定其所獲結(jié)果的一般等價(jià)轉(zhuǎn)換。我們期待將來的技術(shù)進(jìn)步可以帶來革新，以提供比現(xiàn)有可用方法更高的精密度和敏感度，并且可用確定微生物數(shù)量檢測(cè)中的變化絕對(duì)值。目前，美國(guó)制藥和醫(yī)用器材工業(yè)最常用的取樣器為嵌入式和離心取樣器。以下所列取樣器均可通過商業(yè)購買得到，僅作為信息提供。對(duì)特定取樣器的選擇、購買和充分利用則由使用者負(fù)責(zé)。 11 / 23Slit-

26、to-Agar空氣取樣器(STA)這一取樣器是依據(jù)多種控制環(huán)境表 3 的微生物指導(dǎo)方針的一種儀器。其動(dòng)力來源為附屬可控真空裝置。空氣通過一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化的縫隙進(jìn)入縫隙下面設(shè)置的緩慢回轉(zhuǎn)式有蓋培養(yǎng)皿，皿內(nèi)含有營(yíng)養(yǎng)瓊脂。空氣中的顆粒物質(zhì)具有足夠的質(zhì)量撞擊瓊脂表面，使得活菌能夠在其表面生長(zhǎng)。通常用吸入稀疏空氣的方法來減小空氣層流區(qū)域的干擾。濾網(wǎng)取樣器（Sieve Impactor）此裝置包括一個(gè)容器，可以調(diào)節(jié)含營(yíng)養(yǎng)瓊脂的有蓋培養(yǎng)皿。裝置的蓋子有穿孔，穿孔的大小是預(yù)先設(shè)計(jì)好的。真空泵通過蓋子的穿孔抽取已知體積的空氣，空氣中含有微生物的顆粒就與有蓋培養(yǎng)皿內(nèi)的瓊脂培養(yǎng)基碰撞。一些取樣器具有一系列串聯(lián)級(jí)有孔容器，

27、其穿孔按大小降序排列。這些裝置能夠依照尺寸 X 圍分級(jí)測(cè)量含活性微生物的顆粒樣品，因?yàn)轭w粒是經(jīng)過有大小尺寸的穿孔而到達(dá)瓊脂平板表面的。離心取樣器（Centrifugal Sampler）此裝置包括一個(gè)推進(jìn)器或渦輪，以推動(dòng)已知體積的空氣進(jìn)入裝置內(nèi)部，然后向外推進(jìn)空氣使其與獨(dú)立設(shè)置在一個(gè)柔韌塑料基板上的營(yíng)養(yǎng)瓊脂條碰撞。無菌微生物房（Sterilizable Microbiological Atrium）此裝置是單孔濾網(wǎng)打入器的一種變型。裝置的蓋子含有均勻分布的約 0.25 英寸的小口。裝置的基底適合于一個(gè)含營(yíng)養(yǎng)瓊脂的有蓋培養(yǎng)皿。由真空泵來控制通過裝置的空氣運(yùn)動(dòng)，并可以應(yīng)用多重裝置控制中心和遠(yuǎn)距離取

28、樣探針。表面空氣系統(tǒng)取樣器（Surface Air System Sampler）這是一種整合裝置，包括一個(gè)適合瓊脂接觸板的進(jìn)入部分。緊接著接觸板的后面，是一個(gè)傳動(dòng)器和渦輪，可以推動(dòng)空氣穿過裝置中瓊脂接觸板的有孔蓋子，以及穿過傳動(dòng)器遠(yuǎn)端。也可以有多重包埋組合。凝膠薄膜過濾取樣器（Gelatin Filter Sampler）這一裝置包括一個(gè)帶有延長(zhǎng)管的真空泵，延長(zhǎng)管的終端是一個(gè)濾紙夾，此末端可以被放置于遙遠(yuǎn)的關(guān)鍵性空間。濾紙含有無規(guī)則明膠 12 / 23纖維，對(duì)空氣播散微生物起到防衛(wèi)作用。經(jīng)過特定的暴露時(shí)間后，濾紙被無菌的移開，并用適當(dāng)?shù)南♂寗┤芙猓缓笸坑谶m當(dāng)?shù)沫傊囵B(yǎng)基上進(jìn)行微生物含量的評(píng)

29、價(jià)。沉降皿（Settling Plates）作為一種簡(jiǎn)單和廉價(jià)的方法，仍被廣泛用于延長(zhǎng)暴露時(shí)間的環(huán)境品質(zhì)評(píng)估。但是開放性瓊脂填充培養(yǎng)皿或沉降皿的方法，不能用于對(duì)關(guān)鍵環(huán)境進(jìn)行微生物污染的品質(zhì)評(píng)估。機(jī)械空氣取樣器的一個(gè)主要的缺陷是對(duì)被取樣空氣樣本量的限制。如果一個(gè)控制環(huán)境的空氣微生物水平期望值為不高于 3 cfu 每立方米，那么就需要對(duì)幾個(gè)立方米的空氣進(jìn)行測(cè)試，進(jìn)而得到準(zhǔn)確度和精確度合乎給定標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)果。通常這是不切實(shí)際的。為了顯示環(huán)境中存在的微生物數(shù)量不隨時(shí)間而增加，可能就需要通過延長(zhǎng)取樣時(shí)間來確定取樣時(shí)間是否是一個(gè)限制性因素。具代表性的有，slit-to-agar 取樣器具有每分鐘 80 升的取

30、樣能力(對(duì)于表面空氣系統(tǒng)，此能力有時(shí)可能會(huì)更高)。如果檢測(cè) 1 立方米的空氣，接著將需要暴露時(shí)間為 15 分鐘。用這過多的 15 分鐘取樣時(shí)間，對(duì)于獲得代表性的環(huán)境樣品，可能是必需的。盡管報(bào)導(dǎo)有一些取樣器，其取樣體積比率能達(dá)到很高，可是這些情形中存在的對(duì)任何關(guān)鍵區(qū)域氣流模式的潛在破壞性或是能夠增加污染可能性的紊流形成，都應(yīng)該給予考慮。對(duì)于離心空氣取樣器，許多前期的研究表明，所取樣品顯示了對(duì)較大顆粒的選擇性。這種類型取樣器的應(yīng)用，可能會(huì)由于其固有的選擇性，引起比其它類型空氣取樣器更高的空氣播散計(jì)數(shù)。當(dāng)選擇離心取樣器時(shí)，應(yīng)當(dāng)考慮到取樣器對(duì)取樣位置的控制區(qū)域氣流線性的影響。如果忽略所用取樣器的類型，

31、則遠(yuǎn)距離探針的應(yīng)用需要檢測(cè)其額外的配管對(duì)活性空氣播散計(jì)數(shù)沒有不良影響。如有影響，則應(yīng)設(shè)法消除；如果無法消除，則應(yīng)當(dāng)在報(bào)告結(jié)果時(shí)引進(jìn)校正系數(shù)。測(cè)量控制環(huán)境內(nèi)活性微生物污染表面取樣的儀器和方法學(xué)微生物環(huán)境控制程序的另一組成部分是這些環(huán)境中儀器、設(shè)備以及工作人員著裝的表面取樣。在制藥工業(yè)中，表面取樣方法和程序的標(biāo)準(zhǔn)化程度還不及空氣取樣程序的標(biāo)準(zhǔn)化程度廣泛。 13 / 233為使對(duì)關(guān)鍵性操作的影響最小化，表面取樣應(yīng)該在該操作的結(jié)尾進(jìn)行。表面取樣可以通過應(yīng)用接觸平板或者水刷方法來完成。表面監(jiān)測(cè)通常在于產(chǎn)品有關(guān)聯(lián)的區(qū)域或與這些區(qū)域相鄰近的區(qū)域表面進(jìn)行。裝有營(yíng)養(yǎng)瓊脂的接觸平板通常應(yīng)用于規(guī)則的或平坦的表面取樣

32、，并且在給定溫度下直接孵育適當(dāng)時(shí)間以對(duì)活菌進(jìn)行定量檢測(cè)。對(duì)于真菌、孢子等的特殊定量檢測(cè)應(yīng)當(dāng)用專門的瓊脂。水刷方法可以用于不規(guī)則表面的取樣，尤其是儀器表面。在規(guī)則表面，水刷法可作為接觸平板方法的補(bǔ)充。取樣后，將水刷置于適當(dāng)?shù)南♂寗_之中，然后在適當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)瓊脂上或其中接種適當(dāng)量以進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)評(píng)估。將要被刷的區(qū)域用適當(dāng)大小的無菌模板確定。通常其大小在 24 到 30 cm2X 圍內(nèi)。對(duì)報(bào)告的每接觸板或每刷進(jìn)行微生物學(xué)評(píng)估。微生物取樣或定量用培養(yǎng)基及稀釋劑控制環(huán)境中用于微生物取樣或定量的培養(yǎng)基類型是液體還是固體，取決于所用儀器和操作的過程。當(dāng)需要固體培養(yǎng)基時(shí)，一般選用通用的大豆-酪蛋白消化瓊脂培養(yǎng)基

33、。其它固體和液體培養(yǎng)基見下表。液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基*固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基*胰蛋白胨鹽大豆-酪蛋白消化瓊脂胨水營(yíng)養(yǎng)瓊脂緩沖鹽水胰蛋白胨葡萄糖浸液瓊脂緩沖明膠卵磷脂瓊脂濃縮緩沖明膠腦心浸液瓊脂腦心浸液瓊脂平板大豆-酪蛋白培養(yǎng)基* 液體和固體培養(yǎng)基已用有效方法進(jìn)行過滅菌處理. 14 / 23這些培養(yǎng)基的脫水型都可以在市場(chǎng)上購買到。它們的即用型也能夠買得到。當(dāng)控制區(qū)域用了消毒劑或抗生素時(shí)，應(yīng)當(dāng)考慮應(yīng)用具有適當(dāng)滅活劑的培養(yǎng)基?？梢詮纳媳碇羞x擇培養(yǎng)基，如果確證其能夠有效到達(dá)預(yù)期目的。來自環(huán)境控制程序的微生物隔離群的鑒別環(huán)境控制程序包括對(duì)從樣品中獲得的菌叢進(jìn)行適當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)的鑒別。具有控制環(huán)境中一般菌株的知識(shí)，能

34、幫助我們預(yù)先確定被監(jiān)測(cè)設(shè)備通常的微生物菌株；評(píng)估潔凈和清潔衛(wèi)生處理程序、方法及試劑的有效性；并恢復(fù)一些方法。通過鑒別程序收集的信息，在對(duì)污染源的調(diào)查中也是有用的，尤其是當(dāng)其超過行動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)時(shí)。鑒別從關(guān)鍵區(qū)域以及緊鄰關(guān)鍵區(qū)域得到的隔離群，應(yīng)當(dāng)優(yōu)先于對(duì)非關(guān)鍵區(qū)域微生物的鑒別。鑒別方法應(yīng)當(dāng)校驗(yàn)，而且即用試劑盒的質(zhì)量與其預(yù)期目的相當(dāng)。(見環(huán)境控制程序設(shè)計(jì)和實(shí)施中的相關(guān)關(guān)鍵因素)。潔凈室和其他控制環(huán)境中無菌填充產(chǎn)品微生物狀況的操作評(píng)估控制環(huán)境的監(jiān)測(cè)是通過適當(dāng)?shù)沫h(huán)境監(jiān)測(cè)程序進(jìn)行的。為了確保得到最小生物負(fù)載，控制環(huán)境中微生物狀況評(píng)估的額外信息，可以通過應(yīng)用培養(yǎng)基填充來獲得。一個(gè)可接受的培養(yǎng)基填充可以在生產(chǎn)線上對(duì)

35、點(diǎn)及時(shí)成功模擬出產(chǎn)品的流程。然而，其它的因素也是重要的，比如適當(dāng)?shù)脑O(shè)備構(gòu)建、環(huán)境監(jiān)測(cè)以及人員培訓(xùn)。當(dāng)一套無菌操作系統(tǒng)被制定和安裝時(shí)，通過至少連續(xù)三次成功的培養(yǎng)基填充以檢測(cè)微生物狀況的合格性通常是必需的。培養(yǎng)基填充是用生長(zhǎng)培養(yǎng)基替代原產(chǎn)品，以檢測(cè)微生物的生長(zhǎng)。在培養(yǎng)基填充程序的發(fā)展過程中值得注意的問題如下：培養(yǎng)基填充過程、培養(yǎng)基的選擇、填充體積、孵育時(shí)間和溫度、填充裝置的檢查、文件證明、結(jié)果解釋以及需要的可能改善行動(dòng)。由于設(shè)計(jì)培養(yǎng)基填充是為了模擬特定產(chǎn)品的無菌過程，使得培養(yǎng)基填充過程中，正常產(chǎn)品生產(chǎn)流程條件對(duì)其的影響顯得重要了。這包括整個(gè)的工作人員、所有的加工處理步驟以及構(gòu)成 15 / 23一般

36、產(chǎn)品流程的原料。培養(yǎng)基填充生產(chǎn)期間，應(yīng)當(dāng)計(jì)劃發(fā)生在實(shí)際產(chǎn)品生產(chǎn)流程期間的多種初始文件性干涉(如改變填充針、固定組件塞)。為了增加安全域，可以選擇性的進(jìn)行可能條件的聯(lián)合應(yīng)用。實(shí)例可能包括頻繁啟動(dòng)和停止順序、非預(yù)期的處理系統(tǒng)修復(fù)、濾紙的替換等等。取得無菌操作資格不需要每一產(chǎn)品的檢測(cè)，而應(yīng)當(dāng)對(duì)每一生產(chǎn)線進(jìn)行檢測(cè)。容器的幾何形狀(容器的大小和其開啟)和流水線的速度都是無菌操作線上的可變因素，因此應(yīng)當(dāng)在生產(chǎn)線質(zhì)控上對(duì)這些因素進(jìn)行適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合，最好是在終端結(jié)合。產(chǎn)品應(yīng)用的原則應(yīng)當(dāng)形成文件性指導(dǎo)。1987 年 FDA 關(guān)于通過無菌操作生產(chǎn)無菌藥物制劑的指導(dǎo)方針指出，培養(yǎng)基填充流程應(yīng)覆蓋對(duì)于生產(chǎn)線/產(chǎn)品/容器結(jié)

37、合的所有生產(chǎn)換崗。這一指導(dǎo)方針應(yīng)不僅僅被認(rèn)為是培養(yǎng)基填充流程的質(zhì)控，而且應(yīng)看成是周期性再評(píng)估或再生效的指導(dǎo)。培養(yǎng)基填充程序還應(yīng)當(dāng)模擬擴(kuò)展運(yùn)行的生產(chǎn)實(shí)踐。這可以通過在產(chǎn)品生產(chǎn)運(yùn)作末端進(jìn)行培養(yǎng)基填充運(yùn)作來實(shí)現(xiàn)。通常，像大豆酪蛋白牛肉湯這種已經(jīng)用一系列水平低于 100cfu/unit 的指示微生物 (見無菌檢查（Sterility Tests）71)進(jìn)行過促生長(zhǎng)檢驗(yàn)的通用豐富培養(yǎng)基，可以被應(yīng)用。來自將要進(jìn)行無菌操作生產(chǎn)的控制環(huán)境中的隔離群也可以被應(yīng)用。培養(yǎng)基的無菌操作之后，填充容器被置于 22.5 2.5 或 32.5 2.5 進(jìn)行孵育。所以填充培養(yǎng)基的容器至少應(yīng)當(dāng)孵育 14 天。如果培養(yǎng)基樣品的孵

38、育溫度有兩個(gè)，那么這些填充容器在每個(gè)溫度下至少要孵育 7 天。孵育過后，應(yīng)當(dāng)對(duì)培養(yǎng)基填充容器進(jìn)行生長(zhǎng)檢查。培養(yǎng)基填充隔離群以屬進(jìn)行鑒別，如果出于調(diào)查污染源為目的的需要，可能的話要鑒別到種。在進(jìn)行培養(yǎng)基填充時(shí)關(guān)鍵性問題有：使無菌操作質(zhì)量合格的填充數(shù)量，每一培養(yǎng)基填充的單位數(shù)量，對(duì)結(jié)果的解釋以及改善行動(dòng)的實(shí)行。據(jù)以往經(jīng)驗(yàn)，常在質(zhì)控初始或設(shè)備初啟時(shí)采取 3 個(gè)培養(yǎng)基填充運(yùn)行來證明無菌操作線程的連貫性。0.1%污染率是一個(gè)成功培養(yǎng)基填充運(yùn)行的可接受標(biāo)準(zhǔn)，用于證明污染率不超過 0.1%的最小單位數(shù)至少應(yīng)為 3,000。應(yīng)當(dāng)強(qiáng)調(diào) 16 / 23指出，美國(guó)以及其它國(guó)家的的許多生產(chǎn)商在單次培養(yǎng)基填充運(yùn)行時(shí)填充

39、單位超過了 3,000。4中試工廠用于制備臨床批產(chǎn)品的設(shè)備，可以用較小的培養(yǎng)基填充。許多國(guó)際性文件(即 ISO 和 EU-GMP)也已經(jīng)引用了 3,000 培養(yǎng)基填充單位中期望零陽性檢出在 95%置信度?？墒?，公認(rèn)的為了確證過程中實(shí)測(cè)污染率的統(tǒng)計(jì)真實(shí)性，就需要進(jìn)行重復(fù)的培養(yǎng)基填充運(yùn)行。PDA 技術(shù)專題論文 17 期4的“當(dāng)前無菌制造業(yè)實(shí)踐的調(diào)查”表明，許多生產(chǎn)商認(rèn)為他們的無菌操作過程能夠使污染率低于 0.1%既然潔凈室最關(guān)鍵的污染源是工作人員，那么在培養(yǎng)基填充過程中能夠?qū)ο嚓P(guān)生產(chǎn)活動(dòng)中污染事件起到幫助的可視性文件就應(yīng)得到支持。無菌測(cè)試隔離系統(tǒng)的廣泛應(yīng)用，已經(jīng)表明無菌操作中去除人員確實(shí)能減少污染

40、的發(fā)生。目前出現(xiàn)的先進(jìn)無菌操作技術(shù)綜述由于無菌操作中人員的參與和介入與產(chǎn)品污染潛在性之間存在密切的聯(lián)系，所以設(shè)計(jì)并運(yùn)行了可以使人員和關(guān)鍵區(qū)域相隔絕的生產(chǎn)系統(tǒng)。研究減少污染可能性的方法包括自動(dòng)化裝備、阻擋層以及隔離系統(tǒng)。采用這些先進(jìn)無菌操作策略的設(shè)備現(xiàn)已投入運(yùn)行。在應(yīng)用這些設(shè)備的地方，人員已經(jīng)被完全排除在關(guān)鍵區(qū)域之外，那么基于顆粒和環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)需求的潔凈室分類的必需性可能就會(huì)明顯的減少了。以下是關(guān)于一些目前應(yīng)用于無菌操作用以減少污染的系統(tǒng)的定義：阻擋層（Barriers） 在無菌操作系統(tǒng)里，阻擋層是一種裝置，用來限制操作人員與阻擋層內(nèi)被隔離無菌區(qū)域之間的接觸。這些系統(tǒng)用于無菌填充，同時(shí)也用于醫(yī)

41、院藥房、實(shí)驗(yàn)室以及照管動(dòng)物設(shè)備。阻擋層可以是沒有滅過菌的，并且不能總是有準(zhǔn)許沒有暴露在周圍環(huán)境中的原料進(jìn)出/出通行的傳遞系統(tǒng)。阻擋層可以是圍住關(guān)鍵生產(chǎn)區(qū)域的塑料屏障，也可以是在現(xiàn)代無菌填充設(shè)備外建立的堅(jiān)硬的外殼。阻擋層也可以結(jié)合一些元素，如手套孔、不完全工作服以及快速傳遞通道等。 17 / 23Blow/Fill/Seal 這種類型的系統(tǒng)將容器吹成型、產(chǎn)品填充以及單片設(shè)備加封操作相結(jié)合。從微生物學(xué)角度來看，使容器成型、裝入無菌產(chǎn)品以及封蓋的形成和應(yīng)用這系列連續(xù)事件，達(dá)到了連續(xù)的無菌操作并使其于環(huán)境中的暴露最小化。這些系統(tǒng)的存在已有大約 30 年的歷史，并且顯示出使污染率到達(dá)低于 0.1%的能力

42、。當(dāng)綜合和分析組和培養(yǎng)基填充數(shù)據(jù)時(shí)，blow/fill/seal 系統(tǒng)的污染率能夠達(dá)到 0.001%。隔離器（Isolator） 這一技術(shù)可有雙重目的應(yīng)用。一個(gè)是保護(hù)產(chǎn)品免受來自環(huán)境中的污染，包括裝入和封閉過程中的人員方面污染；另一個(gè)是保護(hù)人員免受正在制造的有毒或有害產(chǎn)品的影響。隔離器技術(shù)基于在無菌環(huán)境中預(yù)先放置已滅菌組件（容器/產(chǎn)品/閉包）原則。這些組件在整個(gè)操作過程中保持無菌狀態(tài)，是因?yàn)闆]有任何人員或是非滅菌組件被帶進(jìn)隔離器。隔離器屏蔽是一個(gè)完全的屏蔽，它不允許保護(hù)環(huán)境與非保護(hù)環(huán)境中物質(zhì)的互換。隔離器或者是物理水平的封閉外界環(huán)境污染的進(jìn)入，或者可能是通過應(yīng)用連續(xù)的超壓起到有效的封閉作用。人

43、員對(duì)原料的處理是通過手套、半身或全身工作服進(jìn)行的。所有進(jìn)入隔離器的空氣都要通過HEPA 或 UPLA 過濾器，典型的廢氣通過 HEPA-級(jí)濾器排出。過氧乙酸和過氧化氫蒸汽通常用于隔離器單位內(nèi)部環(huán)境表面的滅菌。隔離器本身內(nèi)部以及所有其內(nèi)容物的無菌水平通?？梢员ＷC到達(dá) 106。設(shè)備、組件以及原料通過許多不同操作步驟被引入隔離器：運(yùn)用雙通道高壓滅菌器；通過無菌通道用輸送帶連續(xù)引入組件；傳送容器系統(tǒng)通過對(duì)接系統(tǒng)在隔離器外殼中的運(yùn)用。對(duì)隔離器組件的完整性、校準(zhǔn)以及保養(yǎng)的緊密監(jiān)測(cè)也是必需的?？刂骗h(huán)境中圍繞這些針對(duì)無菌操作的較新技術(shù)所需條件，應(yīng)當(dāng)依應(yīng)用技術(shù)的類型而定。限制了工作人員與產(chǎn)品的接觸的 Blow/

44、Fill/Seal 設(shè)備可能會(huì)放置在控制環(huán)境中，尤其是生產(chǎn)過程中工作人員可能以某種形式介入的區(qū)域。 18 / 23阻擋層系統(tǒng)可能會(huì)對(duì)控制環(huán)境有些形式上的需要。由于阻擋層系統(tǒng)類型和用途的多樣性，這就造成了阻擋層系統(tǒng)所需周圍環(huán)境的多樣性。因此制造商不得不將圍繞這些系統(tǒng)的環(huán)境的設(shè)計(jì)和工作策略進(jìn)行發(fā)展，以使其成為合理的有利的模式。如果不管這些策略，那么系統(tǒng)制造無菌產(chǎn)品的能力必須被驗(yàn)證有效，且與此前建立的標(biāo)準(zhǔn)相一致。對(duì)于隔離器，空氣通過整個(gè) HEPA 級(jí)或更高質(zhì)量的過濾器進(jìn)入其中，且其內(nèi)部經(jīng)過典型的滅菌處理，其無菌程度保證在 106水平。這樣，隔離器就包含有無菌的空氣，不與周圍環(huán)境進(jìn)行空氣交換，且是隔離

45、于操作人員的。有建議表明，當(dāng)一個(gè)控制環(huán)境中存在隔離器時(shí)，手套和制服上的小孔滲漏事件對(duì)產(chǎn)品造成污染的潛在性是減少了。這些先進(jìn)系統(tǒng)對(duì)無菌操作的環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)的程度和廣度，依賴于其應(yīng)用的系統(tǒng)類型。制造商應(yīng)當(dāng)用通過監(jiān)測(cè)結(jié)果而獲得的利益來平衡需要人員介入的環(huán)境取樣系統(tǒng)的頻率。由于阻擋層系統(tǒng)的設(shè)計(jì)是為了把人員的介入減到最小，那么就應(yīng)當(dāng)用遠(yuǎn)距離取樣系統(tǒng)來替代人員的介入?？偟膩碚f，一旦確立了阻擋層系統(tǒng)的有效性，用以監(jiān)測(cè)無菌操作區(qū)域微生物狀況的取樣頻率與傳統(tǒng)的無菌操作系統(tǒng)的取樣頻率相比較，應(yīng)當(dāng)被減少。隔離器系統(tǒng)的微生物監(jiān)測(cè)頻率相對(duì)較少。連續(xù)的總粒子監(jiān)測(cè)就能夠?yàn)楦綦x器內(nèi)的空氣過濾系統(tǒng)處于正常工作狀態(tài)提供可靠保證。

46、本章所述對(duì)微生物質(zhì)量進(jìn)行控制的方法，對(duì)于隔離器內(nèi)部的環(huán)境測(cè)試來說，其敏感度可能不足。對(duì)隔離器的經(jīng)驗(yàn)提示，在正常操作的情況下，手套上的漏洞或小孔是微生物污染潛在性的主要代表；因此，經(jīng)常性的檢測(cè)手套的完整性以及對(duì)其進(jìn)行表面的監(jiān)測(cè)是必需的。隔離器內(nèi)的表面監(jiān)測(cè)對(duì)于珍貴的主藥也是有益的。詞匯詞匯表表空氣播散空氣播散顆顆粒粒計(jì)計(jì)數(shù)（數(shù)（Airborne Particulate Count）(也指總顆粒計(jì)數(shù))檢測(cè) 0.5 m 以及更大的微粒。當(dāng)詳細(xì)說明許多顆粒的時(shí)候，其指的是每立方米空氣（或每立方英尺空氣）中最大允許顆粒數(shù) 。 19 / 23空氣播散活性空氣播散活性顆顆粒粒計(jì)計(jì)數(shù)（數(shù)（Airborne Vi

47、able Particulate Count）(也指總的空氣散播需氧微生物計(jì)數(shù))當(dāng)詳細(xì)說明許多微生物的時(shí)候，其指的是每立方米空氣（或每立方英尺空氣）中菌落形成單位(cfu)最大數(shù)值，此值與基于空氣散播顆粒計(jì)數(shù)的控制環(huán)境的潔凈級(jí)相關(guān)。無菌操作（無菌操作（Aseptic Processing）一種加工處理藥學(xué)和醫(yī)學(xué)產(chǎn)品的模式，包括產(chǎn)品的單獨(dú)滅菌、產(chǎn)品包裝（容器/閉包或醫(yī)療器械的包裝）、產(chǎn)品裝入容器的傳遞以及其閉包，均在微生物臨界控制條件下進(jìn)行。空氣取空氣取樣樣器（器（Air Sampler）用來采集在特定時(shí)間的測(cè)量空氣樣品，從而測(cè)量控制環(huán)境中空氣顆?；蛭⑸锴闆r的設(shè)備或裝置。換換氣（氣（Air C

48、hanges）控制環(huán)境中的空氣每單位時(shí)間（分、小時(shí)等）被更換的頻率?？諝饪梢跃植垦h(huán)或整體更換。行行動(dòng)標(biāo)動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)（準(zhǔn)（Action Levels）控制環(huán)境中的微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，特指在標(biāo)準(zhǔn)操作過程，當(dāng)超過此標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)當(dāng)啟動(dòng)調(diào)查并基于此調(diào)查進(jìn)行改善。警告警告標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)（準(zhǔn)（Alert Levels）微生物的水平，特指在標(biāo)準(zhǔn)操作過程，當(dāng)超過此標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)當(dāng)調(diào)查以確定進(jìn)程是否仍然處于控制 X 圍內(nèi)。警告標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于給定的設(shè)備是特定的，且是以環(huán)境的檢測(cè)程序下制定的基線為根據(jù)建立的。這些警告標(biāo)準(zhǔn)可依賴檢測(cè)程序中的趨勢(shì)分析而修改。警告標(biāo)準(zhǔn)總是低于行動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)。生物生物負(fù)負(fù)擔(dān)（擔(dān)（Bioburden）在項(xiàng)目中檢測(cè)到的微生物總數(shù)量

49、。以某條款為指導(dǎo)進(jìn)行檢測(cè)。潔凈潔凈室（室（Clean Room）一房間，其空氣播散顆粒濃度被控制達(dá)到特定的空氣播散顆粒潔凈級(jí)別。并且環(huán)境中的微生物濃度是被監(jiān)測(cè)的，定義每一潔凈級(jí)別也分配于空氣、表面和全體傳動(dòng)裝置的微生物水平。潔凈潔凈區(qū)（區(qū)（Clean Zone）定義一個(gè)空間，控制其中的空氣散播顆粒濃度和微生物濃度，使其能達(dá)到特定潔凈級(jí)別。 20 / 23控制控制環(huán)環(huán)境（境（Controlled Environment）一個(gè)無菌處理系統(tǒng)中的任何區(qū)域，其空氣散播顆粒和微生物被控制在特定水平，以在此環(huán)境進(jìn)行適當(dāng)?shù)牟僮??？刂瓶刂骗h(huán)環(huán)境境試車試車（missioning of a Controlled E

50、nvironment）通過工程和質(zhì)量控制證明，環(huán)境是依照期望潔凈級(jí)別的規(guī) X 建立的，且在正常操作條件（或最壞情況條件）中可能遇到的情況下，其有能力進(jìn)行無菌處理。試車包括培養(yǎng)基填充運(yùn)轉(zhuǎn)和環(huán)境監(jiān)測(cè)程序結(jié)果。改善行改善行動(dòng)動(dòng)（Corrective Action）在標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程中需執(zhí)行的行動(dòng)，當(dāng)某一條件超標(biāo)時(shí)即啟動(dòng)。環(huán)環(huán)境隔離群（境隔離群（Environmental Isolates）從環(huán)境監(jiān)測(cè)程序隔離出的微生物。環(huán)環(huán)境境檢測(cè)檢測(cè)程序（程序（Environmental Monitoring Program）文件性程序，通過標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)成實(shí)現(xiàn)，其詳細(xì)描述了在控制環(huán)境中（空氣、表面和全體傳動(dòng)裝置）用于

51、監(jiān)測(cè)顆粒和微生物的程序和方法。此程序包括取樣點(diǎn)、取樣頻率以及如果超過警告或活動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)后應(yīng)采取的跟隨調(diào)查和改善行動(dòng)。同時(shí)也描述了用于趨勢(shì)分析的方法學(xué)。設(shè)備設(shè)備布局（布局（Equipment Layout）無菌處理系統(tǒng)的圖解表示法，用來表示設(shè)備和人員之間的關(guān)系。此布局被用于危險(xiǎn)率估計(jì)，并根據(jù)產(chǎn)品/容器/閉包系統(tǒng)微生物污染的潛在性，確定取樣點(diǎn)和取樣頻率。改變必須經(jīng)由責(zé)任管理人員的評(píng)估，因?yàn)槲唇?jīng)認(rèn)可的改變?cè)O(shè)備或人員的布局可能導(dǎo)致產(chǎn)品/容器/閉包系統(tǒng)污染潛在性的增加。聯(lián)聯(lián)邦邦標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn) 209E（Federal Standard 209E）“潔凈室和潔凈區(qū)內(nèi)空氣播散顆粒潔凈級(jí)別”，是被 the missio

52、ner, Federal Supply Services, General Service Administration 核準(zhǔn)的用于“所有聯(lián)邦機(jī)構(gòu)”的一項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)。此標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)特定空氣播散顆粒濃度，建立了空氣潔凈級(jí)別。這些空氣潔凈級(jí)別通常被發(fā)展為電子行業(yè)“超凈” 控制環(huán)境。在制藥行業(yè)中，聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn) 209E 被用于特指控制環(huán)境的建造。無菌處理系統(tǒng)通常呈現(xiàn)為 100 級(jí)、10,000 級(jí)和 100,000 級(jí)。如果此分級(jí)系統(tǒng)應(yīng)用于顆粒等于或大于 0.5 m 的基礎(chǔ)上，那么這些級(jí)別就分別以M3.5、M5.5 和 M6.5，呈現(xiàn)為 SI 系統(tǒng)。 21 / 23過濾過濾完整性（完整性（Filter Integrity）確定過濾功能型操作是令人滿意的 如：鄰苯二甲酸二辛酯(DOP)和始沸點(diǎn)測(cè)試測(cè)試。原料流原料流動(dòng)動(dòng)（Material Flow）原料和人員進(jìn)入控制環(huán)境的流動(dòng)應(yīng)該遵循特定的和文件性的途徑，其途徑的選擇是用以減少或最小化產(chǎn)品/閉包/容器系統(tǒng)微生物污染潛在性。偏離規(guī)定流程可能會(huì)導(dǎo)致微生物污染的潛在性增加。原料/人員流動(dòng)可以改變，但是其改變的結(jié)果從微生物學(xué)角度看應(yīng)該由責(zé)任的管理人員評(píng)估，且必須經(jīng)認(rèn)可和證明。培養(yǎng)基生培養(yǎng)基生長(zhǎng)長(zhǎng)促促進(jìn)進(jìn)（Media Growth Promotion）此操作參考無菌檢查（Sterility Tests）71 指導(dǎo)