宮頸鱗癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)乙酰肝素酶的表達(dá)及臨床意義--畢業(yè)答辯

1、宮頸鱗癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)乙酰肝素酶宮頸鱗癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)乙酰肝素酶的表達(dá)及臨床意義的表達(dá)及臨床意義 研研 究究 生生 指導(dǎo)老師指導(dǎo)老師2目錄目錄t 研究背景與目的研究背景與目的t 研究方法研究方法t 研究結(jié)果研究結(jié)果t 主要結(jié)論主要結(jié)論t 討論討論t 展望展望t 致謝致謝 研究背景與目的（研究背景與目的（1 1）u宮頸癌是婦科常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其最主要的轉(zhuǎn)移途徑是淋巴轉(zhuǎn)移，淋巴轉(zhuǎn)移是目前明確的可導(dǎo)致臨床治療失敗和死亡的主要原因。u有研究發(fā)現(xiàn)1宮頸癌無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者5年生存率為80%90%，當(dāng)淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移時(shí)生存率下降至45%，盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響宮頸癌患者預(yù)后的重要因素。研究背景與目的（研究背景與目的

2、（2 2）u有報(bào)道指出2,3，宮頸癌伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，約60%為多組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其中有53%的病例出現(xiàn)了跳躍性轉(zhuǎn)移。u如能在術(shù)前準(zhǔn)確的預(yù)測(cè)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況，即可準(zhǔn)確的了解腫瘤的范圍，選擇合適的治療方案，避免不必要的根治性手術(shù)及術(shù)后相應(yīng)并發(fā)癥的發(fā)生，但目前對(duì)于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷，尚缺乏有效的手段。研究背景與目的（研究背景與目的（3 3） 乙酰肝素酶（heparanase，HPA）是一種-D-葡萄糖醛酸內(nèi)切酶，它能在數(shù)個(gè)位點(diǎn)降解硫酸乙酰肝素蛋白多糖，破壞細(xì)胞外基質(zhì)和基膜的完整性，同時(shí)釋放VEGF、b-FGF、細(xì)胞因子、細(xì)胞粘附分子等生物活性因子，從而有利于腫瘤細(xì)胞穿越細(xì)胞外基質(zhì)和血管壁，促進(jìn)腫瘤的局

3、部侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。 乙酰肝素酶作用機(jī)制模式圖4研究背景與目的（研究背景與目的（4 4）u我們的前期研究及一些國(guó)外的研究均已證實(shí)HPA在宮頸癌原發(fā)灶中的表達(dá)顯著增高，是宮頸癌的重要生物標(biāo)志物。 u本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)宮頸鱗癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中HPA的表達(dá)情況，分析宮頸鱗癌淋巴結(jié)HPA的表達(dá)與臨床預(yù)后因素間的關(guān)系，以期為宮頸鱗癌淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移診斷提供一新的分子指標(biāo)。研究方法（研究方法（1 1）u收集鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院病理科2007年1月2012年12月病理確診且臨床資料完整的宮頸鱗癌石蠟標(biāo)本102例，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者53例（A組），淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者49例（B組）。A組取原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)及

4、未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)3個(gè)部位B組取原發(fā)灶和淋巴結(jié)2個(gè)部位，用于免疫組織化學(xué)染色研究方法（研究方法（2 2）u采用免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)HPA在宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（A組）和淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者（B組）的表達(dá)情況。u分別行常規(guī)HE染色和HPA、CK19免疫組織化學(xué)標(biāo)記，CK19為鱗狀上皮標(biāo)記。u結(jié)合圖像分析技術(shù)檢測(cè)各組中HPA表達(dá)的平均灰度值和陽(yáng)性單位。研究方法（研究方法（3 3）圖1 研究技術(shù)路線(xiàn)研究方法（研究方法（4 4）u所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，圖像分析數(shù)據(jù)采用s表示，各組間比較采用方差分析，HPA表達(dá)率采用卡方檢驗(yàn)。u生存曲線(xiàn)采用Kaplan-Meier方法，生存率比較采用Lo

5、g-rank檢驗(yàn)，多因素分析采用Cox回歸分析法。u檢驗(yàn)水平= 0.05。研究結(jié)果（研究結(jié)果（1 1）1.1.宮頸鱗癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)中宮頸鱗癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)中HPAHPA的陽(yáng)性表達(dá)情況的陽(yáng)性表達(dá)情況0%20%40%60%80%100%A組B組原發(fā)灶未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)圖2 宮頸鱗癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)中的HPA陽(yáng)性表達(dá)率12研究結(jié)果（研究結(jié)果（3 3）3 3. .宮頸鱗癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)中宮頸鱗癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)中HPAHPA的表達(dá)情況的表達(dá)情況表1 宮頸鱗癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)中HPA的表達(dá)水平比較分組例數(shù)平均灰度值FP 陽(yáng)性單位FP A組組原發(fā)灶531028*30.5210.0005.03.96.351

6、0.021轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)531193#4.74.4未轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)5313651.30.7B組組原發(fā)灶49113321.3970.0004.73.14.827 0.037淋巴結(jié)4914341.10.8研究結(jié)果（研究結(jié)果（4 4）4.4.淋巴結(jié)淋巴結(jié)HPAHPA表達(dá)水平與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系表達(dá)水平與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系圖 4 宮頸鱗癌淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移與患者生存分析圖 5 宮頸鱗癌淋巴結(jié)HPA表達(dá)水平與患者生存分析研究結(jié)果（研究結(jié)果（5 5）5 5. .宮頸鱗癌中宮頸鱗癌中HPAHPA的表達(dá)與生存時(shí)間的關(guān)系的表達(dá)與生存時(shí)間的關(guān)系 研究結(jié)果（研究結(jié)果（6 6）6 6. .宮頸鱗癌預(yù)后的宮頸鱗癌預(yù)后的CoxCo

7、x模型多因素分析模型多因素分析主要結(jié)論主要結(jié)論1.HPA在宮頸鱗癌原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)均顯著增高，可作為宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的生物學(xué)檢測(cè)指標(biāo)；2.宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者M(jìn)OS明顯低于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是宮頸癌的獨(dú)立預(yù)后因素；3.淋巴結(jié)HPA陽(yáng)性表達(dá)者M(jìn)OS明顯低于淋巴結(jié)HPA陰性表達(dá)者，提示淋巴結(jié)HPA陽(yáng)性患者預(yù)后差。 1.HPA1.HPA在宮頸癌中的研究在宮頸癌中的研究討論（討論（1 1）u我們的前期研究及一些國(guó)外的研究均已證實(shí)HPA在宮頸癌原發(fā)灶中的表達(dá)顯著增高，是宮頸癌的重要生物標(biāo)志物。u本課題對(duì)宮頸鱗癌淋巴結(jié)HPA的表達(dá)情況進(jìn)行了全面的研究，證實(shí)宮頸癌原發(fā)灶HPA的陽(yáng)性表達(dá)率

8、明顯增高，與我們前期研究結(jié)果相同。討論（討論（2 2）u本研究中，轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)表達(dá)率高達(dá)92.6%，提示HPA的異常表達(dá)在宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要作用，可能參與宮頸鱗癌腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的過(guò)程。uDafni等6在檢測(cè)HPA表達(dá)對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移效應(yīng)的研究中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)生物素標(biāo)記后，HPA高表達(dá)的淋巴瘤小鼠的腘窩淋巴結(jié)較HPA低表達(dá)的小鼠腘窩淋巴結(jié)的MRI顯像強(qiáng)度明顯增加，說(shuō)明HPA表達(dá)對(duì)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移有影響。討論（討論（3 3） u淋巴結(jié)清掃的范圍一直是宮頸癌患者手術(shù)爭(zhēng)論的熱點(diǎn)，術(shù)前若能通過(guò)宮頸癌特異性分子標(biāo)志物，對(duì)宮頸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的情況進(jìn)行評(píng)估，則可針對(duì)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)行相應(yīng)淋巴結(jié)清掃以減少手術(shù)創(chuàng)傷，對(duì)

9、術(shù)后是否輔以放療也起到了關(guān)鍵性的指導(dǎo)作用。討論（討論（4 4）2.2.淋巴結(jié)中淋巴結(jié)中HPAHPA表達(dá)的研究現(xiàn)況表達(dá)的研究現(xiàn)況u國(guó)內(nèi)外都在尋找轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)特異性和敏感性的生物分子指標(biāo)。u基于我們的前期研究工作，本研究是國(guó)內(nèi)外首次以HPA為靶分子的宮頸癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的研究。u本研究對(duì)我們下一步進(jìn)行的研究，宮頸癌PET成像診斷研究的靶分子的選擇提供了依據(jù)，尤其是鱗癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)無(wú)創(chuàng)傷PET成像診斷的研究。展望展望t HPA的研究經(jīng)歷了一個(gè)漫長(zhǎng)的時(shí)期，其作用機(jī)制也逐漸清晰。HPA不僅是宮頸癌的生物標(biāo)志物，也有望成為宮頸鱗癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)診斷的生物標(biāo)志物。在我們下一步要進(jìn)行的宮頸癌PET成像診斷的研究中，HPA

10、作為宮頸癌示蹤劑，是對(duì)其作用的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)，同樣擁有廣闊的前景和更加深遠(yuǎn)的意義。1 Aoki Y, Sasaki M, Watanabe M, et al. High-risk group in node-positive patients with stageB,A, and B cervical carcinoma after radical hysterectomy and postoperative pelvic irradiation JGynecol oncol, 2000, 77(2):305-309.2 馮淑瑜, 張彥娜, 劉建剛, 等. 宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高危因素及預(yù)后分析J癌

11、癥, 2005, 24(10):1261-1266.3 張秀珍, 付玉蘭, 趙西俠, 等. 宮頸癌盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況分析J現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué), 2005, 13(2):232-234.4 Expression and analysis of heparanase、VEGF and-FGF in prostate cancerJ. Oncol Res, 2006, 61(3):219-234.5 Parish CR,Freeman C,Hulett MD,et al.Heparanase:a key enzyme involved in cell invasionJ.Biochim Biophys Acta,2001,1471:99-108.6 Dafni H, Cohen B, Ziv K, e