第四章酶forgraduatescandidates

1、一、酶的基本概念和作用特點一、酶的基本概念和作用特點二、酶的國際二、酶的國際分類分類和命名和命名三、酶的作用機制：三、酶的作用機制： 活性中心活性中心、專一性和高效機制、專一性和高效機制四、四、影響酶促反應速度的主要因素影響酶促反應速度的主要因素五、五、別構(gòu)酶別構(gòu)酶和共價修飾酶和共價修飾酶六、六、同工酶同工酶七、維生素和輔酶七、維生素和輔酶八、酶的分離純化八、酶的分離純化重要事件重要事件w1897年，年，Buchner E. （德）發(fā)現(xiàn)無細胞（德）發(fā)現(xiàn)無細胞酵母提取液能將糖轉(zhuǎn)化為乙醇（發(fā)酵是酵母提取液能將糖轉(zhuǎn)化為乙醇（發(fā)酵是被離開活酵母分子的酶所催化的）。被離開活酵母分子的酶所催化的）。w19

2、26年，年，J. Sumner（美）（美） 從刀豆中結(jié)晶從刀豆中結(jié)晶出脲酶，揭示出酶的化學本質(zhì)是蛋白質(zhì)。出脲酶，揭示出酶的化學本質(zhì)是蛋白質(zhì)。w1982年年T. Cech發(fā)現(xiàn)了第發(fā)現(xiàn)了第1個有催化活性個有催化活性 的天然的天然RNA（ribozyme，核酶）。，核酶）。Enzyme（in yeast）一、酶的基本概念和作用特點一、酶的基本概念和作用特點1、酶的概念、酶的概念 由細胞產(chǎn)生的、有高度專一性和由細胞產(chǎn)生的、有高度專一性和高效催化作用的生物大分子；具復雜高效催化作用的生物大分子；具復雜空間構(gòu)象，包括空間構(gòu)象，包括蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)和和核酸核酸。 酶是生物催化劑酶是生物催化劑p關于關于Riboz

3、yme（核酶）的敘述（核酶）的敘述（ ）是正確的。）是正確的。A. 本質(zhì)是蛋白本質(zhì)是蛋白 B. 本質(zhì)是核糖核酸本質(zhì)是核糖核酸 C. 即核酸酶即核酸酶 D. 最早發(fā)現(xiàn)的一種酶最早發(fā)現(xiàn)的一種酶 E. 其輔酶是輔酶其輔酶是輔酶Ap下列關于酶的概念（下列關于酶的概念（ ）是正確的。）是正確的。A. 所有蛋白質(zhì)都有酶活性所有蛋白質(zhì)都有酶活性 B. 其底物都是有機化合物其底物都是有機化合物C. 其催化活性都需要特異的輔助因子其催化活性都需要特異的輔助因子D. 對底物都有絕對專一性對底物都有絕對專一性 E.酶不一定都是蛋白質(zhì)酶不一定都是蛋白質(zhì)2、酶催化作用的特點、酶催化作用的特點 提高反應速度，提高反應速度

4、，不改變平衡點不改變平衡點只起催化作用，只起催化作用，本身不消耗；本身不消耗； 降低反應的活化能降低反應的活化能 一般催化劑一般催化劑 催化能力高催化能力高（速率提高（速率提高105-1017） 高度專一性高度專一性條件溫和，酶活力可調(diào)節(jié)條件溫和，酶活力可調(diào)節(jié) 生物催化劑生物催化劑p酶與一般催化劑相比所具有的特點是酶與一般催化劑相比所具有的特點是 ( )。A.能加速化學反應速度能加速化學反應速度 B.能縮短反應達到平衡所需時間能縮短反應達到平衡所需時間C.具有高度的專一性具有高度的專一性 D.反應前后質(zhì)和量無改反應前后質(zhì)和量無改 E.對正、逆反應都有催化作用對正、逆反應都有催化作用p對酶的正確

5、敘述是對酶的正確敘述是 ( )。A.能催化熱力學上不能進行的反應能催化熱力學上不能進行的反應 B.是由活細胞產(chǎn)生的一種生物催化劑是由活細胞產(chǎn)生的一種生物催化劑C.催化的反應只限于細胞內(nèi)催化的反應只限于細胞內(nèi) D.能降低反應活化能能降低反應活化能E.其本質(zhì)是含輔酶或輔基的蛋白質(zhì)其本質(zhì)是含輔酶或輔基的蛋白質(zhì) p酶與一般催化劑的不同點，在于酶具有：酶與一般催化劑的不同點，在于酶具有：A酶可改變反應平衡常數(shù)酶可改變反應平衡常數(shù)B極高催化效率極高催化效率C對反應環(huán)境的高度不穩(wěn)定對反應環(huán)境的高度不穩(wěn)定D高度專一性高度專一性二、酶的命名二、酶的命名與與分類分類（一）酶的命名（一）酶的命名1. 習慣名習慣名底

6、物底物+ +酶酶 和和/ /或或 催化反應類型催化反應類型+ +酶酶琥珀酸脫氫酶、蛋白酶、纖維素酶琥珀酸脫氫酶、蛋白酶、纖維素酶w 水解酶一般省去水解酶一般省去“水解水解”二字二字底物底物1 ：底物：底物2 + 反應性質(zhì)反應性質(zhì)+ 酶酶 乳酸乳酸 + NAD+丙酮酸丙酮酸 + NADH + H+乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶當?shù)孜餅樗畷r，可省略當?shù)孜餅樗畷r，可省略2. 系統(tǒng)命名系統(tǒng)命名乳酸：乳酸：NAD+ 氧化還原酶氧化還原酶酶的系統(tǒng)編號酶的系統(tǒng)編號：4位數(shù)字位數(shù)字第一位：代表六大類反應類型第一位：代表六大類反應類型第二位：亞類（作用的基團或鍵的特點）第三位：亞亞類（精確表示底物/產(chǎn)物的性質(zhì)）第四位：在

7、亞亞類中的序號乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶 EC 1. 1. 1. 27第1大類，氧化還原酶第1亞類，氧化基團CHOH第1亞亞類，H受體為NAD+該酶在亞亞類中的編號（二）酶的國際系統(tǒng)分類編號（二）酶的國際系統(tǒng)分類編號氫的轉(zhuǎn)移或電子傳遞氫的轉(zhuǎn)移或電子傳遞化合物中基團轉(zhuǎn)移化合物中基團轉(zhuǎn)移加水分解作用加水分解作用包括裂解與裂合包括裂解與裂合異構(gòu)體間互變異構(gòu)體間互變有有ATP參加的合成反應參加的合成反應三、酶的作用機制三、酶的作用機制（一）酶的活性中心（活性部位）（一）酶的活性中心（活性部位）結(jié)合底物結(jié)合底物，將底物轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物將底物轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物必需基團必需基團比較集中、構(gòu)成一定比較集中、構(gòu)成一定空間構(gòu)象空間構(gòu)

8、象與酶活性直接相關的結(jié)構(gòu)區(qū)域與酶活性直接相關的結(jié)構(gòu)區(qū)域局限于酶分子特定部位局限于酶分子特定部位1.必需基團必需基團 與與酶活性酶活性直接相關的化學基團直接相關的化學基團 位于活性中心位于活性中心活性中心以外活性中心以外穩(wěn)定分子構(gòu)象穩(wěn)定分子構(gòu)象必需基團必需基團非必需基團非必需基團His咪唑基、咪唑基、Ser-OH、Glu-COOH、Cys-SH 2. 酶活性部位的特點酶活性部位的特點（1）幾個殘基）幾個殘基+輔助因子輔助因子（2）空間構(gòu)象上集中（單體）空間構(gòu)象上集中（單體/寡聚酶）寡聚酶）（3）疏水空穴）疏水空穴（4）通過次級鍵與底物結(jié)合）通過次級鍵與底物結(jié)合（6）活性中心構(gòu)象具有柔韌性和可塑性

9、）活性中心構(gòu)象具有柔韌性和可塑性 （5）與底物誘導契合）與底物誘導契合簡單蛋白：僅由氨基酸組成簡單蛋白：僅由氨基酸組成綴合蛋白：綴合蛋白：全酶（結(jié)合酶）全酶（結(jié)合酶）蛋白部分蛋白部分 非蛋白成分非蛋白成分脫輔酶脫輔酶 + + 輔助因子輔助因子結(jié)合酶中：結(jié)合酶中： 單獨酶蛋白或輔助因子沒有催化活性單獨酶蛋白或輔助因子沒有催化活性 酶酶 AA殘基殘基 活性中心活性中心AA 核糖核酸酶核糖核酸酶 124 H H K R D E溶菌酶溶菌酶 129 D E胰凝乳蛋白酶胰凝乳蛋白酶 241 H D S羧肽酶羧肽酶A 307 R E Y Zn2+胰蛋白酶胰蛋白酶 223 H D S單體酶、寡聚酶、多酶復合

10、體單體酶、寡聚酶、多酶復合體單體酶單體酶：一般由一條肽鏈組成：一般由一條肽鏈組成寡聚酶寡聚酶：為寡聚蛋白，含多個亞基：為寡聚蛋白，含多個亞基多酶復合體多酶復合體：由數(shù)個獨立的酶組合：由數(shù)個獨立的酶組合起來形成絡合體，催化一個系列反應起來形成絡合體，催化一個系列反應 （糖代謝、脂代謝）（糖代謝、脂代謝）丙酮酸脫氫酶系、大腸桿菌脂肪酸合成酶系丙酮酸脫氫酶系、大腸桿菌脂肪酸合成酶系 p酶保持催化活性，必須（酶保持催化活性，必須（ ）。）。A. 酶分子完整無缺酶分子完整無缺 B. 有酶分子上所有化學基團存在有酶分子上所有化學基團存在C. 有金屬離子參加有金屬離子參加 D. 有輔酶參加有輔酶參加E. 有

11、活性中心及其必需基團有活性中心及其必需基團p酶催化作用所必需的基團是指（酶催化作用所必需的基團是指（ ）。）。A. 維持酶一級結(jié)構(gòu)所必需的基團維持酶一級結(jié)構(gòu)所必需的基團 B. 位于活性中心內(nèi)或以外的，維持酶活性所必需的基團位于活性中心內(nèi)或以外的，維持酶活性所必需的基團C. 酶的亞基結(jié)合所必需的基團酶的亞基結(jié)合所必需的基團D. 維持分子構(gòu)象所必需的基團維持分子構(gòu)象所必需的基團E. 構(gòu)成全酶分子所必需的基團構(gòu)成全酶分子所必需的基團p下列關于酶蛋白和輔助因子的敘述哪一點不正確？下列關于酶蛋白和輔助因子的敘述哪一點不正確？A.酶蛋白或輔助因子單獨存在時均無催化作用酶蛋白或輔助因子單獨存在時均無催化作用

12、B.一種酶蛋白只與一種輔助因子結(jié)合成一種全酶一種酶蛋白只與一種輔助因子結(jié)合成一種全酶C.一種輔助因子只能與一種酶蛋白結(jié)合成一種全酶一種輔助因子只能與一種酶蛋白結(jié)合成一種全酶D.酶蛋白決定結(jié)合酶蛋白反應的專一性酶蛋白決定結(jié)合酶蛋白反應的專一性E.輔助因子直接參加反應輔助因子直接參加反應p全酶是指（全酶是指（ ）。）。A.結(jié)構(gòu)完整無缺的酶結(jié)構(gòu)完整無缺的酶 B.酶蛋白與輔助因子的結(jié)合物酶蛋白與輔助因子的結(jié)合物C.酶與抑制劑的復合物酶與抑制劑的復合物 D.酶與變構(gòu)劑的復合物酶與變構(gòu)劑的復合物p酶蛋白和輔酶之間有下列關系酶蛋白和輔酶之間有下列關系 ( )。 A.兩者以共價鍵相結(jié)合兩者以共價鍵相結(jié)合 B.

13、只有全酶才有催化活性，二者缺一不可只有全酶才有催化活性，二者缺一不可 C.在酶促反應中兩者具有相同的任務在酶促反應中兩者具有相同的任務 D.一種酶蛋白通常只需一種輔酶一種酶蛋白通常只需一種輔酶 E.不同的酶蛋白可使用相同輔酶，催化不同的反應不同的酶蛋白可使用相同輔酶，催化不同的反應 p 輔酶與輔基的主要區(qū)別是（輔酶與輔基的主要區(qū)別是（ ）。）。 A.與酶蛋白結(jié)合的牢固程度不同與酶蛋白結(jié)合的牢固程度不同 B.化學本質(zhì)不同化學本質(zhì)不同 C.分子大小不同分子大小不同 D.催化功能不同催化功能不同p常見的酶活性中心的必需基團有常見的酶活性中心的必需基團有 ( )。 A.半胱氨酸和胱氨酸的巰基半胱氨酸和

14、胱氨酸的巰基 B.組氨酸的咪唑基組氨酸的咪唑基 C.谷氨酸、天冬氨酸的側(cè)鏈羧基谷氨酸、天冬氨酸的側(cè)鏈羧基 D.蘇氨酸的羥基蘇氨酸的羥基 E.絲氨酸的羥基絲氨酸的羥基p酶的活性中心是指：酶的活性中心是指：A.是由必需基團組成的具有一定空間構(gòu)象的區(qū)域是由必需基團組成的具有一定空間構(gòu)象的區(qū)域B.是指結(jié)合底物，并將其轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物的區(qū)域是指結(jié)合底物，并將其轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物的區(qū)域C.是變構(gòu)劑直接作用的區(qū)域是變構(gòu)劑直接作用的區(qū)域D.是重金屬鹽沉淀酶的結(jié)合區(qū)域是重金屬鹽沉淀酶的結(jié)合區(qū)域p 某酶的最適某酶的最適pH在在5附近，據(jù)此請判斷此酶活性中附近，據(jù)此請判斷此酶活性中心中可能存在下列哪一對氨基酸殘基？心中可能存在下

15、列哪一對氨基酸殘基？His 和和Lys B. Ala和和 Phe C. Tyr和和 Arg D.Cys和和 Lys E. Asp和和 His對底物的選擇性對底物的選擇性結(jié)構(gòu)專一性結(jié)構(gòu)專一性立體專一性立體專一性絕對專一性絕對專一性相對專一性相對專一性族專一性族專一性鍵專一性鍵專一性光學專一性（光學專一性（L、D型）型）幾何專一性（順反異構(gòu)）幾何專一性（順反異構(gòu)）（二）酶的專一性（特異性）（二）酶的專一性（特異性） 1. 酶對底物專一性的種類酶對底物專一性的種類絕對專一性：只能作用于某一底物絕對專一性：只能作用于某一底物脲酶脲酶：H2NCNH2 + H2OO2NH3 + CO2鍵專一性：作用于一類

16、相似的底物鍵專一性：作用于一類相似的底物酯酶酯酶：RCOR + H2OORCOO- +R OH + H+族族/ /基團專一性：作用于結(jié)構(gòu)很相似的底物基團專一性：作用于結(jié)構(gòu)很相似的底物鍵和鍵旁基團有要求鍵和鍵旁基團有要求OCH2OHOHOHOH15-葡萄糖葡萄糖苷酶苷酶O R+H2OOCH2OHOHOHOHOH15+ ROH（1）鎖鑰學說）鎖鑰學說剛性構(gòu)象剛性構(gòu)象（2）誘導契合學說誘導契合學說（3）結(jié)構(gòu)性質(zhì)互補學說）結(jié)構(gòu)性質(zhì)互補學說 靜電效應、極性相同靜電效應、極性相同（4）三點附著學說（立體異構(gòu)專一性）三點附著學說（立體異構(gòu)專一性）2. 與酶專一性有關的學說與酶專一性有關的學說p酶的特異性是（

17、酶的特異性是（ ）。）。A. 酶與輔酶特異結(jié)合酶與輔酶特異結(jié)合 B. 酶對其催化的底物有特異的選擇性酶對其催化的底物有特異的選擇性C. 酶在細胞中的定位是特異的酶在細胞中的定位是特異的D. 酶催化反應的機制各不相同酶催化反應的機制各不相同 E. 在酶的分類中各屬不同的類別在酶的分類中各屬不同的類別p酶的專一性可分為：酶的專一性可分為：A作用物基團專一性作用物基團專一性 B相對專一性相對專一性C立體異構(gòu)專一性立體異構(gòu)專一性 D絕對專一性絕對專一性p決定酶專一性的是（決定酶專一性的是（ ）。）。 A.輔酶輔酶 B.酶蛋白酶蛋白 C.金屬離子金屬離子 D.輔基輔基（三）（三） 酶促反應機制酶促反應機

18、制（1）酸堿催化）酸堿催化（2）共價催化）共價催化（3）金屬離子催化）金屬離子催化活性中心活性中心提供提供/使敏感鍵斷裂使敏感鍵斷裂活性中心活性中心參與參與S敏感鍵斷裂敏感鍵斷裂金屬酶金屬酶 含含緊密結(jié)合緊密結(jié)合的金屬離子的金屬離子 穩(wěn)定酶天然構(gòu)象所必需穩(wěn)定酶天然構(gòu)象所必需金屬激活酶金屬激活酶 含含松散結(jié)合松散結(jié)合的金屬離子的金屬離子 金屬離子作用金屬離子作用: A.參與底物反應的定向參與底物反應的定向 B.通過價態(tài)改變參與電子轉(zhuǎn)移通過價態(tài)改變參與電子轉(zhuǎn)移 C.通過靜電穩(wěn)定通過靜電穩(wěn)定/屏蔽負電荷屏蔽負電荷（四）酶的高效性機制（四）酶的高效性機制1. 底物和酶的底物和酶的鄰近效應鄰近效應與與定

19、向效應定向效應 2. 底物形變和誘導底物形變和誘導契合契合3.多元催化多元催化4.活性部位微環(huán)境的影響活性部位微環(huán)境的影響活性部位位于酶分子表面活性部位位于酶分子表面疏水裂縫中疏水裂縫中非極性環(huán)境非極性環(huán)境中帶電基團間作用顯著增高中帶電基團間作用顯著增高靜電吸引疏水作用底物底物酶酶提高有效濃度、正確取位提高有效濃度、正確取位變分子間反應為分子內(nèi)反應變分子間反應為分子內(nèi)反應活性中心催化基團進行催化w產(chǎn)物脫離產(chǎn)物脫離酶復原酶復原催化劑催化劑酶與底物靠近酶與底物靠近定向定向酶與底物相互誘導變形酶與底物相互誘導變形契合成中間產(chǎn)物契合成中間產(chǎn)物產(chǎn)物脫離產(chǎn)物脫離 誘導嵌合學說（誘導嵌合學說（Koshlan

20、d，1958）：）： 當?shù)孜锖兔附佑|時，可誘導酶分子的構(gòu)象當?shù)孜锖兔附佑|時，可誘導酶分子的構(gòu)象變化，使酶活性中心各基團處于和底物互變化，使酶活性中心各基團處于和底物互補契合的正確空間位置，有利于催化補契合的正確空間位置，有利于催化。p酶與底物分子間的關系可以恰當?shù)乇硎龀桑概c底物分子間的關系可以恰當?shù)乇硎龀桑?）。）。A. 一種臨時性結(jié)合一種臨時性結(jié)合 B. 通過共價鍵的一種穩(wěn)定結(jié)合通過共價鍵的一種穩(wěn)定結(jié)合C. 酶在其中發(fā)生永久性改變的一種結(jié)合酶在其中發(fā)生永久性改變的一種結(jié)合D.隨機的非互補結(jié)合隨機的非互補結(jié)合p關于酶的敘述哪項是正確的？關于酶的敘述哪項是正確的？A.所有酶都含有輔基或輔酶所有

21、酶都含有輔基或輔酶 B.只能在體內(nèi)起催化作用只能在體內(nèi)起催化作用C.大多數(shù)酶的化學本質(zhì)是蛋白質(zhì)大多數(shù)酶的化學本質(zhì)是蛋白質(zhì)D.能改變化學反應的平衡點加速反應的進行能改變化學反應的平衡點加速反應的進行E.都具有立體異構(gòu)專一性（特異性）都具有立體異構(gòu)專一性（特異性）p下列哪一項符合誘導契合學說？（下列哪一項符合誘導契合學說？（ ）。）。A.酶與底物的關系有如鎖和鑰的關系酶與底物的關系有如鎖和鑰的關系B.在底物的誘導下，酶的構(gòu)象可發(fā)生一定改變，才在底物的誘導下，酶的構(gòu)象可發(fā)生一定改變，才能與底物進行反應能與底物進行反應C.底物的結(jié)構(gòu)朝著適應酶活性中心方面改變底物的結(jié)構(gòu)朝著適應酶活性中心方面改變D.底物

22、與酶的變構(gòu)部位結(jié)合后，改變酶的構(gòu)象，使底物與酶的變構(gòu)部位結(jié)合后，改變酶的構(gòu)象，使之與底物相適應之與底物相適應四、影響酶促反應速度的主要因素四、影響酶促反應速度的主要因素（一）（一）底物濃度底物濃度: S （二）（二）抑制劑抑制劑:競爭、非競爭、反競爭性競爭、非競爭、反競爭性（三）（三）溫度溫度（四）（四）pH（五）（五）激活劑激活劑根據(jù)總反應速率根據(jù)總反應速率v與反應物濃度與反應物濃度c的關系：的關系： 一級反應：一級反應：v = kc 零級反應：零級反應：v 與與c無關，無關， v = k （一）（一）S 對酶促反應速率的影響對酶促反應速率的影響p底物濃度達到飽和后，再增加底物濃度（底物濃度

23、達到飽和后，再增加底物濃度（ ）。）。A. 反應速度隨底物增加而加快反應速度隨底物增加而加快B. 隨著底物濃度增加酶逐漸失活隨著底物濃度增加酶逐漸失活C. 酶結(jié)合部位全部被占據(jù)，反應速度不再增加酶結(jié)合部位全部被占據(jù)，反應速度不再增加D. 增加抑制劑反應速度反而加快增加抑制劑反應速度反而加快 V V0 底底 物物 濃濃 度度 S反反應應初初速速度度1、酶促反應動力學方程、酶促反應動力學方程米氏方程米氏方程E + S ES P + E中間絡合物學說中間絡合物學說 k4 S很小時很小時V=V VS/Km 反應反應VV VV V/ /2 2 0 Km （米米氏氏常常數(shù)數(shù)） S最最大大反反應應速速率率V

24、= V VSKm + SS很大時很大時V=V VS/S=V V 零級反應零級反應混合混合級級Km=?wKm = SV= V VSKm + S若若 VV/2V2V SKm + S1Km + S = 2Sp己糖激酶以葡萄糖為底物時，己糖激酶以葡萄糖為底物時，S=2km，其，其反應速度反應速度v是是Vmax的（的（ ）。）。A. 67% B. 50% C. 33% D. 15% E. 9%p一個簡單的酶促反應，當一個簡單的酶促反應，當S E保證所有酶都結(jié)合底物保證所有酶都結(jié)合底物p甘油醛甘油醛-3-磷酸脫氫酶，相對分子質(zhì)量為磷酸脫氫酶，相對分子質(zhì)量為4萬，由萬，由4個相同亞基組成，每個亞基上有一個活

25、性位點，在個相同亞基組成，每個亞基上有一個活性位點，在最適條件下，最適條件下，5g純酶制品每分鐘可以催化純酶制品每分鐘可以催化2.8mol甘油醛甘油醛-3-磷酸轉(zhuǎn)化為甘油酸磷酸轉(zhuǎn)化為甘油酸-3-磷酸。請計算酶的比磷酸。請計算酶的比活力和單個活性位點的轉(zhuǎn)換數(shù)。活力和單個活性位點的轉(zhuǎn)換數(shù)。 1 IU= 1 mol / min 5g中含有中含有2.8個個IU 比活力比活力=2.8IU / (510-3)mg=560 IU/mg1mol : 4104g 1 mol : 4104 g 5 g中的總活性位點數(shù)：中的總活性位點數(shù)：4(5/ 4104 )=510-4 mol 單個位點轉(zhuǎn)換數(shù)：單個位點轉(zhuǎn)換數(shù)：2

26、.8 mol/min / 510-4 mol =5600/min=93.3/sp-糜蛋白酶（糜蛋白酶（MW 24 000）可以水解苯甲酰）可以水解苯甲酰-L-酪氨酪氨酸乙酯。比活為酸乙酯。比活為45.0umol/min/mg酶。已知酶。已知-糜蛋白糜蛋白酶只有一個活性位點。求轉(zhuǎn)換數(shù)。酶只有一個活性位點。求轉(zhuǎn)換數(shù)。1mg中的總活性位點數(shù)：中的總活性位點數(shù)：1(103 / 24103 )=1/24 mol 45 mol /min / (1/24 mol) =4524/min=1080/min純化純化步驟步驟總 蛋 白總 蛋 白/mg總活力總活力/U比活力比活力/U.(mg蛋白蛋白)-1粗提液粗提液

2768鹽析鹽析44015203.45離子交換離子交換 1259857.88凝膠過濾凝膠過濾 1219616.33p從某生物材料中提取純化一種酶，按下列步驟純化，從某生物材料中提取純化一種酶，按下列步驟純化，計算最后所得酶制劑的比活力、活力回收率和純化倍數(shù)計算最后所得酶制劑的比活力、活力回收率和純化倍數(shù)?；厥章驶厥章?提純后總活力提純后總活力/提純前總活力提純前總活力100%=196/12650100%=1.54%純化倍數(shù)純化倍數(shù)=純化后比活力純化后比活力/純化前比活力純化前比活力=16.33/0.68=24分離純化方法同蛋白質(zhì)純化類似：分離純化方法同蛋白質(zhì)純化類似：1.選

28、材：酶選材：酶含量豐富含量豐富的的新鮮新鮮生物材料生物材料2.破碎：因材料而異破碎：因材料而異3.抽提：低溫下以水或低鹽緩沖液抽提抽提：低溫下以水或低鹽緩沖液抽提4.分離及純化：粗分級，細分級分離分離及純化：粗分級，細分級分離5. 結(jié)晶結(jié)晶6.保存：低溫下酶粉可長期保存保存：低溫下酶粉可長期保存注意低濃度酶溶液注意低濃度酶溶液酶的純化鑒定：酶的純化鑒定：聚丙烯酰胺凝膠電泳法聚丙烯酰胺凝膠電泳法等電聚焦電泳法等電聚焦電泳法p提取有活性的酶可采用提取有活性的酶可采用 ( )。A.凝固法凝固法 B.三氯乙酸沉淀法三氯乙酸沉淀法 C.鹽析法鹽析法 D.酚提取法酚提取法 E.酸水解法酸水解法13. 對可

29、逆抑制劑的描述，哪項是正確的對可逆抑制劑的描述，哪項是正確的A. 使酶變性失活的抑制劑使酶變性失活的抑制劑 B. 抑制劑與酶是共價鍵相結(jié)合抑制劑與酶是共價鍵相結(jié)合C. 抑制劑與酶是非共價鍵相結(jié)合抑制劑與酶是非共價鍵相結(jié)合D. 抑制劑與酶結(jié)合后用透析等物理方法不能解除抑制抑制劑與酶結(jié)合后用透析等物理方法不能解除抑制E. 可逆性抑制指競爭性抑制可逆性抑制指競爭性抑制 14. 15.16.已知已知1mL酶溶液中含蛋白質(zhì)量為酶溶液中含蛋白質(zhì)量為0.625mg，每，每mL酶溶酶溶液所含單位為液所含單位為250，該酶的比活性應是，該酶的比活性應是A. 200u/mg酶蛋白酶蛋白B. 300u/mg酶蛋白酶

30、蛋白C. 400u/mg酶蛋白酶蛋白D. 500u/mg酶蛋白酶蛋白E. 600u/mg酶蛋白酶蛋白名詞解釋名詞解釋別構(gòu)酶別構(gòu)酶 非競爭性抑制非競爭性抑制 必需基團必需基團 活性中心活性中心 激活劑激活劑米氏常數(shù)米氏常數(shù) 競爭性抑制競爭性抑制 問答題問答題1. 試述不可逆抑制作用和可逆抑制作用的主要區(qū)別？試述不可逆抑制作用和可逆抑制作用的主要區(qū)別？2. 為什么用反應初速度表示酶活力？為什么用反應初速度表示酶活力？3. 酶與一般催化劑相比有何異同？酶與一般催化劑相比有何異同？w單項選擇題單項選擇題1.下列關于下列關于Ribozyme（核酶）的敘述那些正確（核酶）的敘述那些正確A. 本質(zhì)是蛋白質(zhì)本質(zhì)是蛋白質(zhì) B. 本質(zhì)是核糖核酸本質(zhì)是核糖核酸C. 即核酸酶即核酸酶 D. 最早發(fā)現(xiàn)的一種酶最早發(fā)現(xiàn)的一種酶 E. 其輔酶是輔酶其輔酶是輔酶A2.下列關于酶的概念那些正確下列關于酶的概念那些正確A. 所有蛋白