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DNA聚合酶聚合酶mRNAcDNA雜化雙鏈雜化雙鏈PCR擴(kuò)增一步法一步法ComponentsVolume(l)RNA8(1g)5xR.T.buffer4dNTPs(10mmol/L)2Primer1Rnasin(50U/l)0.4AMV-RT(10U/l)1.0DEPC-H2O3.6Total20兩步法兩步法ComponentsVolume(lR.T.Product5.010 xPCR buffer2.5MgCl2(25mmol/L)2.5Primer11Primer21Taq DNA polymerase1ddH2O12Total25cDNA PCR擴(kuò)增擴(kuò)增 cDNA第一鏈合成反應(yīng)第一鏈合成反應(yīng) 過程中過程中cDNA第一第一鏈合成反應(yīng)所用的槍頭、鏈合成反應(yīng)所用的槍頭、槍頭盒、槍頭盒、PCR管等塑料制管等塑料制品均提前用氯仿進(jìn)行處理，品均提前用氯仿進(jìn)行處理，高壓滅菌后使用。玻璃制高壓滅菌后使用。玻璃制品在品在180干烤干烤6-8小時。小時。加樣過程在超凈臺內(nèi)進(jìn)行，加樣過程在超凈臺內(nèi)進(jìn)行，需戴手套與口罩。需戴手套與口罩。 cDNA PCR擴(kuò)增的準(zhǔn)備工作同普擴(kuò)增的準(zhǔn)備工作同普通通PCR反應(yīng)。反應(yīng)。 瓊脂糖凝膠
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