血型鑒定及交叉配血

1、實驗十一：血型鑒定及實驗十一：血型鑒定及交叉配血交叉配血醫(yī)學檢驗學院檢驗基礎實驗室醫(yī)學檢驗學院檢驗基礎實驗室實驗內容實驗內容n一、紅細胞懸液的制備n二、ABO血型鑒定（試管法）和Rh血型鑒定n三、交叉配血（鹽水介質和聚凝胺介質）臨床中：待測待測制成制成紅細紅細胞懸液胞懸液，待測待測一、紅細胞懸液制備一、紅細胞懸液制備n常用濃度：1%、2%、5%、10%。n方法：抗凝血 移去上層血漿待測 洗滌：剩余的紅細胞中加5ML NS，混勻，洗滌 ，棄上清，此步驟重復3次，最后一次上清應清亮并全部棄去。 配制懸液。（根據(jù)要求濃度）如：5%：洗滌后壓積紅細胞1滴+19滴NS，混勻3000r/min5min30

2、00r/min5min二、ABO血型鑒定：n（一）、正定型n（二）、反定型 二、ABO血型鑒定（鹽水介質）：n一、正定型一、正定型原理：用特異性血型抗體檢測被檢RBC,在鹽水介質中發(fā)生肉眼可見的凝集，從而測定被檢RBC膜上有無與特異性血型抗體相對應的抗原，進一步判定血型。二、ABO血型鑒定：n一、正定型一、正定型方法：方法：1、試管法：加標準血清加標準血清1滴滴（-A -B ）加紅細胞懸加紅細胞懸液液1滴（滴（5%）混勻，離心混勻，離心 觀察結果觀察結果1000r/min1min-A-B二、ABO血型鑒定：n正定型正定型判定結果：判定結果：試管法：輕輕搖動（或捻動）試管，使沉于管底的RBC浮起

3、，觀察有無凝集或溶血，如上層清亮，管底有RBC凝塊，輕彈管底，凝塊無散開，為凝集（）；如上層清亮，管底有RBC沉積，邊緣整齊，輕彈管底，RBC浮起或成為均勻的RBC懸液，則為不凝集（一）；若不確定，可將反應物倒在載玻片上，顯微鏡下觀察。注意：若上層為清亮的櫻紅色，考慮是否溶血二、ABO血型鑒定：n二、反定型：原理：用標準紅細胞檢測被檢血清（血漿）,在鹽水介質中發(fā)生肉眼可見的凝集，從而測定被檢血清（血漿）中有無與標準紅細胞相對應的抗體，進一步判定血型。二、ABO血型鑒定：n二、反定型二、反定型方法：方法：1、試管法：加待測血清加待測血清2滴滴加標準紅細加標準紅細胞懸液胞懸液1滴滴混勻，離心混勻，

4、離心 觀察結果（觀察結果（方法同正定型方法同正定型）1000r/min1min-A-B二、ABO血型鑒定：n結果判定：結果判定：抗A抗B結果ABABOA(RBC)B(RBC)結果BAOAB正定型正定型反定型反定型二、ABO血型鑒定n凝集強度的判斷見實驗指導表格n注意：1、正反定型一致才能確定結果； 2、所用器材必須清潔干凈，避免溶血，專型專用； 3、控制離心速度和時間，防止假陽性和假陰性； 4、抗原抗體比例要適當； 5、溶血時，注意結果的判定； 6、正反定型結果不一致時，不可輕易判定，需查明原因，可能有技術問題也可能有標本問題。 Rh（D）血型鑒定n原理：IgM型抗D標準血清與被檢者RBC表面

5、D抗原在室溫條件下鹽水介質中產生特異性反應，根據(jù)是否出現(xiàn)凝集判斷是否有D抗原的存在。 Rh（D）血型鑒定加抗加抗D血清血清1滴滴加紅細胞懸加紅細胞懸液液1滴（滴（5%）輕輕搖動玻片混勻，輕輕搖動玻片混勻，2min內判斷結果，內判斷結果，有凝集（），無凝有凝集（），無凝集需按照說明書進一集需按照說明書進一步實驗確認是否為陰步實驗確認是否為陰性性 Rh（D）血型鑒定n注意事項：1、按照試劑說明書操作2、先加血清，后加RBC懸液，可通過視覺判斷以免出現(xiàn)漏加抗D試劑導致的假陰性結果3、觀察結果時，應輕輕捻動試管，若用力搖動，可認為破壞弱凝集，誤判為（一）性。 三、交叉配血三、交叉配血n概念：供血者的血

6、漿、紅細胞與受血者的紅細胞、血漿混合，觀察有無凝集反應。n方法：鹽水介質法、聚凝胺介質法、微柱凝膠法、抗人球蛋白法、酶介質法。交叉配血：n 主側：受血者血漿+供血者紅細胞 Ps：patient serum Dc：donor celln 次側：供血者血漿+受血者紅細胞 Ds：donor serum Pc：patient cell受血者受血者獻血者獻血者PsPcDsDc主側主側次側次側3%-5% 1%一、鹽水介質法一、鹽水介質法n原理原理：ABO血型天然IgM類抗體與對應的RBC抗原特異性結合時，在鹽水介質中出現(xiàn)肉眼可見的凝集。通過判斷是否凝集，判斷是否有血型不合的情況（一）鹽水介質法（一）鹽水介

7、質法n操作：操作：1、取兩只小試管，標明主和次側2、主側：受血者血漿2滴，獻血者紅細胞1滴 次側：獻血者血漿2滴，受血者紅細胞1滴3、混勻，離心，1000r/min,離心1min4、觀察結果：輕輕搖動（或捻動）試管，使沉于管底的RBC浮起，觀察有無凝集或溶血，如上層清亮，管底有RBC凝塊，輕彈管底，凝塊無散開，為凝集（）；如上層清亮，管底有RBC沉積，邊緣整齊，輕彈管底，RBC浮起或成為均勻的RBC懸液，則為不凝集（一）；若不確定，可將反應物倒在載玻片上，顯微鏡下觀察。（二）聚凝胺介質法（二）聚凝胺介質法n原理：原理：聚凝胺聚凝胺是一種高價陽離子多聚物，在液體是一種高價陽離子多聚物，在液體中可產生負電荷，中和紅細胞表面的負電荷，減中可產生負電荷，中和紅細胞表面的負電荷，減輕細胞間排斥力，縮短紅細胞距離，在離心力作輕細胞間排斥力，縮短紅細胞距離，在離心力作用下，可使紅細胞發(fā)生發(fā)生可逆性、非特異性凝用下，可使紅細胞發(fā)生發(fā)生可逆性、非特異性凝集。集。低離子液低離子液可降低可增強抗原、抗體間的吸引可降低可增強抗原、抗體間的吸引力，促進血型抗體與紅細胞膜上相應抗原結合。力，促進血型抗體與紅細胞膜上相應抗原結合。離心后加入離心后加入再懸液（枸櫞酸鈉），再懸液（枸櫞酸鈉），可中和聚凝胺可中和聚凝胺