實驗診斷學(xué)實驗報告(牡丹江醫(yī)學(xué)院)

1、實驗診斷學(xué)試驗操作報告目錄一、 紅細(xì)胞計數(shù)試驗二、 血紅蛋白測定三、 白細(xì)胞計數(shù)四、 白細(xì)胞分類計數(shù)五、 尿比重六、 尿沉渣定性檢查七、 尿蛋白檢查磺基水楊酸法八、 尿干化學(xué)分析九、 尿葡萄糖定性檢查（班氏法）十、 ABO血型測定紅細(xì)胞計數(shù)試驗實驗?zāi)康模?通過紅細(xì)胞計數(shù)實驗1、掌握紅細(xì)胞計數(shù)方原理、方法及注意事項。2、掌握血細(xì)胞計數(shù)板的結(jié)構(gòu)試驗器材： 血細(xì)胞計數(shù)板、顯微鏡、蓋玻片、試管、血紅蛋白吸管、生理鹽水實驗原理： 一定量的血液經(jīng)一定量等滲性稀釋液稀釋后，充入血細(xì)胞計數(shù)池中顯微鏡下計數(shù)一定容積內(nèi)的細(xì)胞，再換算成每升標(biāo)本的細(xì)胞數(shù)報告。操作步驟： 1、取紅細(xì)胞稀釋液2.0ml毫升，放入一小試管

2、內(nèi)。2、用血紅蛋白吸管吸血至l0ul處。 3、擦去管尖外部余血將血液迅速輕輕吹入盛有紅細(xì)胞稀釋液的試管內(nèi)，上清液嗽洗吸管2-3次，立即搖勻。 4、將計數(shù)池與蓋玻片用軟布料擦凈，將蓋玻片覆蓋于計數(shù)池上。5、用吸管吸取混勻的紅細(xì)胞懸液，充入計數(shù)池中。 6、待23分鐘，讓紅細(xì)胞完全下沉后，將計數(shù)板平放在顯微鏡臺上，用低倍鏡觀察，如紅細(xì)胞分布均勻即可換高倍鏡進(jìn)行計數(shù)。紅細(xì)胞計數(shù)的區(qū)域： 中心大方格中的5個中方格(正中一個和四角各一個)。計數(shù)原則： 數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右的計數(shù)原則即凡壓在中方格邊線(雙線)上的紅細(xì)胞，只計上側(cè)與左側(cè)線上的細(xì)胞，而壓在下側(cè)與右側(cè)線上者不計入。計算： 答案不唯一，言之有理即

3、可紅細(xì)胞數(shù)/L=5個中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)×5×10×201×106或紅細(xì)胞數(shù)/L=5個中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)÷100×1012 式中×5 5個中方格換算成1個大方格 ×10 1個大方格容積為0.1ul，換算成1.0 uL。 ×201 血液的稀釋倍數(shù)×106 由u1換算成L數(shù)據(jù)處理： RBC: ×l012/L 參考值 男:(45.5)×1012/L 女：（3.55）×1012/L 新生兒：（67）×1012/L注意事項： 1、吸管、試管要注意清潔、干燥以防溶血，操作迅

4、速避免血液凝固，如有血凝塊應(yīng)重新采血。2充液前，紅細(xì)胞復(fù)液要充分搖勻，紅細(xì)胞懸液注入計數(shù)池內(nèi)要求分布均勻，不可有氣泡，亦不可有多余液體外溢。3、中方格內(nèi)紅細(xì)胞分布應(yīng)均勻，健康成人每中方格紅細(xì)胞數(shù)約為80100個，各中方格內(nèi)之紅細(xì)胞相近，如懸殊過大(超過10個細(xì)胞以上的)應(yīng)重混勻再充填。血紅蛋白測定實驗?zāi)康模?通過血紅蛋白測定1、氰化高鐵血紅蛋白比色法原理及技術(shù)。2、掌握紅血紅蛋白測定的原理、方法及注意事項。試驗儀器： 試管、微量吸管、分光光度計實驗原理： 血紅蛋白中的亞鐵離子（Fe2+）被高鐵氰化鉀氧化成高離子（Fe3+），血紅蛋白轉(zhuǎn)化成高鐵血紅蛋白，高鐵血紅蛋白與氰離子（CN-）結(jié)合，生成穩(wěn)

5、定的氰化高鐵血紅蛋白。用光電比色計在540nm波長比色。從HicN參考液制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取血紅蛋白克數(shù)。操作步驟： 1、取試劑5毫升加入血液20ul混勻置5分鐘2、用721光電比色儀，540nm波長，試劑為空白調(diào)0點比色，讀取光密度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線得結(jié)果。計算： 血紅蛋白（g/L）=測定管吸光度×367.7數(shù)據(jù)處理： 答案不唯一，言之有理即可 Hb ： gL參考值 男0.400.54L/L女: 0.370.48L/L兒童：0.350.49L/L新生兒：0.500.60L/L注意事項： 1、做血紅蛋白測定，白細(xì)胞計數(shù)和分類計數(shù)，在采血時應(yīng)先做血膜再做紅細(xì)胞，然后做白細(xì)胞，血紅蛋白檢驗，避

6、免紅細(xì)胞破壞。白細(xì)胞計數(shù)實驗?zāi)康模?掌握白細(xì)胞計數(shù)顯微鏡計數(shù)法原理及技術(shù)。實驗器材： 顯微鏡、微量吸管、計數(shù)板、蓋玻片、白細(xì)胞稀釋液。實驗原理： 用稀醋酸液將血液稀釋并破壞紅細(xì)胞，混勻后充入計數(shù)池中，于顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)，經(jīng)過換算求得每升血液內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。操作步驟： 1、取試管1支，加白細(xì)胞稀釋液0.38ml。2、用清潔干燥的微量吸管準(zhǔn)確吸取末梢血20微升或抗凝血20微升。3、擦去管尖外部余血、輕輕注入稀釋液底部，再吸取上清液清洗3次，搖勻。4、將計數(shù)板與蓋玻片用軟布擦凈，將蓋玻片覆蓋于計數(shù)池上，再用微量吸管吸取懸液，充入計數(shù)池與蓋玻片間的細(xì)縫隙中，靜止2-3分鐘，待白細(xì)胞下沉。

7、5、用低倍鏡計數(shù)四角的四個大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。計算： (四個大方格內(nèi)WBC數(shù)/4)×10×20× 106 =WBC數(shù)/20×109/升 數(shù)據(jù)處理：答案不唯一，言之有理即可正常參考值： 成 人：（4-10）×109/升 新生兒：（15-20）×109/升 6月-2歲：（11-12）×109/升 白細(xì)胞分類計數(shù)實驗?zāi)康模?掌握白細(xì)胞分類計數(shù)、原理及技術(shù)。實驗器材： 顯微鏡、染色缸和架，載玻片、瑞氏染液、香柏油、二甲苯。實驗原理： 把血液制成細(xì)胞分布均勻的薄膜涂片，經(jīng)wright染色后，顯微鏡下觀察，根據(jù)白細(xì)胞形態(tài)特點逐個分類計數(shù)

8、。得出各種白細(xì)胞的相對比值，并注意觀察其形態(tài)和質(zhì)量的變化。操作步驟： 1、取末梢血1滴。置于載玻片的一端，以邊緣平滑的推片制成血涂片，空氣干燥。2、用蠟筆在血膜兩端劃線，以防染液溢出，然后將血片放于染色架上。3、先加瑞氏染液數(shù)滴，使其覆蓋整個血膜，固定染色細(xì)胞0.5-1分鐘。4、按1：1或1：2加緩沖液與染料混勻，染色10分鐘左右。5、在血膜染10分鐘后，用緩沖液或接近中性的水沖去洗液，待自然干燥或濾紙吸干后，用鏡油觀察。計算： 1、先用低倍鏡觀察血片染色情況，白細(xì)胞多少和細(xì)胞分布情況。2、選擇血涂片的體尾交界處，染色良好的區(qū)域，在油鏡下計數(shù)100-200個白細(xì)胞，按其形態(tài)特征進(jìn)行分類計數(shù)，求

9、出各自白細(xì)胞所占數(shù)值（百分率）。3、白細(xì)胞分類計數(shù)方法很多，常用的有，完全記錄法、半記錄法、分類計數(shù)器計數(shù)法。4、每個病人應(yīng)分類白細(xì)胞數(shù)，視白細(xì)胞總數(shù)多少而定。5、各類細(xì)胞所占的百分率乘以白細(xì)胞總數(shù)/升，既得每升血液中各類白細(xì)胞的度。 數(shù)據(jù)處理：答案不唯一，言之有理即可尿比重實驗器材： 比密計、比密桶實驗原理： 尿液比密與所含溶質(zhì)成正比，溶質(zhì)越多，尿比密越高，對浮標(biāo)的浮力越大，侵入尿液的比重計部分則越小，讀數(shù)越大；反之，讀數(shù)越小。操作步驟： 1、充分混勻尿液后，沿管壁緩慢倒入小量杯中 2、比重計放入杯中使懸浮于中央，勿觸及杯壁或杯底 3、比重計停穩(wěn)后讀取尿液凹面相切的刻度，即為被測尿液的比重注

10、意事項： 1、尿比密計必須經(jīng)過校正，應(yīng)用純水在規(guī)定溫度下觀察比重是否標(biāo)準(zhǔn)將結(jié)果增加0.001，每低3則減去0.001 3、尿內(nèi)含Pr和Glu時的修正：每10g/L蛋白質(zhì)將比密減0.003， 10g/L葡萄糖將比密減0.004 4、鹽類沉淀的處理，將尿標(biāo)本加溫使鹽類溶解，測定數(shù)據(jù)處理：答案不唯一，言之有理即可尿沉渣定性檢查實驗操作： 1、取新鮮尿液10ml于試管內(nèi)1500r/min5分鐘。 2、待離心機(jī)停后，取出離心管，棄去上清液。留下 0.2ml，輕輕離心使尿沉渣有形成分混勻。 3、取沉淀于玻片上鏡檢。結(jié)果判斷： 用10×10倍，觀察其中有形成分管型，10×40倍觀察細(xì)胞成

11、分和計數(shù)，觀察10個視野管型計數(shù)20個視野。 參考值： 1、細(xì)胞成分：最低-最高值/HP RBC 0-3/HP WBC 0-5個/HP 2、管型（透明）：平均值/LP 3、尿結(jié)晶和鹽類數(shù)量以每一高倍鏡視野（）（ 2 ）（ 3 ）報告三、注意事項： 1、清晨空腹第一次尿應(yīng)在1h內(nèi)送檢 2、準(zhǔn)備干凈，干燥尿杯，留取中段尿，尿液細(xì)胞及管型的計數(shù)。Addis 1h尿沉渣計數(shù)四、標(biāo)本收集： 患者先排尿棄去準(zhǔn)確收集3h尿液于清潔干燥器內(nèi) （標(biāo)本留取5：30-8：30）五、實驗操作： 準(zhǔn)備側(cè)量3h尿量，充分混勻取尿液10ml，1500r/min 5分鐘，用吸管吸取上層尿液9ml留取1ml，吸取混勻尿液1滴注

12、入計數(shù)盤中，cal計數(shù)10大方格，管型20個大方格。 六、計算： 1小時細(xì)胞=10個大方格細(xì)胞總數(shù)×（1000/10）×（3h尿量/3） 1小時Cost計數(shù)=(20個大方格管型數(shù)/2) ×(1000/10)×（3h尿量/3） 式中1000為微升換算成毫升數(shù)，10為尿液濃縮倍數(shù) 答案不唯一，言之有理即可七、實驗注意事項： 1、尿液新鮮PH值應(yīng)在6以下。 2、被檢尿SG在1.026以下如<1.016的為低滲尿易破壞cell。 3、尿中有磷酸鹽時應(yīng)加少量冰乙酸，但勿加過多，使cell管型溶解。尿蛋白檢查磺基水楊酸法實驗原理： 磺基水楊酸為生物堿試劑，在酸

13、性磺酸根陰離子上蛋白質(zhì)氨基的陽離子結(jié)合成不溶性蛋白鹽沉淀。 實驗試劑： 磺基水楊酸溶液三、實驗方法： 取試管1只加入澄清尿液2-3ml滴加磺基水楊酸試劑0.1ml立即輕輕搖勻1分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。 實驗結(jié)果判斷：陰性（）：清晰透明 微量（±）： 黑色背景下僅見輕度渾濁 弱陽性（）： 明顯白霧狀渾濁，無顆粒 陽性（ ）： 明顯渾濁并出現(xiàn)顆粒 強(qiáng)陽性（ ）： 白霧性不明顯渾濁并有小塊狀物 最強(qiáng)陽性（ ）：嚴(yán)重渾濁并大量凝塊。尿干化學(xué)分析測試項目： 尿膽原、膽紅素、酮體、隱血、 蛋白質(zhì)、葡萄糖、 酸堿度、亞硝酸鹽。實驗原理：1、空白（校正塊）：尿在試紙塊上分布的狀態(tài)及尿本身的顏色，一般都會給測

14、定結(jié)果帶來誤差，設(shè)空白塊就是為了排除這些產(chǎn)生誤差的因素，各項目都使用同一空白塊。2、酸堿度：通過pH指示劑測定4.5-9的范圍內(nèi)的pH值，正常人的新鮮尿液pH值在5-7之間。3、亞硝酸鹽：反應(yīng)依賴于尿中革蘭氏陰性細(xì)菌把硝酸鹽還原成亞硝酸鹽，亞硝酸鹽與對氨基苯砷酸反應(yīng)生成重氮化合物，重氮化合物再與萘基乙二胺二鹽酸結(jié)合呈現(xiàn)出桃紅色。4、葡萄糖：根據(jù)葡萄糖氧化酶法反應(yīng)原理，葡糖糖氧化酶特異性氧化-D-葡糖糖，生成葡糖糖醛酸和過氧化氫，過氧化氫在過氧化物酶的作用下，使指示劑氧化而呈現(xiàn)出藍(lán)色。5、蛋白質(zhì)：根據(jù)指示劑蛋白誤差法原理，蛋白質(zhì)與染料結(jié)合形成復(fù)合物產(chǎn)生變色，特別是對白蛋白的反應(yīng)比對球蛋白、血紅蛋

15、白、本-周氏蛋白和粘蛋白更為靈敏。6、隱血：根據(jù)血紅蛋白接觸活性法原理，通過血紅蛋白的類過氧化物酶樣作用催化分解過氧化物，使鄰聯(lián)甲苯胺氧化呈色。7、膽紅素：根據(jù)偶氮偶合法的原理，2，4-二氯苯氨重氮鹽與膽紅素進(jìn)行特異性反應(yīng)，并與膽紅素的濃度相對應(yīng)產(chǎn)生不同的顏色。8、尿膽原：根據(jù)偶氮結(jié)合法的原理，尿膽原在強(qiáng)酸條件下和重氮鹽偶聯(lián)形成胭脂紅色素。9、酮體：根據(jù)硝普酸鈉法原理，硝普酸鈉和酮體在堿性條件下相互作用而呈現(xiàn)紫色，特別是乙酰乙酸對此特別靈敏。實驗操作：1、測試條件：環(huán)境溫度（25±5），相對濕度80，推薦最佳測試溫度23-27 .2、取一試紙條，拿住試紙條印有廠標(biāo)的一端，把試紙條完全

16、侵入尿樣中，2秒鐘后取出。3、在衛(wèi)生紙上蘸掉試紙條邊緣多余的尿液后再放入儀器中進(jìn)行測定。項目 參考范圍 酸堿度 5.5-7.0 亞硝酸鹽 0umol/L 葡萄糖 2.8mmol/L 蛋白質(zhì) 0.15g/L 隱血 10cells/uL 膽紅素 0umol/L 尿膽原 3.2-16umol/L 酮體 0mmol/L 尿葡萄糖定性檢查（班氏法）實驗?zāi)康模?掌握尿葡萄糖定性的班氏法。實驗原理： 葡萄糖或其他還原性糖的醛基在熱堿性溶液中，能將班氏試劑的藍(lán)色硫酸銅還原為黃色的氫氧化銅，進(jìn)而形成紅色氧化亞銅沉淀。實驗器材： 試管架、中試管、滴管、試管夾、酒精燈、班氏試劑實驗操作：1、鑒定班氏試劑質(zhì)量：取試管一支，加入班氏試劑2.0ml，搖動試管徐徐加熱至沸騰，觀察試劑有無顏色及性狀變化，若試劑仍為透明藍(lán)色，可進(jìn)行以下實驗。2、加尿液：向班氏試劑中加離心后的尿液0.2