第四章蛋白質(zhì)與酶的化學(xué)修飾.

1、第四章蛋白質(zhì)與酶的化學(xué)修飾4.1 概述4.2、化學(xué)修飾的設(shè)計(jì)4.3、化學(xué)修飾的種類4.4、修飾酶的性質(zhì)及特點(diǎn)45、化學(xué)修飾的應(yīng)用4.6、化學(xué)修飾的局限性4.1、概述目前為止盡管人類已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了數(shù)千種酶, 但是真正具有商業(yè)價(jià)值即每年銷售額可超過(guò) 1000萬(wàn)美元的酶不過(guò)數(shù)十種，為什么？一、限制酶的應(yīng)用的原因1、穩(wěn)定性不夠，不能適應(yīng)大量生產(chǎn)的需 要。2、作用的最適條件不符。3、酶的專一性4、米式常數(shù)過(guò)大5、臨床應(yīng)用的特殊要求6、酶活性不夠高二、改變酶特性有兩種主要的方法1）通過(guò)化學(xué)修飾的方法來(lái)改變已分離出來(lái) 的天然酶的活性。2）通過(guò)基因工程方法改變編碼酶分子的 基因而達(dá)到改造酶的目的。三、酶化學(xué)修飾的

2、概念酶的化學(xué)修飾（chemical modification）:通過(guò)化學(xué)基團(tuán)的引入或除去，使蛋白質(zhì)共價(jià) 結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。-酶選擇性化學(xué)修飾：描述肽鏈側(cè)鏈基團(tuán)被化學(xué)試劑專一性地修飾。四、酶化學(xué)修飾的目的1. 研究酶的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。（50年代末）2. 人為改變天然酶的某些性質(zhì)，擴(kuò)大酶的應(yīng)用 范圍。（70年代末之后）1）提高酶的生物活性（酶活力）2）增強(qiáng)酶的穩(wěn)定性（熱穩(wěn)定性、體內(nèi)半衰期）3）消除抗原性（針對(duì)特異性反應(yīng)降低生物識(shí)別能 力）4）產(chǎn)生新的催化能力.五、酶化學(xué)修飾的原理1、如何増強(qiáng)師天然構(gòu)象的穩(wěn)左性與耐熱性修飾劑分子存在多個(gè)反應(yīng)基團(tuán)，町與 嗨形成多點(diǎn)交聯(lián)。使酶的天然構(gòu)彖產(chǎn)生 “剛性”結(jié)構(gòu)。

3、2、如何保護(hù)酶活性部位與抗抑制劑大分子修飾劑與酶結(jié)合后，產(chǎn)生的 空間障礙或靜電斥力阻扌肖抑制劑，“遮 蓋” 了酶的活性部位。3、如何維持酚功能結(jié)構(gòu)的完整性與抗蛋門水解酶化學(xué)修飾后通過(guò)兩種途徑抗蛋白水解 酶：A大分子修飾劑產(chǎn)?？臻g障礙阻擋蛋白 水解腮接近酶分了?！罢谏w”幽分了-上敏感鍵 免遭破壞。B酶分f上許多敏感基團(tuán)交聯(lián)上修飾劑后, 減少了受蛋口水解酶破壞的町能性。4、如何消除酶的抗原性酚蛋白氨基酸組成的抗原決定簇， 與修飾劑形成了共價(jià)鍵。破壞了抗原決定簇抗原性降低乃至 消除；“遮蓋” 了抗原決定簇阻礙抗原、 抗體結(jié)合。5、酶微環(huán)境穩(wěn)定的維持 pH值改變時(shí)： 破壞了酶分了上靜電形成的化學(xué)鍵，蛍

4、 鍵等維持天然構(gòu)彖的平衡力 改變了卿分了上氨基酸殘基的離解狀態(tài) 和它們之間的相互結(jié)合及作用方式許多大分子修飾劑木身就是多聚電解 質(zhì)，能在酶分子表而或微環(huán)境區(qū)域形成 一層“緩沖外殼”。4.2s化學(xué)修飾的設(shè)計(jì)一、酶性質(zhì)的了解（1）酶的穩(wěn)定性熱穩(wěn)定性、酸堿穩(wěn)定性、作用溫度、pH、 抑制劑等（2）酶活性中心的狀況活性中心基團(tuán)、輔因子等。其他如分子大 小 棟缺 筋梵數(shù)鎊（3）酶?jìng)?cè)去基團(tuán)的性質(zhì)及其反應(yīng)性既基、氨基、竣基、咪哇基.疑基、酚基. 弧基.眄I喙基、二硫鍵、硫瞇基等二、修飾劑的要求1、修飾劑的分子駅、修飾劑鏈的長(zhǎng)度對(duì)蛋門質(zhì) 的吸附性2、修飾劑上反應(yīng)基團(tuán)的數(shù)目及位置3、修飾劑上反應(yīng)基團(tuán)的活化方法與條

5、件般要求較大分子量、良好的生物相容性 和水溶性、分fulfil有較多反應(yīng)活性基團(tuán)； 試劑的選擇一要根據(jù)修飾冃的選擇例如對(duì)氨基修飾可有幾種情況修飾所有氨基而不修飾其它皋團(tuán)；僅修飾a 氨基：修飾集薜的或反應(yīng)性iUj的氨基：修飾具有催化活性的氨基；例：如果修飾目的是希望改變蛋白質(zhì)的4廿電 狀態(tài)或溶解性，則必須選擇能引入最人電 荷量的試劑。用J：修飾酶的妊堆酸殘基的試劑應(yīng)具備呃選擇性地與一個(gè)氨基酸殘基反應(yīng)；0反應(yīng)在酚蛋口不變性條件下進(jìn)行；呃所標(biāo)記的殘基在肽鏈屮穩(wěn)定以易于分離 鑒定；咆修飾反應(yīng)的程度能簡(jiǎn)單測(cè)定；三、反應(yīng)條件的選擇修飾反應(yīng)盡可能在酶穩(wěn)定條件下進(jìn)行，并盡量 不破壞酶活性功能的必需基團(tuán)，使修飾

6、率高，同時(shí) 酶的活力回收高。（1）pH與離子強(qiáng)度pH決定了酶蛋白分子中反應(yīng)基團(tuán)的解離狀態(tài)。 由于它們的解離狀態(tài)不同，反應(yīng)性能也不同。（2）修飾反應(yīng)的溫度與時(shí)間嚴(yán)格控制溫度和時(shí)間可以減少以至消除一些 非專一性的修飾反應(yīng)。（3）反應(yīng)體系中酶與修飾劑的比例四、化學(xué)修飾的影響因素有的情況下化學(xué)結(jié)構(gòu)的改變并不影響蛋白質(zhì)的 生物學(xué)活性（稱非必需部分的修飾）;但大多情 況下將導(dǎo)致生物活性的改變（如下降以至完全喪 失）.形響蛋白質(zhì)化學(xué)修飾反應(yīng)進(jìn)程的因素：丄蛋白質(zhì)功能基的反應(yīng)性；2 修飾劑的反應(yīng)性.一）、蛋白質(zhì)功能基反應(yīng)性的影響因素蛋白質(zhì)的修飾反應(yīng)都是親核反應(yīng)被修飾蛋 白質(zhì)側(cè)鏈基團(tuán)的親核性與其pK值相關(guān).影響蛋

7、白質(zhì)側(cè)鏈基團(tuán)pK值的因素有：1、微環(huán)境：徵區(qū)極性、基團(tuán)間的氫鍵、靜電相互作 用I 2.基團(tuán)之間的障礙（位阻效應(yīng)）3、其它因素：電荷轉(zhuǎn)移.共價(jià)鍍形成、金屬姿合、 旋轉(zhuǎn)自由度竽超反應(yīng)性:指蛋白質(zhì)的某個(gè)側(cè)鏈基團(tuán)與個(gè)別試劑 能發(fā)生非常迅速的反應(yīng).酶的催化活性基團(tuán)通常對(duì)修飾劑是有反應(yīng)的，但 酶的超反應(yīng)基團(tuán)不一定是酶活性部位上的基團(tuán)， 可能與酶的功能或構(gòu)象沒(méi)有明顯聯(lián)系.彩響因素：1. 改變蛋白質(zhì)功能基的pKa值；2. 蛋白質(zhì)功能基具有較大的親核性；3通過(guò)靜電相互作用吸引試劑，并使其有適當(dāng)?shù)?取向；4 試劑與靠近修飾部位的蛋白質(zhì)區(qū)域之間的立體化學(xué)適應(yīng)性；5 試劑的結(jié)合。三）、修飾劑反應(yīng)性的決定因素丄選擇性吸

8、附:化學(xué)修飾前，修飾劑根據(jù)各自的 弈點(diǎn)，忑蔣性地吸附于低或高極性區(qū)的，有時(shí) 可以根據(jù)對(duì)速度的飽和效應(yīng)，檢測(cè)出蛋白質(zhì) 修飾劑復(fù)合物的形成，類似酶底物復(fù)合物.2靜電相互作用:帶電的修飾劑能選擇性地吸引 到蛋白質(zhì)表面帶相反電荷的部位.該作用可使 修飾劑向多功能部位中的一個(gè)殘基定位，或向 雙功能基一側(cè)定位.此外，靜電排斥力能抑制 修飾作用.3位阻因索:蛋白質(zhì)表面的位阻因素，或底物、 輔因子、抑制劑所產(chǎn)生的位阻因素都能阻止修 飾劑與功能基的正常反應(yīng).但修飾的結(jié)果卻能 提供蛋白質(zhì)表面的有用信息.厶催化因素:修飾部位附近的其它功能基，若起 一般的酸堿催化作用，也能影響修飾反應(yīng)5局部環(huán)境的極性:許多有機(jī)反應(yīng)的

9、速度與溶劑 的極性有關(guān)，而有些反應(yīng)則與極性無(wú)關(guān)；疏水 環(huán)境能阻止產(chǎn)物中電荷分離的反應(yīng).4.3、化學(xué)修飾的種類一. 表面修飾二. 內(nèi)部修飾三. 與輔因子相關(guān)的修飾四. 物理修飾五. 親和修飾、表面修飾1. 化學(xué)固定化2. 小分子修飾3-大分子修飾4肽鏈的交聯(lián)1、化學(xué)固定化通過(guò)酶衣曲的酸性或堿性氨基酸殘基將酶共價(jià) 齬瓣鏑鮭必野變酶所處的環(huán)境pH發(fā)生偏移。糖化酚固窖到陰離（載體上，報(bào)適pHg升到65 與D木糖界構(gòu)酶的放適pH75靠近，緒化高鑿糖載體與底物帶相同電荷,固定化后反應(yīng)系統(tǒng) Km增加，皮Z, Km降低。增加酶分子構(gòu)象穩(wěn)定性。2小分子修飾（酶蛋白側(cè)鏈基團(tuán)修飾）定義：通過(guò)選擇性的試劑或親和標(biāo)記試

10、劑與酶分子 側(cè)鏈上特定的功能基團(tuán)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。側(cè)鏈基團(tuán)：組成蛋白質(zhì)氨基酸殘基上的功能團(tuán)。主 要有：氨基、瘦基、服基、疏基、酚基、咪哇基。側(cè)鏈基團(tuán)修飾劑：采用各種小分子化合物。20種不同氨基酸的側(cè)鏈基團(tuán)中只有極性氨基酸的 側(cè)鏈易被修飾，它們一般具有親核性。幾種重要的修飾反應(yīng):廣烷基化反應(yīng)?；磻?yīng)氧化還原反應(yīng)芳香環(huán)取代反應(yīng)1）烷基化反應(yīng)試劑特點(diǎn)：烷基上帶活潑鹵素，導(dǎo)致酶分子的親核基團(tuán)（如-刈2，-SH等）發(fā)生烷基化.可作用基團(tuán)：氨基（Lys, Arg ）,疏基（Cys ）,菽基（Asp、 Glu）,甲咬基（Met）,咪哇基（His）.修飾劑：2, 4 -二硝基氣苯、碘乙酸、碘乙 酰胺等.憂足化更疝

11、rNH-RSHCOOH + R-X-CH一SCH3NHCOOR * HX G /R 魁、 NR2）酰基化反應(yīng)試劑特點(diǎn): 含有構(gòu),作用于側(cè)鏈基團(tuán)上的 親核基團(tuán)，及化.可作用基團(tuán)：氨基，疏基，醇密基（Ser、Thr）,酚 輕基（Tyr）酰疫化更應(yīng)SH + R-C-Xolc OOC3）氧化和還原反應(yīng)試劑特點(diǎn)：具有氧化性或還原性.氧化劑：H2O2, N渙代琥珀酰亞胺可被氧化的側(cè)鏈基團(tuán)：疏塞，甲鞏基，引喙基（Trp）.咪唆 基，酚基尋.還原齊1： 2-疏基乙醇、DTT等.可械還原的側(cè)鏈基團(tuán)：二疏鍵.連四硫酸鹽氧化銃基，DTT還原逆回，用于保護(hù)毓基。4）芳香環(huán)取代反應(yīng)試劑：鹵（碘）化，硝化試劑。碘代：L+

12、硝化:（NO2）4C +（四硝基甲烷）特定氨基酸殘基側(cè)鏈基團(tuán)的化學(xué)修飾令氨基修飾（Lys）竣基修飾（Asp、Glu）許疏基修飾（Cys）弧基修飾（Arg）輕基修飾（Ser、Thr、Tyr） 白咪哇基修飾（His） 盤眄I喙基修飾（Trp） 介甲硫基修飾（Met）二硫鍵修飾I親和修飾1) 氨基(一NH/修飾-氨基在酶蛋白中主要是Lys的aNH?和肽鏈末 端氨基非質(zhì)子化的oNH?親核反應(yīng)活性很高，易被選 擇性修飾-一般情況下oNH?的pKa = io,其解離程度取 決于微環(huán)境氨基的修飾反應(yīng)主要有N 烷基化等(dH2 NH； + ICH/?0OFNZ -NHCHXW +1 +IP；(OF：NZ-NH

13、, + RCTl, ENZ-N-CRR(0 KNZ-KH；+乙?；姾上Х蓟姾上Х蓟姾上榛胴?fù)電荷還原 烷基化引入正電荷芳基化電荷消失CHRR*2）、竣基（一COOH）修飾-竣基在酶蛋白中主要是Asp和Glu的側(cè)鏈一COOH,以及肽鏈的末端聶基在水溶液中，一COOH通常解離成負(fù)離子，親核 性降低，對(duì)其修飾的方法有限，主要反應(yīng)為成酯、 成酰胺反應(yīng)-修飾反應(yīng)竣基。碳二亞胺反應(yīng)（竣基修飾的標(biāo)準(zhǔn)方法）3）、蔬基（一SH）修飾疏基在酶蛋白中的來(lái)源是tys的#SH-疏基的親核性強(qiáng)，往往是酶分子中反應(yīng)活性 最高的基團(tuán)蔬基容易被氧化成一S-S-,在維持蛋白亞基 之間的相互作用和酶催化過(guò)程中

14、起重要作用疏基用烷基化試劑修飾后一般能得到穩(wěn)定的 修飾產(chǎn)物修飾反應(yīng)茨基 二硫鍵置換反應(yīng)a) DTNB reactionJs ItiB SH12 nmft 有強(qiáng)吸收尹4 nm處 有吸收m；常用于定芒洸定蛋白質(zhì)分子sh M典目、孫究網(wǎng)的改瓷程度如.SH所處的環(huán)境.7g厶Q二硫二毗陀（厶PDS）COOH 5二Md廂祥甲 ft(DTNB) 又稱 EllmaniAJMt*oocb) PDS reactionI-修飾反應(yīng)戲基c) Reacting with /chloromercuribenzoic acid.-*HgSH +PHS /ICOOHI對(duì)氯汞苯甲酸(PMB) .d) Reacting with

15、 2-chloromercuri-4-nitrophenorh/ no2HO 人2氯汞心硝基苯酚（MNP）.-SH S”HO可容許低濃度蛋白質(zhì)的光巧0 nm處有 最大光吸收1與含汞有機(jī)物的反應(yīng)（一SH對(duì)Hg的親和力很強(qiáng)）修飾反應(yīng)鎌基 。S烷基化反應(yīng)同時(shí)會(huì)使氨基乙?；?）肌基（-N=C（NH2）2）修飾-肌基存在于酶蛋白的Arg殘基側(cè)鏈上-在結(jié)合帶有陰離子底物的酶的活性部位中起 重要作用肌基堿性強(qiáng)，難以和大多數(shù)試劑反應(yīng)，一般 采用具有兩個(gè)鄰位按基的化合物，在中性或 弱堿性條件下反應(yīng)，一般是可逆反應(yīng)訃 a修飾反應(yīng)弧基（與鄰F需在黑暗中進(jìn)行因其可作為光 臣敏劑破壞TrpHi5Tyr4f殘基a) Re

16、acting wrth butanedione丁二割bOHpH 90H|NH2NH?N Cnh211b) Reacting with 1.2yclohexanelioneNH / N=Ct方弋環(huán)己二IWpH7T苯乙二醛8c4.3幾押彙用化學(xué)交聯(lián)炳NN WXlMftff* 1U25 * 嗎豪 *AK% F?AM*分子內(nèi)交聯(lián)增加酶分子表面交聯(lián)鍵的數(shù)目。分子間交聯(lián)用雙功能或多功能試劑使不同的酶交聯(lián) 起來(lái)產(chǎn)生雜合酶。二、內(nèi)部修飾1. 酶蛋白主鏈修飾2. 催化基團(tuán)的修飾3肽鏈伸展后的修飾1酶蛋白主鏈修飾酶法：酶原f酶酶蛋白主鏈修飾（肽鏈有限水解修飾）利用酶分子主鏈的切斷和連接，使酶分子 的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其空

17、間結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變，從而 改變酶的特性和功能的方法。蛋白主鏈修飾采用酶法（用專一性較強(qiáng)的蛋白 酶或肽酶為修飾劑）酶蛋白的肽鏈被水解后，可能出現(xiàn)以下 三種情況中的一種：1. 引起酶活性中心的破壞，酶失去催化功能。2. 仍維持活性中心的完整構(gòu)象，保持酶活力。3. 有利于活性中心與底物結(jié)合并形成準(zhǔn)確的催 化部位，酶活力提高。后兩種情況，肽鏈的水解在限定的肽鍵 上進(jìn)行，稱肽鏈有限水解。2、催化基團(tuán)的修飾定點(diǎn)突變：轉(zhuǎn)變氨基酸側(cè)鏈-氨基酸的置換修飾可以采用化學(xué)修飾方法。 例如，Bender等成功地利用化學(xué)修飾法將枯草 桿菌蛋白酶活性中心的Ser轉(zhuǎn)換為Cys,修飾后 該酶失去對(duì)蛋白質(zhì)和多肽的水解能力，卻出現(xiàn)

18、 了催化硝基苯酯等底物水解的活性，因此可用 于肽的合成。缺點(diǎn)：化學(xué)修飾法難度大，成本高，專一 性差，而且要對(duì)酶分子逐個(gè)進(jìn)行修飾，操 作復(fù)雜，難以工業(yè)化生產(chǎn)。3. 肽鏈伸展后的修飾先用變性劑對(duì)酶進(jìn)行變性處理，再進(jìn)行修飾， 然后重新折疊成某種活性的構(gòu)象。Saraswothi等，先讓酶變性，然后加入競(jìng)爭(zhēng)性 抑制劑，待獲得所希望酶的構(gòu)象后，用戊二醛固定， 然后透析除去抑制劑。他們以丙酸作競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑, 把核糖核酸酶制成一種“酸性脂酶”，從而改變了 酶的底物專一性.創(chuàng)造了新的酶活力。三、與輔因子相關(guān)的修飾對(duì)依賴輔因子的酶的修飾1）、如果輔因子與酶是非共價(jià)結(jié)合，則可將輔因子 共價(jià)結(jié)合到酶分子上。2）、引入

19、新的具有強(qiáng)反應(yīng)的輔因子。迄今最成功的 例子是Kaiser將黃素共價(jià)結(jié)合在木瓜蛋白酶上， 利用黃素的漠酰衍生物與木瓜蛋白酶的共價(jià)結(jié)合 成為黃素木瓜蛋白酶，從而將蛋白酶轉(zhuǎn)變成氧化 還原酶。2、金屬酶的金屬取代可改變酶的專一性、穩(wěn)定性、抑制作用等。把酶分子中的金屬離子換成另一種金屬離子，使酶的特 性和功能發(fā)生改變的修飾方法稱為金屬離子置換修飾.通過(guò)修飾了解各種金屬離子在酶催化過(guò)程中的作用，闡 明催化機(jī)制適用對(duì)象：金UNI (metalloenzyme)一種結(jié)合金屬的酶，以一個(gè)或幾個(gè)金屬離子作為首國(guó)子 金屬離子或是直接參與催化作用，或杲對(duì)保持酶的活性和構(gòu) 象起穩(wěn)定作用金屈酶純化時(shí)仍保留著定直的功能金屈

20、離子常見(jiàn)的金屬酶及其離子種類a淀粉酶一Ca叭 Mg叭Znl* 谷氨酸脫氫酶一ZV過(guò)氧化氫酶Fe2+?；被崦敢籞n-超氧化物歧化酶一CuJ Zna* 細(xì)胞色素P45。單加氧酶一V 固氮酶一Fe(ll)、Mo(IV) 谷胱甘肽過(guò)氧化物酶 一Se(IV)主要的金屬離子Cvt P45001AOKCa、Mg、Cu、Zn、Co、Fe、Mn 等金屬離子置換修飾的方法酶的提純除去原有金屬離子加入金屬盛合劑,如EDTA尊，讓酶分子中的金 屬離子與EDTA形成螯合物透析、超濾或?qū)游龀フ衔铮尤胫脫Q的離子加入含另一種金屬離子的溶液，酶蛋白與其結(jié)合用透析或?qū)游龅确椒ǔノ唇Y(jié)合的離子金屬離子置換修飾的作用。闡明

21、金屬離子對(duì)酶催化作用的影響一般在活性中心的金屬離子能與底物或輔酶/輔基可 逆結(jié)合，從而起到催花作用。提高酶的催化效率將Zn型o淀粉酶置換成Ca型，活力可提高20% 30%。增強(qiáng)酶的穩(wěn)定性Fe-SOD置換成Mn-SOD后穩(wěn)定性增強(qiáng)對(duì)Na叫敏感 性降低。改變醉的動(dòng)力學(xué)特性Zn H都四.物理修飾酶分子的物理修飾通過(guò)各種物理方法，使酶分子的空間構(gòu)象發(fā)生 某些改變，從而改變酶的某些特性和功能的方 法研究極端條件下酶結(jié)構(gòu)和活性的變化物理修飾的特點(diǎn)不改變酶的組成單位及其基團(tuán)酶分子中的共價(jià)鍵不發(fā)生改變一酶的一級(jí)結(jié)構(gòu) 不變副鍵發(fā)生某些改變和重幷一酶的高級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生 變化-物理修飾的效果。改變底物特異性例：竣肽酶卩

22、經(jīng)高壓處理，其水解能力降低，而 有利于催化肽的合成反應(yīng)（逆反應(yīng)）改變酶催化的最適溫度例：纖維素酶經(jīng)高壓處理，最適溫度下降，但在3。4。C條件下，活力提高了丄。提高酶的穩(wěn)定性例：用鹽酸肌破壞胰蛋白酶的空間構(gòu)欽，伸展肽 鏈，再透析除去鹽酸肌，在不同溫度下重新構(gòu)建/ 恢復(fù)酶的構(gòu)彖，5。C下更新構(gòu)建的酶穩(wěn)定性比天 然酶提高5倍4.4、修飾酶性質(zhì)的變化及原因散適pH*I 1r喪穩(wěn)定竹半衰期修飾酵的酶學(xué)性質(zhì)變化對(duì)組織的 分布能力變化PEG修1、增強(qiáng)酶天然構(gòu)象的穩(wěn)定性與耐熱性 酶形成多織曲擁勰于PE爲(wèi)瞬讓|上沒(méi)有明顯提高可能由酶分子內(nèi)基團(tuán)間相互隹用在受熱憤況下發(fā)生 了變化，向熱力學(xué)上嫡增加的方咼變化，即 從緊密克序趨于隨機(jī)松散。通過(guò)修飾后，使 心需r爲(wèi)增強(qiáng)酶減鶴針開(kāi)2、保護(hù)酶活性部位與抗抑制劑大分子修飾劑與酶結(jié)合后，產(chǎn)生的 空間障礙或靜電斥力阻擋抑制劑.“遮 蓋” 了酶的活性部位。3如何維持酶功能結(jié)構(gòu)的完整性與抗蛋 白水解酶酶化學(xué)修飾后通過(guò)兩種途徑抗蛋白水解 酶：A大分子修飾劑產(chǎn)生空間障礙阻擋蛋白 水解酶接近酶分子?！罢谏w”酶分子上敏感鍵 免遭破壞。B酶分子上許多敏