臨床常見標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)

1、 臨床常見標(biāo)本的微生物學(xué)檢驗(yàn)臨床常見標(biāo)本的微生物學(xué)檢驗(yàn) 主要內(nèi)容主要內(nèi)容1.臨床常見標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)臨床常見標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)u一、血、骨髓、靜脈導(dǎo)管標(biāo)本一、血、骨髓、靜脈導(dǎo)管標(biāo)本u二、痰及下呼吸道標(biāo)本二、痰及下呼吸道標(biāo)本u三、尿液標(biāo)本三、尿液標(biāo)本u四、大便標(biāo)本四、大便標(biāo)本u五、生殖道系統(tǒng)標(biāo)本五、生殖道系統(tǒng)標(biāo)本u六、化膿和創(chuàng)傷標(biāo)本六、化膿和創(chuàng)傷標(biāo)本u七、穿刺液標(biāo)本七、穿刺液標(biāo)本u八、眼、耳、鼻、咽拭子標(biāo)本八、眼、耳、鼻、咽拭子標(biāo)本u九、組織標(biāo)本九、組織標(biāo)本一、血、骨髓、靜脈導(dǎo)管標(biāo)本一、血、骨髓、靜脈導(dǎo)管標(biāo)本（一）血培養(yǎng)檢測采血指征（一）血培養(yǎng)檢測采血指征 臨床上疑為敗血癥、膿毒血癥或其他血液感染

2、的患者 1. 發(fā)熱（38）或低溫（36） 2. 寒戰(zhàn) 3. 白細(xì)胞增多（10109/L，特別有“核左移”未成熟的或桿狀核白細(xì)胞增多） 4. 粒細(xì)胞減少（成熟的多核白細(xì)胞1109/L） 5. 血小板減少 6皮膚粘膜出血 7昏迷，休克、多器官衰竭 8 CRP升高 在評估可疑新生兒敗血癥時(shí)，除發(fā)熱或低燒外，很少培養(yǎng)出細(xì)菌，應(yīng)該補(bǔ)充尿液尿液和腦脊液腦脊液培養(yǎng)。 對入院危重感染患者未進(jìn)行系統(tǒng)性抗菌藥物治療之前，應(yīng)及時(shí)采集血培養(yǎng)。 骨髓炎或長期使用抗菌藥物者骨髓培養(yǎng)陽性率高于血培養(yǎng)。 （二）血培養(yǎng)檢測消毒程序（二）血培養(yǎng)檢測消毒程序 1.皮膚消毒程序：嚴(yán)格執(zhí)行三步法（防止皮膚寄生菌污染）（1）用75%酒精

3、擦拭靜脈穿刺部位待30s以上；（2）然后用1%-2%碘酊作用30秒或10%碘伏作用60秒，從穿刺點(diǎn)向外畫圈消毒，至消毒區(qū)域直徑達(dá)3cm以上； （3）最后用75%酒精脫碘，待酒精揮發(fā)干燥后采血。 新生兒及對碘過敏的患者，只能用75%酒精消毒60s，待穿刺部位酒精揮發(fā)干燥后穿刺采血。 2.培養(yǎng)瓶消毒程序：（1）用75%酒精消毒血培養(yǎng)瓶橡皮塞，作用60秒。（2）用無菌紗布或無菌棉簽清除橡皮塞表面剩余的酒精，然后注入血液。 無論采用何種采血方法，血培養(yǎng)可接受的污染率通常是3%。1.嚴(yán)格無菌操作，避免被體表或腔道正常菌群污染；2.不要和血?dú)?、血沉的取血同時(shí)進(jìn)行；3.穿刺點(diǎn)消毒不使用低效消毒劑，切勿在靜滴

4、的靜脈切勿在靜滴的靜脈處取血處取血；4.不宜從靜脈導(dǎo)管或靜脈留置口取血，若從該部位取血，應(yīng)在申請單上注明；最好同時(shí)靜脈取血，以求進(jìn)行比對；5.不推薦靜脈血直接入瓶，以免血量控制不好或?qū)颊卟焕?.不主張換針頭入瓶，以免增加污染的機(jī)會。7.采血前把血培養(yǎng)瓶從冰箱拿出后，待恢復(fù)至室溫后采集，采集后切勿放回冰箱。（三）血培養(yǎng)標(biāo)本采集和運(yùn)送（三）血培養(yǎng)標(biāo)本采集和運(yùn)送1.1.采集時(shí)間采集時(shí)間 患者出現(xiàn)寒戰(zhàn)、體溫升高前； 使用抗菌藥物前； 患者已使用抗菌藥物的情況下，若出現(xiàn)明顯的發(fā)熱前期癥狀，可在寒戰(zhàn)前或寒戰(zhàn)后1h內(nèi)采血；若無明顯的寒戰(zhàn)階段，應(yīng)在第二次服抗菌藥物前采血； 對于無明顯感染病灶或未找到發(fā)熱原

5、因的發(fā)熱患者，先在不同部位采集2-3份血標(biāo)本，間隔大于或等于1h，24h-36h后再次采集2份以上； 疑似沙門菌感染的患者在病程第1-2周采集靜脈血； 建議 ： 同時(shí)采集同時(shí)采集2-3瓶瓶（不同部位）（不同部位）； 需氧菌、厭氧菌各一份，采集后同時(shí)送檢； 在采血后的2-5天無需重復(fù)采血培養(yǎng)； 2.采集部位采集部位 要求：從兩側(cè)上肢靜脈采血，“雙瓶雙側(cè)”采血培養(yǎng)。至少做到“雙側(cè)雙瓶”。必要時(shí)從下肢靜脈采血做第三套血培養(yǎng)。 不建議采集（1）動(dòng)脈血，因其診斷價(jià)值沒有比靜脈血更大；（2）靜脈留置導(dǎo)管，因其常伴有高污染率。 所謂“雙瓶雙側(cè)”，是指從一個(gè)部位采血接種一套培養(yǎng)瓶，再從另一部位采血接種另一套培

6、養(yǎng)瓶。（通常是雙臂） 所謂“雙側(cè)雙瓶”，是指從一個(gè)部位采血接種一個(gè)需氧瓶，再從另一部位采血接種另一個(gè)厭氧瓶。 一次靜脈采血注入到多個(gè)培養(yǎng)瓶中應(yīng)視為單個(gè)血培養(yǎng)。3.3.采集次數(shù)采集次數(shù)要求： 對懷疑菌血癥、真菌血癥的成人患者，推薦同時(shí)采集23套套（不同部位）血培養(yǎng)標(biāo)本。（即雙瓶雙臂同時(shí)采集血培養(yǎng)標(biāo)本雙瓶雙臂同時(shí)采集血培養(yǎng)標(biāo)本。） 嬰幼兒患者，推薦同時(shí)采集2次次（不同部位）血培養(yǎng)標(biāo)本。為什么要求多次采血？為什么要求多次采血？v（1）菌血癥有）菌血癥有“持續(xù)性持續(xù)性”和和“暫時(shí)性暫時(shí)性”之分，多次采血可提高之分，多次采血可提高陽性檢出率，減少漏檢；陽性檢出率，減少漏檢； 兩瓶或以上血培養(yǎng)以上血培養(yǎng)結(jié)

7、果陽性，細(xì)菌鑒定結(jié)果相兩瓶或以上血培養(yǎng)以上血培養(yǎng)結(jié)果陽性，細(xì)菌鑒定結(jié)果相同，判斷為感染菌，作藥敏并報(bào)告臨床。同，判斷為感染菌，作藥敏并報(bào)告臨床。送檢兩瓶或以上血培養(yǎng)，僅送檢兩瓶或以上血培養(yǎng)，僅1瓶結(jié)果為陽性，且為潛在的污瓶結(jié)果為陽性，且為潛在的污染菌（如表皮葡萄球菌、微球菌、氣球菌、棒狀桿菌等），染菌（如表皮葡萄球菌、微球菌、氣球菌、棒狀桿菌等），一般作為污染菌。一般作為污染菌。 出現(xiàn)多種細(xì)菌在排除污染可能后，可考出現(xiàn)多種細(xì)菌在排除污染可能后，可考慮慮“復(fù)數(shù)菌復(fù)數(shù)菌”敗血癥的診斷。敗血癥的診斷。僅送檢僅送檢1瓶血培養(yǎng)，且培養(yǎng)出上述潛在的污染菌。則其臨床瓶血培養(yǎng)，且培養(yǎng)出上述潛在的污染菌。則其臨

8、床意義不能確定，需與臨床醫(yī)生討論其可能的臨床價(jià)值。意義不能確定，需與臨床醫(yī)生討論其可能的臨床價(jià)值。v（2）血液感染有原發(fā)性和繼發(fā)性之分，多次采血培養(yǎng)有助）血液感染有原發(fā)性和繼發(fā)性之分，多次采血培養(yǎng)有助于循環(huán)外感染部位的診斷；于循環(huán)外感染部位的診斷；v（3）菌血癥患者多數(shù)為間歇性，病原菌周期性出現(xiàn)在血液）菌血癥患者多數(shù)為間歇性，病原菌周期性出現(xiàn)在血液中，在無菌時(shí)期不管臨床癥狀經(jīng)歷的嚴(yán)重程度，患者血液中，在無菌時(shí)期不管臨床癥狀經(jīng)歷的嚴(yán)重程度，患者血液中的病原菌濃度水平相當(dāng)?shù)?，因此要求多次采血，但中的病原菌濃度水平相?dāng)?shù)?，因此要求多次采血，?4h內(nèi)一般不超過內(nèi)一般不超過3次次。4.4.采血量采血量

9、要求： 成年患者推薦的采血量為每套不少于10ml，每瓶不少于5ml。 嬰幼兒患者推薦的采血量為每瓶不少于2ml。說明：血標(biāo)本采集的量是影響檢出率的最重要的因素。成人血培養(yǎng)采血量在230ml之間，病原菌檢出率與采血量成正比例增長。每增加1ml的血液，病原菌的檢出率增加3.2%。兒童患者因?yàn)檠褐胁≡鷿舛容^高，血培養(yǎng)量無需等同于成人。對血液病患者或者血容量相對較低的患者建議使用兒童瓶來減少血液的采集量增加病原菌的檢出率。5.血培養(yǎng)標(biāo)本的運(yùn)送血培養(yǎng)標(biāo)本的運(yùn)送要求：（1）采集后的血培養(yǎng)瓶應(yīng)在1小時(shí)之內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室。 （2）血培養(yǎng)瓶在接種前和接種后均不得冷藏和冷凍。血液標(biāo)本的處理血液標(biāo)本的處理v1.自動(dòng)

10、化血培養(yǎng)系統(tǒng)：v立即放入儀器內(nèi)，直到儀器報(bào)警提示陽性瓶后進(jìn)行下一步操作。v2.傳統(tǒng)血培養(yǎng)瓶：v放入35 溫箱孵育，每日觀察，若有生長情況立即轉(zhuǎn)種，若第7天仍無菌生長，需要進(jìn)行末次接種。雙相培養(yǎng)瓶二二.導(dǎo)管相關(guān)性血流感染的標(biāo)本培養(yǎng)導(dǎo)管相關(guān)性血流感染的標(biāo)本培養(yǎng)v導(dǎo)管相關(guān)性血流感染：v最常見的為血管內(nèi)導(dǎo)管相關(guān)性血流感染（CRBSI），發(fā)生率與導(dǎo)管種類、導(dǎo)管相關(guān)醫(yī)療操作的頻率、患者病情等因素有關(guān)。v短期留置的血管內(nèi)導(dǎo)管，皮膚定值菌通過皮下隧道移植到導(dǎo)管尖端，隨后引發(fā)感染；v長期留置的血管內(nèi)導(dǎo)管，導(dǎo)管頭被細(xì)菌污染，導(dǎo)管腔發(fā)生細(xì)菌定植，引發(fā)感染；v血行傳播的細(xì)菌可定值在血管內(nèi)導(dǎo)管中，引發(fā)新的病灶。皮膚凝固

11、酶陰性葡萄球菌定植于輸液管皮膚凝固酶陰性葡萄球菌定植于輸液管v懷疑導(dǎo)管相關(guān)性血流感染的患者，可采用培養(yǎng)方法（建議同時(shí)進(jìn)行）：v1.用Maki半定量培養(yǎng)法對血管內(nèi)導(dǎo)管尖端片段進(jìn)行培養(yǎng)：v 采集： 用75%酒精消毒導(dǎo)管周圍皮膚；移動(dòng)導(dǎo)管，無菌剪刀剪取尖端末端5cm，直接置入無菌試管中；立即送檢，防止干燥，常規(guī)培養(yǎng)不超過15min，4保存不超過2h。v 接種： 用無菌鑷子將5cm導(dǎo)管在血瓊脂平皿上交叉滾動(dòng)4次，然后棄之，放入5%二氧化碳35 溫箱。v 處理：若24h后血瓊脂平皿生長15個(gè)菌落，提示有潛在導(dǎo)管相關(guān)性血流感染。 不推薦使用增菌肉湯培養(yǎng)，因?yàn)樵鼍鷶U(kuò)大了污染的幾率，導(dǎo)致結(jié)果不可靠。v2.采集

12、外周靜脈血培養(yǎng)：v 采集至少2份血培養(yǎng)，至少1份經(jīng)外周靜脈血穿刺采血，至少1份從導(dǎo)管中心或靜脈留置口隔膜取血，兩者之間采血時(shí)間應(yīng)5min。Maki 滾動(dòng)法滾動(dòng)法二二 、 痰及下痰及下呼吸道標(biāo)本呼吸道標(biāo)本咳痰途經(jīng)口咽部 不可避免地受到污染v唾液中口咽部定植菌的濃度可達(dá)108 109/ml。v研究顯示，國內(nèi)常規(guī)痰標(biāo)本中約半數(shù)存在唾液嚴(yán)重污染現(xiàn)象。（一）采集指征（一）采集指征v凡是發(fā)熱、咳嗽和咳痰，痰呈膿性、粘稠或血性，并伴有胸痛、氣急，肺部聞及濕羅音，外周白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞比例明顯增高，X線檢查提示肺部有炎性浸潤或胸腔積液，甚至出現(xiàn)感染性休克和呼吸衰竭等患者，應(yīng)采集痰液或下呼吸道標(biāo)本。v對可疑

13、烈性呼吸道傳染?。ㄈ鏢ARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者采集檢驗(yàn)標(biāo)本時(shí)必須注意生物安全防護(hù)。（二）采集時(shí)間（二）采集時(shí)間v在抗生素應(yīng)用前采集痰標(biāo)本;v標(biāo)本采集后12h內(nèi)必須立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室處理；v咳痰標(biāo)本應(yīng)用最早且廣泛，但也是最受爭議的標(biāo)本 ;v取標(biāo)本前應(yīng)摘去牙托，清潔口腔如刷牙和漱口;v深咳，采集標(biāo)本過程中要有專業(yè)的醫(yī)務(wù)人員指導(dǎo);v對于細(xì)菌性肺炎，痰標(biāo)本送檢每天1次，連續(xù)23天；不建議24h內(nèi)多次采集，除非痰液外觀性狀改變；v懷疑分枝桿菌感染者，應(yīng)連續(xù)收集3天清晨痰液送檢。（三）采集方法（三）采集方法v自然咳痰法自然咳痰法 以晨痰為佳。用清水反復(fù)漱口，用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入無菌容器中

14、，盡快送檢。否則有的細(xì)菌（如肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌）在外界可能死亡。不能及時(shí)送檢的標(biāo)本，室溫保存2h。要求采到肺深部的痰液，不要唾液。v2.創(chuàng)傷性取痰方法創(chuàng)傷性取痰方法（均由醫(yī)生操作均由醫(yī)生操作）：v 經(jīng)支氣管鏡抽吸法（支氣管肺泡灌洗液、防污染樣本毛刷等）v直接從肺部感染病灶采集高濃度的病原菌，較為安全，但不能避免咽喉部正常菌群污染。v 經(jīng)人工氣道吸引分泌物（導(dǎo)管吸痰、防污染灌洗等）v較為采用，但人工氣道常有致病菌或定值菌存在，建議采集前先做細(xì)胞血篩查。v 經(jīng)氣管穿刺吸引物v 采集到的下呼吸道標(biāo)本不受上呼吸道污染，常用于厭氧菌培養(yǎng)，但患者不易接受。v 經(jīng)胸壁針刺吸引物v 偶爾用于原因不明的肺

15、炎或貼近胸壁的病灶。v 胃內(nèi)采痰法v 用于結(jié)核桿菌感染的嬰幼兒患者v 小兒取痰法v 用壓舌板向后壓舌，用棉拭子伸入咽部，小兒受刺激后咳出分泌物。v 霧化取痰法v 無痰或痰量極少時(shí)可用，使用5%NaCl霧化導(dǎo)痰。哮喘患者不能用該法。痰標(biāo)本的運(yùn)送、保存痰標(biāo)本的運(yùn)送、保存v1.標(biāo)本采集后2小時(shí)內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室；否則可導(dǎo)致肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌死亡；v2.延遲送檢或待處理標(biāo)本應(yīng)置于4 冰箱保存（疑似肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌的例外），但應(yīng)在24小時(shí)內(nèi)處理；v3.對可疑烈性呼吸道傳染?。⊿ARS、炭疽、鼠疫等）的標(biāo)本，必須全過程注意生物安全；v4.經(jīng)口腔部污染的標(biāo)本均不可以做厭氧菌培養(yǎng)。痰標(biāo)

16、本的處理v一.痰標(biāo)本的革蘭染色涂片檢測：v 其目的是判定標(biāo)本是否適合做細(xì)菌培養(yǎng)，并初步判定有否病原菌，病原菌的數(shù)量級類別，有助于初步報(bào)告、培養(yǎng)基選擇和培養(yǎng)結(jié)果的判定。v一般認(rèn)為來自下呼吸道的合格標(biāo)本應(yīng)該是含膿細(xì)胞和支氣管柱狀上皮細(xì)胞較多，而受唾液污染的來自于頰黏膜的扁平上皮細(xì)胞較少，其判定標(biāo)準(zhǔn)如下表：vA、B級的痰標(biāo)本適合進(jìn)行培養(yǎng)；vC、D級的標(biāo)本須高倍鏡鏡下觀察區(qū)分，根據(jù)視野內(nèi)的白細(xì)胞或纖毛柱狀上皮細(xì)胞的數(shù)量，以及細(xì)菌的種類及分布等結(jié)果進(jìn)行判定；vE級為不合格標(biāo)本。v二二.痰標(biāo)本洗凈：痰標(biāo)本洗凈：v目的：盡量排除上呼吸道正常菌群的污染：v方法：將痰加入含有15-20ml滅菌生理鹽水的試管中，

17、劇烈振蕩5-10s，然后用接種環(huán)將沉淀于管底的膿痰小片沾出，再放另一個(gè)無菌試管中，將同樣的方法反復(fù)2次。v三三.痰標(biāo)本的均質(zhì)化處理：痰標(biāo)本的均質(zhì)化處理：v目的：有助于痰核內(nèi)部細(xì)菌的暴露，以提高痰培養(yǎng)標(biāo)本的陽性培養(yǎng)率。v方法：向痰液內(nèi)加等量的用無菌的PH7.6的磷酸鹽緩沖液配制的1%的胰蛋白酶溶液，放置37 溫箱內(nèi)消化90min即能使痰液均質(zhì)化，而對細(xì)菌培養(yǎng)無影響。此外，還可用玻璃組織研磨器或振蕩器。痰標(biāo)本的處理痰標(biāo)本的處理（常規(guī)）（常規(guī)）v取痰液分區(qū)3區(qū)劃線接種于血平板(及麥康凱平板MAC)上，若需培養(yǎng)嗜血桿菌，再接種于加入抗生素(每毫升巧克力瓊脂內(nèi)加萬古霉素50mg，桿菌肽30mg，氯林可霉

18、素1mg）的嗜血桿菌選擇性巧克力平板（HA）。v血平板置于35普通溫箱，巧克力平板置于5%CO2溫箱內(nèi)。v18-24小時(shí)后觀察。痰培養(yǎng)的結(jié)果判斷v 在培養(yǎng)出細(xì)菌時(shí)都面臨判斷該細(xì)菌是致病在培養(yǎng)出細(xì)菌時(shí)都面臨判斷該細(xì)菌是致病菌或攜帶菌的問題，而這些標(biāo)本的采集很難菌或攜帶菌的問題，而這些標(biāo)本的采集很難不污染攜帶菌。不污染攜帶菌。 v 現(xiàn)代感染的特點(diǎn)是，低免疫人群大大增現(xiàn)代感染的特點(diǎn)是，低免疫人群大大增多，條件致病菌、非致病菌引起的感染增多多，條件致病菌、非致病菌引起的感染增多，這些特點(diǎn)給致病菌的判斷帶來了困難。，這些特點(diǎn)給致病菌的判斷帶來了困難。痰標(biāo)本在平板上的菌落量化指標(biāo)v未列入規(guī)范要求（參考）有

19、意義的痰培養(yǎng)結(jié)果v合格痰標(biāo)本培養(yǎng)優(yōu)勢菌中度以上生長合格痰標(biāo)本培養(yǎng)優(yōu)勢菌中度以上生長( (+)+)v合格痰標(biāo)本少量生長，但與涂片鏡檢結(jié)果一合格痰標(biāo)本少量生長，但與涂片鏡檢結(jié)果一致致( (肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌) )v多次培養(yǎng)到相同細(xì)菌；多次培養(yǎng)到相同細(xì)菌；無意義的痰培養(yǎng)結(jié)果v痰培養(yǎng)有上呼吸道正常菌群的細(xì)菌痰培養(yǎng)有上呼吸道正常菌群的細(xì)菌( (如草綠色如草綠色鏈球菌、表皮葡萄球菌、非致病奈瑟菌、類鏈球菌、表皮葡萄球菌、非致病奈瑟菌、類白喉?xiàng)U菌等白喉?xiàng)U菌等) )v痰培養(yǎng)為多種病原菌少量痰培養(yǎng)為多種病原菌少量(+)(105CFU/ml 或革蘭陽性球菌數(shù)1

20、04CFU/ml時(shí)有臨床診斷意義。 （不是絕對的，受多因素影響，綜合判斷）v2. 尿液標(biāo)本的采集和培養(yǎng)中的問題是污染雜菌，故應(yīng)嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作。v3. 尿標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，以免污染，尿液中不得加防腐劑和消毒劑。v4.除非是流行病學(xué)調(diào)查，長期留置導(dǎo)尿管患者常規(guī)尿培養(yǎng)沒有臨床意義，大量病原菌?？稍谶@類患者中檢出，導(dǎo)尿管留置時(shí)間延長易導(dǎo)致與引起患者尿道感染不一致的微生物定植生長；v5.不可從集尿袋的下端管口留取標(biāo)本，集尿袋內(nèi)的尿液也不能用于培養(yǎng)，可能會引起污染；v6.臨床常讓患者留取清潔中段尿，應(yīng)該在醫(yī)護(hù)人員監(jiān)督指導(dǎo)下讓患者正確的留取清潔中段尿；v7.由于種種原因，患者常常不能正確地留取清潔中段

21、尿，實(shí)驗(yàn)室只是針對尿液標(biāo)本培養(yǎng)的結(jié)果進(jìn)行評估，或常常由于分析前尿液標(biāo)本污染了多種細(xì)菌無法正確解釋的結(jié)果，可能延誤了臨床的正確診斷和治療。下列因素可使尿液中細(xì)菌數(shù)量減少，判斷結(jié)果下列因素可使尿液中細(xì)菌數(shù)量減少，判斷結(jié)果時(shí)應(yīng)注意時(shí)應(yīng)注意使用抗生素治療，細(xì)菌生長受到抑制；使用抗生素治療，細(xì)菌生長受到抑制；尿液稀釋，尿比重尿液稀釋，尿比重1.0031.003，營養(yǎng)成分減少，細(xì)菌生長遲緩；，營養(yǎng)成分減少，細(xì)菌生長遲緩；尿尿PHPH5.05.0或或8.58.5，細(xì)菌生長受阻；，細(xì)菌生長受阻；尿頻時(shí)，膀胱內(nèi)細(xì)菌停留時(shí)間短，菌落數(shù)減少；尿頻時(shí)，膀胱內(nèi)細(xì)菌停留時(shí)間短，菌落數(shù)減少；尿道口消毒液混入標(biāo)本中，影響細(xì)菌

22、繁殖，菌落數(shù)減少；尿道口消毒液混入標(biāo)本中，影響細(xì)菌繁殖，菌落數(shù)減少；不同種類的細(xì)菌生長速度不同、營養(yǎng)要求不同，菌落計(jì)數(shù)有所不同種類的細(xì)菌生長速度不同、營養(yǎng)要求不同，菌落計(jì)數(shù)有所不同。不同。接種方式v接種于血平板；置于35普通溫箱；18-24小時(shí)后觀察。采用1ul或者10ul定量接種環(huán)。尿培養(yǎng)的劃線方式尿培養(yǎng)的劃線方式1ul接種環(huán)：菌落數(shù)*1000/ml10ul接種環(huán)：菌落數(shù)*100/ml5ul接種環(huán)：菌落計(jì)數(shù)*200/ml尿培養(yǎng)結(jié)果評價(jià)v正常情況下從腎臟排泌至膀胱的尿液是無菌正常情況下從腎臟排泌至膀胱的尿液是無菌的，但膀胱中的尿液經(jīng)尿道排出體外時(shí)可受的，但膀胱中的尿液經(jīng)尿道排出體外時(shí)可受到下尿

23、道中正常菌群的污染而出現(xiàn)細(xì)菌。因到下尿道中正常菌群的污染而出現(xiàn)細(xì)菌。因此對不同方法獲取的尿液標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果需正此對不同方法獲取的尿液標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果需正確評價(jià)，才能有效指導(dǎo)臨床合理治療。一般確評價(jià)，才能有效指導(dǎo)臨床合理治療。一般認(rèn)為，清潔中段尿標(biāo)本中單種細(xì)菌菌落數(shù)認(rèn)為，清潔中段尿標(biāo)本中單種細(xì)菌菌落數(shù)10105 5CFU/mlCFU/ml可能為感染；可能為感染；5 510104 4CFU/mlCFU/ml可能可能為污染，在兩者之間需要根據(jù)具體情況進(jìn)行為污染，在兩者之間需要根據(jù)具體情況進(jìn)行評估（表評估（表1 1）。）。表表1 1 不同方法采集的尿標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果評價(jià)不同方法采集的尿標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果評價(jià)標(biāo)本來源標(biāo)

24、本來源 菌落數(shù)菌落數(shù)CFU/ml CFU/ml 結(jié)果評價(jià)結(jié)果評價(jià) 清潔中清潔中段尿段尿5 510104 4無意義，僅報(bào)告菌落數(shù)及革蘭染色特征，無意義，僅報(bào)告菌落數(shù)及革蘭染色特征，并注明是純培養(yǎng)或是混合菌生長并注明是純培養(yǎng)或是混合菌生長純培養(yǎng)有意義，報(bào)告菌落計(jì)數(shù)和菌種鑒純培養(yǎng)有意義，報(bào)告菌落計(jì)數(shù)和菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)結(jié)果；混合菌生長無意義定及藥敏試驗(yàn)結(jié)果；混合菌生長無意義，僅做革蘭染色鏡檢，并報(bào)告鏡檢結(jié)果，僅做革蘭染色鏡檢，并報(bào)告鏡檢結(jié)果(5(510)10)10104 4純培養(yǎng)或混合菌生長，其中某種細(xì)菌數(shù)純培養(yǎng)或混合菌生長，其中某種細(xì)菌數(shù)10105 5者有意義，需進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥敏試者有意義，需進(jìn)

25、行細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)；驗(yàn)；4 4種及以上細(xì)菌生長無意義，報(bào)告標(biāo)本種及以上細(xì)菌生長無意義，報(bào)告標(biāo)本污染污染10105 53 3種以內(nèi)細(xì)菌生長都有意義，對種以內(nèi)細(xì)菌生長都有意義，對2 2種主要生種主要生長菌需進(jìn)行菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)；長菌需進(jìn)行菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)；4 4 種及種及以上細(xì)菌生長無意義，報(bào)告標(biāo)本污染以上細(xì)菌生長無意義，報(bào)告標(biāo)本污染10103 3導(dǎo)尿?qū)蚨加幸饬x，所有細(xì)菌均需做菌種鑒定及藥都有意義，所有細(xì)菌均需做菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)敏試驗(yàn)任意數(shù)目任意數(shù)目恥骨上膀恥骨上膀胱穿刺胱穿刺陰性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告陰性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告v培養(yǎng)培養(yǎng)48h48h無菌落生長，即為陰性。接種無菌落生長，即為陰性。接種1ul

26、1ul尿尿量者，應(yīng)報(bào)告量者，應(yīng)報(bào)告“培養(yǎng)培養(yǎng)48h48h，菌落計(jì)數(shù)，菌落計(jì)數(shù)10103 3CFU/ml”CFU/ml”；接種；接種10ul10ul尿量者，應(yīng)報(bào)告尿量者，應(yīng)報(bào)告“培培養(yǎng)養(yǎng)48h48h，菌落計(jì)數(shù)，菌落計(jì)數(shù)10102 2CFU/ml”CFU/ml”。陽性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告陽性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告v應(yīng)報(bào)告細(xì)菌種屬名稱、菌落計(jì)數(shù)和藥物敏感應(yīng)報(bào)告細(xì)菌種屬名稱、菌落計(jì)數(shù)和藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果。如：大腸埃希菌生長，菌落計(jì)性試驗(yàn)結(jié)果。如：大腸埃希菌生長，菌落計(jì)數(shù)數(shù)10105 5CFU/mlCFU/ml，藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果：，藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果：v菌落計(jì)數(shù)菌落計(jì)數(shù)10105 5CFU/mlCFU/ml只是診斷尿路

27、感染的一般標(biāo)準(zhǔn)只是診斷尿路感染的一般標(biāo)準(zhǔn)。對一個(gè)實(shí)驗(yàn)室而言，如果僅使用一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對實(shí)驗(yàn)。對一個(gè)實(shí)驗(yàn)室而言，如果僅使用一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行解釋，那么若標(biāo)準(zhǔn)制定過松，將會造成抗結(jié)果進(jìn)行解釋，那么若標(biāo)準(zhǔn)制定過松，將會造成抗生素濫用和不必要的資源浪費(fèi)；制定過嚴(yán)，將有可生素濫用和不必要的資源浪費(fèi)；制定過嚴(yán)，將有可能導(dǎo)致尿路感染的漏診。所以每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在與臨能導(dǎo)致尿路感染的漏診。所以每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在與臨床醫(yī)生密切合作的基礎(chǔ)上，根據(jù)不同的情況制定不床醫(yī)生密切合作的基礎(chǔ)上，根據(jù)不同的情況制定不同的解釋標(biāo)準(zhǔn)。尿培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)可受多種因素的影同的解釋標(biāo)準(zhǔn)。尿培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)可受多種因素的影響，在一些患者即使菌落計(jì)數(shù)較少，

28、也有明顯的臨響，在一些患者即使菌落計(jì)數(shù)較少，也有明顯的臨床意義，所以對菌落計(jì)數(shù)床意義，所以對菌落計(jì)數(shù)5 510104 4CFU/mlCFU/ml，“規(guī)范規(guī)范”中認(rèn)為無意義的陽性結(jié)果，不應(yīng)隨意丟棄，必要中認(rèn)為無意義的陽性結(jié)果，不應(yīng)隨意丟棄，必要時(shí)應(yīng)根據(jù)患者的具體情況或與臨床醫(yī)生聯(lián)系后，決時(shí)應(yīng)根據(jù)患者的具體情況或與臨床醫(yī)生聯(lián)系后，決定是否需要做細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)。定是否需要做細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)。四、四、 大便培養(yǎng)標(biāo)本大便培養(yǎng)標(biāo)本 v最常見于感染性腹瀉：v1.吸收不良性腹瀉；v 輪狀病毒、腺病毒、隱孢子蟲、致病性大腸埃希菌.v2.分泌性腹瀉（腸毒素性腹瀉）；v 霍亂弧菌、產(chǎn)腸毒素大腸埃希菌、金黃色葡

29、萄球菌、蠟樣芽孢桿菌.v3.侵襲性腹瀉（滲出性腹瀉）；v沙門菌屬、耶爾森菌、溶組織內(nèi)阿米巴、侵襲性大腸埃希菌v4.抗生素相關(guān)性腹瀉（一）采集時(shí)間（一）采集時(shí)間v腹瀉患者應(yīng)在急性期，并盡可能在使用抗生素之前采集新鮮糞便；傷寒患者在發(fā)病2周以后。（二）采集方法（二）采集方法v1自然排便采集法 自然排便后，挑取有膿血或黏液部位的糞便2-3g ，液狀糞便取絮狀物盛于無菌的容器內(nèi)或置于保存液或增菌液中送檢。v2直腸拭子采集法 對不易獲得糞便或排便困難的患者及嬰幼兒，可采用直腸拭子法采集標(biāo)本，其方法是將拭子前端用甘油濕潤。然后插入肛門約45cm（幼兒約23cm）處，輕輕在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)，擦取直腸表面粘液后取出

30、，盛入無菌試管或保存液中送檢。（三）實(shí)驗(yàn)室檢查（三）實(shí)驗(yàn)室檢查 v腸道細(xì)菌大多為革蘭陰性桿菌，且因糞便標(biāo)本中有各種正常菌群，形態(tài)上區(qū)分困難，因此一般不做直接涂片檢查。v只有當(dāng)臨床懷疑腸道菌群失調(diào)或檢查霍亂弧菌、結(jié)核分枝桿菌、疑似葡萄球菌或難辯梭菌引起的偽膜性腸炎以及真菌性腹瀉時(shí)，才做直接涂片檢查。v疑似葡萄球菌引起的抗菌素相關(guān)性腸炎，可取水樣便或腸黏膜樣物涂片，革蘭染色后鏡檢，見革蘭陰性桿菌明顯減少，革蘭陽性球菌大量散在或成堆（葡萄狀）排列，可提示腸道菌群失調(diào)。（四）注意事項(xiàng)（四）注意事項(xiàng)v在腹瀉發(fā)病的正確時(shí)間收集標(biāo)本，病人應(yīng)盡量在急性期（3d）內(nèi)和用藥前采集標(biāo)本，以提高檢出率。v大便標(biāo)本中含

31、有很多雜菌，糞便標(biāo)本的采集須注意防止外界臟物污染，盡量采用無菌容器。v為提高陽性檢出率，要采集新鮮標(biāo)本，立即送檢。標(biāo)本接種標(biāo)本接種v一 細(xì)菌性痢疾、傷寒感染（沙門、志賀）v 取標(biāo)本接種于SS瓊脂平板或麥康凱平板或XLD平板，置于35普通溫箱，18-24小時(shí)后觀察。v二 偽膜性腸炎（難辨梭狀芽孢桿菌）v 接種于CCFA平板和厭氧血瓊脂平板，置于37普通溫箱，48小時(shí)后觀察。v三 霍亂感染v 標(biāo)本接種于堿性蛋白胨水， 35培養(yǎng)6-8h后轉(zhuǎn)種于慶大霉素瓊脂平板或SS瓊脂平板， 35普通溫箱，18-24小時(shí)后觀察。v四 其他感染v 真菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、空腸彎曲菌。v 接種方式v四區(qū)劃線，每區(qū)均換

32、環(huán)。五、五、 生殖道標(biāo)本生殖道標(biāo)本 （一）送檢指征（一）送檢指征1. 1. 男性泌尿系統(tǒng)表現(xiàn)男性泌尿系統(tǒng)表現(xiàn)尿急、尿頻、尿痛尿急、尿頻、尿痛尿道分泌物增多尿道分泌物增多會陰部疼痛及陰囊疼痛會陰部疼痛及陰囊疼痛性功能障礙性功能障礙泌尿生殖器畸形和缺損泌尿生殖器畸形和缺損2. 2. 女性泌尿系統(tǒng)表現(xiàn)女性泌尿系統(tǒng)表現(xiàn)分泌物增多及性狀異常分泌物增多及性狀異常尿道口搔癢及膿性分泌物流暢尿道口搔癢及膿性分泌物流暢下腹疼痛下腹疼痛月經(jīng)失調(diào)月經(jīng)失調(diào)陰道出血陰道出血外陰搔癢外陰搔癢外陰或陰道疼痛外陰或陰道疼痛性功能障礙性功能障礙（二）標(biāo)本采集（二）標(biāo)本采集v 生殖器官標(biāo)本包括子宮頸、陰道、前列腺；男性及女性外生

33、殖器的分泌物及經(jīng)血等。應(yīng)根據(jù)感染的部位和可能的病原體決定用于病原學(xué)診斷的標(biāo)本種類、采集部位和采集方法等。陰道、子宮頸及前列腺等分泌物應(yīng)由醫(yī)師采集，收集于無菌試管內(nèi)送檢。v尿道分泌物1.女性尿道：患者排尿1小時(shí)后采集，首先拭去尿道口的滲出物；再用拭子通過陰道，靠著恥骨聯(lián)合，按摩尿道，采集分泌物；如未獲得分泌物，清洗外尿道，用滅菌紗布或棉球擦拭，用泌尿生殖道拭子插入尿道24cm，旋轉(zhuǎn)拭子2秒。2. 男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔24cm，旋轉(zhuǎn)拭子，至少停留20秒，而使之容易吸收。v陰道分泌物 擦除過多的分泌物和排出液，用無菌棉拭子采取陰道口內(nèi)4厘米內(nèi)側(cè)壁或后穹窿處分泌物，如果需要涂片，需再用

34、一個(gè)拭子。v男性前列腺： 用前列腺按摩法采集前列腺液。清洗尿道口，沖洗尿道膀胱，從肛門用手指按摩前列腺，使前列腺液溢出，用無菌容器收集。無肉眼可見膿液時(shí)，可用滅菌拭子輕輕伸入前尿道內(nèi)，旋轉(zhuǎn)拭子采集標(biāo)本。（三）注意事項(xiàng)（三）注意事項(xiàng) 1.生殖器是開放性器官，標(biāo)本采集過程中應(yīng)嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)程以減少雜菌污染。 2.由于陰道正常菌群的存在而使細(xì)菌的分離鑒定受到干擾，所以在采集女性生殖道標(biāo)本時(shí)應(yīng)注意盡量減少或避免正常菌群的污染。 3.疑有宮腔感染，如遇產(chǎn)婦需行剖宮產(chǎn)，待胎兒娩出后取宮腔分泌物，并同時(shí)取嬰兒耳拭子一同送檢。 4.沙眼衣原體和病毒均在宿主細(xì)胞內(nèi)繁殖，取材時(shí)拭子應(yīng)在病變部位（移行上皮處稍內(nèi)

35、）停留十幾秒鐘，并采集盡可能多的上皮細(xì)胞。 5. 生殖道感染厭氧菌也較多見，疑有厭氧菌感染時(shí)，標(biāo)本采集和運(yùn)送應(yīng)避免與氧氣接觸，最佳方法是床邊采樣，直接接種至厭氧裝置內(nèi)。 6. 淋病奈瑟菌檢查時(shí)，取材的深度一定要夠，因?yàn)榱芮蚓冒l(fā)于柱狀上皮細(xì)胞而不是復(fù)層鱗狀上皮細(xì)胞。不論男女尿道及子宮頸均需用拭子插入尿道及子宮頸3cm深轉(zhuǎn)動(dòng)并停留10-30s取樣送檢。 7. 淋病奈瑟菌抵抗力低，對外環(huán)境變化頗為敏感，對寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，為了保證培養(yǎng)有足夠的成功率，取材后要盡快送檢，立即接種，標(biāo)本離體時(shí)間越短越好。v直接接種于巧克力培養(yǎng)基，置于5%CO2溫箱內(nèi)，18-24小時(shí)后觀察。六、六、 化膿和創(chuàng)傷

36、標(biāo)本化膿和創(chuàng)傷標(biāo)本 組織或器官的化膿性感染，其病原菌的來源可分為兩類：組織或器官的化膿性感染，其病原菌的來源可分為兩類：v 內(nèi)源性：感染源是炎癥局部周圍器官中的正常菌群，由于損傷等因素進(jìn)入無菌狀態(tài)的組織內(nèi)，發(fā)生感染。v 外源性：感染源是存在于人體外部自然界的微生物，由于外傷和直接接觸通過人體表面進(jìn)入人體，造成感染。 膿液的細(xì)菌學(xué)檢查對于確定感染的種類（結(jié)核性或非結(jié)核性等）、提供藥物敏感結(jié)果和指導(dǎo)臨床治療有重要的意義。（一）標(biāo)本采集（一）標(biāo)本采集v1開放性感染和已潰破的化膿灶 標(biāo)本采集前先用滅菌生理鹽水拭去表面滲出物，盡可能用抽吸或?qū)⑹米由钊雮?，緊貼傷口前沿取樣，從膿腫底部或膿腫壁取樣，效果最

37、好。慢性感染，污染嚴(yán)重，很難分離到致病菌，可取感染部位下的組織，研磨成組織勻漿接種于適宜的培養(yǎng)基。v2封閉性膿腫 局部消毒后用針及注射器抽吸膿腫壁，將所有物質(zhì)置于無菌試管內(nèi)送檢，疑為厭氧菌感染時(shí)立即作床邊接種或置于厭氧轉(zhuǎn)運(yùn)裝置送檢（針頭插一橡皮塞隔絕空氣）。但取樣時(shí)，可能會帶入與感染過程無關(guān)的定植細(xì)菌。v3大面積創(chuàng)傷感染：可取感染組織塊或沾有膿汁的內(nèi)層敷料送檢。（二）注意事項(xiàng)（二）注意事項(xiàng)v細(xì)菌對干燥敏感或只能采集少量標(biāo)本時(shí)，用棉拭子采集標(biāo)本后立即放入液體培養(yǎng)基內(nèi)，或采標(biāo)本前先將棉拭子沾少許肉湯以保持標(biāo)本濕度。v對于不能立即送檢的標(biāo)本，應(yīng)放4保存，培養(yǎng)淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌的標(biāo)本除外。v盡可

38、能在用藥前采集標(biāo)本。v采樣前病灶局部應(yīng)避免用抗菌藥物或消毒劑。v革蘭染色對標(biāo)本進(jìn)行評估。涂片中如出現(xiàn)上皮細(xì)胞提示標(biāo)本已被污染。沒有上皮細(xì)胞而有白細(xì)胞說明標(biāo)本采集正確。v有的創(chuàng)傷均可有細(xì)菌污染，但不一定發(fā)生感染，因此對分離到的細(xì)菌要根據(jù)創(chuàng)傷的情況、菌量和種數(shù)，收集標(biāo)本的處理過程、機(jī)體免疫力及抗生素的使用情況等多種因素來分析判斷。標(biāo)本處理v直接涂片，做出初步判斷；v接種于血平板，置于35普通溫箱；18-24小時(shí)后觀察。七、七、 穿刺液標(biāo)本穿刺液標(biāo)本 v穿刺液主要包括穿刺液主要包括: : 腦脊液 膽汁 胸水 腹水 心包液 關(guān)節(jié)液 鞘膜液 在正常人體中，上述體液均是無菌的。有感染的情況下檢出的細(xì)菌，在

39、排除污染后應(yīng)視為病原菌，及時(shí)給予正確的治療，使病人早日恢復(fù)健康。送檢指征v腦脊液：v 癥狀指征：發(fā)熱等感染性全身癥狀、顱內(nèi)壓升高、腦膜刺激癥狀、神經(jīng)麻痹癥狀、腦脊液常規(guī)及生化變化；懷疑腦膜炎時(shí)。v胸水：v 多伴有胸痛、發(fā)熱、胸腔積液；疑似胸膜炎、胸腔積水；v腹水：v 有積液伴腹痛、嘔吐、肌緊張、腸鳴音弱或消失等。疑似原發(fā)或繼發(fā)性腹膜炎；v膽汁：v 腹痛、黃疸、右上腹壓痛、肌緊張、膽囊區(qū)深吸氣時(shí)有觸痛；疑似膽石癥、膽囊炎、肝膽系統(tǒng)感染等。v心包液：v 發(fā)冷、發(fā)熱、心悸、出汗、乏力及精神癥狀；心前區(qū)疼痛、心包摩擦音、心音明顯減弱、心電圖改變等。疑似心包炎；v5關(guān)節(jié)液：v 關(guān)節(jié)腫脹，關(guān)節(jié)周圍肌肉發(fā)生

40、保護(hù)性痙攣；疑似化膿性關(guān)節(jié)炎。（一）腦脊液（一）腦脊液1. 采集時(shí)間： 懷疑為腦膜炎的病人，應(yīng)立即采集腦脊液，最好在使用抗菌藥物以前采集標(biāo)本。2. 采集方法： 用腰穿方法采集腦脊液35ml，分裝到3個(gè)無菌試管中，每個(gè)試管12ml。第一管用于細(xì)菌培養(yǎng)! 也可將抽取液直接注入血培養(yǎng)瓶,用血培養(yǎng)儀培養(yǎng)。3.標(biāo)本運(yùn)送和保存：標(biāo)本運(yùn)送和保存： 腦膜炎奈瑟菌離體后會迅速自溶,肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌也很容易死亡,因此,標(biāo)本應(yīng)立即送檢,并注意保溫、防干燥。切不可置冰箱保存,否則會影響檢出率。 腦脊液標(biāo)本送檢的理想時(shí)間為15分鐘內(nèi)，半小時(shí)送檢是可接受的，如果送檢時(shí)間超過1小時(shí)，則會影響結(jié)果。 如不能及時(shí)送檢，

41、可使用血培養(yǎng)瓶（懷疑腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染時(shí)，請勿使用血培養(yǎng)瓶） （二）膽汁及其它穿刺液（胸水、腹水、（二）膽汁及其它穿刺液（胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜液等）心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜液等） 1. 采集時(shí)間 懷疑感染存在，應(yīng)盡早采集標(biāo)本，一般在患者使用抗菌藥物之前或停止用藥后2-3天采集。 2. 采集方法 無菌操作穿刺抽取標(biāo)本或外科手術(shù)采集標(biāo)本。 標(biāo)本采集量應(yīng)1ml;胸腔積液、腹水可抽取10ml; 心包液、關(guān)節(jié)液等可抽取25ml 。 標(biāo)本采集后注入無菌小瓶或無菌試管中送檢也可將抽取液直接注入血培養(yǎng)瓶，用血培養(yǎng)儀培養(yǎng)。 為防止穿刺液的凝固為防止穿刺液的凝固，應(yīng)在無菌試管中預(yù)先加入，應(yīng)在無菌

42、試管中預(yù)先加入滅菌肝滅菌肝素，素，再注入穿刺液。再注入穿刺液。標(biāo)本處理v腦脊液：v1. 若腦脊液標(biāo)本明顯紅色或渾濁，直接接種； 若腦脊液清晰透明，應(yīng)以3000r/min離心10-15分鐘后，取沉淀物進(jìn)行接種。v2.一般選擇血瓊脂平皿、巧克力平皿、麥康凱或中國藍(lán)平皿、沙保羅平皿、硫羥乙酸鹽肉湯。v3.接種前將平板置于溫箱中預(yù)溫30min，保存平皿表面干燥。v4.采用10ul定量環(huán)接種進(jìn)行4區(qū)劃線。接種后37、5%CO2溫箱培養(yǎng)24h，若不見生長，繼續(xù)培養(yǎng)。v注意：v1.腦脊液標(biāo)本不推薦接種與增菌肉湯，其營養(yǎng)條件較弱，不易苛養(yǎng)菌生長：v2.腦脊液標(biāo)本不能使用血培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，由于培養(yǎng)瓶中含有的聚茴香胺

43、硫酸鈉（SPS）對腦膜炎奈瑟菌有毒性。胸腹水、膽汁、心包液、關(guān)節(jié)液等標(biāo)本的接種胸腹水、膽汁、心包液、關(guān)節(jié)液等標(biāo)本的接種v標(biāo)本處理：v 將標(biāo)本取10ul直接接種于血瓊脂平皿、巧克力平皿、麥康凱或中國藍(lán)平皿、沙保羅平皿上，除巧克力平皿放入37、5%CO2溫箱外，其余平板均放入35 普通溫箱。v備注：由于該方法檢出率低，目前國內(nèi)使用新的接種方法：v 無菌操作將標(biāo)本與肉湯按1 1-1 2比例加入到已配置的血液增菌肉湯管中，輕輕搖勻。置于35 普通溫箱，24h后轉(zhuǎn)種到血瓊脂平皿上，再次培養(yǎng)24h觀察。八、八、 眼、耳、鼻、咽拭子標(biāo)本眼、耳、鼻、咽拭子標(biāo)本 正常眼部、中耳及鼻竇內(nèi)是無菌的，而咽峽部有口腔的

44、常在菌叢。 耳、鼻、咽部的細(xì)菌感染病原菌多源于口腔，口腔中既有需氧菌也有厭氧菌，所以，其周圍組織器官的感染不僅考慮是需氧菌，也須檢查厭氧菌。（一）標(biāo)本采集（一）標(biāo)本采集 1. 1. 眼眼 結(jié)膜：分別用（無菌鹽水預(yù)濕）拭子繞每一個(gè)結(jié)膜??；采集完即接種培養(yǎng)基；將拭子涂片在兩個(gè)玻片上染色。角膜刮擦：滴兩滴局部麻醉液；用無菌鏟刮擦膿腫或潰瘍，將刮擦物直接接種于培養(yǎng)基；將剩余材料涂于兩個(gè)干凈的玻片上染色。液體或抽吸物：備眼，用針頭抽吸液體。先用無菌生理鹽水沖洗眼部，然后用棉拭子拭干，再用無菌棉拭子采集分泌物。2. 2. 耳耳 內(nèi)耳內(nèi)耳：對復(fù)雜的、反復(fù)的或慢性頑固的中耳炎做鼓：對復(fù)雜的、反復(fù)的或慢性頑固的

45、中耳炎做鼓膜穿刺術(shù)，接觸耳鼓室先用肥皂水清洗耳道再用注膜穿刺術(shù)，接觸耳鼓室先用肥皂水清洗耳道再用注射器收集液體；對破裂的鼓室，借助耳科診視器，射器收集液體；對破裂的鼓室，借助耳科診視器，用軟桿拭子收集液體。用軟桿拭子收集液體。外耳外耳：用濕拭子將耳道的任何碎屑或痂皮拭去；在：用濕拭子將耳道的任何碎屑或痂皮拭去；在外耳道用力旋轉(zhuǎn)拭子取樣。外耳道用力旋轉(zhuǎn)拭子取樣。3 3鼻或鼻咽分泌物鼻或鼻咽分泌物 直接用拭子涂抹病灶部位，切勿接觸直接用拭子涂抹病灶部位，切勿接觸周圍粘膜或皮膚，標(biāo)本立即送檢。周圍粘膜或皮膚，標(biāo)本立即送檢。4 4咽分泌物咽分泌物 先用清水漱口，用壓舌板將舌向下向外壓，先用清水漱口，用壓舌板將舌向下向外壓，將咽拭子在咽后壁或懸雍垂后側(cè)涂抹數(shù)次，插入運(yùn)送培將咽拭子在咽后壁或懸雍垂后側(cè)涂抹數(shù)次，插入運(yùn)送培養(yǎng)基。切勿接觸口腔和舌粘膜。養(yǎng)基。切勿接觸口腔和舌粘膜。（二）標(biāo)本運(yùn)送和保存二）標(biāo)本運(yùn)送和保存 標(biāo)本采集時(shí)，