微生物知識(shí)及消毒與滅菌知識(shí)培訓(xùn)

1、. .一、微生物的特點(diǎn)一、微生物的特點(diǎn)n分布范圍廣n生長(zhǎng)速度快n生存能力強(qiáng)微生物包括：. 我們所生活的環(huán)境中，到處都存在著大量的微生物。在一般空氣中，微生物達(dá)8003500個(gè)/m3，在土壤中達(dá)1500108個(gè)/g，在嚴(yán)重污染的水中可達(dá)107個(gè)/ml。（飲用水要求細(xì)菌總數(shù)100個(gè)/ml，大腸桿菌3個(gè)/ml。經(jīng)水塔或貯水池貯存后，短期內(nèi)可繁殖至105106個(gè)/ml。）人的頭皮上有140萬(wàn)個(gè)/cm2，兩手上約有440萬(wàn)個(gè)，1g指甲污垢有38億個(gè)，1g糞便可達(dá)101000億個(gè)?？梢哉f(shuō)微生物是無(wú)處不在，無(wú)處不有。許多以前被人們認(rèn)為是極端（高溫、高壓、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、低溫等）甚至是致死的環(huán)境，現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)生活著

2、各種類(lèi)型的微生物（稱(chēng)為極端微生物）。事實(shí)說(shuō)明，微生物有特別頑強(qiáng)的生存、繁殖和變異能力來(lái)適應(yīng)環(huán)境。 .二、微生物特點(diǎn)二、微生物特點(diǎn)n種類(lèi)多、分布廣種類(lèi)多、分布廣n微生物在地球上幾乎無(wú)處不有，無(wú)孔不入，人的皮膚上，口腔，腸道里都有許多微生物。微生物聚集最多的地方是土壤，土壤是各種微生物生長(zhǎng)繁殖的大本營(yíng)，約占微生物總量的70-90%，任意取一把土或一粒土，就是一個(gè)微生物世界，不論數(shù)量或種類(lèi)均最多。在肥沃的土壤中，每克土含有20億個(gè)微生物，即使是貧瘠的土壤，每克土中也含有35億個(gè)微生物。空氣里懸浮著無(wú)數(shù)細(xì)小的塵埃和水滴，它們是微生物在空氣中的藏身之地。哪里塵埃多，哪里的微生物就多。n迄今為止，我們知道

3、的微生物約有10萬(wàn)種，目前已知的種類(lèi)只占地球上實(shí)際存在的微生物總數(shù)的20%，人類(lèi)生產(chǎn)和生活中僅開(kāi)發(fā)利用了已發(fā)現(xiàn)微生物種數(shù)的1%。 .n個(gè)體小、面積大個(gè)體小、面積大n生物的個(gè)體極其微小，必須借助顯微鏡放大幾倍、幾百倍、上千倍，乃至數(shù)萬(wàn)倍才能看清。桿菌的寬度是微米，因此80個(gè)桿菌“肩并肩”地排列成橫隊(duì)，也只有一根頭發(fā)絲的寬度。桿菌的長(zhǎng)度約2微米，故1500個(gè)桿菌頭尾銜接起來(lái)僅有一顆芝麻長(zhǎng)。 物體的表面積和體積之比稱(chēng)為比表面積。大腸桿菌的比表面積是人的30萬(wàn)倍。 .n吸收多、轉(zhuǎn)化快吸收多、轉(zhuǎn)化快n微生物有驚人的繁殖速度，大多數(shù)微生物幾十分鐘內(nèi)就可以繁殖一代，如細(xì)菌一般每2030分鐘既可分裂一次；n微

4、生物的食譜非常廣泛，凡是動(dòng)植物能利用的營(yíng)養(yǎng)，微生物都能利用，大量的動(dòng)植物不能利用的物質(zhì)，甚至劇毒的物質(zhì)，微生物照樣可以視為美味佳肴。如大腸桿菌在合適條件下，每小時(shí)可以消耗相當(dāng)于自身重量2000倍的糖，而人體則需要40年之久。 .n適應(yīng)強(qiáng)、易變異適應(yīng)強(qiáng)、易變異n多數(shù)細(xì)菌能耐0196的低溫；在海洋深處的某些硫細(xì)菌可在250300的高溫條件下正常生長(zhǎng)；一些嗜鹽細(xì)菌甚至能在飽和鹽水中正常生活；產(chǎn)芽孢細(xì)菌和真菌孢子在干燥條件下能保藏幾十年、幾百年。由于微生物繁殖快，也可在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量變異的后代。正是由于這個(gè)特性，人們才能夠按照自己的要求不斷改良在生產(chǎn)上應(yīng)用的微生物，如青霉素生產(chǎn)菌的發(fā)酵水平由每毫升2

5、0單位上升到近10萬(wàn)單位，利用變異和育種得到如此大幅度的產(chǎn)量提高。 .三、微生物的類(lèi)群和形態(tài)結(jié)構(gòu)三、微生物的類(lèi)群和形態(tài)結(jié)構(gòu)n微生物按其結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及生活習(xí)性等分為三大類(lèi)：n原核細(xì)胞型原核細(xì)胞型：細(xì)菌、放線菌、支原體、衣原體、立克次氏體、螺旋體等n真核細(xì)胞型真核細(xì)胞型：真菌n非細(xì)胞型非細(xì)胞型：病毒 噬菌體 . 芽孢桿菌 （細(xì)菌）. 淡水中的螺旋菌 spirochetes . .蠟樣芽孢桿菌（細(xì)菌）. 支原體掃描電鏡圖片支原體支原體（mycoplasma）以前被認(rèn)為是最小的能獨(dú)立存活的原核生物，以前也被認(rèn)為是地球上迄今為止被發(fā)現(xiàn)的最小的細(xì)胞生物。全世界90%的豬體內(nèi)寄生著支原體。.立克次氏體（r

6、ickettsiae），一種微小的寄生的細(xì)菌。上圖是動(dòng)物的淋巴細(xì)胞，紅色的是寄生的立克次氏體。. 青霉是種真菌，屬于子囊菌。 有的能產(chǎn)生青霉素，救了無(wú)數(shù)人的命。 產(chǎn)生無(wú)性孢子。.根霉（Rhizopus)是種真菌，屬于接合菌。能產(chǎn)生無(wú)性孢子菌絲體的直徑約12 um黑的是孢子囊 . 噬菌體SARS病毒是一類(lèi)新發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒 禽流感病毒愛(ài)滋病毒. 粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征 沙門(mén)氏菌的菌落特征 銅綠假單孢菌的菌落特征 弗氏志賀氏菌的菌落特征 粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征 .放線菌的菌落特征 A：諾爾斯氏鏈霉菌； B：皮疽諾卡氏菌； C：酒紅指孢囊菌； D：游動(dòng)放線菌； E：小單胞菌； F：皺雙孢馬杜拉放線菌產(chǎn)

7、抗菌素的放線菌的菌落特征A：卡特利鏈霉菌； B：弗氏鏈霉菌；C：吸水鏈霉菌金淚亞種；D：卡那霉素鏈霉菌；E：除蟲(chóng)鏈霉菌； F：生磺酸鏈霉菌. 各種曲霉的菌落 . 各種病原真菌的菌落 青霉的菌落 青霉的菌落 . 各種酵母菌的菌落 啤酒酵母的菌落 紅酵母的菌落 .四、微生物的營(yíng)養(yǎng)四、微生物的營(yíng)養(yǎng)n水分水分：水占細(xì)胞漿的70%90%，是細(xì)胞的重要組成成分。較普遍的觀點(diǎn)認(rèn)為，只有在含水的環(huán)境中微生物才能存活。但也有人發(fā)現(xiàn)在無(wú)水碳?xì)浠衔镏形⑸锟砷L(zhǎng)期存活。n碳源碳源：碳源是構(gòu)成細(xì)胞的重要物質(zhì)。有些微生物的碳源必須來(lái)自有機(jī)碳化合物如糖、蛋白質(zhì)、脂肪、有機(jī)酸等（同時(shí)利用其化學(xué)能），屬異養(yǎng)型；有些微生物不需

8、有機(jī)碳化合物，以CO2為碳源，屬自養(yǎng)型（分為光能自養(yǎng)型和化能自養(yǎng)型）。.n氮源氮源：氮是組成蛋白質(zhì)和核酸的重要元素。n無(wú)機(jī)鹽類(lèi)無(wú)機(jī)鹽類(lèi)：細(xì)菌所需無(wú)機(jī)鹽包括磷、硫、鎂、鐵、鉀、鈉、鈣、氯、錳、鋅、鈷、銅等。其中磷、硫、鎂、鉀、鈉、鐵需要量較多，其他只需微量。n生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子：生長(zhǎng)因子是某些微生物生長(zhǎng)發(fā)育所必需，而其自身又不能合成的一類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。包括維生素、嘌呤和嘧啶。.五、微生物生長(zhǎng)的影響因素五、微生物生長(zhǎng)的影響因素n1、營(yíng)養(yǎng)物n2、PH值n3、溫度n4、氧氣n5、滲透壓n6、表面張力.六、消毒與滅菌六、消毒與滅菌n消毒與滅菌是微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)中最基本的操作，從事藥品生產(chǎn)和檢驗(yàn)的人員都應(yīng)當(dāng)了解消

9、毒與滅菌的方法及其意義，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，否則會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量，危害患者安全。.概念概念n無(wú)菌不存在活的生物（GMP指南）。n “無(wú)菌”從定義上來(lái)說(shuō)是一個(gè)絕對(duì)的概念，但遺憾的是，在科學(xué)和技術(shù)高度發(fā)展的今天，藥品的絕對(duì)無(wú)菌即做不到，也無(wú)法加以證實(shí)。然而，無(wú)菌制劑的安全性要求人們?cè)O(shè)定無(wú)菌的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)。FDA、歐洲制藥工業(yè)界曾將百萬(wàn)分之一微生物污染率作為滅菌產(chǎn)品“無(wú)菌”的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)，它和蒸汽滅菌后產(chǎn)品中微生物存活的概率為 10-6（即產(chǎn)品的無(wú)菌保證值為6），系同一標(biāo)準(zhǔn)的不同表示法。這一標(biāo)準(zhǔn)于1980起收錄于USP 中，如今已為世界各國(guó)普遍接受和采用。.概念概念n滅菌使達(dá)到無(wú)菌狀態(tài)的方法（GMP指南）。用物

10、理或化學(xué)方法殺滅傳播媒介上所有的微生物，使其達(dá)到無(wú)菌（GB）。通常是指殺滅或除去全部活的微生物（包括繁殖體和芽孢）。n消毒用物理或化學(xué)方法殺滅或清除傳播媒介上的病原微生物，使其達(dá)到無(wú)害化（GB）。通常是指殺死病原微生物的繁殖體，但不能破壞其芽孢。所以消毒是不徹底的，不能代替滅菌。.概念概念n無(wú)菌制劑不存在活的微生物的制劑（GMP指南）。n非無(wú)菌制劑所含活的微生物量符合衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的制劑（GMP指南）。.常用消毒劑常用消毒劑 n 70%75%乙醇水溶液；n 0.5%洗必泰溶于70%乙醇，再加入2%甘油，用于皮膚、器具等消毒；n異丙醇 75%水溶液，用于皮膚、器具等消毒；n甲醛 37%40%甲醛液8

11、9ml，再加入45g高錳酸鉀，每m3熏蒸量，密閉1224h，刺激性強(qiáng)；n戊二醛 2%水溶液，用于空氣、器具等消毒。廣譜、高效、低毒，可殺芽孢和病毒，毒性較輕；.常用消毒劑常用消毒劑n新潔爾滅（苯扎溴銨） 0.1%水溶液，用于皮膚、粘膜、器具等消毒，有清潔和消毒雙重功效，抗菌譜較窄；n杜滅芬（消毒寧） 0.05%0.1%水溶液，用于皮膚、器具等消毒；n過(guò)氧乙酸 a、 0.2%0.5%水溶液；b、新配0.5%水溶液；c 、1g/m3； 用于器具等消毒，抗菌譜廣，可用于皮膚消毒殺滅某些病毒；熏蒸，但性質(zhì)不穩(wěn)定。n乳酸 a、0.331mol/L；b、 熏蒸或與等量苯酚合用熏蒸 噴霧，用于空氣消毒，有強(qiáng)

12、殺菌作用；熏蒸，密閉12h以上。n麝香草酚 5%麝香草酚溶于50%乙醇，噴灑墻面、地面，殺霉菌。.干熱滅菌干熱滅菌n常見(jiàn)的有火焰、燒灼、干烤和紅外線滅菌等。n火焰、燒灼：通常用于實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌操作中金屬或其它耐火材料制成的器具的滅菌。n干烤和紅外線：利用干熱空氣或熱輻射進(jìn)行滅菌。一般135145需35h，160170需2h以上，170180需1h以上，180200需0.51h。除熱原，則需25030min，或20045min，1802h?？諝鈧鳠崧?，穿透力不強(qiáng)，故干熱滅菌時(shí)間長(zhǎng)。干熱滅菌時(shí)烤箱內(nèi)裝入物品應(yīng)留有空隙，以利空氣流動(dòng)，否則使箱內(nèi)溫度不均，部分物品滅菌不徹底。.濕熱滅菌濕熱滅菌n通過(guò)熱蒸汽

13、或沸水使蛋白質(zhì)變性而殺滅微生物的方法。濕熱穿透力強(qiáng)，滅菌效果較干熱好。n煮沸或流通蒸汽滅菌：常壓下沸水和蒸汽的溫度是100，一般處理3060min可殺死細(xì)菌繁殖體，但不能完全殺滅芽孢。此法適用于不能高壓蒸汽滅菌的物品。n低溫間隙滅菌（巴斯德滅菌法）：將物品先用6080加熱（或煮沸）1h，然后置2025保存24h（或常溫過(guò)夜），使其中殘存的芽孢萌發(fā)成繁殖體，再用以上條件滅菌，如此反復(fù)三次。本法適用于不耐高溫或高溫下易變質(zhì)的物品，但很費(fèi)時(shí)。.高壓蒸汽滅菌（熱壓滅菌）高壓蒸汽滅菌（熱壓滅菌）n超過(guò)一個(gè)大氣壓時(shí)，水的沸點(diǎn)高于100，反之亦然。高壓蒸汽滅菌就是通過(guò)加壓提高蒸汽溫度，滅菌效果最好。它簡(jiǎn)便、

14、經(jīng)濟(jì)、可靠、無(wú)毒，是最可靠、應(yīng)用最廣泛的滅菌法。此法適用于耐高溫和潮濕的物品。n常用條件為：115.5 、30min； 121.5 、20min； 126.5、 15min。.注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) na.必須完全排出滅菌器內(nèi)的空氣。否則會(huì)影響滅菌器內(nèi)溫度達(dá)到規(guī)定的要求。nb. 注意被滅菌物品的溫度。滅菌器內(nèi)溫度與被滅菌物品的溫度一般是一致的，但在蒸汽輸入過(guò)快時(shí)，后者可能低于前者，所以升溫時(shí)要有一定的預(yù)熱時(shí)間。另外，降溫過(guò)快易引起玻璃炸裂。因此，對(duì)于一種滅菌產(chǎn)品，應(yīng)制定一固定的滅菌曲線（像凍干曲線一樣）。nc. 定期檢查滅菌器內(nèi)溫度的準(zhǔn)確性。.化學(xué)滅菌化學(xué)滅菌n利用化學(xué)試劑形成的氣體來(lái)殺滅微生物的方法。常用的滅菌劑為環(huán)氧乙烷（又稱(chēng)氧化乙烯）。環(huán)氧乙烷是廣譜殺菌劑，能殺滅細(xì)菌、芽孢和多種病毒，還能殺死昆蟲(chóng)及蟲(chóng)卵。但由于環(huán)氧乙烷易燃易爆且有毒（有致變異性），用于藥品方面極有限，多用于醫(yī)療器械、塑料制品等滅菌。（不能用于橡膠和乳膠手套，能將其溶解。 .濾過(guò)除菌濾過(guò)除菌n利用細(xì)菌不能通過(guò)致密孔濾材的原理，除去對(duì)熱不穩(wěn)定的藥品溶液或液體物質(zhì)中的細(xì)菌的方法。過(guò)濾法