微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

1、專(zhuān)題專(zhuān)題2 :2 :微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 變形蟲(chóng)變形蟲(chóng)酵母菌酵母菌流感病毒流感病毒蘑蘑菇菇微生物微生物特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡(jiǎn)單特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡(jiǎn)單, ,個(gè)體多數(shù)十分微小個(gè)體多數(shù)十分微小. .通常通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)至沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu). . 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒病毒（一）微生物的種類(lèi)（一）微生物的種類(lèi)(細(xì)菌、放線菌、藍(lán)藻細(xì)菌、放線菌、藍(lán)藻)(酵母菌、霉菌、大型真菌酵母菌、霉菌、大型真菌)(草履蟲(chóng)、變形蟲(chóng)、衣藻草履蟲(chóng)、變形蟲(chóng)、衣藻)(噬菌體、噬菌體、HIV病毒病毒)一、基

2、礎(chǔ)知識(shí)：一、基礎(chǔ)知識(shí)：細(xì)細(xì)菌菌的的結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)細(xì)胞壁：肽聚糖。保護(hù)細(xì)胞壁：肽聚糖。保護(hù)細(xì)胞膜：細(xì)胞膜：細(xì)胞質(zhì)：細(xì)胞質(zhì)：( (核糖體、質(zhì)粒核糖體、質(zhì)粒: :小型小型 環(huán)狀環(huán)狀DNADNA分子分子) )擬核：大型環(huán)狀擬核：大型環(huán)狀DNADNA分子，控制分子，控制 細(xì)菌的主要遺傳形狀。細(xì)菌的主要遺傳形狀。特殊結(jié)構(gòu)特殊結(jié)構(gòu)莢膜：多糖。保護(hù)作用莢膜：多糖。保護(hù)作用 鞭毛：運(yùn)動(dòng)鞭毛：運(yùn)動(dòng)芽孢：細(xì)菌休眠體，對(duì)惡劣的環(huán)芽孢：細(xì)菌休眠體，對(duì)惡劣的環(huán) 境有抵抗力境有抵抗力 有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體，叫做體，叫做芽孢芽孢。

3、芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)。芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3 3小時(shí)以后才小時(shí)以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌。分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌。微生物的代謝類(lèi)型微生物的代謝類(lèi)型異養(yǎng)厭氧型異養(yǎng)厭氧型乳酸菌、乳酸菌、破傷風(fēng)桿菌等破傷風(fēng)桿菌等自養(yǎng)厭氧型自養(yǎng)厭氧型綠硫細(xì)菌等綠硫細(xì)菌等極少數(shù)微生物極少數(shù)微生物厭氧型厭氧型異養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需氧型絕大多數(shù)

4、微生物絕大多數(shù)微生物自養(yǎng)需氧型自養(yǎng)需氧型 硝化細(xì)菌等硝化細(xì)菌等需氧型需氧型異養(yǎng)型異養(yǎng)型自養(yǎng)型自養(yǎng)型同化類(lèi)型同化類(lèi)型異化類(lèi)型異化類(lèi)型一切微生物，都需要從外界吸收一切微生物，都需要從外界吸收營(yíng)養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)物質(zhì)，通過(guò)，通過(guò)代謝代謝獲取獲取能量能量并合成自身的并合成自身的組組成物質(zhì)成物質(zhì)，以維持正常的，以維持正常的生長(zhǎng)生長(zhǎng)和和繁殖。繁殖。在生產(chǎn)實(shí)際和科學(xué)研究中，常常要人在生產(chǎn)實(shí)際和科學(xué)研究中，常常要人工培養(yǎng)某一種微生物，因此，必須了解微工培養(yǎng)某一種微生物，因此，必須了解微生物所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。生物所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。一、培養(yǎng)基：一、培養(yǎng)基： 1、定義：、定義： 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配培養(yǎng)基（培養(yǎng)液

5、）是由人工方法配制而成的，專(zhuān)供微生物生長(zhǎng)繁殖使用的混合營(yíng)養(yǎng)制而成的，專(zhuān)供微生物生長(zhǎng)繁殖使用的混合營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)?；|(zhì)。培養(yǎng)微生物培養(yǎng)微生物 碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽 特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)2、培養(yǎng)基的成分、培養(yǎng)基的成分概念概念來(lái)源來(lái)源作用作用碳碳源源凡是能為微凡是能為微生物提供所生物提供所需需碳碳元素的元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)無(wú)機(jī)碳源無(wú)機(jī)碳源 COCO2 2 NaHCO NaHCO3 3等等有機(jī)碳源有機(jī)碳源糖類(lèi)（主要）糖類(lèi)（主要）脂肪酸脂肪酸石油等石油等構(gòu)成細(xì)胞構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和一些物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物代謝產(chǎn)物異養(yǎng)微生異養(yǎng)微生物的能源物的能源（1）微生物的碳源）微生物的碳源自養(yǎng)型和異養(yǎng)

6、型微生物分別能利用哪類(lèi)自養(yǎng)型和異養(yǎng)型微生物分別能利用哪類(lèi)碳源物質(zhì)？碳源物質(zhì)？思考思考概念概念來(lái)源來(lái)源作用作用氮氮源源無(wú)機(jī)氮源無(wú)機(jī)氮源 N2、NH4+、 NO3-、NH3等等有機(jī)氮源有機(jī)氮源 尿素、牛肉膏、尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等蛋白胨、氨基酸等凡是能夠凡是能夠?yàn)槲⑸餅槲⑸锾峁┑峁┑氐臓I(yíng)養(yǎng)素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)物質(zhì)主要用于合成主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸蛋白質(zhì)、核酸及含氮的代謝及含氮的代謝產(chǎn)物產(chǎn)物（2）微生物的氮源）微生物的氮源思考思考 哪些微生物能夠利用氮?dú)猓磕男┪⑸锬軌蚶玫獨(dú)猓?氮源能否為微生物提供能量？氮源能否為微生物提供能量？ 概念概念 常見(jiàn)的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)常見(jiàn)的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 為什

7、么不可缺少？為什么不可缺少？ ：微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物：微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等天然物質(zhì)包括：酵母膏，蛋白胨，動(dòng)植物組織提取液天然物質(zhì)包括：酵母膏，蛋白胨，動(dòng)植物組織提取液缺乏合成這些物質(zhì)所需酶或合成能力有限缺乏合成這些物質(zhì)所需酶或合成能力有限（3 3）特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)）特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 牛肉膏牛肉膏是用新鮮牛肉經(jīng)過(guò)剔除脂肪、消化、過(guò)濾、是用新鮮牛肉經(jīng)過(guò)剔除脂肪、消化、過(guò)濾、濃縮而得到的一種棕黃色至棕褐色的膏狀物。濃縮而得到的一種棕黃色至棕褐色的膏狀物。 蛋白胨蛋白胨用新鮮牛骨及牛肉混合提取，經(jīng)過(guò)消化、用新鮮牛骨及牛肉混合提取，經(jīng)過(guò)

8、消化、過(guò)濾、濃縮、噴霧干燥而得到的一種淺黃色至類(lèi)白過(guò)濾、濃縮、噴霧干燥而得到的一種淺黃色至類(lèi)白色的干燥粉末。易溶于水，水溶液呈淡黃色。色的干燥粉末。易溶于水，水溶液呈淡黃色。 酵母膏酵母膏采用新鮮酵母乳液自溶、酶解、分離、濃采用新鮮酵母乳液自溶、酶解、分離、濃縮等現(xiàn)代生物高新技術(shù)精制而成的一種棕黃色可溶縮等現(xiàn)代生物高新技術(shù)精制而成的一種棕黃色可溶性膏狀純天然制品。性膏狀純天然制品。 。1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成培養(yǎng)基組分培養(yǎng)基組分提供的主要營(yíng)養(yǎng)提供的主要營(yíng)養(yǎng)牛肉膏牛肉膏 5g碳源、氮源、磷酸鹽和碳源、氮源、磷酸鹽和維生素維生素蛋白胨蛋白胨 10g氮源和維生素氮源和維生素NaCl

9、5g無(wú)機(jī)鹽無(wú)機(jī)鹽H2O 定容至定容至1000ml氫元素、氮元素氫元素、氮元素 請(qǐng)判斷下列說(shuō)法的正確性請(qǐng)判斷下列說(shuō)法的正確性 同一種物質(zhì)不能既做碳源，又做氮源。同一種物質(zhì)不能既做碳源，又做氮源。 碳源都能提供能量。碳源都能提供能量。 NaHCO3只能提供碳源。只能提供碳源。 無(wú)機(jī)氮源也能提供能量。無(wú)機(jī)氮源也能提供能量。 微生物都需要微生物都需要特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。、目的要明確、目的要明確根據(jù)所培養(yǎng)的微生物的種類(lèi)、培養(yǎng)的目的配制根據(jù)所培養(yǎng)的微生物的種類(lèi)、培養(yǎng)的目的配制、營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)、營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。、pHpH要適宜要適宜 細(xì)菌細(xì)菌 pH6.5

10、7.5pH6.57.5 真菌真菌 pH5.06.0pH5.06.03、培養(yǎng)基的配制原則、培養(yǎng)基的配制原則1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成培養(yǎng)基組分培養(yǎng)基組分提供的主要營(yíng)養(yǎng)提供的主要營(yíng)養(yǎng)牛肉膏牛肉膏 5g碳源、氮源、磷酸鹽和碳源、氮源、磷酸鹽和維生素維生素蛋白胨蛋白胨 10g氮源和維生素氮源和維生素NaCl 5g無(wú)機(jī)鹽無(wú)機(jī)鹽H2O 定容至定容至1000ml氫元素、氮元素氫元素、氮元素 根據(jù)物理性質(zhì)分根據(jù)物理性質(zhì)分固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基微生物的分離計(jì)數(shù)微生物的分離計(jì)數(shù), ,鑒定菌種鑒定菌種半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基觀察微生物的運(yùn)動(dòng)觀察微生物的運(yùn)動(dòng), ,液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基常用于工業(yè)生產(chǎn)常用于工

11、業(yè)生產(chǎn)4、培養(yǎng)基的種類(lèi)、培養(yǎng)基的種類(lèi)液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基+瓊脂瓊脂（半固體培養(yǎng)基）（半固體培養(yǎng)基） 固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基凝固劑凝固劑含量含量是以藻類(lèi)的石花菜屬及制成的明膠產(chǎn)是以藻類(lèi)的石花菜屬及制成的明膠產(chǎn)品，用藻類(lèi)制成的瓊脂是半透明、無(wú)品，用藻類(lèi)制成的瓊脂是半透明、無(wú)定形的粉末、薄片或顆粒，瓊脂不溶定形的粉末、薄片或顆粒，瓊脂不溶于冷水，能吸收相當(dāng)本身體積于冷水，能吸收相當(dāng)本身體積20倍的倍的水。易溶于沸水，稀釋液在水。易溶于沸水，稀釋液在42（108 ）仍保持液狀，但在）仍保持液狀，但在37凝成凝成緊密的膠凍。緊密的膠凍。瓊脂的最有用特性是它的瓊脂的最有用特性是它的凝點(diǎn)凝點(diǎn)和和熔點(diǎn)熔點(diǎn)之間的

12、溫度相差很大。它在水中需加之間的溫度相差很大。它在水中需加熱至熱至95時(shí)才開(kāi)始熔化，熔化后的溶時(shí)才開(kāi)始熔化，熔化后的溶液溫度需降到液溫度需降到40時(shí)才開(kāi)始凝固，所時(shí)才開(kāi)始凝固，所以它是配制固體培養(yǎng)基的最好凝固劑以它是配制固體培養(yǎng)基的最好凝固劑。瓊脂：瓊脂：固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基主要用于微生物的主要用于微生物的分離、計(jì)數(shù)等分離、計(jì)數(shù)等主要用于觀察微生物主要用于觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、鑒定菌種等的運(yùn)動(dòng)、鑒定菌種等主要用于工業(yè)生產(chǎn)主要用于工業(yè)生產(chǎn)需加入凝固需加入凝固劑，如瓊脂劑，如瓊脂半固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基：無(wú)動(dòng)力無(wú)動(dòng)力 有動(dòng)力有動(dòng)力( (彌散彌散) )( (

13、是否運(yùn)動(dòng)是否運(yùn)動(dòng)) ) l根據(jù)化學(xué)成分分根據(jù)化學(xué)成分分合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基成分明確成分明確, ,常用于分類(lèi)常用于分類(lèi), ,鑒定鑒定天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基成分不明確成分不明確, ,常用于工業(yè)生產(chǎn)常用于工業(yè)生產(chǎn) （加牛肉膏、蛋白胨、酵母膏等）（加牛肉膏、蛋白胨、酵母膏等）選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì), ,以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng), ,促進(jìn)所需要的微促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)。生物的生長(zhǎng)。 根據(jù)功能分根據(jù)功能分鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品化學(xué)藥品, ,用以鑒別不同種類(lèi)的微生物。用以

14、鑒別不同種類(lèi)的微生物。伊紅和美藍(lán)伊紅和美藍(lán), ,和大腸桿菌的代謝產(chǎn)物結(jié)合和大腸桿菌的代謝產(chǎn)物結(jié)合, ,使使菌落呈黑色菌落呈黑色選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基 加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基 分離分離酵母菌、霉菌等真菌酵母菌、霉菌等真菌 加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基 分離分離金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌（耐鹽細(xì)菌）（耐鹽細(xì)菌）（一）微生物的結(jié)構(gòu)（一）微生物的結(jié)構(gòu)一、基礎(chǔ)知識(shí)：一、基礎(chǔ)知識(shí)：（二）培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基1、培養(yǎng)基的種類(lèi)、培養(yǎng)基的種類(lèi)2、微生物的營(yíng)養(yǎng)、微生物的營(yíng)養(yǎng) 3、培養(yǎng)基配制原則、培養(yǎng)基配制原則練習(xí)：下列是與微生物培養(yǎng)有關(guān)的問(wèn)題，請(qǐng)回答練習(xí)：下列是與微生物培養(yǎng)有關(guān)的問(wèn)題，

15、請(qǐng)回答：（1）某細(xì)菌固體培養(yǎng)基的組成成分是）某細(xì)菌固體培養(yǎng)基的組成成分是KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、瓊脂和蒸餾、葡萄糖、尿素、瓊脂和蒸餾水，其中凝固劑是水，其中凝固劑是_，碳源是，碳源是_，氮源，氮源是是_已知只有能合成脲酶的細(xì)菌才能在該已知只有能合成脲酶的細(xì)菌才能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，幫該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，幫該培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基培養(yǎng)基按照化學(xué)成分分類(lèi)，該培養(yǎng)基屬于按照化學(xué)成分分類(lèi)，該培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基培養(yǎng)基從同化作用類(lèi)型看，用該培養(yǎng)的細(xì)菌屬于從同化作用類(lèi)型看，用該培養(yǎng)的細(xì)菌屬于_ 瓊脂瓊脂葡萄糖葡萄糖尿素尿素選擇選擇人工合成人工合成異養(yǎng)型異養(yǎng)型二、無(wú)菌技術(shù)二、無(wú)

16、菌技術(shù) 無(wú)菌操作泛指無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。所有防止雜菌污染的方法。無(wú)論是隨后將要無(wú)論是隨后將要學(xué)到的學(xué)到的倒平板倒平板、平板劃線平板劃線操作，還是操作，還是平板稀平板稀釋涂布法釋涂布法，其操作中的每一步都需要做到，其操作中的每一步都需要做到“無(wú)菌無(wú)菌”，即，即防止外來(lái)雜菌入侵防止外來(lái)雜菌入侵。只有熟練、。只有熟練、規(guī)范地進(jìn)行無(wú)菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微規(guī)范地進(jìn)行無(wú)菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微生物。生物。 1 1）清潔和消毒）清潔和消毒2 2）滅菌）滅菌3 3）酒精燈附近進(jìn)行）酒精燈附近進(jìn)行 4) 4)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周?chē)奈锲?/p>

17、接觸避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周?chē)奈锲方佑|1.1.注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：（二）無(wú)菌技術(shù)（二）無(wú)菌技術(shù)2.2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 消毒消毒使用較使用較溫和溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物的物理或化學(xué)方法僅殺死物體體表面或內(nèi)部一部分表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生對(duì)人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。物（不包括芽孢和孢子）。滅菌滅菌使用使用強(qiáng)烈強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)的理化因素殺死物體內(nèi)所有所有的的微生物，包括芽孢和孢子。微生物，包括芽孢和孢子。1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法巴氏消毒法：70-75

18、70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化學(xué)藥劑消毒法化學(xué)藥劑消毒法: :用用75%75%酒精進(jìn)行皮酒精進(jìn)行皮膚消毒膚消毒; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源4 4、紫外線紫外線30min30min消毒消毒，照射前，可噴，照射前，可噴石炭酸或煤酚皂等消毒液加強(qiáng)消毒效果石炭酸或煤酚皂等消毒液加強(qiáng)消毒效果(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法1 1、灼燒滅菌灼燒滅菌：接種環(huán)、接種針、試接種環(huán)、接種針、試管口、瓶口管口、瓶口2 2、干熱滅菌干熱滅菌：玻璃器皿和金屬用具玻璃器皿和金屬用具3 3、高壓蒸汽滅菌高壓

19、蒸汽滅菌：100kPa100kPa、121 121 下下維持維持15-30min.15-30min.(2)滅菌的方法：滅菌的方法： 1.無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？還有什么目的？ 答：無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作答：無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。者自身被微生物感染。旁欄思考旁欄思考 2.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。的方法。 （1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)

20、皿 （2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管 （3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手實(shí)驗(yàn)操作者的雙手答：（答：（1 1）、（）、（2 2）需要滅菌；（）需要滅菌；（3 3）需要消毒。需要消毒。1. 1. 器具的滅菌器具的滅菌2. 2. 培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制3. 3. 培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的滅菌4. 4. 倒平板倒平板5. 5. 微生物接種微生物接種6. 6. 恒溫箱中培養(yǎng)恒溫箱中培養(yǎng)7. 7. 菌種的保存菌種的保存實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作三、實(shí)驗(yàn)操作之大腸桿菌的純化培養(yǎng)三、實(shí)驗(yàn)操作之大腸桿菌的純化培養(yǎng)1、制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(用于培養(yǎng)細(xì)菌用于培養(yǎng)細(xì)菌)牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配

21、方牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏牛肉膏 5.0g蛋白胨蛋白胨 10.0gNaCl 5.0g瓊脂瓊脂 20.0g將上述物質(zhì)溶解后，添加自來(lái)水，定將上述物質(zhì)溶解后，添加自來(lái)水，定容至容至1000mL1計(jì)算計(jì)算 2. 稱(chēng)量稱(chēng)量 3溶化溶化操作步驟操作步驟4滅菌滅菌: 將培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，加棉塞將培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，再放入，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋高壓蒸氣滅菌鍋。將培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包裹，放入將培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包裹，放入干熱滅菌箱干熱滅菌箱內(nèi)，內(nèi)，在在160170 下滅菌下滅菌2h。（定容之后調(diào)定容之后調(diào)PH）5倒平板倒平板: 待培養(yǎng)基冷卻到待培養(yǎng)基冷卻到

22、50 左右時(shí)，在酒精燈左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。附近倒平板。1.1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 50 左右時(shí)，才能左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？ 可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.3.平板冷凝后，為

23、什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？物嗎？為什么？ 平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以防止培基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以防止培養(yǎng)基表面的水分過(guò)快揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠養(yǎng)基表面的水分過(guò)快揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。落入培養(yǎng)基，造成污染。 空氣中的微生物可能在皿蓋與

24、皿底之間的培養(yǎng)基空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。1. 1. 器具的滅菌器具的滅菌2. 2. 培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制3. 3. 培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的滅菌4. 4. 倒平板倒平板5. 5. 微生物接種微生物接種6. 6. 恒溫箱中培養(yǎng)恒溫箱中培養(yǎng)7. 7. 菌種的保存菌種的保存整理實(shí)驗(yàn)操作整理實(shí)驗(yàn)操作1 1、平板劃線法、平板劃線法: :通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫(huà)線的操作連續(xù)畫(huà)線的操作, ,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面的表面

25、. . 在數(shù)次畫(huà)線后在數(shù)次畫(huà)線后, ,可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體, ,這就是這就是菌落菌落. .2 2、純化大腸桿菌、純化大腸桿菌微生物接種的方法：微生物接種的方法：平板劃線法平板劃線法和和稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法 單個(gè)微生物在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，會(huì)形成單個(gè)微生物在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的一個(gè)肉眼可見(jiàn)的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體子細(xì)胞群體，叫做，叫做菌落菌落。(一種微生物形成一種菌落。一種微生物形成一種菌落。)微生物的菌落微生物的菌落 每種細(xì)菌在一定條每種細(xì)菌在一定條件

26、下所形成的菌落，件下所形成的菌落，可以作可以作為菌種鑒定的重要依據(jù)為菌種鑒定的重要依據(jù)。特征：特征：大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。功能：功能：定義：定義：有鞭毛細(xì)菌菌落有鞭毛細(xì)菌菌落無(wú)鞭毛細(xì)菌菌落無(wú)鞭毛細(xì)菌菌落無(wú)鞭毛的球菌，常形成較小較厚邊緣較整齊的菌落，無(wú)鞭毛的球菌，常形成較小較厚邊緣較整齊的菌落，有鞭毛細(xì)菌形成大而扁平、邊緣波浪或鋸齒狀菌落有鞭毛細(xì)菌形成大而扁平、邊緣波浪或鋸齒狀菌落菌落細(xì)菌的菌落特征細(xì)菌的菌落特征因種而異因種而異 思考與討論：思考與討論：在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什

27、么？為什么？劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。整個(gè)操作過(guò)程中的接種次數(shù)？灼燒次數(shù)？整個(gè)操作過(guò)程中的接種次數(shù)？灼燒次數(shù)？接種接種1次，灼燒次，灼燒6次次灼燒之后為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？灼燒之后為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？在做第二次劃線及以后的劃線操作時(shí)，為什在做第二次劃線及以后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？高溫會(huì)將微生物殺死高溫會(huì)將微生物殺死充分使微生物分離開(kāi)來(lái)充分使微生物分離開(kāi)來(lái)整個(gè)操作置于火焰旁的原因？整個(gè)操作置于火焰旁的原因？防止培養(yǎng)基被雜菌污染防止培養(yǎng)基被雜菌污染2 2、稀釋涂布平板法、稀釋涂布平板法菌落在30-300適宜計(jì)數(shù)計(jì)算：已知在稀釋度數(shù)計(jì)算：已知在稀釋度數(shù)106的培養(yǎng)基中，現(xiàn)的培養(yǎng)基中，現(xiàn)0.2ml溶液中有菌落溶液中有菌落50個(gè)，求原溶液個(gè)，求原溶液1ml中有多少個(gè)微中有多少個(gè)微生物？生物？2.5X108討論：討論： 第第2 2步（涂布）應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)步（涂布）應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？菌操作？ 酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適；吸管頭