DNA的提取原理及提取技術(shù)學(xué)習(xí)教案

1、會計學(xué)1DNA的提取的提取(tq)原理及提取原理及提取(tq)技術(shù)技術(shù)第一頁，共42頁。第1頁/共42頁第二頁，共42頁。主要用于分離目的基因。第2頁/共42頁第三頁，共42頁。第3頁/共42頁第四頁，共42頁。第4頁/共42頁第五頁，共42頁。第5頁/共42頁第六頁，共42頁。第6頁/共42頁第七頁，共42頁。第7頁/共42頁第八頁，共42頁。第8頁/共42頁第九頁，共42頁。第9頁/共42頁第十頁，共42頁。(qi ngj)。第10頁/共42頁第十一頁，共42頁。第11頁/共42頁第十二頁，共42頁。第12頁/共42頁第十三頁，共42頁。第13頁/共42頁第十四頁，共42頁。1-2hDNA

2、瓊脂糖凝膠；第14頁/共42頁第十五頁，共42頁。第15頁/共42頁第十六頁，共42頁。第16頁/共42頁第十七頁，共42頁。第17頁/共42頁第十八頁，共42頁。第18頁/共42頁第十九頁，共42頁。第19頁/共42頁第二十頁，共42頁。第20頁/共42頁第二十一頁，共42頁。 組份組份 Tris-HCl （pH8.0）EDTA （pH8.0） NaCl CTAB-巰基乙醇巰基乙醇 終濃度終濃度 100 mM 20 mM 1.4M2%(W/V)0.1%（V/V）使）使用前加入用前加入Tris-HCl （pH8.0）提供一個緩沖環(huán)境，防止核酸被破壞；）提供一個緩沖環(huán)境，防止核酸被破壞； Tri

3、s (三羥甲基氨基甲烷三羥甲基氨基甲烷 )EDTA螯合螯合Mg2+或或Mn2+離子，抑制離子，抑制DNase活性；活性；NaCl 提供一個高鹽環(huán)境，使提供一個高鹽環(huán)境，使DNP充分溶解，存在充分溶解，存在(cnzi)于液相中；于液相中；CTAB溶解細(xì)胞膜，并結(jié)合核酸，使核酸便于分離；溶解細(xì)胞膜，并結(jié)合核酸，使核酸便于分離；-巰基乙醇是抗氧化劑，有效地防止酚氧化成醌，避免褐變，使酚容易去除巰基乙醇是抗氧化劑，有效地防止酚氧化成醌，避免褐變，使酚容易去除第21頁/共42頁第二十二頁，共42頁。 組份組份 Tris-HCl （pH8.0）EDTA （pH8.0）NaCl CTAB PVP40-巰基乙

4、醇巰基乙醇 終濃度終濃度 100 mM 20 mM1.4M3%(W/V)5%(W/V)2%（V/V）使）使用前加入用前加入vPVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的絡(luò)合物，能與多酚形成一種不（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的絡(luò)合物，能與多酚形成一種不溶的絡(luò)合物質(zhì)，有效去除多酚，減少溶的絡(luò)合物質(zhì)，有效去除多酚，減少DNA中酚的污染中酚的污染(wrn)；同時它也能和多糖結(jié)合，有效去除多糖。同時它也能和多糖結(jié)合，有效去除多糖。第22頁/共42頁第二十三頁，共42頁。混勻。第23頁/共42頁第二十四頁，共42頁。第24頁/共42頁第二十五頁，共42頁。第25頁/共42頁第二十六頁，共42頁。第26頁/共42頁第二十七頁，

5、共42頁。第27頁/共42頁第二十八頁，共42頁。CTAB法流程圖法流程圖植物植物(zhw)材料材料裂解裂解(li ji)液液上層上層(shngcng)溶液溶液液氮研磨液氮研磨抽提抽提細(xì)胞裂解細(xì)胞裂解干燥溶解干燥溶解離心洗滌離心洗滌酒精沉淀酒精沉淀DNA溶液溶液第28頁/共42頁第二十九頁，共42頁。第29頁/共42頁第三十頁，共42頁。第30頁/共42頁第三十一頁，共42頁。第31頁/共42頁第三十二頁，共42頁。dun)與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片結(jié)合形成沉淀，而復(fù)性的超螺旋結(jié)合形成沉淀，而復(fù)性的超螺旋質(zhì)粒質(zhì)粒DNA分子則以溶解狀態(tài)存在分子則以溶解狀態(tài)存在液相中，從而可通過離心將兩者液相中，從而可通過離心將兩者分開。分開。第32頁/共42頁第三十三頁，共42頁。n作用：酸性下質(zhì)粒作用：酸性下質(zhì)粒DNADNA復(fù)性，變復(fù)性，變性蛋白、線性性蛋白、線性DNADNA沉淀。沉淀。第33頁/共42頁第三十四頁，共42頁。第34頁/共42頁第三十五頁，共42頁。第35頁/共42頁第三十六頁，共42頁。第36頁/共42頁第三十七頁，共42頁。第37頁/共42頁第三十八頁，共42頁。第38頁/共42頁