FISH技術(shù)臨床應(yīng)用

1、FISH技術(shù)的臨床應(yīng)用技術(shù)的臨床應(yīng)用中南大學湘雅醫(yī)院血研室中南大學湘雅醫(yī)院血研室 基本原理：應(yīng)用熒光染料標記探針基本原理：應(yīng)用熒光染料標記探針DNADNA，變性成，變性成單鏈后與變性后的染色體或細胞核靶單鏈后與變性后的染色體或細胞核靶DNADNA雜交，雜交，在熒光顯微鏡下觀察并記錄結(jié)果。在熒光顯微鏡下觀察并記錄結(jié)果。生命科學中的生命科學中的“釣魚釣魚” ” 技術(shù)技術(shù) 操作流程簡圖操作流程簡圖制片制片預(yù)處理預(yù)處理FISHFISH結(jié)果分析結(jié)果分析 破壞細胞膜利于探針破壞細胞膜利于探針 雜交。雜交。 蛋白酶消化、蛋白酶消化、HCl處理處理 變性變性 雜交雜交 洗滌洗滌 復(fù)染復(fù)染 制備的質(zhì)量制備的質(zhì)量

2、 新鮮程度新鮮程度操作流程簡圖操作流程簡圖標本為新鮮細胞制片：標本為新鮮細胞制片：閾值建立閾值建立采集采集2020例正常人細胞。例正常人細胞。閾值測定：每例分析至少閾值測定：每例分析至少100100個細胞，統(tǒng)計出現(xiàn)個細胞，統(tǒng)計出現(xiàn)2 2個以上陽性信號細胞個以上陽性信號細胞數(shù)目的百分比。數(shù)目的百分比。 閾值閾值= = 平均數(shù)（平均數(shù)（M M）+ 3X+ 3X標準差（標準差（SDSD）結(jié)果判斷結(jié)果判斷每例樣本隨機計數(shù)細胞（至少每例樣本隨機計數(shù)細胞（至少100100個）個）如果檢測值如果檢測值 閾值，判定為陽性結(jié)果；閾值，判定為陽性結(jié)果；如果檢測值如果檢測值 閾值，判定為陰性結(jié)果；閾值，判定為陰性結(jié)

3、果；如果檢測值如果檢測值= =閾值，加大觀測樣本細胞數(shù)目。閾值，加大觀測樣本細胞數(shù)目。結(jié)結(jié) 果果 判判 斷斷 FISHFISH在血液及淋巴腫瘤中的應(yīng)用在血液及淋巴腫瘤中的應(yīng)用 FISHFISH技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用 FISHFISH在泌尿系腫瘤中的應(yīng)用在泌尿系腫瘤中的應(yīng)用 FISHFISH技術(shù)在宮頸癌檢測中的應(yīng)用技術(shù)在宮頸癌檢測中的應(yīng)用 其它其它FISH技術(shù)的臨床應(yīng)用技術(shù)的臨床應(yīng)用FISH在血液及淋巴腫瘤中的應(yīng)用在血液及淋巴腫瘤中的應(yīng)用趙榮趙榮 骨髓象骨髓象(CML)趙榮趙榮 血象血象 （CML）覃長江血象覃長江血象(MD/MPD)覃長江骨髓象覃長江骨髓象 (MD/MPD

4、) BCR/ABL陰性陰性(圖片來自覃長江) MD/MPDBCR/ABL陽性陽性(圖片來自趙榮) CML陸曉逸骨髓象（陸曉逸骨髓象（CLL）D13S25/P53基因陰性基因陰性 （來自陸曉逸） CSP12基因陰性基因陰性 （來自陸曉逸）PML/RARa陽性陽性 (圖片來自卜麗敏)PML/RARa陰性陰性(圖片來自彭志新)卜麗敏骨髓象卜麗敏骨髓象FISHFISH技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用染色體異常的發(fā)生機率 出生嬰兒 0.6% 先天性智力障礙（MR）患者 23% 先天性心臟病 13% SAB 夫婦 5% 死胎和 圍產(chǎn)期死亡胎兒 6.0% 自然流產(chǎn) (前三個月) 60% 唐氏綜合

5、癥唐氏綜合癥21號染色體三體號染色體三體, 95-97% 多余的染色體來自母親多余的染色體來自母親, 唐氏綜合癥與母親唐氏綜合癥與母親的年齡有關(guān)系的年齡有關(guān)系, 確切的病因不是很了解確切的病因不是很了解.活產(chǎn)新生兒發(fā)病率為活產(chǎn)新生兒發(fā)病率為1 /800 to 1 /1,100 , 唐氏綜合癥與文化、種族、唐氏綜合癥與文化、種族、社會階層以及地理區(qū)域都沒有必然的聯(lián)系。社會階層以及地理區(qū)域都沒有必然的聯(lián)系。智能較正常兒童低，認知困難，發(fā)育遲緩。他們也有很特殊的面貌，智能較正常兒童低，認知困難，發(fā)育遲緩。他們也有很特殊的面貌，通常雙眼距離較遠、眼睛向上斜、鼻梁骨平坦，嘴、牙齒及耳朵均細通常雙眼距離較

6、遠、眼睛向上斜、鼻梁骨平坦，嘴、牙齒及耳朵均細小。肌張力低。小。肌張力低。 Turner 綜合癥 1個x染色體的全部或者部分丟失 ，只發(fā)生在女性。 是最常見的染色體異常導(dǎo)致的疾病 ( 活產(chǎn)女性新生兒發(fā)病率大約為 1 / 2500 ) 身材矮小、卵巢不發(fā)育、性幼稚、 蹼頸、 腎臟和甲狀腺有問題, 骨骼畸形等 生長激素治療, 雌激素替代治療等21+13+GLP13/GLP21陰性陰性FISH在泌尿系腫瘤中的應(yīng)用在泌尿系腫瘤中的應(yīng)用 常用診斷及監(jiān)測膀胱癌 膀胱鏡檢查：病人痛苦，難以接受 細胞形態(tài)學檢測：敏感性低 尿液中抗原檢測：雖靈敏性高于細胞形態(tài)學檢測，但特異性較低，不能成為可靠的診斷指標。概 述

7、 FISH檢測：9號染色體部分（如p16位點）或全部丟失。3號、7號及17號染色體的非整倍性。膀胱癌的靈敏度大約 80%, 特異性大約 96% 非創(chuàng)傷性及非痛苦性概 述疾病名稱檢測探針標記顏色探針定位探針名稱患者中常見異常類型膀胱癌GLP P16/CSP17 紅/綠P16：9p21CSP17:17p11.1-q11.1 P16：細胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子2ACSP17:17號染色體著絲粒 P16缺失；17號染色體非整倍性 臨床意義 隨著對膀胱癌遺傳學改變的深入研究，人們發(fā)現(xiàn)9號染色體部分（如p16位點）或全部丟失是最常見遺傳學改變，且這一改變與膀胱癌的早期發(fā)生密切相關(guān)。P16為抑癌基因，通

8、過CDK4對細胞增殖分裂起負調(diào)控作用，CDK4與cyclin D形成復(fù)合物促進細胞從G1-S轉(zhuǎn)換，促進細胞有絲分裂，P16基因異常在膀胱癌發(fā)生早期出現(xiàn).膀胱癌膀胱癌FISH 探針組探針組( (一一) )疾病名稱檢測探針標記顏色探針定位探針名稱患者中常見異常類型膀胱癌CSP 7/CSP3 紅/綠CSP7: 7p11.1-q11.1 CSP 3: 3p11.1-q11.13 、7號染色體著絲粒3、7號染色體非整倍性 臨床意義膀胱癌的發(fā)展與染色體不穩(wěn)定性緊密相連，特別是與3號、7號及17號染色體的非整倍性密切相關(guān)。3、7、17 染色體的不穩(wěn)定性與腫瘤的浸潤行為有關(guān) ，3，7，17改變在病程發(fā)展中出現(xiàn)

9、。膀胱癌膀胱癌FISH 探針組探針組(二二)CSP 7/CSP3陰性陰性 CSP7/CSP3陽性陽性FISHFISH技術(shù)在宮頸癌檢測中的應(yīng)用技術(shù)在宮頸癌檢測中的應(yīng)用 傳統(tǒng)巴氏細胞學涂片&液基薄層細胞檢測(TCT） HPV病毒檢測 熒光原位雜交（FISH）檢測臨床檢測方法臨床檢測方法方方 法法特異性（）特異性（）敏感性（）敏感性（）形態(tài)學檢測形態(tài)學檢測909055-8055-80HPVHPV檢測檢測6464959584-10084-100FISHFISH90909090三種檢測方法比較三種檢測方法比較 TERCTERC（人類染色體末端酶（人類染色體末端酶 ）基因定位在）基因定位在3q26

10、.3 3q26.3 ，該基因，該基因的擴增可阻止細胞凋亡，導(dǎo)致腫瘤產(chǎn)生的擴增可阻止細胞凋亡，導(dǎo)致腫瘤產(chǎn)生 宮頸細胞由非典型性發(fā)育異常向?qū)m頸癌轉(zhuǎn)變的過程中幾乎宮頸細胞由非典型性發(fā)育異常向?qū)m頸癌轉(zhuǎn)變的過程中幾乎都伴有都伴有3 3號染色體長臂擴增。其中，涉及到的最重要的基號染色體長臂擴增。其中，涉及到的最重要的基因可能是因可能是TERCTERC基因。該基因擴增能準確區(qū)分宮頸細胞高度基因。該基因擴增能準確區(qū)分宮頸細胞高度癌前病變與低度癌前發(fā)育異常，鑒別診斷的敏感性及特異癌前病變與低度癌前發(fā)育異常，鑒別診斷的敏感性及特異性均在性均在90%90%以上；同時，這一擴增也能預(yù)測以上；同時，這一擴增也能預(yù)測52%52%96%96%的癌的癌前病變有惡變的可能前