第21講基因工程

1、第第21講講 基因工程基因工程一、基因工程的基本工具一、基因工程的基本工具 判斷正誤判斷正誤 (1)(1)限制酶只能用于切割目的基因。限制酶只能用于切割目的基因。 ( () )(2)(2)限制酶切割限制酶切割DNADNA分子具有特異性。分子具有特異性。( () )(3)(3)限制酶切割限制酶切割DNADNA后可產(chǎn)生黏性末端和平末端后可產(chǎn)生黏性末端和平末端 兩種類型。兩種類型。 ( () )(4)DNA(4)DNA連接酶能將兩堿基間通過形成氫鍵連接連接酶能將兩堿基間通過形成氫鍵連接 起來。起來。 ( () )(5)(5)E Ecolicoli DNA DNA連接酶既可連接平末端，又可連接酶既可連

2、接平末端，又可 連接黏性末端。連接黏性末端。 ( () )(6)(6)質粒是小型環(huán)狀質粒是小型環(huán)狀DNADNA分子，是基因工程常用分子，是基因工程常用 的載體。的載體。 ( () )(7)(7)載體的作用是攜帶目的基因導入受體細胞載體的作用是攜帶目的基因導入受體細胞 中中, ,使之穩(wěn)定存在并表達。使之穩(wěn)定存在并表達。 ( () )二、基因工程的操作程序二、基因工程的操作程序 填空填空 基因文庫基因文庫PCRPCR技術技術啟動子啟動子標記基因標記基因農(nóng)桿菌轉化法農(nóng)桿菌轉化法花粉管通道法花粉管通道法顯微注射顯微注射DNADNA分子雜交分子雜交分子雜交分子雜交抗原抗原抗體雜交抗體雜交個體生物學水平個

3、體生物學水平三、蛋白質工程三、蛋白質工程 判斷正誤判斷正誤 (1)(1)蛋白質工程可按照人的意愿生產(chǎn)出自然界中蛋白質工程可按照人的意愿生產(chǎn)出自然界中 不存在的蛋白質。不存在的蛋白質。 ( () )(2)(2)人類主要通過直接改造蛋白質的結構來生產(chǎn)人類主要通過直接改造蛋白質的結構來生產(chǎn) 新的蛋白質。新的蛋白質。 ( () )(3)(3)蛋白質工程是在基因工程基礎上延伸出來的蛋白質工程是在基因工程基礎上延伸出來的 第二代基因工程。第二代基因工程。 ( () )考點考點1 1 _識別序列的特點：呈現(xiàn)堿基互補對稱，無論識別序列的特點：呈現(xiàn)堿基互補對稱，無論 是奇數(shù)個堿基還是偶數(shù)個堿基，都可以找到是奇數(shù)

4、個堿基還是偶數(shù)個堿基，都可以找到 一條一條中心軸線中心軸線，如圖，如圖，中軸線兩側中軸線兩側的雙鏈的雙鏈DNADNA 上的堿基是上的堿基是反向對稱反向對稱重復排列的重復排列的。如。如: :當限制酶在它識別序列的當限制酶在它識別序列的中軸線兩側中軸線兩側將將DNADNA的的兩條鏈分別切開時，產(chǎn)生的是兩條鏈分別切開時，產(chǎn)生的是黏性末端黏性末端。而當限制酶在它識別序列的而當限制酶在它識別序列的中軸線處中軸線處切開時，切開時，產(chǎn)生的則是產(chǎn)生的則是平末端平末端。高考警示高考警示：切割質粒切割質粒需使用限制酶需使用限制酶1 1次次，切割，切割目的基因目的基因則需則需 要使用相同的限制酶要使用相同的限制酶2

5、 2次次。因為質粒是環(huán)狀。因為質粒是環(huán)狀DNADNA， 而目的基因在而目的基因在DNADNA分子鏈上。分子鏈上。高考警示高考警示：質粒質粒DNADNA分子上分子上限制酶切割位點限制酶切割位點的選擇必的選擇必須保證須保證 至少有一個標記基因是完整的至少有一個標記基因是完整的，如果標記基因，如果標記基因 全部被切開則不便于鑒定與選擇。全部被切開則不便于鑒定與選擇。 跟蹤訓練跟蹤訓練1 1 關于關于DNADNA重組技術基本工具的說法正確的是重組技術基本工具的說法正確的是( () ) A ADNADNA連接酶只能連接雙鏈連接酶只能連接雙鏈DNADNA片段互補的片段互補的 黏性末端。黏性末端。 B B細

6、菌細胞中含有的限制酶不能對自身細菌細胞中含有的限制酶不能對自身DNADNA 進行剪切。進行剪切。 C C限制酶切割限制酶切割DNADNA后一定能產(chǎn)生黏性末端后一定能產(chǎn)生黏性末端 D D天然的質粒就可以用來作為載體天然的質粒就可以用來作為載體B 跟蹤訓練跟蹤訓練2A基因比較小基因比較小，無無啟動子啟動子、終止子終止子、內含子內含子為為RNARNA聚合酶識別和結合位點，聚合酶識別和結合位點，驅動轉錄驅動轉錄mRNAmRNA使轉錄終止使轉錄終止的的DNADNA片段片段 幾個切口？幾個切口？幾個粘性末端？幾個粘性末端？生物生物種類種類植物細胞植物細胞動物細胞動物細胞微生物細胞微生物細胞常用常用方法方法

7、農(nóng)桿菌轉化法農(nóng)桿菌轉化法顯微注射技術顯微注射技術感受態(tài)細胞法感受態(tài)細胞法受體受體細胞細胞體細胞體細胞受精卵受精卵原核細胞原核細胞轉化轉化過程過程將目的基因插入將目的基因插入到到TiTi質粒的質粒的T TDNADNA上上農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌導入植物細胞導入植物細胞整合到受體細整合到受體細胞的胞的染色體染色體DNADNA上上表達表達將含有目的基將含有目的基因的表達載體因的表達載體提純提純取卵取卵( (受精卵受精卵)顯顯微注射微注射受精受精卵發(fā)育卵發(fā)育獲得獲得具有新性狀的具有新性狀的動物動物CaCa2 2處理細胞處理細胞感受態(tài)細胞感受態(tài)細胞重組表達載重組表達載體與感受態(tài)細體與感受態(tài)細胞混合胞混合感受感受態(tài)細

8、胞吸收態(tài)細胞吸收DNADNA分子分子DNA跟蹤訓練跟蹤訓練3下面是獲得抗蟲棉的技術流程示意圖。下面是獲得抗蟲棉的技術流程示意圖。有關敘述錯誤的是有關敘述錯誤的是( () )A A重組質粒構建過程中需要限制性內切酶和重組質粒構建過程中需要限制性內切酶和 DNADNA連接酶連接酶B B圖中愈傷組織分化產(chǎn)生的再生植株的基因型圖中愈傷組織分化產(chǎn)生的再生植株的基因型 一般都相同一般都相同C C卡那霉素抗性基因中含有相關限制性內切酶卡那霉素抗性基因中含有相關限制性內切酶 酶的識別位點酶的識別位點D D轉基因抗蟲棉有性生殖的后代不能穩(wěn)定保持轉基因抗蟲棉有性生殖的后代不能穩(wěn)定保持 抗蟲性狀抗蟲性狀（ ）C跟蹤

9、訓練跟蹤訓練4考點考點3 3 : :用基因工程的方法，使外源基因得到用基因工程的方法，使外源基因得到高效表達的菌類細胞株系。高效表達的菌類細胞株系。3.3.工程菌工程菌：工程菌工程菌比較比較：比較項目比較項目乳腺生物反應器乳腺生物反應器工程菌工程菌基因結構基因結構動物基因的結構與動物基因的結構與人類基因的結構基人類基因的結構基本相同本相同細菌或酵母菌等生物基細菌或酵母菌等生物基因的結構與人類基因的因的結構與人類基因的結構有較大差異結構有較大差異基因表達基因表達合成的藥物蛋白與合成的藥物蛋白與天然蛋白質相同天然蛋白質相同細菌細胞細菌細胞內內沒有內質網(wǎng)、沒有內質網(wǎng)、高爾基體高爾基體等細胞器，產(chǎn)等細

10、胞器，產(chǎn)生的藥物蛋白生的藥物蛋白可能沒有可能沒有活性活性藥物提取藥物提取從動物乳汁中提取從動物乳汁中提取從微生物細胞中提取從微生物細胞中提取生產(chǎn)設備生產(chǎn)設備 畜牧業(yè)生產(chǎn)，畜牧業(yè)生產(chǎn)， 加提取設備加提取設備工業(yè)生產(chǎn)，設備精良工業(yè)生產(chǎn)，設備精良受體細胞受體細胞動物的受精卵動物的受精卵微生物細胞微生物細胞導入目的導入目的基因方式基因方式顯微注射法顯微注射法感受態(tài)細胞法感受態(tài)細胞法生產(chǎn)條件生產(chǎn)條件不需嚴格滅菌，溫度等不需嚴格滅菌，溫度等外界條件對其影響不大外界條件對其影響不大需嚴格滅菌，嚴格需嚴格滅菌，嚴格控制工程菌所需的控制工程菌所需的溫度、溫度、pHpH、營養(yǎng)物、營養(yǎng)物質濃度等外界條件質濃度等外界

11、條件比較項目比較項目乳腺生物反應器乳腺生物反應器工程菌工程菌跟蹤訓練跟蹤訓練5 C考點考點4 4 : :跟蹤訓練跟蹤訓練61 1(2010(2010全國卷全國卷)下列敘述符合基因工程概念下列敘述符合基因工程概念 的是的是 ( () )A AB B淋巴細胞與腫瘤細胞融合，雜交瘤細胞中淋巴細胞與腫瘤細胞融合，雜交瘤細胞中 含有含有B B淋巴細胞中的抗體基因淋巴細胞中的抗體基因B B將人的干擾素基因重組到質粒后導入大腸桿將人的干擾素基因重組到質粒后導入大腸桿 菌，獲得能產(chǎn)生人干擾素的菌株菌，獲得能產(chǎn)生人干擾素的菌株C C用紫外線照射青霉菌，使其用紫外線照射青霉菌，使其DNADNA發(fā)生改變，發(fā)生改變，

12、 通過篩選獲得青霉素高產(chǎn)菌株通過篩選獲得青霉素高產(chǎn)菌株D D自然界中天然存在的噬菌體自行感染細菌后自然界中天然存在的噬菌體自行感染細菌后 其其DNADNA整合到細菌整合到細菌DNADNA上上2.2.【1212浙江浙江6 6】天然的玫瑰沒有藍色花，這是由于天然的玫瑰沒有藍色花，這是由于 缺少控制藍色色素合成的基因缺少控制藍色色素合成的基因B B，而開藍色花的，而開藍色花的 矮牽牛中存在序列已知的基因矮牽牛中存在序列已知的基因B B，現(xiàn)用基因工程，現(xiàn)用基因工程 技術培育藍玫瑰，下列操作正確的是技術培育藍玫瑰，下列操作正確的是 ( )( )A A提取矮牽牛藍色花的提取矮牽牛藍色花的mRNAmRNA，

13、經(jīng)逆轉錄獲得互補，經(jīng)逆轉錄獲得互補 的的DNADNA，再擴增基因，再擴增基因B BB B利用限制性核酸內切酶從開藍色花矮牽牛的利用限制性核酸內切酶從開藍色花矮牽牛的 基因文庫中獲取基因基因文庫中獲取基因B BC C利用利用DNADNA聚合酶將基因聚合酶將基因B B與質粒連接后導入與質粒連接后導入 玫瑰細胞玫瑰細胞D D將基因將基因B B直接導入大腸桿菌，然后感染并轉入直接導入大腸桿菌，然后感染并轉入 玫瑰細胞玫瑰細胞3.20143.2014重慶卷重慶卷 如圖是利用基因工程培育抗蟲如圖是利用基因工程培育抗蟲植物的示意圖。以下相關敘述，正確的是植物的示意圖。以下相關敘述，正確的是( () )A A

14、的構建需要限制性核酸內切酶和的構建需要限制性核酸內切酶和DNADNA聚合酶參與聚合酶參與B B侵染植物細胞后，重組侵染植物細胞后，重組TiTi質粒整合到的染色體上質粒整合到的染色體上C C的染色體上若含抗蟲基因，則就表現(xiàn)出抗蟲性狀的染色體上若含抗蟲基因，則就表現(xiàn)出抗蟲性狀D D只要表現(xiàn)出抗蟲性狀就表明植株發(fā)生了可遺傳變異只要表現(xiàn)出抗蟲性狀就表明植株發(fā)生了可遺傳變異4.20144.2014天津卷天津卷 為達到相應目的，必須通過為達到相應目的，必須通過 分子檢測的是分子檢測的是 ( () )A A攜帶鏈霉素抗性基因受體菌的篩選攜帶鏈霉素抗性基因受體菌的篩選B B產(chǎn)生抗人白細胞介素產(chǎn)生抗人白細胞介素

15、8 8抗體的雜交瘤細胞抗體的雜交瘤細胞 的篩選的篩選C C轉基因抗蟲棉植株抗蟲效果的鑒定轉基因抗蟲棉植株抗蟲效果的鑒定D D2121三體綜合征的診斷三體綜合征的診斷A A過程需使用逆轉錄酶過程需使用逆轉錄酶B B過程需使用解旋酶和過程需使用解旋酶和PCRPCR獲取目的基因獲取目的基因C C過程使用的感受態(tài)細胞可用過程使用的感受態(tài)細胞可用NaClNaCl溶液制備溶液制備D D過程可利用過程可利用DNADNA分子雜交鑒定目的基因是否分子雜交鑒定目的基因是否 已導入受體細胞已導入受體細胞5.20145.2014廣東卷廣東卷 ( (雙選雙選) )利用基因工程技術利用基因工程技術 生產(chǎn)羧酸酯酶生產(chǎn)羧酸酯

16、酶(CarE)(CarE)制劑的流程如圖所示，制劑的流程如圖所示， 下列敘述正確的是下列敘述正確的是 ( ( ) )6.20146.2014江蘇卷江蘇卷 ( (多選多選) )下列關于基因工程下列關于基因工程技術的敘述，錯誤的是技術的敘述，錯誤的是 ( ( ) )A A切割質粒的限制性核酸內切酶均特異性地切割質粒的限制性核酸內切酶均特異性地 識別識別6 6個核苷酸序列個核苷酸序列B BPCRPCR反應中溫度的周期性改變是為了反應中溫度的周期性改變是為了DNADNA聚聚合酶催化不同的反應合酶催化不同的反應C C載體質粒通常采用抗生素合成基因作為篩載體質粒通常采用抗生素合成基因作為篩選標記基因選標記

17、基因D D抗蟲基因即使成功地插入到植物細胞染色抗蟲基因即使成功地插入到植物細胞染色體上也未必能正常表達體上也未必能正常表達1 1(2010(2010全國卷全國卷)下列敘述符合基因工程概念下列敘述符合基因工程概念 的是的是 ( () )A AB B淋巴細胞與腫瘤細胞融合，雜交瘤細胞中淋巴細胞與腫瘤細胞融合，雜交瘤細胞中 含有含有B B淋巴細胞中的抗體基因淋巴細胞中的抗體基因B B將人的干擾素基因重組到質粒后導入大腸桿將人的干擾素基因重組到質粒后導入大腸桿 菌，獲得能產(chǎn)生人干擾素的菌株菌，獲得能產(chǎn)生人干擾素的菌株C C用紫外線照射青霉菌，使其用紫外線照射青霉菌，使其DNADNA發(fā)生改變，發(fā)生改變，

18、 通過篩選獲得青霉素高產(chǎn)菌株通過篩選獲得青霉素高產(chǎn)菌株D D自然界中天然存在的噬菌體自行感染細菌后自然界中天然存在的噬菌體自行感染細菌后 其其DNADNA整合到細菌整合到細菌DNADNA上上 B2.2.【1212浙江浙江6 6】天然的玫瑰沒有藍色花，這是由于天然的玫瑰沒有藍色花，這是由于 缺少控制藍色色素合成的基因缺少控制藍色色素合成的基因B B，而開藍色花的，而開藍色花的 矮牽牛中存在序列已知的基因矮牽牛中存在序列已知的基因B B，現(xiàn)用基因工程，現(xiàn)用基因工程 技術培育藍玫瑰，下列操作正確的是技術培育藍玫瑰，下列操作正確的是 ( )( )A A提取矮牽牛藍色花的提取矮牽牛藍色花的mRNAmRN

19、A，經(jīng)逆轉錄獲得互補，經(jīng)逆轉錄獲得互補 的的DNADNA，再擴增基因，再擴增基因B BB B利用限制性核酸內切酶從開藍色花矮牽牛的利用限制性核酸內切酶從開藍色花矮牽牛的 基因文庫中獲取基因基因文庫中獲取基因B BC C利用利用DNADNA聚合酶將基因聚合酶將基因B B與質粒連接后導入與質粒連接后導入 玫瑰細胞玫瑰細胞D D將基因將基因B B直接導入大腸桿菌，然后感染并轉入直接導入大腸桿菌，然后感染并轉入 玫瑰細胞玫瑰細胞A3.20143.2014重慶卷重慶卷 如圖是利用基因工程培育抗蟲如圖是利用基因工程培育抗蟲植物的示意圖。以下相關敘述，正確的是植物的示意圖。以下相關敘述，正確的是( () )

20、A A的構建需要限制性核酸內切酶和的構建需要限制性核酸內切酶和DNADNA聚合酶參與聚合酶參與B B侵染植物細胞后，重組侵染植物細胞后，重組TiTi質粒整合到的染色體上質粒整合到的染色體上C C的染色體上若含抗蟲基因，則就表現(xiàn)出抗蟲性狀的染色體上若含抗蟲基因，則就表現(xiàn)出抗蟲性狀D D只要表現(xiàn)出抗蟲性狀就表明植株發(fā)生了可遺傳變異只要表現(xiàn)出抗蟲性狀就表明植株發(fā)生了可遺傳變異D4.20144.2014天津卷天津卷 為達到相應目的，必須通過為達到相應目的，必須通過 分子檢測的是分子檢測的是 ( () )A A攜帶鏈霉素抗性基因受體菌的篩選攜帶鏈霉素抗性基因受體菌的篩選B B產(chǎn)生抗人白細胞介素產(chǎn)生抗人白

21、細胞介素8 8抗體的雜交瘤細胞抗體的雜交瘤細胞 的篩選的篩選C C轉基因抗蟲棉植株抗蟲效果的鑒定轉基因抗蟲棉植株抗蟲效果的鑒定D D2121三體綜合征的診斷三體綜合征的診斷BA A過程需使用逆轉錄酶過程需使用逆轉錄酶B B過程需使用解旋酶和過程需使用解旋酶和PCRPCR獲取目的基因獲取目的基因C C過程使用的感受態(tài)細胞可用過程使用的感受態(tài)細胞可用NaClNaCl溶液制備溶液制備D D過程可利用過程可利用DNADNA分子雜交鑒定目的基因是否分子雜交鑒定目的基因是否 已導入受體細胞已導入受體細胞5.20145.2014廣東卷廣東卷 ( (雙選雙選) )利用基因工程技術利用基因工程技術 生產(chǎn)羧酸酯酶

22、生產(chǎn)羧酸酯酶(CarE)(CarE)制劑的流程如圖所示，制劑的流程如圖所示， 下列敘述正確的是下列敘述正確的是 ( ( ) )A A、D D6.20146.2014江蘇卷江蘇卷 ( (多選多選) )下列關于基因工程技術下列關于基因工程技術 的敘述，錯誤的是的敘述，錯誤的是 ( ( ) )A A切割質粒的限制性核酸內切酶均特異性地切割質粒的限制性核酸內切酶均特異性地 識別識別6 6個核苷酸序列個核苷酸序列B BPCRPCR反應中溫度的周期性改變是為了反應中溫度的周期性改變是為了DNADNA聚合酶聚合酶 催化不同的反應催化不同的反應C C載體質粒通常采用抗生素合成基因作為篩選載體質粒通常采用抗生素

23、合成基因作為篩選 標記基因標記基因D D抗蟲基因即使成功地插入到植物細胞染色體上抗蟲基因即使成功地插入到植物細胞染色體上 也未必能正常表達也未必能正常表達A、B、C祝同學們前程似錦祝同學們前程似錦! !2.(20122.(2012福建卷福建卷) )肺細胞中的肺細胞中的letlet7 7基因表達減弱，基因表達減弱， 癌基因癌基因RASRAS表達增強，會引發(fā)肺癌。研究人員利表達增強，會引發(fā)肺癌。研究人員利 用基因工程技術將用基因工程技術將letlet7 7基因導入肺癌細胞實基因導入肺癌細胞實 現(xiàn)表達，發(fā)現(xiàn)肺癌細胞的增殖受到抑制。該基現(xiàn)表達，發(fā)現(xiàn)肺癌細胞的增殖受到抑制。該基 因工程技術基本流程如圖因

24、工程技術基本流程如圖1 1。圖圖1 1圖圖2 2限制性核酸內切限制性核酸內切( (或或限制限制) )啟動子啟動子胰蛋白胰蛋白請回答：請回答：(1)(1)進行過程時，需用進行過程時，需用_酶切開載體以插入酶切開載體以插入letlet7 7基因。載體應有基因。載體應有RNARNA聚聚合酶識別和結合的部位，以驅動合酶識別和結合的部位，以驅動letlet7 7基因轉錄，基因轉錄，該部位稱為該部位稱為_。(2)(2)進行過程時，需用進行過程時，需用_酶處理貼附在酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細胞，以利于傳代培養(yǎng)。培養(yǎng)皿壁上的細胞，以利于傳代培養(yǎng)。(3)(3)研究發(fā)現(xiàn)，研究發(fā)現(xiàn)，letlet7 7基因能影響癌基

25、因基因能影響癌基因RASRAS的的表達，其影響機理如圖表達，其影響機理如圖2 2。據(jù)圖分析，可從細胞。據(jù)圖分析，可從細胞中提取中提取_進行分子雜交，以直接檢測進行分子雜交，以直接檢測letlet7 7基因是否轉錄。肺癌細胞增殖受到抑制，基因是否轉錄。肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由于細胞中可能是由于細胞中_(RASmRNA/RAS_(RASmRNA/RAS蛋白蛋白) )含量減少引起的。含量減少引起的。RNARNARASRAS蛋白蛋白祝同學們前程似錦祝同學們前程似錦! !最近在基因工程教學，對最近在基因工程教學，對20112011年高考題學生有疑問，年高考題學生有疑問，我也解釋不清楚，就借助紹興柯

26、橋中學葉建偉老師我也解釋不清楚，就借助紹興柯橋中學葉建偉老師的解釋，選部分供大家參考。的解釋，選部分供大家參考。例題（例題（20112011年高考理綜浙江卷第年高考理綜浙江卷第6 6題）將題）將adaada（腺苷酸脫（腺苷酸脫氨酶基因）通過質粒氨酶基因）通過質粒pET28bpET28b導入大腸桿菌并成功表達腺導入大腸桿菌并成功表達腺苷酸脫氨酶。下列敘述錯誤的是苷酸脫氨酶。下列敘述錯誤的是 A A每個大腸桿菌細胞至少含一個重組質粒每個大腸桿菌細胞至少含一個重組質粒 B B每個重組質粒至少含一個限制性核酸內切酶識別位點每個重組質粒至少含一個限制性核酸內切酶識別位點 C C每個限制性核酸內切酶識別位

27、點至少插入一個每個限制性核酸內切酶識別位點至少插入一個adaada D D每個插入的每個插入的adaada至少表達一個腺苷酸脫氨酶分子至少表達一個腺苷酸脫氨酶分子參考答案：參考答案：C C 考生對考生對A A和和D D選項基本沒有異議，選項基本沒有異議，B B和和C C二個選項在師生中二個選項在師生中引起廣泛爭議，甚至有人認為試題存在科學性錯誤。下引起廣泛爭議，甚至有人認為試題存在科學性錯誤。下面是一些具有代表性的錯誤觀點和筆者（葉建偉老師）面是一些具有代表性的錯誤觀點和筆者（葉建偉老師）對相關疑難問題的闡述（節(jié)選）。對相關疑難問題的闡述（節(jié)選）。 1 1 重組質粒是否含有限制性核酸內切酶識別

28、位點重組質粒是否含有限制性核酸內切酶識別位點 認為認為B B選項表述的含義是錯誤的原因分析：選項表述的含義是錯誤的原因分析： 目的基因和質粒能夠形成重組質粒的關鍵是目的基因和目的基因和質粒能夠形成重組質粒的關鍵是目的基因和 質粒被限制性核酸內切酶切割后具有相同的粘性末端。質粒被限制性核酸內切酶切割后具有相同的粘性末端。 形成相同的粘性末端可以采用兩種方法：形成相同的粘性末端可以采用兩種方法： 用用相同的限制性核酸內切酶切割目的基因和質粒相同的限制性核酸內切酶切割目的基因和質粒； 用用同尾酶切割目的基因和質粒同尾酶切割目的基因和質粒。若選擇同尾酶分別。若選擇同尾酶分別 切割目的基因和質粒，再由切

29、割目的基因和質粒，再由DNADNA連接酶作用形成重組連接酶作用形成重組 質粒。該重組質?？赡軣o法被同尾酶中的任何一種質粒。該重組質粒可能無法被同尾酶中的任何一種 限制性核酸內切酶識別和切割。限制性核酸內切酶識別和切割。實際上基因工程技術的操作過程中會遇到很多問題，實際上基因工程技術的操作過程中會遇到很多問題，如重組質粒導入受體細胞后，目的基因的表達可能會如重組質粒導入受體細胞后，目的基因的表達可能會出現(xiàn)目的基因不表達、表達水平過低或過高、表達產(chǎn)出現(xiàn)目的基因不表達、表達水平過低或過高、表達產(chǎn)物的氨基酸序列差錯等多種表達異常情況。當出現(xiàn)目物的氨基酸序列差錯等多種表達異常情況。當出現(xiàn)目的基因的表達異

30、常時，需要回收目的基因，并對目的的基因的表達異常時，需要回收目的基因，并對目的基因進行加工修飾，最終使目的基因表達出人們所預基因進行加工修飾，最終使目的基因表達出人們所預期的效果。因此在期的效果。因此在構建重組質粒時，要求連接形成的構建重組質粒時，要求連接形成的“接點接點”序列，必須能被特定的限制性核酸內切酶識別、序列，必須能被特定的限制性核酸內切酶識別、切割，以便回收插入質粒的目的基因切割，以便回收插入質粒的目的基因2 2 質粒的每個限制性核酸內切酶識別位點是否都要插入質粒的每個限制性核酸內切酶識別位點是否都要插入目的基因目的基因認為認為C C選項表述的含義是正確的原因分析：具有一種或選項表

31、述的含義是正確的原因分析：具有一種或多種限制性核酸內切酶的單一切割位點是理想質粒載體多種限制性核酸內切酶的單一切割位點是理想質粒載體的基本條件之一，的基本條件之一，同時該切割位點就是目的基因的插入位點。也就是說如同時該切割位點就是目的基因的插入位點。也就是說如果用某一特定的限制性核酸內切酶（如果用某一特定的限制性核酸內切酶（如BamHBamH）作用于）作用于基因工程質粒載體（如基因工程質粒載體（如pET28bpET28b）只會產(chǎn)生一個切口，）只會產(chǎn)生一個切口，故認為該切口插入一個目的基因（如故認為該切口插入一個目的基因（如adaada）是目的基因）是目的基因成功表達（如合成腺苷酸脫氨酶）的前提條件。成功表達（如合成腺苷酸脫氨酶）的前提條件?；蚬こ掏ǔ２贿x擇天然質粒直接作為目的基因的載體，基因工程通常不選擇天然質粒直接作為目的基因的載體，而選擇以天然質粒為基礎，人工改造和組建形成的實用而選擇以天然質粒為基礎，人工改造和組建形成的實用質粒作為目的基因的載體。這種實用質粒不是單純?yōu)槟迟|粒作為目的基因的載體。這種實用質粒不是單純?yōu)槟骋荒康幕驑嫿ǖ?，而需要有較廣泛的使用功能，也就一目的基