家兔實(shí)驗(yàn)性彌散性血管內(nèi)凝血

1、家兔實(shí)驗(yàn)性彌散性血管內(nèi)凝血家兔實(shí)驗(yàn)性彌散性血管內(nèi)凝血Experiment of disseminated intravascular coagulation (DIC) in rabbit目的應(yīng)用靜脈注射兔腦浸液方法，復(fù)制應(yīng)用靜脈注射兔腦浸液方法，復(fù)制家兔實(shí)驗(yàn)性家兔實(shí)驗(yàn)性DICDIC。通過(guò)實(shí)驗(yàn)和幾項(xiàng)血液。通過(guò)實(shí)驗(yàn)和幾項(xiàng)血液學(xué)指標(biāo)的測(cè)定及結(jié)果分析，了解實(shí)驗(yàn)室學(xué)指標(biāo)的測(cè)定及結(jié)果分析，了解實(shí)驗(yàn)室診斷診斷DICDIC的常用方法，聯(lián)系理論知識(shí)加的常用方法，聯(lián)系理論知識(shí)加深理深深理深DICDIC的病因及發(fā)病機(jī)理。的病因及發(fā)病機(jī)理。 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.1. 稱重、固定（清醒狀態(tài)）、稱重、固定（清醒狀態(tài)）、局部浸潤(rùn)

2、麻醉局部浸潤(rùn)麻醉2.2. 手術(shù)：手術(shù)：頸動(dòng)脈插管頸動(dòng)脈插管，采集正常血標(biāo)本，采集正常血標(biāo)本(3.8%(3.8%枸櫞枸櫞酸鈉溶液酸鈉溶液0.5ml0.5ml，血液，血液4.5ml4.5ml）3.3. 造模：造模：i.v.2i.v.2兔腦浸液，兔腦浸液，60mg/kg.b.w.60mg/kg.b.w.（慢（慢,2ml/min,2ml/min）4.4. 采集采集DICDIC血標(biāo)本，離心分離血漿備用血標(biāo)本，離心分離血漿備用5.5. 測(cè)定樣本：測(cè)定樣本：KPTT,KPTT,PT,PT,Fg,Fg,3P3P6.6. 討論討論、小結(jié)、小結(jié)測(cè)定指標(biāo)和方法1.1. 白陶土部分凝血活酶時(shí)間白陶土部分凝血活酶時(shí)間（

3、Kaolin partial thromboplastin time,KPTT）玻片法（挑絲法）玻片法（挑絲法） 2.2. 凝血酶原時(shí)間凝血酶原時(shí)間( (prothrombin time,PT) )玻片法（挑玻片法（挑絲法）絲法） 3.3. 纖維蛋白原纖維蛋白原（fibrinogen,Fg）含量，飽和鹽水法）含量，飽和鹽水法4.4. 血漿魚精蛋白副凝固試驗(yàn)血漿魚精蛋白副凝固試驗(yàn)（Plasma Protamine Paracoagulation test，3P） 結(jié)果組別組別KPTT(sec.)PT(sec.)Fg(mg%)3P正常正常DIC正常正常DIC正常正常DIC正常正常DIC12345注

4、意事項(xiàng)1.1.采血時(shí)不得將動(dòng)脈夾移開，以免放血后不能及時(shí)采血時(shí)不得將動(dòng)脈夾移開，以免放血后不能及時(shí)夾閉動(dòng)脈造成放血過(guò)量和失血。夾閉動(dòng)脈造成放血過(guò)量和失血。2.2.采集抗凝血需掌握好血液采集抗凝血需掌握好血液: :抗凝劑之比例抗凝劑之比例(1:9)(1:9)并并充分混勻（顛倒混勻）。充分混勻（顛倒混勻）。3.3.注射兔腦浸液前，要做好第二次采血的一切準(zhǔn)備注射兔腦浸液前，要做好第二次采血的一切準(zhǔn)備工作，如換好新的動(dòng)脈插管（因原來(lái)插管內(nèi)可工作，如換好新的動(dòng)脈插管（因原來(lái)插管內(nèi)可能已有血栓阻塞），或向?qū)Ч軆?nèi)注入生理鹽水。能已有血栓阻塞），或向?qū)Ч軆?nèi)注入生理鹽水。4.4.注射兔腦浸液是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵步驟

5、，要緩慢推注射兔腦浸液是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵步驟，要緩慢推注注(2ml/min)(2ml/min)，同時(shí)密切注意家兔反應(yīng)，如有，同時(shí)密切注意家兔反應(yīng)，如有明顯的呼吸急促和躁動(dòng)不安明顯的呼吸急促和躁動(dòng)不安，應(yīng)立即放血。，應(yīng)立即放血。注意事項(xiàng)5.5.離心分離血漿前，必須先平衡離心管。分離出離心分離血漿前，必須先平衡離心管。分離出血漿吸入清潔試管備用。血漿吸入清潔試管備用。6.6.測(cè)測(cè)KPTTKPTT、PTPT的平皿必須清潔、干燥、無(wú)油脂。的平皿必須清潔、干燥、無(wú)油脂。KPTTKPTT試劑使用前須搖勻。試劑使用前須搖勻。7.7.測(cè)測(cè)FgFg時(shí)，血漿一旦與飽和鹽水接觸。要立即進(jìn)時(shí)，血漿一旦與飽和鹽水接觸。要

6、立即進(jìn)行充分混勻，以防產(chǎn)生局部沉淀，同樣，比濁行充分混勻，以防產(chǎn)生局部沉淀，同樣，比濁前亦要再次混勻。前亦要再次混勻。8.8.測(cè)測(cè)3P3P時(shí)，要先加血漿，再加魚精蛋白，以免魚時(shí)，要先加血漿，再加魚精蛋白，以免魚精蛋白接觸管底不潔物造成假陽(yáng)性。精蛋白接觸管底不潔物造成假陽(yáng)性。完完討論1.1. 兔腦浸液引起兔腦浸液引起DICDIC的原因和機(jī)制？的原因和機(jī)制？2.2. KPTTKPTT、PTPT、FgFg和和3P3P各指標(biāo)的臨床意義是什各指標(biāo)的臨床意義是什么？分別反應(yīng)什么變化么？分別反應(yīng)什么變化? ?3.3. KPTTKPTT、PTPT、FgFg和和3P3P的測(cè)定原理及發(fā)生變化的測(cè)定原理及發(fā)生變化的

7、原因和機(jī)制的原因和機(jī)制? ?清潔平皿和試劑清潔平皿和試劑3737預(yù)熱預(yù)熱滴加滴加20ul20ul血漿和血漿和20ul KPTT20ul KPTT試劑試劑, ,用清潔針頭混勻預(yù)熱用清潔針頭混勻預(yù)熱3min3min滴加滴加20ul 0.025mol/L20ul 0.025mol/L氯化鈣溶液氯化鈣溶液, ,立即啟動(dòng)立即啟動(dòng)秒表，同時(shí)用清潔針頭不斷混勻和挑撥秒表，同時(shí)用清潔針頭不斷混勻和挑撥一旦挑出絲狀物立即停止秒表一旦挑出絲狀物立即停止秒表記錄時(shí)間（正常值記錄時(shí)間（正常值353545s45s）KPTT測(cè)定方法清潔平皿和試劑清潔平皿和試劑3737預(yù)熱預(yù)熱滴加滴加20ul20ul血漿預(yù)熱血漿預(yù)熱1mi

8、n1min滴加滴加40ul PT40ul PT試劑，立即啟動(dòng)秒表，試劑，立即啟動(dòng)秒表，同時(shí)用清潔針頭不斷混勻和挑撥同時(shí)用清潔針頭不斷混勻和挑撥一旦挑出絲狀物立即停止秒表一旦挑出絲狀物立即停止秒表記錄時(shí)間（正常值記錄時(shí)間（正常值111113s13s）PT測(cè)定方法纖維蛋白含量測(cè)定方法試管編號(hào)試管編號(hào)1 12 23 34 4調(diào)調(diào)100%100%管管測(cè)定管測(cè)定管調(diào)調(diào)100%100%管管測(cè)定管測(cè)定管生理鹽水生理鹽水4.5ml4.5ml4.5ml4.5ml飽和鹽水飽和鹽水4.5ml4.5ml4.5ml4.5ml正常血漿正常血漿0.5ml0.5ml0.5ml0.5mlDICDIC血漿血漿0.5ml0.5ml

9、0.5ml0.5ml3737孵浴孵浴3min3min，520nm520nm波長(zhǎng)比色，讀取波長(zhǎng)比色，讀取ODOD值值纖維蛋白含量測(cè)定方法各加生理鹽水各加生理鹽水4.5ml 4.5ml 各加飽和鹽水各加飽和鹽水4.5ml4.5ml（調(diào)（調(diào)100100管）管） （測(cè)定管）（測(cè)定管） 1423正常血漿各正常血漿各0.5ml DIC0.5ml DIC血漿各血漿各0.5ml0.5ml3P試驗(yàn)試管標(biāo)記試管標(biāo)記1.1.正常正常2.DIC2.DIC正常血漿正常血漿0.5ml0.5mlDICDIC血漿血漿0.5ml0.5ml1 1魚精蛋白溶液魚精蛋白溶液50ul50ul50ul50ul輕輕搖勻，輕輕搖勻，3737

10、水浴孵浴水浴孵浴15min15min，黑色背景觀察沉淀物，黑色背景觀察沉淀物DIC動(dòng)物模型的復(fù)制方法l凝血酶凝血酶l蛇毒蛇毒l兔腦浸液兔腦浸液l內(nèi)毒素內(nèi)毒素l羊水羊水實(shí)驗(yàn)室診斷DIC的方法 篩選指標(biāo)篩選指標(biāo)：l血小板計(jì)數(shù)（血小板計(jì)數(shù)（platelet，PLT）l凝血酶原時(shí)間凝血酶原時(shí)間( (prothrombin time，PT) ) l纖維蛋白原含量（纖維蛋白原含量（fibrinogen，F(xiàn)g）l纖溶指標(biāo)：纖溶指標(biāo)：FDPFDP測(cè)定、測(cè)定、3P3P試驗(yàn)、優(yōu)球蛋白溶解試驗(yàn)、優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間、時(shí)間、D-D-二聚體，等二聚體，等實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)( (以下三項(xiàng)以上異常以下三項(xiàng)以上異常) ) 1. PT延長(zhǎng)或縮短延長(zhǎng)或縮短3s以上，以上，KPTT延長(zhǎng)或縮短延長(zhǎng)或縮短10s以上；以上；2. 血漿血小板活化產(chǎn)物含量增加：血漿血小板活化產(chǎn)物含量增加：-TG、PF4、TXB2、