chapter7-1+免疫學(xué)技術(shù)

1、第七章 免疫學(xué)技術(shù)7.1 7.1 血清學(xué)技術(shù)血清學(xué)技術(shù) ( (非標(biāo)記免疫分析技術(shù)）非標(biāo)記免疫分析技術(shù)）7.2 7.2 標(biāo)記免疫分析技術(shù)標(biāo)記免疫分析技術(shù)7.3 7.3 單克隆抗體技術(shù)單克隆抗體技術(shù)7.4 7.4 基因工程抗體技術(shù)基因工程抗體技術(shù)7.5 7.5 其它免疫學(xué)技術(shù)其它免疫學(xué)技術(shù) 概 論免疫學(xué)技術(shù)免疫學(xué)技術(shù)是指對(duì)抗原、抗體在體外所作的各種是指對(duì)抗原、抗體在體外所作的各種 反應(yīng)實(shí)驗(yàn)及抗體的制備技術(shù)。反應(yīng)實(shí)驗(yàn)及抗體的制備技術(shù)。 免疫學(xué)技術(shù)的特點(diǎn)免疫學(xué)技術(shù)的特點(diǎn): :A A、診斷：診斷：人類各種傳染病的診斷：如各型肝炎，人類各種傳染病的診斷：如各型肝炎，艾滋病艾滋病、梅毒、梅毒、 SARS S

2、ARS 、炭疽病菌等；各種腫瘤的診、炭疽病菌等；各種腫瘤的診斷；妊娠、血型、法醫(yī)血痕診斷。（凝集實(shí)驗(yàn)、康氏斷；妊娠、血型、法醫(yī)血痕診斷。（凝集實(shí)驗(yàn)、康氏試驗(yàn)試驗(yàn)( (絮狀沉淀絮狀沉淀) ) 、間接凝集抑制試驗(yàn)、間接凝集抑制試驗(yàn)、 ELISA 、 ELISA-PCR 、 Western blot 、免疫熒光方法、免疫傳感、免疫熒光方法、免疫傳感器和抗體芯片器和抗體芯片等）。等）。 B B、預(yù)防、治療：預(yù)防、治療：傳染性疾病的免疫預(yù)防和治療；腫傳染性疾病的免疫預(yù)防和治療；腫瘤的免疫預(yù)防和治療；免疫缺陷和自身免疫性疾病預(yù)瘤的免疫預(yù)防和治療；免疫缺陷和自身免疫性疾病預(yù)防和治療等。如制備疫苗（基因工程疫

3、苗）進(jìn)行預(yù)防防和治療等。如制備疫苗（基因工程疫苗）進(jìn)行預(yù)防和治療。預(yù)防性抗體（如肌注人丙種球蛋白預(yù)防傳染和治療。預(yù)防性抗體（如肌注人丙種球蛋白預(yù)防傳染性肝炎，麻疹等病毒性疾?。?，抗體靶向治療腫瘤性肝炎，麻疹等病毒性疾病），抗體靶向治療腫瘤（如單克隆抗體，基因工程抗體）。（如單克隆抗體，基因工程抗體）。2 2、動(dòng)物檢疫檢測(cè)中的應(yīng)用、動(dòng)物檢疫檢測(cè)中的應(yīng)用免疫學(xué)技術(shù)在動(dòng)物檢疫上主要應(yīng)用于檢測(cè)抗原免疫學(xué)技術(shù)在動(dòng)物檢疫上主要應(yīng)用于檢測(cè)抗原及動(dòng)物性流行病調(diào)查中檢測(cè)特異性抗體。檢測(cè)范圍及動(dòng)物性流行病調(diào)查中檢測(cè)特異性抗體。檢測(cè)范圍非常廣泛，常見的主要有非常廣泛，常見的主要有禽病禽病診斷中病毒的檢測(cè)，診斷中病毒

4、的檢測(cè)，如禽流感病毒、雞痘病毒、禽腺病毒等；如禽流感病毒、雞痘病毒、禽腺病毒等；豬豬的流行的流行性腹瀉病毒、豬囊蟲；性腹瀉病毒、豬囊蟲；牛牛的口蹄疫、瘋牛病等。如的口蹄疫、瘋牛病等。如采用酶免疫測(cè)定法，采用酶免疫測(cè)定法，Western blot。3 3、植物病毒檢測(cè)中的應(yīng)用、植物病毒檢測(cè)中的應(yīng)用免疫學(xué)方法已被植物病毒學(xué)家廣泛應(yīng)用免疫學(xué)方法已被植物病毒學(xué)家廣泛應(yīng)用于植物病毒的檢測(cè)，病毒病的普查、口岸和于植物病毒的檢測(cè)，病毒病的普查、口岸和產(chǎn)地檢疫等。如產(chǎn)地檢疫等。如ELISAELISA方法方法, ,具有靈敏度高具有靈敏度高快速等特點(diǎn)?？焖俚忍攸c(diǎn)。4 4、生物學(xué)上的應(yīng)用生物學(xué)上的應(yīng)用A A、物種的

5、分類鑒定：物種的分類鑒定：動(dòng)物、植物、微生物的鑒動(dòng)物、植物、微生物的鑒定，品種品系、血清型；各種生物之間的差異定，品種品系、血清型；各種生物之間的差異都可表現(xiàn)在抗原性不同，物種種源越遠(yuǎn)，抗原都可表現(xiàn)在抗原性不同，物種種源越遠(yuǎn)，抗原性差異越大，可用區(qū)分抗原性的血清學(xué)反應(yīng)，性差異越大，可用區(qū)分抗原性的血清學(xué)反應(yīng)，進(jìn)行包括微生物在內(nèi)的物種鑒定、物種的分類進(jìn)行包括微生物在內(nèi)的物種鑒定、物種的分類等。等。B B、分子生物學(xué)研究領(lǐng)域：分子生物學(xué)研究領(lǐng)域：在基因工程中，基因的分離、在基因工程中，基因的分離、克隆、篩選、表達(dá)產(chǎn)物的定性與定量分析、表達(dá)產(chǎn)物克隆、篩選、表達(dá)產(chǎn)物的定性與定量分析、表達(dá)產(chǎn)物的純化等均

6、涉及到免疫技術(shù)。如免疫印跡，免疫親和的純化等均涉及到免疫技術(shù)。如免疫印跡，免疫親和層析等免疫分析和分離技術(shù)。層析等免疫分析和分離技術(shù)。C C、建立血清庫(kù)建立血清庫(kù) 用于各種生物資源及生態(tài)分布的調(diào)查用于各種生物資源及生態(tài)分布的調(diào)查, ,如如: :各種植物各種植物病源菌、根瘤菌、蘇云金桿菌等（用到熒光抗體標(biāo)記病源菌、根瘤菌、蘇云金桿菌等（用到熒光抗體標(biāo)記測(cè)定技術(shù)）。測(cè)定技術(shù)）。 5 5、食品、藥品的檢測(cè)食品、藥品的檢測(cè) 用于食品中微生物的檢測(cè)，如用用于食品中微生物的檢測(cè)，如用ELISA方法檢測(cè)方法檢測(cè)食物中毒的病原菌食物中毒的病原菌，如沙門氏菌，如沙門氏菌、霉、霉菌；菌；食品中毒素食品中毒素如黃曲

7、霉毒素的如黃曲霉毒素的檢測(cè)；檢測(cè)；食品中食品中殘留農(nóng)藥殘留農(nóng)藥的的檢測(cè)；抗哮喘的藥物如茶堿檢測(cè)；抗哮喘的藥物如茶堿、抗生、抗生素如慶大霉素的素如慶大霉素的檢測(cè)。檢測(cè)。6 6、在環(huán)境保護(hù)中的應(yīng)用在環(huán)境保護(hù)中的應(yīng)用 采用夾心免疫法，免疫生物傳感器檢測(cè)采用夾心免疫法，免疫生物傳感器檢測(cè) 污染物。另外，利用固定化的單鏈抗體處理污染物。另外，利用固定化的單鏈抗體處理 污染物。污染物。 7.1 血清學(xué)技術(shù) (非標(biāo)記免疫分析技術(shù)）7.1.1 1. 用已知抗原檢測(cè)未知用已知抗原檢測(cè)未知抗體抗體2. 用已知抗體檢測(cè)未知用已知抗體檢測(cè)未知抗原抗原3. 用已知抗體檢測(cè)某些藥物用已知抗體檢測(cè)某些藥物、激素等各種、激素

8、等各種半半 抗原抗原 7.1.2 7.1.2 影響血清學(xué)反應(yīng)的因素影響血清學(xué)反應(yīng)的因素1.1.內(nèi)在因素內(nèi)在因素- -抗原抗體的性質(zhì)抗原抗體的性質(zhì)抗原抗體反應(yīng)的整體強(qiáng)度受抗原抗體反應(yīng)的整體強(qiáng)度受3 3個(gè)因素控制：個(gè)因素控制： 1) 1) 結(jié)合力結(jié)合力 2) 2) 特異性特異性 3) 3) 結(jié)合價(jià)結(jié)合價(jià) 其中結(jié)合力和特異性是反應(yīng)的關(guān)鍵因素。其中結(jié)合力和特異性是反應(yīng)的關(guān)鍵因素。 1)1)AgAg、AbAb的分子間非共價(jià)鍵的相互作用（結(jié)合力）：的分子間非共價(jià)鍵的相互作用（結(jié)合力）：鹽鍵鹽鍵( (靜電引力靜電引力) )、氫鍵結(jié)合力、氫鍵結(jié)合力、疏水作用力和范德疏水作用力和范德瓦爾力。瓦爾力?？乖贵w分子

9、間相互作用力抗原抗體分子間相互作用力鹽鍵鹽鍵氫鍵氫鍵疏疏水力水力范德瓦爾力范德瓦爾力2)2)特異性特異性: :抗原抗體反應(yīng)的專一性，這是抗抗原抗體反應(yīng)的專一性，這是抗原表位（抗原決定簇）與抗體超變區(qū)中抗原表位（抗原決定簇）與抗體超變區(qū)中抗原結(jié)合點(diǎn)之間，化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈原結(jié)合點(diǎn)之間，化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系。如果兩個(gè)抗原有相同的抗原表互補(bǔ)關(guān)系。如果兩個(gè)抗原有相同的抗原表位位- -交叉反應(yīng)。交叉反應(yīng)。3)3)結(jié)合價(jià)：結(jié)合價(jià)：AgAg為多價(jià)，為多價(jià)，AbAb為二價(jià)或二價(jià)以為二價(jià)或二價(jià)以上。多價(jià)才形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝聚物。上。多價(jià)才形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝聚物。2.2.外在因素外在因素抗抗原原抗抗體體

10、的的結(jié)結(jié)合合比比例例抗抗 原原 濃濃 度度復(fù)復(fù)合合物物沉沉淀淀量量抗原過(guò)剩抗原過(guò)?？贵w過(guò)?？贵w過(guò)剩適宜適宜抗體過(guò)剩抗體過(guò)剩, ,形形成最小的沉淀成最小的沉淀物物抗原抗體比例抗原抗體比例合適合適, ,形成最形成最大的沉淀物大的沉淀物抗原過(guò)?？乖^(guò)剩, ,形形成最小的沉淀成最小的沉淀物物p1562) 2) 電解質(zhì)（電解質(zhì)（NaClNaCl）3) pH3) pH值：值：4) 4) 溫度：溫度：7.1.3 血清學(xué)血清學(xué)分析技術(shù)主要內(nèi)容 原理：原理：可溶性抗原與相應(yīng)抗體混合后，在適量的電解質(zhì)存在的可溶性抗原與相應(yīng)抗體混合后，在適量的電解質(zhì)存在的條件下發(fā)生特異性結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物并出現(xiàn)可見的條件下發(fā)

11、生特異性結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物并出現(xiàn)可見的反應(yīng)（沉淀或沉淀線）的過(guò)程。反應(yīng)（沉淀或沉淀線）的過(guò)程。 沉淀原：沉淀原：參加反應(yīng)的可溶性抗原。參加反應(yīng)的可溶性抗原。 沉淀素：沉淀素：參加反應(yīng)的抗體。參加反應(yīng)的抗體。 可溶性抗原：可溶性抗原：抗原分子較小，如蛋白質(zhì)、多糖、類脂、細(xì)菌的抗原分子較小，如蛋白質(zhì)、多糖、類脂、細(xì)菌的外毒素、內(nèi)毒素、菌體裂解液、病毒的可溶性抗原、血清蛋外毒素、內(nèi)毒素、菌體裂解液、病毒的可溶性抗原、血清蛋白、組織浸出液等。白、組織浸出液等。根據(jù)沉淀反應(yīng)可在液相或半液相（凝膠）根據(jù)沉淀反應(yīng)可在液相或半液相（凝膠）中進(jìn)行，可分為：中進(jìn)行，可分為：液相液相毛細(xì)管沉淀反應(yīng)毛細(xì)管沉淀反

12、應(yīng)絮狀沉淀反應(yīng)絮狀沉淀反應(yīng) 免疫濁度法免疫濁度法 環(huán)狀沉淀反應(yīng)環(huán)狀沉淀反應(yīng)瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)免疫電泳免疫電泳半液相半液相p1587.1.4.1 環(huán)狀沉淀反應(yīng) (Ring precipitation reaction）原理：原理：過(guò)程：過(guò)程：用途：用途：過(guò)程：過(guò)程：原理：原理：免疫濁度法利用抗原抗體在液體內(nèi)快速形成免疫濁度法利用抗原抗體在液體內(nèi)快速形成 抗原抗體復(fù)合物反應(yīng)液中會(huì)抗原抗體復(fù)合物反應(yīng)液中會(huì)出現(xiàn)濁度出現(xiàn)濁度的特性。的特性。 可利用光學(xué)測(cè)定儀（光電比色計(jì)等）及自動(dòng)可利用光學(xué)測(cè)定儀（光電比色計(jì)等）及自動(dòng) 化分析系統(tǒng)對(duì)液相沉淀反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)?；治鱿到y(tǒng)對(duì)液相沉淀反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。 包括包括

13、透射比濁法透射比濁法 散射比濁法散射比濁法 速率散射比濁法速率散射比濁法 免疫膠乳濁度法等。免疫膠乳濁度法等。 以上幾種方法均已用于臨床體液樣品的測(cè)定。以上幾種方法均已用于臨床體液樣品的測(cè)定。特點(diǎn)：特點(diǎn)：靈敏度高、測(cè)定速度快。靈敏度高、測(cè)定速度快。例：例：AbAb濃度固定，在一定范圍內(nèi)，檢樣濁度與其中所濃度固定，在一定范圍內(nèi)，檢樣濁度與其中所含含AgAg量呈正比，在量呈正比，在495495nmnm波長(zhǎng)比色計(jì)上比濁。波長(zhǎng)比色計(jì)上比濁。載體：載體：原理：原理：過(guò)程：過(guò)程：用途：用途：?jiǎn)蜗颦傊瑪U(kuò)散單向瓊脂擴(kuò)散過(guò)程：過(guò)程：用途：用途：原理：原理：?jiǎn)蜗颦傊瑪U(kuò)散單向瓊脂擴(kuò)散 （水平板上）（水平板上）過(guò)程：

14、過(guò)程：1)1)AgAgAgAg含抗體凝膠含抗體凝膠沉沉 淀淀 環(huán)環(huán)用途：用途：雙向擴(kuò)散雙向擴(kuò)散( (抗體效價(jià)測(cè)定抗體效價(jià)測(cè)定) )Ab 2 4 8 16 32 Ag CK 雙向擴(kuò)散(組分分析)沉 淀 帶AbAgAbAg原理：原理：免疫電泳為區(qū)帶電泳與免疫雙擴(kuò)散的結(jié)合免疫電泳為區(qū)帶電泳與免疫雙擴(kuò)散的結(jié)合。 先利用區(qū)帶電泳技術(shù)將不同電荷和分子量的先利用區(qū)帶電泳技術(shù)將不同電荷和分子量的蛋白抗原在瓊脂內(nèi)分離，然后在與電泳方向平行蛋白抗原在瓊脂內(nèi)分離，然后在與電泳方向平行的方向上開槽，加入抗血清。的方向上開槽，加入抗血清。3737下使兩者擴(kuò)散，下使兩者擴(kuò)散，各區(qū)帶蛋白在相應(yīng)的位置與抗體反應(yīng)形成弧形沉各區(qū)

15、帶蛋白在相應(yīng)的位置與抗體反應(yīng)形成弧形沉淀線。淀線。過(guò)程：過(guò)程：免疫電泳（結(jié)果）免疫電泳（結(jié)果）正常人血清蛋白的免疫電泳圖象正常人血清蛋白的免疫電泳圖象特點(diǎn)：特點(diǎn)：用途：用途：1) 1) 對(duì)流免疫電泳（對(duì)流免疫電泳（counter counter immunoelectrophoresisimmunoelectrophoresis）2) 2) 火箭免疫電泳火箭免疫電泳( (rocket rocket immunoelectrophoresisimmunoelectrophoresis) )3) 3) 雙向免疫電泳雙向免疫電泳( (two dimension two dimension munoe

16、lectrophoresismunoelectrophoresis) )4) 4) 線形免疫電泳（線形免疫電泳（Line Line immunoelectrophoresisimmunoelectrophoresis）原理：原理：過(guò)程：過(guò)程：用途：用途：優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：火箭免疫電泳火箭免疫電泳rocket immunoelectrophoresis原理：原理：過(guò)程：過(guò)程：標(biāo)標(biāo) 準(zhǔn)準(zhǔn) 抗抗 原原待待 測(cè)測(cè) 抗抗 原原含含 抗抗 體體 凝凝 膠膠+用途：用途：0.5-1g/mL雙向免疫電泳雙向免疫電泳( (Two dimension Imunoelectrophoresis)過(guò)程：過(guò)程：雙雙 向向 免

17、免 疫疫 電電 泳泳 示示 意意 圖圖用途：用途：線形免疫電泳線形免疫電泳（Line immunoelectrophoresis） 過(guò)程：過(guò)程：含含Ag 1 凝膠凝膠含含Ag 2 凝膠凝膠含含Ag 3 凝膠凝膠含含Ab凝膠凝膠+ 定義：定義：1. 直接凝集反應(yīng)（直接凝集反應(yīng)（direct agglutination）2.間接凝集反應(yīng)（間接凝集反應(yīng)（indirect agglutination ）3.間接凝集抑制試驗(yàn)間接凝集抑制試驗(yàn)(indirect agglutination inhibition test)4.協(xié)同凝集試驗(yàn)（協(xié)同凝集試驗(yàn)（Coagglutination）5.庫(kù)姆斯試驗(yàn)（庫(kù)姆斯

18、試驗(yàn)（Coombs test）7.1.5.17.1.5.1直接凝集反應(yīng)直接凝集反應(yīng)（direct agglutination）原理：原理：是指細(xì)菌、紅細(xì)胞和螺旋體等是指細(xì)菌、紅細(xì)胞和螺旋體等顆粒顆粒性抗原性抗原與相應(yīng)的與相應(yīng)的抗體抗體在適量的電解質(zhì)存在的在適量的電解質(zhì)存在的條件下，經(jīng)一定時(shí)間后凝聚成肉眼可見的凝條件下，經(jīng)一定時(shí)間后凝聚成肉眼可見的凝集物。簡(jiǎn)稱凝集反應(yīng)。集物。簡(jiǎn)稱凝集反應(yīng)。 凝集原：凝集原：參加凝集反應(yīng)的顆粒性抗原。參加凝集反應(yīng)的顆粒性抗原。 凝集素：凝集素：參加凝集反應(yīng)的抗體。參加凝集反應(yīng)的抗體。過(guò)程：過(guò)程：用途：用途：標(biāo)準(zhǔn)抗標(biāo)準(zhǔn)抗A A血清血清標(biāo)準(zhǔn)抗標(biāo)準(zhǔn)抗B B血清血清O O

19、型型B B型型A A型型ABAB型型試管法：試管法：過(guò)程：過(guò)程：用途：用途：H-AgAb生理鹽水生理鹽水每管加每管加0.5ml抗原用生理鹽水稀釋到至相當(dāng)于抗原用生理鹽水稀釋到至相當(dāng)于McFarlandMcFarland比濁管第比濁管第6 6支的濃度支的濃度試管凝集反應(yīng)判斷指標(biāo)7.1.5.2 7.1.5.2 間接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng)（indirect agglutination）定義：定義：載體：載體：正向間接凝集反應(yīng)正向間接凝集反應(yīng)原理：原理：抗原：抗原：載體：載體：過(guò)程：過(guò)程：A A、抗原與載體結(jié)合抗原與載體結(jié)合（紅細(xì)胞致敏），（紅細(xì)胞致敏）， - -多數(shù)多糖抗原多數(shù)多糖抗原直接吸附直接吸附

20、 - -蛋白質(zhì)抗原：用蛋白質(zhì)抗原：用1%1%戊二醛和鞣酸處理紅細(xì)胞戊二醛和鞣酸處理紅細(xì)胞 再吸附蛋白質(zhì)抗原（再吸附蛋白質(zhì)抗原（0.005%0.005%鞣酸鞣酸3737O OC,C,處理處理1010minmin）。 - -化學(xué)鍵促進(jìn)結(jié)合：三氯化鉻、重偶氮聯(lián)苯胺、碳化學(xué)鍵促進(jìn)結(jié)合：三氯化鉻、重偶氮聯(lián)苯胺、碳 乙二胺乙二胺 B B、致敏紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體反應(yīng)致敏紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體反應(yīng) 用途用途: : 抗體的定性；定量分析抗體的定性；定量分析, ,抗毒素的檢測(cè)，如白喉抗抗毒素的檢測(cè)，如白喉抗 毒素的檢測(cè)，靈敏度可達(dá)毒素的檢測(cè)，靈敏度可達(dá)1.2 1.2 ngng/ml/ml正向間接凝集試驗(yàn)正向間接凝集試驗(yàn)醛

21、醛化化鞣酸鞣酸可溶性抗原可溶性抗原新鮮新鮮RBC醛化醛化RBC致敏RBC抗體抗體鞣酸化鞣酸化RBC產(chǎn)生血凝現(xiàn)象產(chǎn)生血凝現(xiàn)象反向間接凝集試驗(yàn)反向間接凝集試驗(yàn)（Reverse indirect hemagglutination test）原理：原理：以特異性抗體致敏載體以檢測(cè)標(biāo)本中的抗原。以特異性抗體致敏載體以檢測(cè)標(biāo)本中的抗原。過(guò)程：過(guò)程：- IgG經(jīng)胃蛋白酶處理經(jīng)胃蛋白酶處理 F（ab）2，不處理不處理 的與紅細(xì)胞結(jié)合后無(wú)活性的與紅細(xì)胞結(jié)合后無(wú)活性 - 紅細(xì)胞經(jīng)鞣酸處理紅細(xì)胞經(jīng)鞣酸處理 - F（ab）2與紅細(xì)胞結(jié)合與紅細(xì)胞結(jié)合 - 與相應(yīng)抗原反應(yīng)與相應(yīng)抗原反應(yīng)反向間接凝集試驗(yàn)反向間接凝集試驗(yàn)經(jīng)醛

22、化、經(jīng)醛化、鞣酸化的鞣酸化的RBC洗滌洗滌可溶性抗原可溶性抗原加入經(jīng)處加入經(jīng)處理的抗體理的抗體致敏致敏RBC用途：用途：1. 調(diào)查棉蚜分布（用不同蚜蟲抗原制備抗體，調(diào)查棉蚜分布（用不同蚜蟲抗原制備抗體， 用此抗體檢測(cè)草蛉中腸內(nèi)用此抗體檢測(cè)草蛉中腸內(nèi)蚜蟲抗原蚜蟲抗原） 2. 傳染病及癌癥抗原的檢測(cè)傳染病及癌癥抗原的檢測(cè)，敏感性、特異，敏感性、特異 性高。如性高。如檢測(cè)血清中乙型肝炎表面抗原和檢測(cè)血清中乙型肝炎表面抗原和 普查肝癌甲胎蛋白普查肝癌甲胎蛋白；采用聚苯乙烯乳膠為；采用聚苯乙烯乳膠為 載體的反向間接凝集試驗(yàn)，可用比濁法進(jìn)載體的反向間接凝集試驗(yàn)，可用比濁法進(jìn) 行光學(xué)檢測(cè)，檢測(cè)癌胚抗原達(dá)行光

23、學(xué)檢測(cè)，檢測(cè)癌胚抗原達(dá)1 ng/ml。7.1.5.3 7.1.5.3 間接凝集抑制試驗(yàn)間接凝集抑制試驗(yàn)原理：待檢的原理：待檢的可溶性抗原與相應(yīng)抗體混合后，經(jīng)一可溶性抗原與相應(yīng)抗體混合后，經(jīng)一定時(shí)間后加入用同一抗原致敏的載體顆粒，將因抗定時(shí)間后加入用同一抗原致敏的載體顆粒，將因抗體已被先加入的抗原結(jié)合而不能再與致敏的顆粒結(jié)體已被先加入的抗原結(jié)合而不能再與致敏的顆粒結(jié)合，因此合，因此不能出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，此為陽(yáng)性反應(yīng)不能出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，此為陽(yáng)性反應(yīng)；若待；若待測(cè)樣品中無(wú)相應(yīng)抗原，加入抗體后，再加入致敏顆測(cè)樣品中無(wú)相應(yīng)抗原，加入抗體后，再加入致敏顆粒，抗體則與致敏顆粒結(jié)合而出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。粒，抗體則與致敏顆

24、粒結(jié)合而出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。 用途：用途：定性分析，如：定性分析，如： - 妊娠鑒定妊娠鑒定：檢測(cè)尿液是否含有絨毛：檢測(cè)尿液是否含有絨毛 膜促性腺激素膜促性腺激素 標(biāo)準(zhǔn)抗原：絨毛膜促性腺激素標(biāo)準(zhǔn)抗原：絨毛膜促性腺激素 標(biāo)準(zhǔn)抗體：抗絨毛膜促性腺激素抗體標(biāo)準(zhǔn)抗體：抗絨毛膜促性腺激素抗體 載體：聚苯乙烯乳膠載體：聚苯乙烯乳膠 致敏顆粒：聚苯乙烯乳膠致敏顆粒：聚苯乙烯乳膠+絨毛膜促絨毛膜促 性腺激素性腺激素產(chǎn)產(chǎn) 生生 凝凝 集集致敏顆粒致敏顆粒標(biāo)準(zhǔn)抗體標(biāo)準(zhǔn)抗體待測(cè)抗原待測(cè)抗原凝凝 集集 抑抑 制制載體顆粒載體顆粒標(biāo)準(zhǔn)抗原標(biāo)準(zhǔn)抗原致敏顆粒致敏顆粒致敏顆粒致敏顆粒標(biāo)準(zhǔn)抗體標(biāo)準(zhǔn)抗體無(wú)待測(cè)抗原無(wú)待測(cè)抗原間接血凝抑制

25、試驗(yàn)間接血凝抑制試驗(yàn)待測(cè)抗原待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)抗體標(biāo)準(zhǔn)抗體形成抗原抗形成抗原抗體復(fù)合物體復(fù)合物加入標(biāo)準(zhǔn)抗原加入標(biāo)準(zhǔn)抗原致敏的致敏的RBCRBC發(fā)生凝集抑制發(fā)生凝集抑制間間接接血血凝凝抑抑制制試試驗(yàn)驗(yàn)結(jié)結(jié)果果7.1.5.4 協(xié)同凝集試驗(yàn)協(xié)同凝集試驗(yàn) （Coagglutination）原理：原理：反應(yīng)過(guò)程：反應(yīng)過(guò)程：協(xié)同凝集反應(yīng)協(xié)同凝集反應(yīng)含含A蛋白的金黃蛋白的金黃色葡萄球菌色葡萄球菌IgG與與IgGFc段結(jié)合的段結(jié)合的金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌相應(yīng)抗原相應(yīng)抗原發(fā)生協(xié)同凝集反應(yīng)發(fā)生協(xié)同凝集反應(yīng)7.1.5.5 庫(kù)姆斯試驗(yàn)庫(kù)姆斯試驗(yàn) （Coombs test）原理：原理：庫(kù)姆斯試驗(yàn)也叫庫(kù)姆斯試驗(yàn)也叫抗球蛋白實(shí)驗(yàn)抗球蛋白實(shí)驗(yàn)，有的抗，有的抗 體在適宜的介質(zhì)中與相應(yīng)的抗原結(jié)合后體在適宜的介質(zhì)中與相應(yīng)的抗原結(jié)合后 不出現(xiàn)可見的反應(yīng)，這種抗體稱為不完不出現(xiàn)可見的反應(yīng)，這種抗體稱為不完 全抗體，如抗紅細(xì)胞全抗體，如抗紅細(xì)胞RhRh抗原的抗體，將抗原的抗體，將 抗人球蛋白抗體抗人球蛋白抗體加到抗原與不完全抗體加到抗原與不完全抗體 的結(jié)合物