第十四章維生素類藥物的分析

1、維生素：維生素： 是維持人體正常代謝機能所必需的是維持人體正常代謝機能所必需的微量營養(yǎng)物質。微量營養(yǎng)物質。 人體不能合成維生素。人體不能合成維生素。發(fā)現(xiàn)簡史p公元前公元前3500年年-古埃及人發(fā)現(xiàn)能防治夜盲癥的物質，古埃及人發(fā)現(xiàn)能防治夜盲癥的物質，也就是后來也就是后來 的維的維A。 p1600年年-醫(yī)生鼓勵以多吃動物肝臟來治夜盲癥。醫(yī)生鼓勵以多吃動物肝臟來治夜盲癥。p1747年年-蘇格蘭醫(yī)生林德發(fā)現(xiàn)檸檬能治壞血病，也就蘇格蘭醫(yī)生林德發(fā)現(xiàn)檸檬能治壞血病，也就是后來的維是后來的維C。p1831年年-胡蘿卜素被發(fā)現(xiàn)。胡蘿卜素被發(fā)現(xiàn)。p1905年年-甲狀腺腫大被碘治愈。甲狀腺腫大被碘治愈。p1911年

2、年-波蘭化學家豐克為維生素命名。波蘭化學家豐克為維生素命名。p1915年年-科學家認為糙皮病是由于缺乏某種維生素而科學家認為糙皮病是由于缺乏某種維生素而造成的造成的 p1916年年-維生素維生素B被分離出來。被分離出來。 p1917年年-英國醫(yī)生發(fā)現(xiàn)魚肝油可治愈佝僂病，隨后斷英國醫(yī)生發(fā)現(xiàn)魚肝油可治愈佝僂病，隨后斷定這種病是定這種病是 缺乏維缺乏維D引起的。引起的。p1920年年-發(fā)現(xiàn)人體可將胡蘿卜轉化為維生素發(fā)現(xiàn)人體可將胡蘿卜轉化為維生素A。 p1922年年-維維E被發(fā)現(xiàn)。被發(fā)現(xiàn)。 p1928年年-科學家發(fā)現(xiàn)維科學家發(fā)現(xiàn)維B至少有兩種類型。至少有兩種類型。 p1933年年-維維E首次用于治療。

3、首次用于治療。 p1948年年-大劑量維大劑量維C用于治療炎癥。用于治療炎癥。 p1949年年-維維B3與維與維C用于治療精神分裂癥。用于治療精神分裂癥。 p1954年年-自由基與人體老化的關系被揭開。自由基與人體老化的關系被揭開。 p1957年年-Q10多酶被發(fā)現(xiàn)。多酶被發(fā)現(xiàn)。 p1969年年-體內超級抗氧化酶被發(fā)現(xiàn)。體內超級抗氧化酶被發(fā)現(xiàn)。 p1970年年-維維C被用于治療感冒。被用于治療感冒。 p1993年年-哈佛大學發(fā)表維生素哈佛大學發(fā)表維生素E與心臟病關系的與心臟病關系的研究結果研究結果必需維生素必需維生素 13種種 p維生素維生素A，維生素，維生素B，維生素，維生素C，維生素，維生

4、素D，維生素，維生素E，維生素，維生素K，維生素，維生素H（生（生物素），維生素物素），維生素P，維生素，維生素PP，維生素，維生素M，維生素，維生素T，維生素，維生素U，水溶性維生素。，水溶性維生素。必需維生素？必需維生素？p外源性：人體自身不可合成，需要通過外源性：人體自身不可合成，需要通過食物補充；食物補充； p微量性：人體所需量很少，但是可以發(fā)微量性：人體所需量很少，但是可以發(fā)揮巨大作用；揮巨大作用； p調節(jié)性：維生素必需能夠調節(jié)人體新陳調節(jié)性：維生素必需能夠調節(jié)人體新陳代謝或能量轉變；代謝或能量轉變； p特異性：缺乏了某種維生素后，人將呈特異性：缺乏了某種維生素后，人將呈現(xiàn)特有的病態(tài)

5、?，F(xiàn)特有的病態(tài)。 VitA、D2、D3、 E、K1 等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性 VitB族族(B1、B2、B6、B12) VitC、葉酸、煙酸、煙酰胺、葉酸、煙酸、煙酰胺分類：分類：VitMVitPP常見維生素的生理活性p維生素維生素A ：有：有VA1-3，其中，其中VA1活性最高，活性最高，又稱為視黃醇；維生素又稱為視黃醇；維生素A是眼睛中是眼睛中視紫質視紫質的原料，也是皮膚組織必需的材料，人的原料，也是皮膚組織必需的材料，人缺少它會得干眼病、夜盲癥等。缺少它會得干眼病、夜盲癥等。p對人體的生長、視覺和生殖功能都很重對人體的生長、視覺和生殖功能都很重要要 。 p維生素維生素D：又稱鈣化醇

6、，：又稱鈣化醇， 與鈣、磷代謝及植物與鈣、磷代謝及植物神經系統(tǒng)、內分泌及血管系統(tǒng)有密切關系，具神經系統(tǒng)、內分泌及血管系統(tǒng)有密切關系，具有皮質類固醇激素樣作用?？捎糜谥委煯愇恍杂衅べ|類固醇激素樣作用?？捎糜谥委煯愇恍云ぱ灼ぱ?、紅斑狼瘡紅斑狼瘡、斑禿、聚合性痤瘡、泛發(fā)性、斑禿、聚合性痤瘡、泛發(fā)性膿皰性銀屑病等膿皰性銀屑病等 ；與曬太陽有關。；與曬太陽有關。p維生素維生素E 可用于治療凍瘡、多形紅斑、結節(jié)性可用于治療凍瘡、多形紅斑、結節(jié)性紅斑、單純性紅斑、單純性紫癜紫癜、色素性紫癜性、色素性紫癜性皮膚病皮膚病、肢、肢端紫紺癥、痛經以及治療抑郁癥。端紫紺癥、痛經以及治療抑郁癥。p維生素維生素K 促進肝

7、臟合成凝血酶原及血漿因子，促進肝臟合成凝血酶原及血漿因子，與皮質類固醇激素有協(xié)同作用?？捎糜谥委熥吓c皮質類固醇激素有協(xié)同作用?？捎糜谥委熥像啊⒙择?、慢性蕁麻疹蕁麻疹、淋巴瘤伴皮膚瘙癢病等。、淋巴瘤伴皮膚瘙癢病等。p維生素維生素B1 可用于治療可用于治療濕疹濕疹、皮炎、膿皮病、皮炎、膿皮病、念珠菌病、光感性皮膚病、帶狀念珠菌病、光感性皮膚病、帶狀皰疹皰疹后遺神經后遺神經痛、多發(fā)性神經炎等。痛、多發(fā)性神經炎等。p維生素維生素B2 可用于治療脂溢性皮炎、脂溢可用于治療脂溢性皮炎、脂溢性性脫發(fā)脫發(fā)、尋常痤瘡、酒渣鼻、尋常須瘡、尋常痤瘡、酒渣鼻、尋常須瘡、口周濕疹、日光性皮炎等?？谥軡裾?、日光性皮炎等

8、。p維生素維生素B6 可用于治療脂溢性皮炎、脂溢可用于治療脂溢性皮炎、脂溢性脫發(fā)、尋常痤瘡、酒渣鼻、濕疹、滲性脫發(fā)、尋常痤瘡、酒渣鼻、濕疹、滲出性銀屑病、神經性皮炎、妊娠癢疹、出性銀屑病、神經性皮炎、妊娠癢疹、斑禿、唇炎等。斑禿、唇炎等。p維生素維生素B12 是體內多種代謝過程中必需的輔是體內多種代謝過程中必需的輔酶，參與核蛋白的合成，甲基的轉換以及脂肪酶，參與核蛋白的合成，甲基的轉換以及脂肪和糖的代謝，可用于治療慢性蕁麻疹、接觸性和糖的代謝，可用于治療慢性蕁麻疹、接觸性皮炎、早期銀屑病、皮炎、早期銀屑病、扁平疣扁平疣、水痘、帶狀皰疹、水痘、帶狀皰疹、扁平苔癬、脂溢性皮炎、光感性皮膚病等。扁平

9、苔癬、脂溢性皮炎、光感性皮膚病等。p維生素維生素C 主要用于抗炎和抗衰老，可用于治療主要用于抗炎和抗衰老，可用于治療紫癜性皮膚病、濕疹、蕁麻疹、紫癜性皮膚病、濕疹、蕁麻疹、黃褐斑黃褐斑、黑變、黑變病、特發(fā)性斑狀色素沉著、早期銀屑病、砷劑病、特發(fā)性斑狀色素沉著、早期銀屑病、砷劑皮炎等。皮炎等。 CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3-H 維生素維生素A醇醇-COCH3 維生素維生素A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 維生素維生素A棕櫚酸酯棕櫚酸酯R :第一節(jié)第一節(jié) 維生素維生素A的分析的分析全反式全反式（一）為一個具有共軛多烯側鏈的環(huán)己烯（一）為一個具有共軛多烯側鏈的環(huán)己烯1. 具有具有UV吸收

10、吸收2.2.存在多種立體異構化合物存在多種立體異構化合物結構與性質結構與性質一、一、維生素A 325.5 100% 全反式新維生素Aa 328 75% 2順新維生素Ab 320.5 24% 4順新維生素Ac 310.5 15% 2，4順異維生素Aa 323 21% 6順異維生素Ab 324 24% 2，6順max 相對生物效價相對生物效價順反異構順反異構C H2O HVitA2C H2VitA33 3.易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應CH2OHCH2OHCH3鯨醇鯨醇酸酸醛醛環(huán)環(huán)氧氧化化物物、氧氧化化劑劑紫紫外外線線、VitAVitAVitAOO2 v或有金屬離子存在時氧化

11、或有金屬離子存在時氧化v臨床使用時成酯后，溶于植物油中；陰臨床使用時成酯后，溶于植物油中；陰涼干燥處保存，還需加入涼干燥處保存，還需加入N2或一定抗氧或一定抗氧劑提高穩(wěn)定性。劑提高穩(wěn)定性。共軛多烯側鏈共軛多烯側鏈 易被氧化易被氧化（二）（二）環(huán)氧化物環(huán)氧化物OC H2OHVitA醛醛HOCVitA酸酸C OOH（三）（三）與三氯化銻發(fā)生呈色反應與三氯化銻發(fā)生呈色反應紫紫紅紅藍藍色色3SbClVitACHCl3溶解性溶解性（四）（四）不溶于水，微溶于乙醇；不溶于水，微溶于乙醇；易溶于有機溶劑和植物油等易溶于有機溶劑和植物油等(五)紫外吸收特征p共軛多烯紫外吸收；共軛多烯紫外吸收；325328nm

12、范圍內有最大吸收，可用于鑒范圍內有最大吸收，可用于鑒別和定量測定；別和定量測定；三氯化銻反應三氯化銻反應（一）（一）條件：條件： 無水、無醇無水、無醇紫紫紅紅藍藍色色 3SbClVitACHCl3鑒別試驗鑒別試驗二、二、SbCl3水水SbOCl乙醇可使碳正離子的正電荷消失乙醇可使碳正離子的正電荷消失-RCOOSbCl5+CH2藍色藍色紫紅紫紅+CH2-RCOOSbCl5VitAVitAHCl去去水水無無水水乙乙醇醇max為為326nm一個吸收峰一個吸收峰UV法法（二）（二）max為為350390nm三個吸收峰三個吸收峰去水去水VitA（VitA3）CH2CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3

13、VitAUSP 顯色劑顯色劑 磷鉬酸磷鉬酸 規(guī)定斑點顏色和規(guī)定斑點顏色和Rf值值BP 對照品法對照品法 顯色劑顯色劑 三氯化銻三氯化銻TLC法法（三）（三）立體異構體立體異構體氧化產物及光照產物氧化產物及光照產物合成中間體合成中間體去氫維生素去氫維生素A（ VitA2）去水維生素去水維生素A（ VitA3）UV法（三點校正法）法（三點校正法）（一）（一）含量測定含量測定三、三、三點校正法三點校正法1. 前提條件：前提條件：（1）雜質的吸收在）雜質的吸收在310340nm波長范圍內呈波長范圍內呈一條直線，且隨波長的增大吸收度減小；一條直線，且隨波長的增大吸收度減?。唬?）物質對光的吸收具有加和性

14、。）物質對光的吸收具有加和性。測定對象：測定對象：VitA醋酸酯醋酸酯328340316328第一法第一法 等波長差法等波長差法第二法第二法 等吸收比法等吸收比法(皂化法皂化法)32176AAA測定對象：測定對象：VitA醇醇2. 波長的選擇：波長的選擇：（1） 1 VitA的的 max（如（如VitA酯酯 328nm）（2） 2 3 分別在分別在 1的兩側各選一點的兩側各選一點第二步：求第二步：求)(%cm1樣樣 l(%)CA%)(cm1 樣樣3、測定法、測定法（1）基本步驟）基本步驟: 第一步：第一步：A選擇，選擇，A328測定或測定或A328校正校正第三步第三步 求效價求效價換換算算因因

15、數(shù)數(shù)）效效價價（樣樣樣樣 %)(cm1)(Eg/IU第四步：求標示量第四步：求標示量標標示示量量平平均均丸丸重重100g/IU 標標示示量量丸丸標標示示量量100/IU 標標示示量量平平均均丸丸重重換換算算因因數(shù)數(shù)100CA A*D*換算因數(shù)換算因數(shù)*WW*100*標示量標示量100換算因數(shù)：換算因數(shù)：%)(cm1Eg/IU純純）效效價價（換換算算因因數(shù)數(shù)單位單位E1cm數(shù)值所相當?shù)男r數(shù)數(shù)值所相當?shù)男r數(shù)（由純品計算而得）（由純品計算而得）醋醋酸酸酯酯維維生生素素 Ag344.0IU1 2907000g344. 0g101g/IU6 ）效效價價g/IU%)(cm1

16、純純）效效價價（換換算算因因數(shù)數(shù)1900 醇醇維維生生素素 Ag300.0IU1 3330000g300. 0g101g/IU6 ）效效價價g/IU%)(cm1 純純）效效價價（換換算算因因數(shù)數(shù)1830 方法：方法：（2） 第一法第一法維生素維生素A醋酸酯醋酸酯iAnm360340328316300ml/IU159S處處測測、分分別別于于溶溶液液環(huán)環(huán)己己烷烷 判斷判斷 是否在是否在326329nm之間之間max 改用第二法改用第二法是是否否 求算求算 并與規(guī)定值比較并與規(guī)定值比較328/ AAi 299.0AA811.0AA0000.1AA907.0AA555.0AA

17、328360328340328328328316328300 規(guī)定值規(guī)定值 差值差值328iA/A 判斷差值是否超過判斷差值是否超過02. 0 03%15%3%第二法第二法 校校正正328A328A第二第二法法 3403163283282523AAA.A 校校正正 計算計算 A328（校正）（校正） 用用A328計算計算有超過有超過0.02無超過無超過%100AAAf328328)(328 校校正正f VitAD膠丸中VitA的含量測定 精密稱取本品(規(guī)格10000VitAIU/丸)裝量差異項下（平均裝量0.08262g/丸）的內容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖

18、勻；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測定最大吸收波長為328nm，并在下列波長處測得吸收度為A300 ：0.354A316 ：0.561A328 ：0.628A340 ：0.523A360 ：0.216A300 /A328 ：0.555A316/A328 ：0.907A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.811A360/A328 ：0.299 求本品中維生素求本品中維生素A的含量？的含量？A300 /A328 ：0.564A316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.833A3

19、60/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 + 0.010.01 0 + 0.02 + 0.04 605.0523.0561.0628.0252.3252.3340316328328AAAA校正=%)3%15(%7 .3%100328328)(328AAAf校正 %0 .99%1001000008262. 010020125022399. 01900605. 0%100)ml100/g(C1900A%328 標標示示量量平平均均丸丸重重標標示示量量校校正正適用于維生素適用于維生素A醇醇（等吸收比法） 第一法無法消除雜質干擾時用此法第一法無法消除雜質

20、干擾時用此法 皂化法、皂化法、6/7A法法 （3）第二法）第二法i/KOHAnm334325310300ml/IU159VitAVitAS處測處測、于于稀釋至稀釋至溶解溶解異丙醇異丙醇除去植物油的干擾除去植物油的干擾甘油和脂肪酸鹽甘油和脂肪酸鹽植物油植物油醇醇醋酸酯醋酸酯皂化液皂化液揮干乙醚揮干乙醚乙醚提取乙醚提取乙醇乙醇 水溶性水溶性脂溶性脂溶性 判斷判斷 max是否在是否在323327nm之間之間取未皂化樣品采用取未皂化樣品采用色譜法純化后再測色譜法純化后再測定定 計算計算325300AA是是否否 判斷判斷 A300 /A325 是否大于是否大于0.73是是否否取未皂化樣品采用色取未皂化樣

21、品采用色譜法純化后再測定譜法純化后再測定 計算計算A325(校正校正) 334310325325260455528156A.A.A.A 校校正正%100AAAf325325)(325 校校正正03%3% 校正校正325A325A 校正校正325Af三氯化銻比色法三氯化銻比色法（二）藍藍色色 3SbClVitA優(yōu)點：優(yōu)點： 簡便簡便 快速快速max 618nm620nm標準曲線法標準曲線法 SbOClSbClOH32缺點：缺點：呈色不穩(wěn)定呈色不穩(wěn)定 （5 10s內）內）水分干擾水分干擾與標準曲線溫差與標準曲線溫差1專屬性差專屬性差三氯化銻有腐蝕性三氯化銻有腐蝕性（三）高效液相色譜法三）高效液相色

22、譜法流動相：正己烷異丙醇（流動相：正己烷異丙醇（9973）檢測波長：檢測波長：325nm第二節(jié)第二節(jié) 維生素維生素B1的分析的分析一、結構與性質一、結構與性質1.溶解性溶解性(1)易溶于水易溶于水(2)水溶液呈酸性水溶液呈酸性3.UV共軛雙鍵共軛雙鍵max = 246nm二、性質二、性質 藍色熒光藍色熒光硫色素硫色素正丁醇正丁醇 OOH2.硫色素熒光反應硫色素熒光反應4.與生物堿沉淀試劑反應與生物堿沉淀試劑反應雜原子的反應，能與某些生物堿沉淀試劑雜原子的反應，能與某些生物堿沉淀試劑反應，生成組成恒定的沉淀，可用于鑒別反應，生成組成恒定的沉淀，可用于鑒別和含量測定。和含量測定。5.氯化物的特性氯

23、化物的特性6.硫元素反應：與硫元素反應：與NaOH共熱，形成硫化共熱，形成硫化鈉，硝酸鉛生成黑色沉淀；鈉，硝酸鉛生成黑色沉淀；7.紅外光譜特征紅外光譜特征熒熒光光消消失失藍藍色色熒熒光光硫硫色色素素正正丁丁醇醇）（環(huán)環(huán)合合 HCNFeKOHNaOHVitB6321O OH專屬性反應專屬性反應二、鑒別試驗二、鑒別試驗（一）（一）硫色素反應硫色素反應CH2NNH3CNH2CH3NNaSC2H4OHONNH3CNH2HClNSCH3C2H4OHCH2NaOHNNH3CNNNaSCH3C2H4OH-H2O硫色素硫色素SCH3C2H4OHNNH3CNNH環(huán)合NNH3CNNSCH3C2H4OH H22HV

24、itB1 4242HgIHBHgIK 淡淡黃黃H+ 2KIIIHIB2 紅紅色色H+白白色色硅硅鎢鎢酸酸 H+ OH4WO12OHSiOB23222 白色扇形白色扇形苦酮酸苦酮酸 H+（二）（二）沉淀反應沉淀反應 PbSNaSVitBAcPbNaOH OHNHAgNOAgCl白白3HNO3HNO藍藍淀淀粉粉試試紙紙 KIMnOClS元素反應元素反應Cl-反應反應（三）（三）其他反應其他反應H+三、含量測定三、含量測定 HClOClOBHClOHClClBAcHg）（喹那啶紅亞甲藍喹那啶紅亞甲藍(紫紅紫紅天藍天藍)（一）（一）非水溶液滴定法非水溶液滴定法UV法法（二）（二）片劑、注射劑片劑、注射

25、劑= 421%cmE11（每片）相當于標示量的（每片）相當于標示量的%=A = ECLChP11 標示量標示量% WEA %cm 100D 100平均片重平均片重（每（每ml）相當于標示量的）相當于標示量的 標示量標示量% VEA %cm 100D 100注意p維生素維生素1的紫外吸收峰隨溶液的的紫外吸收峰隨溶液的pH變變化而不同：化而不同：pH2.0時，最大吸收波長在時，最大吸收波長在246nm處；處；pH7.0時，時，2個吸收峰：個吸收峰：232233和和266；p可采用差示分光光度法測定其含量；可采用差示分光光度法測定其含量；熒熒光光硫硫色色素素異異丁丁醇醇鐵鐵氰氰化化鉀鉀 VitBNa

26、OH（三）（三）硫色素熒光法：維生素硫色素熒光法：維生素B1的專屬性反應的專屬性反應1、+ NaOH + 鐵氰化鉀鐵氰化鉀 + 異丁醇異丁醇+ NaOH + 異丁醇異丁醇+ NaOH + 鐵氰化鉀鐵氰化鉀 + 異丁醇異丁醇+ NaOH + 異丁醇異丁醇SdAb對照液對照液供試液供試液dSbAC樣樣 C標標3、（1）靈敏度高，線性范圍寬）靈敏度高，線性范圍寬（2）專屬性強，氧化產物及代謝產物不干擾，可用）專屬性強，氧化產物及代謝產物不干擾，可用于制劑分析，體液分析等。于制劑分析，體液分析等。硫色素熒光法特點p為維生素為維生素B1的專屬性反應，可用于維生的專屬性反應，可用于維生素素B1及制劑的含量

27、測定；及制劑的含量測定；p不受氧化破壞產物的影響，結果較準確；不受氧化破壞產物的影響，結果較準確；但操作比較復雜，受干擾因素多；但操作比較復雜，受干擾因素多；p氧化劑除了鐵氰化鉀外，還可以使用氯氧化劑除了鐵氰化鉀外，還可以使用氯化汞或者溴化氰；化汞或者溴化氰；第三節(jié)第三節(jié) 維生素維生素C的分析的分析654321OOHHOO COHHCH2OHL抗壞血酸抗壞血酸結構與性質結構與性質一、一、（一）結構（一）結構二烯醇二烯醇內酯內酯兩個手性碳（兩個手性碳（C4,C5）OO HH OO CO HHC H2O H123456C3OH的的pKa = 4.17C2OH的的pKa = 11.572.酸性酸性一

28、元酸一元酸（二）性質（二）性質1.溶解性溶解性1、易溶于水、易溶于水2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性OOHHOO C OHHCH2OH123456L(+)抗壞血酸抗壞血酸活性最強活性最強手性手性C（C4、C5）3.旋光性旋光性*CH2OHOOOO C OHHCH2OHCHHOCHOHCOCOCOONa HH+OH-有活性有活性有活性有活性無活性無活性OHOO C OHHCH2OHHOO4.還原性還原性二烯醇結構二烯醇結構與堿反應與堿反應單單鈉鈉鹽鹽32CONa酮酮酸酸鹽鹽水水解解 NaOH5.水解反應水解反應OHOO C OHHCH2OHHOOHOO C OHHCH2OHNaOCOONaOCOC

29、CHOHHOCHCH2OHNa2CO3NaOH顯色糠醛衍生物糠醛吡咯脫水 H糖類的顯色反應糖類的顯色反應藍藍色色糠糠醛醛吡吡咯咯脫脫水水 HVitC50結構與糖類相似結構與糖類相似6.具糖的性質具糖的性質7.UV特征特征nmnmmaxOHmaxH6565 去去氫氫抗抗壞壞血血酸酸 OVitC利用還原性：與氧化劑的反應利用還原性：與氧化劑的反應鑒別試驗鑒別試驗二、二、OHOO C OHHCH2OHHOCH2OHOOOO C OHH O黑AgAgNOVitC3（一）與（一）與AgNO3反應反應（二）與（二）與2，6 - 二氯靛酚反應二氯靛酚反應無無色色二二氯氯靛靛酚酚， VitC62氧化型氧化型玫

30、瑰紅色玫瑰紅色H還原型還原型藍色藍色 OHOHNClHOClONClHOClOHH（玫瑰色）玫瑰色）（無色）（無色）紅紅堿堿性性酒酒石石酸酸銅銅 OCuVitC與堿性酒石酸銅反應與堿性酒石酸銅反應USP與與KMnO4反應反應 MnKMnOVitC（三）與其他氧化劑反應（三）與其他氧化劑反應（四）糖類的反應（四）糖類的反應藍色糠醛戊糖脫水三氯醋酸 VitC-CO2-H2OOC HN（藍色）（藍色）OC H O(糠醛糠醛)OCHOH3CH2OHCH（戊糖）（戊糖）NNH50(吡咯吡咯)OO CO HHC H2O HH OO HC H2O HOO CO HHHH OOH2OC COHO OCHOH3

31、CH2OHBP0.01mol/L HClnmmax243 58554511E%cm （五）（五）UV三、雜質檢查三、雜質檢查（一）溶液的澄清度與顏色檢查（一）溶液的澄清度與顏色檢查（二）鐵、銅離子的檢查（二）鐵、銅離子的檢查維生素維生素C C原料藥原料藥 片片 劑劑 注射劑注射劑維生素維生素C C原料藥原料藥糠醛縮合呈色糠醛縮合呈色催化催化V Vc c氧氧化分解化分解原子吸收法原子吸收法(三)草酸的檢查p草酸與金屬離子作用形成沉淀；所以對草酸與金屬離子作用形成沉淀；所以對Vc的原料，尤其是注射液，要進行草酸的原料，尤其是注射液，要進行草酸檢查；檢查；p加入加入CaCl2，比濁法；，比濁法；II

32、VitCH去氫抗壞血酸2指示劑指示劑 淀粉指示液淀粉指示液（一）碘量法（一）碘量法四、含量測定四、含量測定原理：利用原理：利用V Vc c強的還原性強的還原性OHOO C OHHCH2OHHO IH+OO C OHHOOCH2OHH I2+ 取本品約取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過，精密稱定，加新沸過的冷水的冷水100ml與稀醋酸與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉使溶解，加淀粉指示液指示液1ml，立即用碘滴定液（，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液顯藍色，在滴定，至溶液顯藍色，在30秒內不褪。每秒內不褪。每1ml碘滴定液碘滴定液(0.05mol/L)相當于相當于8.806mg的的

33、C6H8O6。2、方法、方法原料藥原料藥（2）酸性環(huán)境）酸性環(huán)境 稀醋酸稀醋酸 （1）新沸冷）新沸冷H2O減慢減慢VitC被被O2氧化速度氧化速度（3）立即滴定）立即滴定 趕走水中趕走水中O2減少減少O2的干擾的干擾3、討論、討論4.附加劑干擾的排除附加劑干擾的排除片劑片劑 過濾過濾注射劑注射劑 抗氧劑抗氧劑 丙酮丙酮甲醛甲醛Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 CHHOOaS3a S O+H2N H ON2252HO NH COS3a33COCHCH33CHCHCNaSO3OH33CHCHCNaSO3OH空空樣樣二二氯氯靛靛酚酚液液空空白白樣樣品品VVHAcHPO 3(

34、二二)2，6 - 二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法酚酚亞亞胺胺二二氯氯靛靛酚酚， 6 6 VitC1、原理、原理2、方法、方法自身指示終點法自身指示終點法（2）快速滴定）快速滴定 2min內內 （1）酸性環(huán)境）酸性環(huán)境 HPO3-HAc 穩(wěn)定穩(wěn)定VitC防止其他還原性物質干擾防止其他還原性物質干擾（3）亦可剩余比色測定）亦可剩余比色測定 AVitC測測二二氯氯靛靛酚酚（定量過量）（定量過量）（測剩余染料）（測剩余染料）3、討論、討論（4）缺點）缺點 需經常標定需經常標定貯存貯存一周一周不穩(wěn)定不穩(wěn)定專屬性強，多用于含專屬性強，多用于含 Vc的制劑和食品的的制劑和食品的分析分析（5）優(yōu)點）優(yōu)點（三）高

35、效液相色譜法高效液相色譜法血漿中維生素血漿中維生素C的測定的測定 標準溶液包括樣品預處理過程均需加入標準溶液包括樣品預處理過程均需加入偏磷酸，偏磷酸同時可用于血樣中的蛋偏磷酸，偏磷酸同時可用于血樣中的蛋白沉淀；當天取血當天測定；處理好的白沉淀；當天取血當天測定；處理好的樣品亦需冰箱保存樣品亦需冰箱保存第四節(jié)第四節(jié) 維生素維生素D D的分析的分析一、結構與性質一、結構與性質（一）結構（一）結構CH2HOCH3HCH3HHHCH3CH3HCH3維生素 D2(麥角骨化醇) CH2HOCH3HCH3HHHCH3CH31212345678910111314151617181920212223242526

36、27維生素D3(膽骨化醇) 1.1.性狀性狀 無色針狀結晶或白色結晶性粉無色針狀結晶或白色結晶性粉 末；無臭，無味。末；無臭，無味。2.2.溶解性溶解性 宜溶于有機溶劑，在植物油中宜溶于有機溶劑，在植物油中 略溶，在水中不溶。略溶，在水中不溶。3.3.不穩(wěn)定性不穩(wěn)定性 含有多個烯鍵，所以極不穩(wěn)含有多個烯鍵，所以極不穩(wěn) 定，宜氧化變質，效價降低，定，宜氧化變質，效價降低， 毒性增強。毒性增強。（二）性質（二）性質4 4旋光性旋光性 維生素維生素D2 6D2 6個手性碳原子個手性碳原子 維生素維生素D3 5D3 5個手性碳原子個手性碳原子5 5顯色反應顯色反應 甾類化合物甾類化合物氯仿溶液氯仿溶液

37、 黃色黃色 紅色紅色 紫色紫色 綠色綠色6 6紫外吸收特性紫外吸收特性 無水乙醇無水乙醇 265nm 265nm 維生素維生素D2 D2 為為460460490490 維生素維生素D3 D3 為為465465495495醋酐醋酐硫酸硫酸E1cm1%E1%1cm二、鑒別試驗二、鑒別試驗 （一）顯色反應（一）顯色反應1 1與醋酐與醋酐- -濃硫酸反應濃硫酸反應 氯仿溶液氯仿溶液 黃色黃色 紅色紅色 紫色紫色 綠色綠色醋酐醋酐硫酸硫酸2 2與三氯化銻反應與三氯化銻反應 本品本品1,2-1,2-二氯乙烷二氯乙烷 三氯化銻試液三氯化銻試液 橙紅色橙紅色 粉紅色粉紅色 3 3其它顯色反應其它顯色反應 維生

38、素維生素D D 三氯化鐵三氯化鐵 橙黃色橙黃色 二氯丙醇二氯丙醇 乙酰氯乙酰氯 綠色綠色 （二）比旋度鑒別（二）比旋度鑒別無水乙醇溶液無水乙醇溶液 維生素維生素D D2 2 比旋度為比旋度為102.5102.5至至107.5107.5 維生素維生素D D3 3 比旋度為比旋度為105105至至112112 （三）其它鑒別方法三）其它鑒別方法 薄層色譜法、薄層色譜法、HPLCHPLC法法制備衍生物測熔點制備衍生物測熔點 紫外、紅外吸收光譜紫外、紅外吸收光譜 （四）維生素（四）維生素D D2 2、D D3 3的區(qū)別反應的區(qū)別反應維生素維生素D D2 2 維生素維生素D D3 3 96%96%乙醇乙

39、醇 10ml 取取0.1ml0.1ml 乙醇乙醇1ml1ml和和85%85%硫酸硫酸5ml5ml 紅色紅色max570nm 黃色黃色 max495nm 三、雜質檢查三、雜質檢查（一）麥角甾醇的檢查（一）麥角甾醇的檢查維生素維生素D D2 290% %乙醇溶液乙醇溶液 洋地黃皂苷溶液洋地黃皂苷溶液 不得發(fā)生渾濁或沉淀不得發(fā)生渾濁或沉淀 （二）前維生素（二）前維生素D D的光照產物的光照產物RHO57hvhv加熱加熱HOCH2R前維生素D前維生素D維生素Dhvhvhvhv異構化hv異構化RHHO光甾醇（lumisterol）RCH3OH速甾醇（tachysterol）ROHCH2反式維生素D5,7

40、-二烯5,6-ROHCH3四、含量測定四、含量測定正相高效液相色譜法正相高效液相色譜法 （一）維生素（一）維生素D D測定法測定法 含量以單位表示含量以單位表示每單位相當于維生素每單位相當于維生素D 0.025D 0.025g g 注意：計算的是維生素注意：計算的是維生素D D及前維生素及前維生素D D經折經折 算成維生素算成維生素D D的總量的總量測定在半暗室及避免氧化的情況下進行測定在半暗室及避免氧化的情況下進行第一法：無干擾雜質第一法：無干擾雜質第二法：有第二法：有VA及其他雜質干擾及其他雜質干擾第三法：用第二法時，前第三法：用第二法時，前 VD峰受雜質干擾峰受雜質干擾 僅僅VD峰可分離

41、峰可分離 第一法第一法內標物：鄰苯二甲酸二甲酯內標物：鄰苯二甲酸二甲酯色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗：色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗：填充劑：硅膠填充劑：硅膠流動相：正己烷流動相：正己烷-正戊醇（正戊醇（997：3）檢測波長：檢測波長：254nm無干擾雜質無干擾雜質維維生生素素D3光照光照前維生素前維生素D3反式維生素反式維生素D3維生素維生素D3速甾醇速甾醇D3與維生素與維生素D3的比保的比保 留留 時時 間間分離度分離度1.01.0溶液組成溶液組成先后進樣先后進樣5次，維生素次，維生素D3 峰面積的峰面積的 RSD2.0 % 0.50.61.01.1系統(tǒng)適用系統(tǒng)適用性試驗性試驗校正因子測定：校正因子測

42、定：維生素維生素D的校正因子的校正因子: f1=Asmi/Aims前維生素前維生素D折算成維生素折算成維生素D的校正因子的校正因子:f2=（Asmr-f1msAr1）/（Ar2ms）含量測定：計算維生素含量測定：計算維生素D及前維生素及前維生素D折算成折算成 維生素維生素D的總量的總量mi=（f1Ai1+f2Ai2）ms/As第二法第二法第一步：皂化提取第一步：皂化提取供試品供試品OH-加熱回流加熱回流冷卻冷卻乙醚提取乙醚提取乙醚提取液乙醚提取液揮干乙醚揮干乙醚殘渣殘渣甲醇溶解甲醇溶解供試溶液供試溶液A有有VA及其他雜質干擾及其他雜質干擾第二步：分離收集第二步：分離收集供供試試品品溶溶液液AR

43、P-HPLC維生素維生素D前維生素前維生素D維生素維生素A及及其他雜質其他雜質疊疊峰峰分分離離收集收集供供試試品品溶溶液液B維生素維生素D及前及前維生素維生素D第三步：按第一法進行含量測定（內標法）第三步：按第一法進行含量測定（內標法）揮干揮干內標的正內標的正己烷溶液己烷溶液溶解溶解第三法第三法第一步：皂化提取第一步：皂化提取同第二法得供試品溶液同第二法得供試品溶液A第二步：第二步：供供試試品品溶溶液液ARP-HPLC維生素維生素D前維生素前維生素D維生素維生素A及及其他雜質其他雜質疊疊峰峰分分離離供試品溶液供試品溶液C收集收集揮干揮干異辛烷溶解異辛烷溶解90、1.5h揮干揮干正己烷正己烷溶解

44、溶解前維生素前維生素D維生素維生素D第三步：用第一法色譜條件按外標法計算含量第三步：用第一法色譜條件按外標法計算含量用第二法時，前用第二法時，前 VD峰受雜質干擾峰受雜質干擾苯并二氫吡喃醇苯并二氫吡喃醇第五節(jié)第五節(jié) 維生素維生素E的分析的分析OHO 一、結構與性質一、結構與性質（一）結構（一）結構OR1HOR2CH3名名 稱稱R1R2相對活性相對活性-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*生物效價 右旋體 ： 消旋體 = 1.4 ：10（天然品）（天然品）（合成品）（合成品）CH3COOCH3CH3CH3CH3CH3CH3H3CH3COdl生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯（二）性質（二）性質1、溶解性：易溶于有機溶劑，不溶于水、溶解性：易溶于有機溶劑，不溶于水4、UV：乙醇溶液中：乙醇溶液中UV284nm2、水解性：酯鍵易水解、水解性：酯鍵易水解 OorOHHVitE醌醌型型化化合合物物生生育育酚酚3、氧化性：無氧條