08化妝品的微生物學(xué)檢查ppt課件

1、第八章化裝品的微生物學(xué)檢查1化裝品的衛(wèi)生規(guī)范化裝品微生物學(xué)檢查根底知識(shí)化裝品中微生物總數(shù)檢查化裝品中控制菌檢查2一、2007版“化裝品衛(wèi)生規(guī)范粘膜用、嬰兒及兒童用化裝品眼部及口唇等細(xì)菌菌落總數(shù)不得大于500CFU/mL 或500CFU/g。其他化裝品細(xì)菌菌落總數(shù)不得大于1000CFU/mL 或1000CFU/g3一切化裝品霉菌和酵母菌總數(shù)不得大于100CFUmL 或100CFUg每克或每毫升產(chǎn)品中不得檢出糞大腸菌群、銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌。4二、檢查的必備知識(shí)1.采樣采樣應(yīng)具有代表性。從兩個(gè)包裝單位以上的樣品中共取10g 或10mL作為檢驗(yàn)量。樣品應(yīng)嚴(yán)厲堅(jiān)持原有的包裝形狀。容器不應(yīng)有破裂

2、，在檢驗(yàn)前不得翻開，防止樣品被污染。接到樣品后，應(yīng)立刻登記，編寫檢驗(yàn)序號(hào)，并按檢驗(yàn)要求盡快檢驗(yàn)。及時(shí)檢驗(yàn)的樣品應(yīng)放在室溫陰涼枯燥處，不要冷藏或冷凍。5二、檢查的必備知識(shí)1.采樣假設(shè)樣品需同時(shí)做多種分析，如細(xì)菌、毒理、化學(xué)等，那么宜先取出部分樣品做細(xì)菌檢驗(yàn)，再將剩余樣品做其它分析。在檢驗(yàn)過程中，從翻開包裝到全部檢驗(yàn)操作終了，均須防止微生物的再污染和分散，所用器皿及資料均應(yīng)事先滅菌，全部操作應(yīng)在無菌室內(nèi)進(jìn)展，或在相應(yīng)條件下，按無菌操作規(guī)定進(jìn)展。6二、檢查的必備知識(shí)1.采樣如檢出糞大腸菌群或其它致病菌，自報(bào)揭顯露之日起該菌種及被檢樣品應(yīng)保管一個(gè)月。7二、檢查的必備知識(shí)2.供檢樣品供試品的制備水溶性液

3、體樣品樣品10mL90mL生理鹽水1:10供試液8二、檢查的必備知識(shí)2.供檢樣品供試品的制備油性液體樣品5mL滅菌液體石蠟1:10供試液均質(zhì)器10mL滅菌吐溫80404410mL樣品混勻10min75mL 4044滅菌生理鹽水4044乳化9二、檢查的必備知識(shí)2.供檢樣品供試品的制備親水性半固體膏、霜、乳劑樣品振蕩90mL生理鹽水上清液作為1:10供試液10g樣品15min膏、霜?jiǎng)┘僭O(shè)用均質(zhì)器，混合均質(zhì)12min即可。10二、檢查的必備知識(shí)2.供檢樣品供試品的制備疏水性半固體樣品10mL滅菌液體石蠟1:10供試液均質(zhì)器10mL滅菌吐溫80404410g樣品混勻10min70mL 4044滅菌生理

4、鹽水4044乳化膏、霜?jiǎng)┘僭O(shè)用均質(zhì)器，混合均質(zhì)35min即可。11二、檢查的必備知識(shí)2.供檢樣品供試品的制備固體樣品振蕩90mL生理鹽水上清液作為1:10供試液10g樣品15min12三、細(xì)菌、真菌總數(shù)檢查1.意義測(cè)定總數(shù)主要是作為斷定化裝品被細(xì)菌、霉菌及酵母菌污染程度的標(biāo)志，也可以察看化裝品中細(xì)菌、霉菌及酵母菌的性質(zhì)和在化裝品中的繁衍動(dòng)態(tài)，以便對(duì)樣品進(jìn)展衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)時(shí)提供科學(xué)根據(jù)。13三、細(xì)菌、真菌總數(shù)檢查2.培育基、培育溫度和時(shí)間檢查菌培養(yǎng)基名稱培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時(shí)間細(xì)菌卵磷脂、吐溫80-營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂36148h2h真菌虎紅瓊脂28272h2h14三、細(xì)菌、真菌總數(shù)檢查3.方法平皿法數(shù)據(jù)處置混合平

5、板的制備細(xì)菌、真菌的培育檢查結(jié)果、察看與計(jì)數(shù)供試液的制備書寫檢驗(yàn)記錄單15 細(xì)菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)的操作過程10-110-210-210-110-110-210-2 10-1對(duì)照對(duì)照對(duì)照對(duì)照1.0ml倒置培育48h1h361卵磷脂、吐溫80-營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂282虎紅瓊脂倒置培育72h2h9.0ml 稀釋液10g/ml供試品 9.0ml10-210-11.0ml16三、細(xì)菌、真菌總數(shù)檢查4.操作本卷須知1.盡量使菌細(xì)胞分散開，使每個(gè)菌細(xì)胞生成一個(gè)菌落，否那么將會(huì)導(dǎo)致艱苦的技術(shù)誤差。 2.為防止細(xì)菌增殖及產(chǎn)生菌苔，制成供試液后，應(yīng)盡快稀釋，注皿。普通稀釋后應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)操作終了。 17三、細(xì)菌、真菌總

6、數(shù)檢查4.操作本卷須知3.運(yùn)用吸量管時(shí)，應(yīng)小心沿管壁參與，不用觸及管內(nèi)溶液，以防吸管尖端外側(cè)黏附的溶液混入其中。 4.留意抑菌景象。由于防腐劑未被中和，往往使平板計(jì)數(shù)結(jié)果受影響，如低稀釋時(shí)菌落少。而高釋釋度時(shí)菌落數(shù)反而增大。遇此情況應(yīng)反復(fù)檢驗(yàn)，以確定是防腐劑影響還是操作技術(shù)誤差。 18三、細(xì)菌、真菌總數(shù)檢查4.操作本卷須知5.為檢查和控制滅菌效果，應(yīng)做空白對(duì)照，以檢驗(yàn)所運(yùn)用的物品能否徹底滅菌及檢驗(yàn)過程能否無菌操作。 6.為便于區(qū)別化裝品中的顆粒與菌落，可在每100mL 卵磷脂吐溫80 營(yíng)養(yǎng)瓊脂中參與1mL0.5的TTC 溶液，如有細(xì)菌存在，培育后菌落呈紅色，而化裝品的顆粒顏色無變化。19三、細(xì)

7、菌、真菌總數(shù)檢查5.菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告方法 宜選取細(xì)菌、酵母菌平均菌落數(shù)30300之間、霉菌平均菌落數(shù)550之間的稀釋級(jí)，作為菌數(shù)報(bào)告取兩位有效數(shù)字的根據(jù)。 1當(dāng)只需一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時(shí)，即以該平皿菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù); 2假設(shè)有兩個(gè)稀釋度，其平均菌落數(shù)均在30 個(gè)300 個(gè)之間，那么應(yīng)求出兩菌落總數(shù)之比值來決議，假設(shè)其比值小于或等于2，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)，假設(shè)大于 2 那么報(bào)告其中稀釋度較低的平皿的菌落數(shù)20三、細(xì)菌、真菌總數(shù)檢查5.菌落計(jì)數(shù)及報(bào)告方法 3假設(shè)一切稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300 個(gè)，那么應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之; 4假設(shè)一切稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30

8、 個(gè)，那么應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之; 5假設(shè)一切稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30 300 個(gè)之間，其中一個(gè)稀釋度大于300 個(gè)，而相鄰的另一稀釋度小于30 個(gè)時(shí)，那么以接近30 或300 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之； 6假設(shè)一切的稀釋度均無菌生長(zhǎng)，報(bào)告數(shù)為每g 或每mL 小于10CFU;21例次不同稀釋度平均菌落數(shù)兩稀釋度菌數(shù)之比菌落總數(shù)(CFU/mL或CFU/g)報(bào)告方式(CFU/mL 或CFU/g)10-110-210-31136516420-1640016000或1.6*10422760295461.63800038000或3.8*10432890271602.227

9、10027100或2.7*1044不可計(jì)4650513-513000513000或5.1*105527115-270270或2.7*1026不可計(jì)30512-3050031000或3.1*1047000-1*1022四、控制菌檢查檢查工程1陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)：應(yīng)無菌生長(zhǎng)。2陽性對(duì)照實(shí)驗(yàn)：供試品+陽性對(duì)照菌，應(yīng)檢出相應(yīng)的陽性對(duì)照菌。 3供試品控制菌檢查：依相應(yīng)的檢查方法進(jìn)展。 23四、控制菌檢查檢查流程供試品增菌培育分別培育純培育染色鏡檢生化反響實(shí)驗(yàn)報(bào)告結(jié)果24四、控制菌檢查檢查流程1.增菌培育目的使被檢藥物中的被檢菌增殖，防止出現(xiàn)漏檢。25四、控制菌檢查檢查流程2.分別培育目的經(jīng)增殖培育后,被檢菌大

10、量繁衍，同時(shí)其他一些雜菌也出現(xiàn)增殖。因此分別培育能使目的菌從混合菌中分別出來。26四、控制菌檢查檢查流程3.純培育目的只是大量增殖被檢菌，用于后面的進(jìn)一步檢驗(yàn)。27四、控制菌檢查檢查流程4.染色鏡檢目的初步鑒定，察看細(xì)菌的形狀大小。28四、控制菌檢查檢查流程5.生化實(shí)驗(yàn)?zāi)康淖罱K的鑒定根據(jù)，結(jié)合染色鏡檢得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果，填寫檢驗(yàn)報(bào)告。29四、控制菌檢查糞大腸菌群檢查糞大腸菌群 糞大腸菌群系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌，在44.50.5培育24h48h 能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣。30四、控制菌檢查糞大腸菌群檢查糞大腸菌群檢查意義 糞大腸菌群主要存在于溫血?jiǎng)游锛S便中，隨糞便排出體外后可直接污染化裝

11、品，假設(shè)產(chǎn)品中檢出該菌群，闡明該產(chǎn)品遭到糞便污染，能夠存在腸道致病菌并引起疾病，是評(píng)價(jià)化裝品衛(wèi)生質(zhì)量的重要目的之一。31四、控制菌檢查糞大腸菌群檢查產(chǎn)酸：黃色產(chǎn)氣：氣泡產(chǎn)酸產(chǎn)氣書寫檢驗(yàn)記錄單不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣增菌培育供試液的制備配培育基和稀釋液檢查結(jié)果判別44 0.52428h分別培育蛋白胨水培育最終結(jié)果判別44 0.5242h靛基質(zhì)特征菌落361 1824h雙倍膽鹽乳糖MEMB瓊脂液面玫瑰紅色紫黑色糞大腸菌群檢查流程圖32雙倍乳糖膽鹽培育基EMB瓊脂培育基靛基質(zhì)實(shí)驗(yàn)氣泡，培育基呈黃色紫黑色金屬光澤玫瑰紅色液面33四、控制菌檢查糞大腸菌群檢查糞大腸菌群檢查結(jié)果報(bào)告 根據(jù)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，平板上有典型

12、菌落，并經(jīng)證明為革蘭氏陰性短桿菌，靛基質(zhì)實(shí)驗(yàn)陽性，那么可報(bào)告被檢樣品中檢出糞大腸菌群。34四、控制菌檢查銅綠假單胞菌檢查銅綠假單胞菌 銅綠假單胞菌屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能產(chǎn)生綠膿菌素。此外還能液化明膠，復(fù)原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在421條件下能生長(zhǎng)。35四、控制菌檢查銅綠假單胞菌檢查銅綠假單胞菌檢查意義 銅綠假單胞菌在特殊情況下可引起皮膚化膿感染、泌尿道感染、中耳炎等。外傷及燒傷患者感染后最易引起化膿，并引起敗血癥。為保證消費(fèi)者平安，化裝品中不得檢出銅綠假單胞菌。36四、控制菌檢查銅綠假單胞菌檢查最終結(jié)果判別增菌培育供試液的制備書寫檢驗(yàn)記錄單分別純化無菌落或無特征菌落配培育

13、基和稀釋液革蘭染色、鏡檢 氧化酶實(shí)驗(yàn) 綠膿菌素實(shí)驗(yàn)生化實(shí)驗(yàn) 硝酸鹽復(fù)原實(shí)驗(yàn) 42生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn) 明膠液化實(shí)驗(yàn)銅綠假單胞菌檢查流程圖SCDLP培育基十六烷三甲基溴化銨瓊脂3611824h3611824h特征菌落灰白色、扁平、周圍有水溶性藍(lán)綠色素37十六烷三甲基溴化銨平板SCDLP培育基黃綠色菌膜灰白色潮濕氧化酶實(shí)驗(yàn)粉紅/紫紅色38綠膿菌素實(shí)驗(yàn)鹽酸層呈粉紫色氯仿層呈藍(lán)綠色硝酸鹽復(fù)原產(chǎn)氣實(shí)驗(yàn)N2明膠液化實(shí)驗(yàn)明膠培育基高層明膠液化39四、控制菌檢查銅綠假單胞菌檢查銅綠假單胞菌檢查結(jié)果報(bào)告 被檢樣品經(jīng)增菌分別培育后，經(jīng)證明為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素實(shí)驗(yàn)皆為陽性者，即可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌；如

14、綠膿菌素實(shí)驗(yàn)陰性而液化明膠、硝酸鹽復(fù)原產(chǎn)氣和42生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)三者皆為陽性時(shí)，仍可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。40四、控制菌檢查金黃色葡萄球菌檢查金黃色葡萄球菌 金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀陳列，無芽胞，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。41四、控制菌檢查金黃色葡萄球菌檢查金黃色葡萄球菌檢查意義 金黃色葡萄球菌在外界分布較廣，抵抗力也較強(qiáng)，能引起人體部分化臟性病灶，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致敗血癥，因此化裝品中檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌有重要意義。42四、控制菌檢查金黃色葡萄球菌檢查革蘭染色、鏡檢 生化實(shí)驗(yàn):血漿凝固酶實(shí)驗(yàn) 甘露醇發(fā)酵實(shí)驗(yàn)最終結(jié)果判別增菌培育供試品的處置書寫檢驗(yàn)記錄單分別純化無菌落或無特征菌落配培育基和稀釋液361361SCDLP培育