經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)-供參考

1、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)二 經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆諏?shí)驗(yàn)動物分組方法測定LD50的試驗(yàn)設(shè)計(jì)原則小鼠的經(jīng)口灌胃技術(shù)二、試劑和材料1、實(shí)驗(yàn)動物：（1）動物品種：健康成年ICR小鼠，體重18g22g（2）樣品來源：首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部器材：注射器（1ml）、灌胃針頭、燒杯、吸管、容量瓶、燒杯、棉簽、動物秤。 3、試劑：敵敵畏（1400mg/ml）、苦味酸染液（標(biāo)記用）。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容健康實(shí)驗(yàn)動物的選擇和性別鑒定 選擇健康的雄性小鼠（健康標(biāo)準(zhǔn)：毛順、毛順、無分泌物、反應(yīng)敏銳。動物出現(xiàn)圓圈動作可能為中耳炎，廢棄。） 肛門與生殖孔距離：大者為雄性，小者為雌性實(shí)驗(yàn)動物稱重、編號和隨機(jī)分組 選擇體重在18-22 g的小鼠，

2、采用隨機(jī)分組的方法（動物按體重分為幾個體重段，再從每個體重段分出各組動物），每組10只小鼠，用黃色的苦味酸飽和液標(biāo)號19,10號小鼠不標(biāo)記。受試化學(xué)物溶液的配制（1）確定灌胃量：0.1ml/10g （2）確定最高給藥量，計(jì)算溶液濃度，估計(jì)給藥總體積（3）藥品稱量及稀釋小鼠灌胃技術(shù) 左手固定，右手持灌胃器，插入動物口腔，沿咽后壁徐徐插入食道，深度為口腔至劍突的距離。毒性體征的觀察和LD50計(jì)算（1）毒性體征的觀察： 染毒后注意觀察小鼠中毒的發(fā)生、發(fā)展過程及死亡數(shù)和死亡時間 按表格記錄動物體征及出現(xiàn)時間，記錄死亡情況及時間，觀察期為30 minLD50的計(jì)算： a、實(shí)驗(yàn)各組劑量的確定：設(shè)5組，每組

3、雌雄動物各10只。 劑量組距 d 為： d為相鄰兩個劑量組劑量對數(shù)之差 利用lgLD0依次加d，取反對數(shù)，即可得出各組劑量。b、LD50的計(jì)算（見附件）：C、求半數(shù)致死量的95%可信區(qū)間實(shí)驗(yàn)過程1、人員分工：本次實(shí)習(xí)同學(xué)分兩個大組(A組和B組)，分別在不同實(shí)驗(yàn)室。每大組分5個小組，分別處理雌雄動物，每小組10只動物。 集體活動：1、 2、 3、 4、5 組各1人，進(jìn)行受試物配制。 各小組活動： 每小組1人（共4人），進(jìn)行動物標(biāo)記。（1-10號） 每小組1人（共4人），進(jìn)行體重記錄。（1-10號） 每小組1人（共4人），進(jìn)行灌胃。（1-10號） 每小組1人（共4人），根據(jù)體重吸取受試物（0.1m

4、l/10g）劑量設(shè)計(jì)及受試物配制表見附件六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)原始記錄（見附件）2 、LD50計(jì)算表（見附件）結(jié)果計(jì)算（按照ppt中所給的劑量設(shè)計(jì)及受試物配制表計(jì)算） =(lg500-lg100)4=（0.6990-2）4=0.1747=0.1747 =0.0316=2.1747-1/2（0+0.35）+（0.35+0.2）+（0.2+0.65）+（0.65+1） =1.8777即：65.433587.0162mg/Kg實(shí)驗(yàn)結(jié)論與分析毒性物質(zhì)敵敵畏為中等毒性，體重在1822g之間的雄性健康成年ICR小鼠（來源于首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部）經(jīng)口急性染毒的為65.433587.0162mg/Kg。毒性特征：小鼠在經(jīng)口染毒后短時間內(nèi)出現(xiàn)抽搐，躁動不安，麻痹，肌張力松弛，反應(yīng)減弱，同時伴有呼吸加快，口吐白沫，鼻孔溢液，尿失禁，腹瀉等癥狀，然后在10分鐘左右死亡。本組小鼠為徑口染毒的最低劑量，沒有出現(xiàn)死亡小鼠，觀察過程中，6號小鼠出現(xiàn)亢奮，8號小鼠出現(xiàn)腹瀉癥狀。經(jīng)過上述癥狀，可以看出敵敵畏急性毒性包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)與軀體感覺