酶促反應動力學實驗設計

1、2017酶促反應動力學實驗16級臨床162071實驗目的及原理2實驗方案設計3實驗注意事項目錄01實驗目的及原理實驗目的及原理實驗目的：酶促反應動力學研究酶促反應的速度以及影響酶促反應速度的各種因素。影響酶促反應的因素主要包括酶濃度、底物濃度、溫度、pH、抑制劑和激活劑。本實驗主要討論溫度對酶活性的影響、抑制劑對酶活性的影響。掌握酶的最適溫度的概念;掌握溫度對酶活性的影響；掌握酶的抑制劑種類、概念；掌握酶的競爭性抑制劑的動力學特點。實驗原理：酶作為生物催化劑與一般催化劑一樣呈現(xiàn)溫度效應，酶促反應開始時，反應速度隨溫度升高而增快，達到最大反應速度時的溫度稱為某種酶的最適溫度。由于絕大多數(shù)酶是有活

2、性的蛋白質，當達到最適溫度后，繼續(xù)升高溫度，引起蛋白質變性，酶促反應速度反而逐步下降，以至完全停止。酶的最適溫度不是一個常數(shù)，它與作用時間長短有關。測定酶活性均在酶促反應最適溫度下進行。常用恒溫水浴保持溫度恒定。大多數(shù)動物來源的酶最適溫度為3740。本設計性實驗以人唾液淀粉酶為例，觀察高溫（沸水浴）、最適溫度（37水?。┖偷蜏兀ū。┉h(huán)境對酶活性的影響，并根據(jù)底物即淀粉水解的快慢來判斷酶活性的高低。淀粉經淀粉酶催化水解為葡萄糖的不同階段，與碘試劑作用的顏色反應如下：淀粉（藍色)紫色糊精（紫色)紅色糊精（紅色)無色糊精（不顯色)麥芽糖（不顯色)葡萄糖（不顯色)。抑制劑對酶活性的影響 能降低酶活

3、性，甚至使酶活性完全喪失活性的物質，被稱為酶的抑制劑。酶的抑制分為可逆性抑制與不可逆性抑制。不可逆性抑制劑與酶生成共價結合的復合物，或以其他結合方式生成結合牢固且難以再解離的復合物。可逆性抑制劑多為與酶的底物化學結構相似的物質，可與酶的活性中心結合，從而使酶與其底物結合的比例減少，降低酶促反應速率，但當加大底物濃度時，可逆轉其抑制。 本設計實驗以琥珀酸脫氫酶為例，觀察丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用。在隔絕空氣的條件下，從加入的甲烯藍的褪色情況來判斷琥珀酸脫氫酶的活性02實驗步驟設計實驗步驟設計溫度對酶活性的影響1. 試劑 1/15 mol/LpH6.8磷酸鹽緩沖液（phosphate-b

4、ufferedsaline，PBS)：稱取NaH2PO42H2O10.4 g，溶于1000 mL蒸餾水中，即為1/15 mol/L NaH2PO4液。稱取Na2HPO412H2O 23.88 g，溶于1000mL蒸餾水中，即為1/15 mol/L Na2HPO4液。取1/15 mol/LNaH2PO4液51 mL，加1/15 mol/L Na2HPO4液49 mL，混勻，即為1/15 mol/L pH 6.8磷酸鹽緩沖液。 1%淀粉液。 0.3%稀碘液：溶解2 g KI于20 mL蒸餾水中，加入1g碘，于量筒中稀釋到300 mL。 0.9%NaCl。2. 器材 試管及試管架。 滴管。 刻度吸量

5、管。 恒溫水浴、冰水浴、沸水浴。 白瓷比色盤。1.收集唾液淀粉酶2.取三支試管，分別編號為A，B，C。向三只試管中加入4mL磷酸緩沖液，2mL0.9%NaCl，然后再向三支試管中加入2mL淀粉液。3.將A，B，C三支試管分別裝入100，37，0恒溫水浴箱中恒溫水浴5min,使每支試管保持恒溫后再分別向每支試管中加入2mL人唾液淀粉酶，再恒溫水浴5min。4.將A，B，C試管中的試劑滴一滴在白瓷比色盤上，然后分別向三個盤里滴加23滴稀碘液5.比色，得出實驗結果，并小組討論出實驗結論實驗步驟【注意事項】 1.嚴格控制水浴時間試管1/15mol/L磷酸緩沖液（ml0.9%NaCl（ml）1%淀粉液（

6、ml）人淀粉唾液酶（ml）溫度（A4222100B422237C42220抑制劑對酶活性的影響【實驗試劑和器材】1. 試劑 1/15 mol/LpH 7.4磷酸鹽緩沖液：稱取9.078 g KH2PO4溶于蒸餾水中，1000 mL容量瓶中稀釋到刻度，為1/15 mol/L KH2PO4溶液。稱取23.87 g Na2HPO412H2O溶于蒸餾水中，于1000 mL容量瓶中稀釋到刻度，為1/15 mol/L Na2HPO4溶液。取1/15 mol/L KH2PO4溶液175 mL，1/15 mol/L Na2HPO4溶液825 mL，混合，即為1/15 mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖液。 琥珀

7、酸。 0.02mol/L琥珀酸。 0.2mol/L丙二酸。 0.02mol/L丙二酸。 0.02%甲烯藍2. 器材 試管及試管架。 滴管、漏斗、紗布。 刻度吸量管。 高速組織搗碎機。 燒杯、研缽。 恒溫水浴箱。文字內容文字內容文字內容文字內容1.酶的提取液的制備：從家兔肝組織中提取琥珀酸脫氫酶，加入1/15 mol/L Na2HPO4溶液5ml混勻后用干凈的燒杯收集備用。2取試管5支，按照下列表格操作3.各管混勻后，沿試管的內壁加入石蠟油（隔絕空氣），放置37水浴中保溫，觀察各管甲烯藍的褪色情況，并記錄褪色的所需要的時間，解釋其現(xiàn)象。試劑ml12345酶提取液11110.2mol/L琥珀酸0.

8、20.20.20.20.02mol/L琥珀酸0.20.2mol/L丙二酸0.20.20.02mol/L丙二酸0.2蒸餾水0.21.2 0.02%甲烯藍0.10.10.10.10.103注意事項請?zhí)砑有祟}Please replace text, click add relevant headline, modify the text content, also can copy your content to this directly. Please replace text, click add relevant headline, modify the text content, also can copy your content to this directly. 抑制劑對酶活性