ABO血型鑒定操作規(guī)程教學(xué)文案

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。ABO血型鑒定操作規(guī)程-ABO血型鑒定操作規(guī)程111.01.0.0.0原理原理原理原理根據(jù)紅細(xì)胞上和血清（或血漿）中有無(wú)A抗原和（或）B抗原及其抗體，將血型分為A型、B型、AB型及O型?？衫眉t細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過(guò)正、反定型鑒定ABO血型。正定型正定型正定型是指用已知抗正定型-A、抗-B血清來(lái)檢測(cè)受檢紅細(xì)胞上有無(wú)相應(yīng)的A抗原和（或）B抗原；反定型反定型是指用已知反定型反定型A1型、B型紅細(xì)胞來(lái)檢測(cè)受檢血清（或血漿）中有無(wú)相應(yīng)的抗-A和（或）抗-B。222.02.0.0.0原始樣品要求原始樣品要求原始樣品要

2、求原始樣品要求5mL靜脈全血。333.03.0.0.0樣品容器和添加劑樣品容器和添加劑樣品容器和添加劑樣品容器和添加劑真空試管，EDTA.K2抗凝/普通試管，不抗凝。444.04.0.0.0檢測(cè)環(huán)境要求檢測(cè)環(huán)境要求檢測(cè)環(huán)境要求檢測(cè)環(huán)境要求溫度：1827，濕度：30%70%。555.05.0.0.0所需材料和設(shè)備所需材料和設(shè)備所需材料和設(shè)備所需材料和設(shè)備5.1設(shè)備普通離心機(jī)、免疫血液學(xué)離心機(jī)、顯微鏡、恒溫水箱、定時(shí)器。5.2材料抗-A、抗-B血清、ABO標(biāo)準(zhǔn)抗原紅細(xì)胞試劑、移液器、加樣吸頭、生理鹽水（NS）、干凈空試管。666.06.0.0.0檢測(cè)操作過(guò)程檢測(cè)操作過(guò)程檢測(cè)操作過(guò)程檢測(cè)操作過(guò)程6.

3、1將受檢標(biāo)本以1000g離心5min，使標(biāo)本血漿/血清與紅細(xì)胞分離，吸取紅細(xì)胞，用NS洗滌三次后，配成3%5%紅細(xì)胞懸液。6.2取6支小試管，分別標(biāo)記“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。6.3在“-A”、“-B”管中分別加入抗-A和抗-B血清各50L，其余管加入受檢血漿/血清各100L。6.4在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受檢者3%5%紅細(xì)胞懸液各50L，搖勻。6.5在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分別加入A1、B、O紅細(xì)胞試劑各50L，搖勻。6.61000g離心15sec，輕輕懸浮紅細(xì)胞，觀察結(jié)果并記錄。6.7根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，除室溫下觀察結(jié)果外，另可增加在4、

4、37下觀察結(jié)果。777.07.0.0.0結(jié)果判斷結(jié)果判斷結(jié)果判斷結(jié)果判斷7.1凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)見表1。表表表表1凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)表凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)表表表凝集凝集凝集強(qiáng)度凝集強(qiáng)度強(qiáng)度強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)4+紅細(xì)胞凝集成一大塊，液體背景透明，無(wú)游離紅細(xì)胞3+數(shù)個(gè)大凝集塊，液體背景透明，無(wú)游離紅細(xì)胞2+有很多小凝集塊，液體背景透明，無(wú)游離紅細(xì)胞1+有許多很小的凝集塊，肉眼可見，液體背景不透明，有游離紅細(xì)胞微小的凝集塊，肉眼很難看清，需要用顯微鏡觀察-或無(wú)凝集，無(wú)溶血，全是游離紅細(xì)胞MF混合凝集外觀，鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而大部分是游離紅細(xì)胞pH部分溶

5、血H完全溶血7.2ABO血型結(jié)果判斷見表2：表表表表222血型結(jié)果判斷表2血型結(jié)果判斷表血型結(jié)果判斷表血型結(jié)果判斷表正定型正定型正定型正定型反反反定型反定型定型定型自身對(duì)照自身對(duì)照自身對(duì)照自身對(duì)照血型血型血型血型抗抗抗-抗-AAAA血清血清血清血清抗抗抗-抗-BBBB血清血清血清血清AcAcAcAcBcBcBcBcOcOcOcOcABOAB注：“”表示凝集或溶血；“”表示不凝集。7.3正反定型不一致、ABO抗原減弱、抗-A或抗-B減弱、O細(xì)胞凝集時(shí)，排除人為操作錯(cuò)誤后，執(zhí)行疑難血型鑒定操作規(guī)程進(jìn)行最終確認(rèn)。7.4根據(jù)上述判斷標(biāo)準(zhǔn)，作出結(jié)論并記錄在免疫血液學(xué)檢查實(shí)驗(yàn)記錄。888.08.0.0.0

6、結(jié)果報(bào)告結(jié)果報(bào)告結(jié)果報(bào)告結(jié)果報(bào)告根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，打印免疫血液學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告。報(bào)告的形式為：A型/B型/O型/AB型。999.09.0.0.0實(shí)驗(yàn)結(jié)果解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果為A型、B型、AB型，O型，說(shuō)明受檢者ABO血型分別屬于A型、B型、AB型，O型。紅細(xì)胞上分別有A抗原、B抗原、皆有A抗原和B抗原、皆無(wú)A抗原和B抗原；血漿中分別有抗-B、抗-A、抗-AB、皆無(wú)抗-A(B)。11101000.0.0.0.0質(zhì)量控制質(zhì)量控制質(zhì)量控制質(zhì)量控制當(dāng)受檢標(biāo)本與正、反定型試劑反應(yīng)，凝集強(qiáng)度少于2+時(shí)，取標(biāo)準(zhǔn)抗-A、抗-B或A、B、O紅細(xì)胞與正、反定型試劑反應(yīng)，以驗(yàn)證試劑效能是否下降。1

7、1111111.0.0.0.0注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)11.1試管必須清潔、干燥，防止溶血。11.2加樣順序一般先加血清，再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清。11.3分型血清效價(jià)太低，抗原抗體比例不適當(dāng)，可使反應(yīng)不明顯誤判為陰性反應(yīng)。11.4用立即試管法可能不能測(cè)出亞型（如AX），需延長(zhǎng)作用時(shí)間。11.5觀察結(jié)果時(shí)既要看有無(wú)凝集，更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于亞型、類B或cisAB的發(fā)現(xiàn)。11.6各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，容易誤判為不凝集；部分溶血時(shí)，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體，也會(huì)造成不凝集。11.7受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過(guò)少（如亞型）或抗原性減弱（多見于白血病或惡性腫瘤）以及

8、類B或cisAB等，易被誤判為不凝集。11.8ABO正反定型不一致常見原因11.8.1分型血清效價(jià)太低，親和力不強(qiáng)。11.8.2漏加、錯(cuò)加試劑或標(biāo)本，試劑被污染或失效。11.8.3紅細(xì)胞懸液過(guò)濃或過(guò)淡，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯誤判為陰性結(jié)果。11.8.4受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過(guò)少（如亞型）或抗原性減弱（多見于白血病或惡性腫瘤）以及類B或cisAB等。11.8.5受檢者血清蛋白紊亂（高球蛋白血癥）或?qū)嶒?yàn)溫度過(guò)高，常引起細(xì)胞呈緡錢狀排列。11.8.6受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗-A或抗-B，如丙種球蛋白缺乏癥。11.8.7各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集；部分溶血時(shí)，可溶性血型物質(zhì)中和了

9、相應(yīng)的抗體。11.8.8由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。11.8.9血清中有意外抗體，如抗-I等，常干擾定型。11.8.10患者近期曾輸過(guò)異型血，使其血液標(biāo)本成為不同型別的紅細(xì)胞混合物，定型時(shí)顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。11.8.11嵌合體血型，體內(nèi)有兩群紅細(xì)胞，定型時(shí)顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。11.8.12獲得性類B的影響：由于革蘭氏陰性桿菌的作用，紅細(xì)胞可獲得“類B”的活性。11.8.13藥物等因素的影響：藥物、右旋糖酐及靜脈注射某些造影劑聚集而類似凝集。11.8.14老年人血清中抗體水平大幅度下降。11.8.15新生兒尚未形成ABO同種抗體，故三個(gè)月內(nèi)的新生

10、兒只要求做正定型來(lái)確定血型。11.9紅細(xì)胞在保存期內(nèi)會(huì)逐漸變?yōu)榘导t色，只要其未被細(xì)菌污染，抗原性不受任何影響。每次使用前，檢查試劑有無(wú)明顯溶血發(fā)生，明顯溶血者棄掉。11.10標(biāo)本保存不當(dāng)、試劑過(guò)期變質(zhì)、試劑被污染、不同批號(hào)的試劑混用、離心力或離心時(shí)間不符合要求、孵育時(shí)間不準(zhǔn)確、孵育溫度未達(dá)試劑實(shí)驗(yàn)要求等均可出現(xiàn)較大的變異。12.0相關(guān)文件單克隆抗-A、抗-B血型定型試劑說(shuō)明書ABO標(biāo)準(zhǔn)抗原紅細(xì)胞試劑說(shuō)明書全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第三版）臨床輸血技術(shù)規(guī)范中國(guó)輸血技術(shù)操作規(guī)范（1997年版）為什么為什么為什么為什么ABO血型鑒定要正血型鑒定要正、血型鑒定要正血型鑒定要正、反定型反定型反定型都做反定型

11、都做都做都做？原因如下原因如下原因如下：原因如下：正定型屬于細(xì)胞抗原定型，反定型屬于血清抗體定型。ABO血型鑒定必須正、反定型都要做，有相互印證的作用。因?yàn)閱巫稣ㄐ蛠?lái)鑒定ABO血型，在某些情況下不可靠，易造成ABO血型誤判。如：1.抗-A、抗-B血清效價(jià)低時(shí)（試劑失效、被污染或被稀釋），可使正定型反應(yīng)不明顯誤判為陰性反應(yīng)。則A、B、AB型會(huì)誤判為O型。2.受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過(guò)少（如亞型）或抗原性減弱（多見于白血病或惡性腫瘤），可使正定型反應(yīng)不明顯誤判為陰性反應(yīng)。則A、B、AB型會(huì)誤判為O型。3.各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集；部分溶血時(shí)，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體?？墒拐ㄐ头磻?yīng)不明顯誤判為陰性反應(yīng)。則A、B、AB型會(huì)誤判為O型。4.由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集。則A、B、O型會(huì)誤判為AB型。5.獲得性類B的影響：由于革蘭氏陰性桿菌的作用，紅細(xì)胞可獲得“類B”的活性。則A型會(huì)誤判為AB型。ABO血型誤判，對(duì)于臨床輸血來(lái)說(shuō)風(fēng)險(xiǎn)極大，會(huì)造成ABO血型異型輸血，易引起急性溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生，對(duì)患者的生命安全造成威脅。