分解尿素細(xì)菌

1、關(guān)于分解尿素的細(xì)菌第一張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月一、課題背景1、尿素的利用 尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細(xì)菌利用尿素的原因土壤中的細(xì)菌分解尿素是因為它們能合成脲酶CO(NH2)脲酶+ CO2NH3+ H2O第二張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月 1、實例：啟示：尋找目的菌種時要根據(jù)它對生存環(huán)境的 要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。原因：因為熱泉溫度70800C，淘汰了絕大多 數(shù)微生物只有Taq細(xì)菌被篩選出來。DNA多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種在體外將少量DNA大量復(fù)制的技術(shù)，此項技術(shù)要求使用耐高溫（930C）的

2、DNA聚合酶。.篩選菌株第三張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月2、實驗室中微生物的篩選原理： 人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時抑制或阻止其他微生物生長。什么是選擇性培養(yǎng)基？第四張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO47H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類？固體培養(yǎng)基第五張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微

3、生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。5、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理第六張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月6、怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是分離尿素細(xì)菌判斷該培養(yǎng)基有無選擇性實驗組對照組培養(yǎng)基類型是否接種目的結(jié)果只生長尿素細(xì)菌生長多種微生物是第七張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月1、顯微鏡直接計數(shù)：利用血球計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。.統(tǒng)計菌落數(shù)目：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對運動細(xì)菌的計數(shù)；需要相對高的細(xì)菌濃度；個體小的細(xì)菌在顯微鏡下難

4、以觀察；缺點第八張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月2.間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）原理：在稀釋度足夠高時，微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個菌落是由一個單細(xì)胞繁殖而成的，即一個菌落代表原先的一個單細(xì)胞。常用方法：稀釋涂布平板法。每克樣品中的菌落數(shù)(CV)M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。第九張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月注意事項為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板上進(jìn)行計數(shù)。為使結(jié)果接近真實值可將同一稀釋度加到三個或三個以上的平皿中，經(jīng)涂布，培養(yǎng)計算出菌落平均數(shù)。統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)

5、目低。第十張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月實例：在做分解尿素的細(xì)菌的篩選與統(tǒng)計菌 落數(shù)目的實驗時，A同學(xué)從對應(yīng)的106 倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約150個菌 落，但是其他同學(xué)在同樣的稀釋度下 只選擇出大約50個菌落。分析其原因。原因：土樣不同， 培養(yǎng)基污染或操作失誤 (或者是混入了其他的含氮物質(zhì))第十一張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月設(shè)置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。.設(shè)置對照：第十二張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月小結(jié)：通過這個事例可以看出，實驗結(jié)果要有說服力，對照的設(shè)置是必不可少的。方案一：由其他同學(xué)用與A同學(xué)相

6、同土樣進(jìn)行實驗 方案二：將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。結(jié)果預(yù)測：如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A無誤；如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。第十三張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月二.實驗的具體操作 .土壤取樣 從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。.制備培養(yǎng)基：制備以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。第十四張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月應(yīng)在火焰旁稱取土壤10g。在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁

7、進(jìn)行三樣品的稀釋第十五張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月.取樣涂布實驗時要對培養(yǎng)皿作好標(biāo)記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等。第十六張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月.取樣涂布分離不同的微生物采用不同的稀釋度原因：不同微生物在土壤中含量不同第十七張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月.微生物的培養(yǎng)與觀察在菌落計數(shù)時，每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。 培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細(xì)菌：3037培養(yǎng)12d放線菌：2528培養(yǎng)57d霉菌：2528的溫度下培養(yǎng)34d。第十八張，PPT共三十二頁

8、，創(chuàng)作于2022年6月如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明試驗不精確，需要重新實驗。第十九張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月微生物的培養(yǎng)與觀察第二十張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月三.結(jié)果分析與評價1.通過對照實驗，若培養(yǎng)物有雜菌污染，菌落數(shù)偏高；若培養(yǎng)物混入其他氮源，則菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高，難以選擇出分解尿素的微生物。2.提示：選擇每個平板上長有30300個菌落的稀釋倍計算每克樣品的菌數(shù)最合適。同一稀釋倍數(shù)的三個重復(fù)的菌落數(shù)不能相差懸殊，如相差較大，表示實驗不精

9、確。第二十一張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月四、操作提示 無菌操作 做好標(biāo)記 規(guī)劃時間 第二十二張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月五.課外延伸 在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，指示劑將變紅，說明該細(xì)菌能夠分解尿素。測定飲水中大腸桿菌數(shù)量的方法是將一定體積的水用細(xì)菌過濾器過濾后，將濾膜放到 伊紅美藍(lán) 培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色，通過記述得出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。第二十三張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月大腸桿菌呈 黑色中心 ,有或無金屬光澤大腸桿菌在伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)上典型特征 第二十四張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2

10、022年6月本課題知識小結(jié):第二十五張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月六、例題解析 例1對細(xì)菌群體生長規(guī)律測定正確的表述是A在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行 B至少接種一種細(xì)菌 C接種一個細(xì)菌 D及時補(bǔ)充消耗的營養(yǎng)物質(zhì) 解析：細(xì)菌群體生長規(guī)律的測定是人們在一定條件下進(jìn)行的。這些條件是：一種細(xì)菌、恒定容積的培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基、定時測定細(xì)菌總數(shù)。在這些條件下，才能測定出細(xì)菌的生長規(guī)律。測定時只能用一種細(xì)菌的子細(xì)胞群體的變化規(guī)律表達(dá)微生物的生長；恒定容積是給微生物提供一定的生存環(huán)境；液體培養(yǎng)基才能通過樣品推測細(xì)菌總數(shù)。若接種多種細(xì)菌，則會發(fā)生種間斗爭而不能測定一種微生物的生長規(guī)律。在接種時，要保證一定的接

11、種量。答案：A第二十六張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月1.對細(xì)菌群體生長規(guī)律測定的正確的表述是（ ） A.在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行 B.至少接種一種細(xì)菌 C.接種一個細(xì)菌 D.及時補(bǔ)充消耗的營養(yǎng)物質(zhì) 2.使用選擇培養(yǎng)基的目的是（ ） A.培養(yǎng)細(xì)菌 B.培養(yǎng)真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素實踐訓(xùn)練A CD第二十七張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月4.下列說法不正確的是（ ） A.科學(xué)家從7080度熱泉中分離到耐高

12、溫的TaqDNA聚合酶 B.統(tǒng)計某一稀釋度的5個平板的菌落數(shù)依次為M1、M2、M3、M4、M5，以M3作為該樣品菌落數(shù)的估計值 C.設(shè)置對照實驗的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度 D.同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數(shù)量最大，種類最多。5.為培養(yǎng)和分離出酵母菌并淘汰雜菌，常在培養(yǎng)基中加入（） A.較多的氮源物質(zhì) B.較多的碳源物質(zhì) C.青霉素類藥物 D.高濃度食鹽BC第二十八張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月 練一練用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目，其結(jié)果與實際值相比（ ） A.比實際值高 B.比實際值低 C.和實際值一致 D.比實際值可能高也可能低第二十九張，PPT共三十二頁，創(chuàng)作于2022年6月下列能選擇出分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基是( ) A. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂、水 B. KH2PO4、NA