免疫學(xué)檢驗(yàn)第十五章流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用

1、第十五章 流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用(Chapter 17 Detection of complement and its application)課程承擔(dān)：濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室課件制作：醫(yī)學(xué)免疫學(xué)省級(jí)教學(xué)團(tuán)隊(duì)主 講 人：戴 軍授課班級(jí)：2010級(jí)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)本科授課時(shí)間：2013年10月8日臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)第十五章 流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用第一節(jié) 流式細(xì)胞儀的分析及分選原理第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析第三節(jié) 流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求第四節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用第一節(jié) 流式細(xì)胞儀的分析及分選原理流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）是以流式細(xì)胞儀為檢測(cè)手段的一項(xiàng)能快速、精確的對(duì)

2、單個(gè)細(xì)胞理化特性進(jìn)行多參數(shù)定量分析和分選的技術(shù)。通過(guò)流式細(xì)胞儀我們可以干什么？相對(duì)細(xì)胞大小相對(duì)細(xì)胞顆粒密度和內(nèi)部復(fù)雜度細(xì)胞表面及內(nèi)部分子的表達(dá)（多參數(shù)）分離純化細(xì)胞比較形態(tài)學(xué)觀察，免疫組化第一節(jié) 流式細(xì)胞儀的分析及分選原理一、流式細(xì)胞儀分析的工作原理噴嘴熒光信號(hào)或側(cè)向散射光前向散射光鞘液激光第一節(jié) 流式細(xì)胞儀的分析及分選原理基本組成結(jié)構(gòu)液流系統(tǒng)：樣本，鞘液光學(xué)系統(tǒng)：激光光源，分色反光鏡，光束成形器，透鏡組，光電倍增管數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：計(jì)算機(jī)和軟件一、流式細(xì)胞儀分析的工作原理第一節(jié) 流式細(xì)胞儀的分析及分選原理基本組成結(jié)構(gòu)基本工作原理一、流式細(xì)胞儀分析的工作原理第一節(jié) 流式細(xì)胞儀的分析及分選原理分選的

3、基本原理二、分選基本原理第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析前向散射光（FS）反映細(xì)胞或顆粒的大小側(cè)向散射光（SS）反映細(xì)胞或顆粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度、表面光滑程度熒光（FL）反映細(xì)胞或顆粒被染上熒光數(shù)量的多少一、參數(shù)第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析前向散射光（SS）反映細(xì)胞或顆粒的大小二、散射光的測(cè)定第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析前向散射光（SS）反映細(xì)胞或顆粒的大小二、散射光的測(cè)定第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析側(cè)向散射光（FS）反映細(xì)胞或顆粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度、表面光滑程度二、散射光的測(cè)定第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析側(cè)向散射光（FS）反映細(xì)胞或顆粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度、表面光滑程度二、散射光的測(cè)定第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析熒光信號(hào)檢測(cè)與

4、放大器反映細(xì)胞或顆粒被染上熒光數(shù)量的多少 激發(fā)光：熒光素吸收激光能量 熒光：熒光素將吸收能量釋放，釋放較入射光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光量子 熒光素抗體：熒光抗體與細(xì)胞抗原結(jié)合越多，產(chǎn)生的熒光信號(hào)越強(qiáng) 三、熒光測(cè)量第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析熒光信號(hào)檢測(cè)與放大器反映細(xì)胞或顆粒被染上熒光數(shù)量的多少三、熒光測(cè)量第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析熒光信號(hào)檢測(cè)與放大器反映細(xì)胞或顆粒被染上熒光數(shù)量的多少放大器 線性放大器 對(duì)數(shù)放大器三、熒光測(cè)量第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析單參數(shù)直方圖四、數(shù)據(jù)顯示方式第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析單參數(shù)直方圖四、數(shù)據(jù)顯示方式第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析單參數(shù)直方圖四、數(shù)據(jù)顯示方式第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析單參數(shù)直方

5、圖四、數(shù)據(jù)顯示方式第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析雙參數(shù)散點(diǎn)圖（點(diǎn)圖）四、數(shù)據(jù)顯示方式人外周血白細(xì)胞第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析雙參數(shù)散點(diǎn)圖（點(diǎn)圖）四、數(shù)據(jù)顯示方式人外周血白細(xì)胞中的T細(xì)胞第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析流式細(xì)胞儀的多參數(shù)分析四、數(shù)據(jù)顯示方式人外周血白細(xì)胞中的T細(xì)胞亞群“門”的設(shè)置第二節(jié) 數(shù)據(jù)的顯示與分析流式細(xì)胞儀的多參數(shù)分析四、數(shù)據(jù)顯示方式“門”的設(shè)置第三節(jié) 流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求制備單細(xì)胞懸液外周血淋巴細(xì)胞樣品的制備培養(yǎng)細(xì)胞的樣品制備 懸浮生長(zhǎng)貼壁生長(zhǎng)新鮮實(shí)體組織單細(xì)胞懸液的制備單細(xì)胞懸液的保存 深低溫保存法 乙醇或甲醇保存法 甲醛或多聚甲醛固定法一、免疫檢測(cè)樣品的制備第三節(jié) 流式細(xì)胞儀

6、免疫分析的技術(shù)要求異硫氰酸熒光素（FITC）激發(fā)光：488nm綠色熒光PE（藻紅蛋白）激發(fā)光：488nm橙色熒光二、免疫分析中常用的熒光染料與標(biāo)記染色第三節(jié) 流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求二、免疫分析中常用的熒光染料與標(biāo)記染色第三節(jié) 流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求二、免疫分析中常用的熒光染料與標(biāo)記染色第三節(jié) 流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求二、免疫分析中常用的熒光染料與標(biāo)記染色第三節(jié) 流式細(xì)胞儀免疫分析的技術(shù)要求熒光染料熒光標(biāo)記直接免疫熒光染色法間接免疫熒光染色法細(xì)胞自發(fā)熒光三、免疫分析中常用的熒光染料與標(biāo)記染色第四節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用T細(xì)胞（CD3 CD4 CD8）一、淋巴細(xì)胞及其亞群

7、的分析第四節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用T細(xì)胞（CD3 CD4 CD8）一、淋巴細(xì)胞及其亞群的分析第四節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用T細(xì)胞（CD3 CD4 CD8）一、淋巴細(xì)胞及其亞群的分析第四節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用B細(xì)胞（CD19 CD5）一、淋巴細(xì)胞及其亞群的分析第四節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用NK細(xì)胞（CD3-CD16+CD56+）一、淋巴細(xì)胞及其亞群的分析第四節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒試驗(yàn)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子測(cè)定二、淋巴細(xì)胞功能分析T細(xì)胞內(nèi)IFN-g的測(cè)定第四節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)檢查中的應(yīng)用三、淋巴造血系統(tǒng)分化抗原及白血病免疫分型總結(jié)掌握流式細(xì)胞儀的分析和分選原理掌握FS、SS、FL參數(shù)及其意義熟悉單參數(shù)